一种具有增强免疫力和抗炎功能的组合物及其制备方法与流程

1.本发明涉及组合物技术领域，尤其是一种具有增强免疫力和抗炎功能的组合物及其制备方法。


背景技术：

2.免疫力是人体自身的防御机制，是人体识别和消灭外来侵入的任何异物(病毒、细菌等)、处理衰老、损伤、死亡、变性的自身细胞以及识别和处理体内突变细胞和病毒感染细胞的能力。炎症是指具有血管系统的活体组织对感染或非感染损伤因子所产生的识别、清除和修复的系列防御反应过程,急性炎症主要表现为红、肿、热、痛和功能障碍。依据致炎病因不同,分为感染性炎症和无菌性炎症。
3.芦荟为百合科芦荟属多年生肉质草本植物，种类繁多，约500余种，按其用途可为药用芦荟、食用芦荟和观赏芦荟。芦荟富含多种生物活性物质，包括蒽醌类化合物、糖类化合物、氨基酸、有机酸、维生素、甾族化合物、酶类化合物、无机物质等，其中芦荟多糖是芦荟凝胶的主要生物活性组分。我国保健食品相关法规规定，可作为保健食品原料的芦荟品种为库拉索芦荟和好望角芦荟。蜂王浆是蜜蜂巢中培育幼虫的青年工蜂(保姆蜂)咽头腺的分泌物，是专供蜜蜂小幼虫和蜂王食用的浆状物质。蜂王浆中有葡萄糖、脂质、蛋白质、矿物质、维生素、天冬氨酸、磷化合物、固醇、凝胶、核酸、微量成分和乙酰胆碱等多种物质。蜂王浆一般含水量为65％-68％，蛋白质为11％-14％，碳水化合物为15％-17％，脂类为6％，其他物质为3％。蜂王浆冻干粉由鲜王浆，经过滤、冻干、粉碎等工艺制得，通过冷冻干燥能较好保留其中营养成分。破壁油菜花粉由油菜花粉经干燥、粉碎、气流破壁等工艺制得。油菜花粉是蜂花粉中常见的一种，蜂花粉是从植物花蕊内采集的花粉，加入了花蜜和唾液混合而成的扁圆形颗粒。花粉中不但含有人体通常所需要的营养物质如蛋白质、脂肪、糖、微量元素和各种维生素，还含有黄酮、类胡萝卜素、磷脂、多不饱和脂肪酸等多种生物活性物质，花粉因而被誉为“微型营养库”。姜黄是姜科植物姜黄的根茎为原料，经溶剂提取精制而成，姜黄植物味苦、辛，性温，归肝、脾经，有较好的药理活性，可抗氧化、抗各种病原微生物、抗风湿、抗肿瘤，同时还可改善免疫系统、心血管系统、消化系统和神经系统功能。
4.目前，市场上产品多数以增强免疫力或者抗炎单个功效为主，同时具备增强免疫力和抗炎功效的产品非常少。


技术实现要素：

5.基于此，本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种具有增强免疫力和抗炎功能的组合物及其制备方法。本发明提供的具有增强免疫力和抗炎功能的组合物安全、适合长期使用，本发明具有增强免疫力和抗炎功能的组合物的各个原料之间相互协同，制备得到的产品具有较好的增强免疫力和抗炎的功效。
6.为实现上述目的，本发明所采取的技术方案为：一种具有增强免疫力和抗炎功能的组合物，包括以下组分：芦荟粉、蜂王浆冻干粉、破壁油菜花粉、姜黄；其中，芦荟粉、蜂王
浆冻干粉、破壁油菜花粉、姜黄的重量比为：芦荟粉：蜂王浆冻干粉：破壁油菜花粉：姜黄＝(10-30)：(20-40)：(20-40)：(10-30)。
7.本发明提供了一种包括芦荟粉、蜂王浆冻干粉、破壁油菜花粉、姜黄的组合物，其中，组合物里芦荟粉中芦荟多糖 破壁油菜花粉中黄酮 蜂王浆冻干粉中蛋白 姜黄中多酚类物质，通过作用于免疫器官(胸腺、脾)、激活免疫细胞(淋巴细胞、单核吞噬细胞、白细胞)、调节细胞因子释放、促进抗体生成等途径，对机体免疫系统发挥多方面的调节作用，起到协同增效的作用，提升机体整体免疫力。同时，在机体整体免疫提升的情况下，上述组合物中发挥协同作用，减少氧化应激反应的发生，并抑制炎症介质和转录因子，发挥更好的抗炎作用，从而减少慢病的发生。
8.本发明所用芦荟粉、蜂王浆冻干粉、破壁油菜花粉、姜黄可以直接购买，也可以采用相应的制备方法制得。
