一种治疗肝郁型失眠的中药组合物及其应用的制作方法

1.本发明涉及中药技术领域，具体地说，是关于一种治疗肝郁型失眠的中药组合物及其应用。


背景技术：

2.慢性失眠症(chronic insomnia)指长期睡眠的质或量不足，对患者造成白天功能的损害，一般伴有其他相关临床症状。慢性失眠症是临床常见的睡眠障碍之一，其病因复杂，影响大众身心健康、脑思维、记忆、创新性功能和社会活动功能。失眠症的确切定义应从失眠的主观感受，失眠所致的日间不良后果(如疲劳、注意力下降、打盹等)与客观检测(多导睡眠脑电图等)三方面结合来描述。最常见的睡眠障碍，具体表现为入睡困难、睡眠维持障碍、早醒、睡眠质量下降和总睡眠时间减少(通常少于6h)，同时伴有日间功能障碍。根据病程可分为急性失眠、亚急性失眠和慢性失眠。失眠症可以作为独立疾病存在(失眠症),也可与其他疾病共同存在(共病性失眠症)或者是其他疾病的症状之一。
3.由于社会经济发展，市场竞争激烈和自然环境的变化，当今失眠症的临床表现，以亢奋型居多，衰弱型较少。常见因先天体质肝木偏旺，或因过食肥甘，化痰动肝致肝阳上亢，或情志不悦，精神过劳，致肝失调达，郁而化火，或则犯胃，使胃失和降，瘀热交阻，以至扰乱气血，阴阳失衡，阴不能潜阳，则入夜难寐或因阳入于阴，但不能潜于阴，互相干扰，则夜梦多醒，或因阴气不足，阳潜入于阴时间较短，则早醒不能再入睡，甚则因阳亢过竭，阴气无能潜阳，则通宵难寐。故当今失眠症诸多表现均因阳亢阴虚所致，故立法当以平肝潜阳活血安神为主。
4.落花生枝叶为豆科植物落花生的茎叶。味甘淡，微苦涩，无毒，人肝、心、肺三经，有清热解毒，平肝解郁、安神健脑、化痰祛瘀。主治跌打损伤，痈肿疮毒，失眠，高血压等；落花生，一年生草本。茎高30～70厘米，匍匐或直立，有棱，被棕黄色长毛。偶数羽状复叶，互生；叶柄长2～5厘米，被棕色长毛；托叶大，基部与叶柄基部连生，披针形，长3～4厘米，脉纹明显。小叶通常4枚，椭圆形至倒卵形，有时为长圆形，长2～6厘米，宽1～2.5厘米，先端圆或钝。花黄色，单生或簇生于叶腋，开花期几无花梗；萼管细长，萼齿上面3个合生，下面一个分离成二唇形；花冠蝶形，旗瓣近圆形，宽大，翼瓣与龙骨瓣分离；雄蕊9，合生，1个退化，花药5个长圆形，4个近于圆形；花柱细长，柱头顶生，疏生细毛，子房内有1至数个胚珠，胚殊受精后，子房柄伸长至地下，发育为荚果。荚果长椭圆形，种子间常缢缩，果皮厚，革质，具突起网脉，长1～5厘米。种子1～4颗。花期6～7月，果期9～10月。
5.香附为莎草科植物莎草的干燥根茎。秋季采挖，燎去毛须，置沸水中略煮或蒸透后晒干，或燎后直接晒干。性状：多呈纺锤形，有的略弯曲，长2～3。5cm，直径0。5～4cm。表面棕褐色或黑褐色，有纵皱纺，并有6～10个略隆起的环节，节上有未除净的棕色毛须及须根断痕；去净毛须者较光滑，环节不明显。质硬，经蒸煮者断面黄棕色或红棕色，角质样；生晒者断面色白而显粉性，内皮层环纹明显，中柱色较深，点状维管束散在。气香，味策苦。炮制：香附除去毛须及杂质，碾碎或切薄片。醋香附取香附粒(片)，照醋炙法炒干。性味与归经：辛、
微苦、微甘，平。归肝、脾、三焦经。功能与主治：具有疏肝、调经、和中的作用，用于肝郁气滞，胸、胁、脘腹胀痛，消化不良，胸脘痞闷，寒疝腹痛，乳房胀痛，月经不调，经闭痛经等。香附是一种能治疗中医郁症的良药，重在散肝气之郁结，香附行气疗肝郁，且可防治气滞所引起的血瘀及诸痛症，可在改善失眠症的同时，缓解失眠症伴随的躯体化症状，现代药理研究其有镇静催眠及抗抑郁的作用。
6.肝郁失眠主症：睡眠难，睡眠容易醒来，睡眠多，容易醒来，醒来后很难再次入眠，一整晚不能睡觉。兼症：心烦意乱、眩晕、耳鸣、胸闷、胁肋胀痛、眼睛干涩或看东西不清、喉咙有异物感、口干或口苦、尿不清、大便不清、舌红、苔黄、脉弦细。分型包括肝阳上亢、肝亢犯肺、肝亢肾虚、肝亢脾虚、肝郁化火、肝郁瘀阻、肝郁犯胃、肝郁犯心，以肝为主，波及其他脏腑的均辨证为肝郁型失眠。
7.而目前关于药味少、效果好、见效快、安全的治疗肝郁型失眠中药组合物还未见报道。


技术实现要素：

8.本发明的第一个目的是，针对现有技术中的不足，提供一种治疗肝郁型失眠的中药组合物。
9.本发明的第二个目的是，中药组合物的用途。
10.为实现上述第一个目的，本发明采取的技术方案是：一种治疗肝郁型失眠的中药组合物，所述中药组合物由以下重量份的原料药制成：落花生枝叶6-30份；制香附6-30份。
11.作为一个优选例，所述中药组合物由以下重量份的原料药制成：落花生枝叶10-20份；制香附9-27份。
12.作为一个优选例，所述中药组合物由以下重量份的原料药制成：落花生枝叶30份；制香附9份。
13.作为一个优选例，所述落花生枝叶是江苏姜堰产地的落花生枝叶，所述的香附是广东产地的香附。
14.为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：肝郁型失眠的中药组合物在制备治疗肝郁型失眠药物中的应用。
15.本发明优点在于：
16.落花生枝叶和制香附二药配伍，意在相互为用，增强疗效，花生叶重在平肝安神，香附重在疏肝解郁，二者配伍组合，在归经方面增加了脾和三焦经，在功效上针对失眠症肝郁气滞的病机特点，加强了疏肝理气的作用，既能平抑肝木偏旺之气，又可疏通肝郁不畅之气，增强了疏肝解郁