9.优选地，所述的具有增强免疫力和抗炎功能的组合物，芦荟粉、蜂王浆冻干粉、破壁油菜花粉、姜黄的重量比为：芦荟粉：蜂王浆冻干粉：破壁油菜花粉：姜黄＝(10-23)：(27-40)：(27-40)：(10-23)。
10.发明人实验时发现，当组合物中芦荟粉、蜂王浆冻干粉、破壁油菜花粉、姜黄各原料的配比发生变化时，将直接影响免疫及抗炎的效果。单一原料的含量逐渐提升或减少对组合物效果的影响并不是线性的，以上述配比时组合物具有较好的增强免疫力和抗炎的功效。
11.进一步优选地，所述的具有增强免疫力和抗炎功能的组合物，芦荟粉、蜂王浆冻干粉、破壁油菜花粉、姜黄的重量比为：芦荟粉：蜂王浆冻干粉：破壁油菜花粉：姜黄＝15：35：35：15。
12.发明人实验时发现，当组合物中芦荟粉、蜂王浆冻干粉、破壁油菜花粉、姜黄各原料的配比为15：35：35：15时，组合物增强免疫力和抗炎的功效达到最佳。
13.优选地，所述芦荟粉为芦荟凝胶粉，所述芦荟凝胶粉中多糖的质量百分含量≥80000mg/kg；所述芦荟凝胶粉中，以氯化乙酰胆碱计，o-乙酰基的质量百分含量≥75000mg/kg。本发明选用的芦荟凝胶粉符合qb/t 2489-2018《食品原料用芦荟制品》的要求。
14.优选地，所述姜黄包括姜黄素、脱甲氧基姜黄素、双脱甲氧基姜黄素，本发明选用的姜黄符合gb 1886.60-2015《食品安全国家标准-食品添加剂-姜黄》的要求，所述姜黄的结构式如下：
[0015][0016]
其中，姜黄素中r1＝r2＝och3，脱甲氧基姜黄素中r1＝och3，r2＝h，双脱甲氧基姜黄素中r1＝r2＝h。
[0017]
优选地，本发明选用的蜂王浆冻干粉符合gb/t 21532-2008《蜂王浆冻干粉》的要求；本发明选用的油菜花粉符合gb 31636-2016《食品安全国家标准-花粉》的要求。
[0018]
此外，本发明的另一目的在于提供所述具有增强免疫力和抗炎功能的组合物的制备方法，包括如下步骤：将芦荟粉、蜂王浆冻干粉、破壁油菜花粉、姜黄混合均匀，得到所述具有增强免疫力和抗炎功能的组合物。
[0019]
本发明的再一目的在于提供所述组合物在制备具有增强免疫力和抗炎功能的制品或食品中的应用。
[0020]
优选地，所述制品包括具有增强免疫力和抗炎功能的组合物。
[0021]
优选地，所述制品的组分还包括辅料，所述辅料为膳食纤维、复配营养素、氨基酸、填充剂、酸味剂、甜味剂、果蔬粉、香精、助流剂中的至少一种。
[0022]
优选地，所述的制品，如下(a)-(i)中的至少一种：
[0023]
(a)所述膳食纤维为低聚果糖、低聚木糖、低聚半乳糖、低聚异麦芽糖、菊粉、抗性糊精中的至少一种；
[0024]
(b)所述复配营养素为营养素、矿物质的混合物；所述营养素为维生素c、维生素e、维生素a、维生素d中的至少一种；所述矿物质为钙盐、镁盐、锌盐、铬盐、铁盐中的至少一种；
[0025]
(c)所述氨基酸为牛磺酸、丙氨酸、精氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸中的至少一种；
[0026]
(d)所述填充剂为赤藓糖醇、果糖、麦芽糖醇、山梨糖醇、异麦芽酮糖醇、木糖醇、乳糖中的至少一种；
[0027]
(e)所述酸味剂为柠檬酸、苹果酸、乳酸、富马酸、酒石酸中的至少一种；
[0028]
(f)所述甜味剂为甜菊糖苷、罗汉果甜苷、三氯蔗糖、阿斯巴甜、纽甜中的至少一种；
[0029]
(g)所述果蔬粉为橙粉、柠檬粉、芦荟烘干粉、樱桃粉、苹果粉、草莓粉中的至少一种；
[0030]
(h)所述香精为橙香精、柠檬香精、樱桃香精、苹果香精、草莓香精中的至少一种；
[0031]
(i)所述助流剂为二氧化硅、硬脂酸镁、硬脂酸中的至少一种。
[0032]
优选地，所述制品剂型为口服液、固体饮料、颗粒剂、胶囊、片剂、粉剂中的一种。
[0033]
本发明提供了一种制品，包括以下重量份的组分：所述的组合物1-15份、膳食纤维5-30份、复配营养素2-10份、氨基酸2-10份、填充剂40-80份、酸味剂0-5份、甜味剂0-5份、果蔬粉3-20份、香精0.1-5份。
[0034]
优选地，所述制品为粉剂，包括以下重量份的组分：低聚果糖8-16份、牛磺酸2-6份、维生素c0.5-3份、蜂王浆冻干粉0.5-5份、破壁油菜花粉0.5-5份、芦荟烘干粉0.5-3份、芦荟凝胶粉0.5-5份、复配营养素1-5份、姜黄0.5-5份、赤藓糖醇30-50份、果糖20-35份、橙粉2-6份、橙香精0.5-3份、柠檬粉2-6份。
[0035]
本发明提供了所述的制品为粉剂时的制备方法，包括如下步骤：
[0036]
(1)按配比称量各组分；
[0037]
(2)将破壁油菜花粉、蜂王浆冻干粉、芦荟凝胶粉、姜黄混合均匀，得到所述组合物；
[0038]
(3)将芦荟烘干粉、维生素c、复配营养素、低聚果糖、牛磺酸、赤藓糖醇、果糖、橙
粉、橙香精、柠檬粉、步骤(2)中制备得到的组合物混合均匀，得到所述制品。
[0039]
发明人在进行制备方法之前，需要先对所用原料进行质量标准检验，检验合格后移入洁净区(洁净区生产环境洁净度为10万级，按gmp要求安排组织生产；车间温度≤25℃，相对湿度≤65％)，破壁油菜花粉、芦荟凝胶粉、低聚果糖用振动筛过20目筛备用，再进行称量。优选地，所述步骤(2)中，破壁油菜花粉、蜂王浆冻干粉、芦荟凝胶粉、姜黄混合均匀的具体方式为：将上述原料投入料斗中，将料斗置自动提升料斗混合机中，混合机转速10-15rpm，混合15-25min。优选地，所述步骤(3)中，混合均匀的具体方式为：投入装有20目筛网的投料器，通过真空系统进入混合料斗，投料完毕，开启双轴桨式混合机，转速35-45rpm，混合140-160s。
[0040]
优选地，本发明制备得到的制品剂型为粉剂时，包装规格有两种：5g/袋或145g/瓶。
[0041]
优选地，所述制品为片剂，包括以下重量份的组分：低聚果糖15-30份、牛磺酸5-10份、维生素c1-5份、蜂王浆冻干粉0.5-5份、破壁油菜花粉0.5-5份、芦荟烘干粉0.5-3份、芦荟凝胶粉0.5-5份、复配营养素3-8份、姜黄0.5-5份、山梨糖醇30-50份、异麦芽酮糖醇5-20份、橙粉1-3份、橙香精0.5-2份、柠檬粉1-3份、硬脂酸镁0.1-1份、二氧化硅0.1-1份。
[0042]
本发明提供了所述的制品为片剂的制备方法，包括如下步骤：
[0043]
(1)按配比称量各组分；
[0044]
(2)将破壁油菜花粉、蜂王浆冻干粉、芦荟凝胶粉、姜黄混合均匀，得到所述组合物；
[0045]
(3)将芦荟烘干粉、维生素c、复配营养素、低聚果糖、牛磺酸、橙粉、橙香精、柠檬粉、硬脂酸镁、二氧化硅、山梨糖醇、异麦芽酮糖醇步骤(2)中制备得到的组合物合均匀，压片后得到所述制品。
[0046]
发明人在进行制备方法之前，需要先对所用原料进行质量标准检验，检验合格后移入洁净区(洁净区生产环境洁净度为10万级，按gmp要求安排组织生产；车间温度≤25℃，相对湿度≤65％)，维生素c、橙粉、橙香精粉碎，芦荟凝胶粉、低聚果糖用振动筛过20目筛，破壁油菜花粉用振动筛过40目筛备用，再进行称量。优选地，所述步骤(2)中，破壁油菜花粉、蜂王浆冻干粉、芦荟凝胶粉、姜黄混合均匀的具体方式为：将上述原料投入料斗中，将料斗置自动提升料斗混合机中，混合机转速10-15rpm，混合15-25min。优选地，所述步骤(3)中，混合均匀的具体方式为：投入装有20目筛网的投料器，通过真空系统进入混合料斗，投料完毕，开启双轴桨式混合机，转速50-60rpm，混合140-160s。
[0047]
优选地，本发明制备得到的制品剂型为片剂时，通过压片机进行压片，片重控制在1.0g，包装规格采用90片/瓶。
[0048]
相对于现有技术，本发明的有益效果为：经过评价试验，对常见组分(如破壁油菜花粉、蜂王浆冻干粉、芦荟凝胶粉、姜黄)进行组合筛选，组合物里芦荟粉中芦荟多糖 破壁油菜花粉中黄酮 蜂王浆冻干粉中蛋白 姜黄中多酚类物质，通过作用于免疫器官(胸腺、脾)、激活免疫细胞(淋巴细胞、单核吞噬细胞、白细胞)、调节细胞因子释放、促进抗体生成等途径，对机体免疫系统发挥多方面的调节作用，起到协同增效的作用，提升机体整体免疫力。同时，在机体整体免疫提升的情况下，上述组合物中发挥协同作用，减少氧化应激反应的发生，并抑制炎症介质和转录因子，发挥更好的抗炎作用，从而减少慢病的发生。本发明
提供的组合物，同时具有很好的免疫和抗炎效果，扩展产品的功能应用。
具体实施方式
[0049]
为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。
[0050]
实施例中，所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法，所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到；本发明实施例及对比例中所用原料来源如下：
[0051]
芦荟凝胶粉，购买自云南万绿生物股份有限公司；蜂王浆冻干粉，购买自杭州天厨蜜源；破壁油菜花粉，购买自青海康普生物科技股份有限公司；姜黄，购买自印度。
[0052]
实施例1-5及对比例1-6
[0053]
实施例1
[0054]
本发明实施例的一种组合物，本实施例所述组合物组分如下：芦荟凝胶粉21.43份、蜂王浆冻干粉28.57份、破壁油菜花粉28.57份、姜黄21.43份。
[0055]
本发明实施例的一种组合物的制备方法，包括如下步骤：将芦荟凝胶粉、蜂王浆冻干粉、破壁油菜花粉、姜黄混合均匀，得到所述具有增强免疫力和抗炎功能的组合物。
[0056]
实施例2
[0057]
本实施例与实施例1的差别仅在于，本实施例所述组合物组分如下：芦荟凝胶粉10份、蜂王浆冻干粉40份、破壁油菜花粉40份、姜黄10份。
[0058]
实施例3
[0059]
本实施例与实施例1的差别仅在于，本实施例所述组合物组分如下：芦荟凝胶粉15份、蜂王浆冻干粉35份、破壁油菜花粉35份、姜黄15份。
[0060]
实施例4
[0061]
本实施例与实施例1的差别仅在于，本实施例所述组合物组分如下：芦荟凝胶粉25份、蜂王浆冻干粉25份、破壁油菜花粉25份、姜黄25份。
[0062]
实施例5
[0063]
本实施例与实施例1的差别仅在于，本实施例所述组合物组分如下：芦荟凝胶粉30份、蜂王浆冻干粉20份、破壁油菜花粉20份、姜黄30份。
[0064]
具体对比例1-6的原料及重量份选择如下：
[0065]
对比例1
[0066]
本对比例与实施例1的差别仅在于，所述组合物包含以下组分：芦荟凝胶粉5份、蜂王浆冻干粉15份、破壁油菜花粉50份、姜黄30份。
[0067]
对比例2
[0068]
本对比例与实施例1的差别仅在于，所述组合物包含以下组分：芦荟凝胶粉40份、蜂王浆冻干粉10份、破壁油菜花粉10份、姜黄40份。
[0069]
对比例3
[0070]
本对比例与实施例1的差别仅在于，所述组合物包含以下组分：芦荟凝胶粉5份、蜂王浆冻干粉15份、破壁油菜花粉15份、姜黄65份。
[0071]
对比例4
[0072]
本对比例与实施例1的差别仅在于，所述组合物包含以下组分：芦荟凝胶粉30份、
破壁油菜花粉20份、姜黄50份。
[0073]
对比例5
[0074]
本对比例与实施例1的差别仅在于，所述组合物包含以下组分：芦荟凝胶粉15份、蜂王浆冻干粉35份、姜黄50份。
[0075]
对比例6
[0076]
本对比例与实施例1的差别仅在于，所述组合物包含以下组分：蜂王浆冻干粉25份、破壁油菜花粉25份、姜黄50份。
[0077]
应用例1
[0078]
一种粉剂，包括以下质量百分比的组分：低聚果糖15％、牛磺酸3％、维生素c1％、蜂王浆冻干粉2％、破壁油菜花粉2％、全叶芦荟烘干粉0.8％、芦荟凝胶粉2％、复配营养素4％、姜黄1％、赤藓糖醇37.2％、果糖25％、橙粉3％、橙香精1％、柠檬粉3％。
[0079]
应用例2
[0080]
一种片剂，包括以下质量百分比的组分：低聚果糖20％、牛磺酸5％、维生素c1.5％、蜂王浆冻干粉3％、破壁油菜花粉2％、芦荟全叶干粉1％、芦荟凝胶粉2％、复配营养素6％、姜黄2％、山梨糖醇40％、异麦芽酮糖醇12.8％、橙粉2％、橙香精0.5％、柠檬粉1％、硬脂酸镁0.8％、二氧化硅0.4％。
[0081]
效果验证
[0082]
试验例1改善t细胞减少。
[0083]
实验过程：随机选取4dpf转基因t细胞红色荧光斑马鱼于6孔板中，每孔均处理30尾斑马鱼。分别水溶给予样品，同时设置阳性对照(百令胶囊)、正常对照组和模型对照组，每孔容量为3ml。除正常对照组外，其余各实验组均静脉注射酒石酸长春瑞滨注射液建立斑马鱼t细胞减少症模型。
[0084]
28℃处理1天后，每个实验组随机选取8尾斑马鱼置于荧光显微镜下拍照，分析斑马鱼t细胞荧光强度，以该指标的统计学分析结果，评价样品改善t细胞减少功效。统计学处理结果采用mean
±
se表示。用独立t检验进行统计学分析，p《0.05表明差异具有统计学意义。
[0085]
试验结果：如表1和表2所示。
[0086]
表1
[0087][0088]
表2
[0089]
[0090]
与模型对照组对比，*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001。
[0091]
由上表可知，与模型对照组对比，实施例1-5具有差异性(p《0.05)，表明具有改善t细胞减少作用，实施例1、实施例2与模型对照组比，具有显著差异性(p《0.01)，改善t细胞减少效果更优，实施例3与模型对照组比，具有极显著差异性(p《0.001)，改善t细胞减少效果最优。对比例1-6与模型对照组比，无显著性差异，表明没有改善t细胞减少的功能。
[0092]
试验例2改善巨噬细胞减少。
[0093]
试验过程：随机选取3dpf转基因巨噬细胞绿色荧光品系斑马鱼于6孔板中，每孔均处理30尾斑马鱼。分别水溶给予样品，同时设置阳性对照(百令胶囊)、正常对照组和模型对照组，每孔容量为3ml。除正常对照组外，其余各实验组均静脉注射酒石酸长春瑞滨注射液建立斑马鱼巨噬细胞减少症模型。5dpf换液一次。
[0094]
28℃处理4天后，每个实验组随机选取5尾斑马鱼置于荧光显微镜下拍照，分析斑马鱼巨噬细胞荧光强度，以该指标的统计学分析结果评价样品改善巨噬细胞减少功效。统计学处理结果采用mean
±
se表示。用独立t检验进行统计学分析，p《0.05表明差异具有统计学意义。
[0095]
试验结果：如表3和表4所示。
[0096]
表3
[0097][0098]
表4
[0099][0100]
与模型对照组比较，*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001。
[0101]
由上表可知，与模型对照组对比，实施例1-5具有差异性(p《0.05)，表明具有改善巨噬细胞减少的功能，实施例1、实施例2与模型对照组比，具有显著差异性(p《0.01)，改善巨噬细胞减少效果更优，实施例3与模型对照组比，具有极显著差异(p《0.001)，改善巨噬细胞减少效果最优，对比例1-6与模型对照组比，无显著性差异，表明没有改善巨噬细胞减少的功能。
[0102]
试验例3降低no分泌量。
[0103]
试验机理：在炎症反应过程中巨噬细胞起着介导作用，活化的促炎因子如tnf-α，促炎介质no等会诱导和加强局部炎症反应。no主要由一氧化氮合酶催化产生，当巨噬细胞被lps等物质刺激时会增加inos的表达量，短时间内大量催化诱导型no的生成，no水平升高可使细胞释放活性氧中间体和炎症性细胞因子，并进一步导致no大量合成。脂多糖lps诱导raw264.7小鼠巨噬细胞模型抗炎试验目前已被广泛地应用于筛选受试物是否具有抗炎功
效。因此no可作为受试物抗炎功效的评价指标。
[0104]
按1.5
×
105个/ml的接种密度接种细胞至24孔板中，每孔800μl细胞悬浮液，培养箱(37℃、5％co2)中孵育过夜。试验设置空白对照组、阳性对照组(地塞米松)与样品组。待24孔板中细胞铺板率达到50％-60％时，进行分组给药，每孔给药量为800μl，每组设3个复孔，培养箱(37℃、5％co2)继续培养2h。培养2h后，根据组别设计向已给药的孔板中加入由相应受试物工作液配制的lps工作液，左右摇晃孔板，使得孔板内药物混匀，lps终浓度为1μg/ml，培养箱(37℃、5％co2)继续培养24h。将各孔细胞上清液转移至新的96孔板中(50μl/孔)后，先加50μl griess试剂ⅰ，再加50μl griess试剂ⅱ，待各孔反应完全，混匀后于540nm处酶标仪上测定吸光值，根据样品吸光值大小在标曲上计算出相应的no浓度。
[0105]
通过检测炎症因子no的分泌情况，评价待测样品的抗炎功效。用t-test方法进行统计分析时。
[0106]
试验结果：如表5和表6所示。
[0107]
表5
[0108][0109]
表6
[0110][0111]
样品组与lps组(模型组)比较*p＜0.05，**p＜0.01。
[0112]
由上表可以知，模型对照组相比，实施例1-5数据有差异性，表明具有减少no分泌量的作用，实施例1、实施例2和实施例3与模型对照组相比，具有显著差异性，减少no分泌量效果更优，对比例1-6与模型对照组相比，没有显著性差异，不具有此作用。
[0113]
试验例4降低tnf-α分泌量。
[0114]
试验标准：在炎症反应过程中巨噬细胞起着介导作用，活化的促炎因子如tnf-α，促炎介质no等会诱导和加强局部炎症反应。适量释放的tnf-α能够介导免疫应答、对机体代谢等也都有重要的调节作用，大量释放会引起炎症的扩大反应。脂多糖lps诱导raw264.7小鼠巨噬细胞模型抗炎试验目前已被广泛地应用于筛选受试物是否具有抗炎功效。因此tnf-α可作为受试物抗炎功效的评价指标。
[0115]
按1.5
×
105个/ml的接种密度接种细胞至24孔板中，每孔800μl细胞悬浮液，培养箱(37℃、5％co2)中孵育过夜。试验设置空白对照组、阳性对照组(地塞米松)与样品组。待24孔板中细胞铺板率达到50％～60％时，进行分组给药，每孔给药量为800μl，每组设3个复孔，培养箱(37℃、5％co2)继续培养2h。培养2h后，根据组别设计向已给药的孔板中加入由相应受试物工作液配制的lps工作液，左右摇晃孔板，使得孔板内药物混匀，lps终浓度为1μg/ml，培养箱(37℃、5％co2)继续培养24h后，收集细胞培养上清液于ep管中，收集完后将用
于tnf-α含量检测的样品置于-80℃冰箱冷冻保存，tnf-α具体测试方法参照试剂盒说明书执行。
[0116]
通过检测炎症因子tnf-α的分泌情况，评价待测样品的抗炎功效。用t-test方法进行统计分析时。
[0117]
试验结果：如7和表8所示。
[0118]
表7
[0119][0120]
表8
[0121][0122][0123]
样品组与lps组(模型组)比较*p＜0.05，**p＜0.01。
[0124]
由上表可以知，模型对照组相比，实施例1-5数据有差异性，表明具有减少tnf-α分泌量(抗炎)的作用，实施例1、实施例2和实施例3与模型对照组相比，具有显著差异性，减少tnf-α分泌量效果更优，对比例1-6与模型对照组相比，没有显著性差异，不具有此作用。
[0125]
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。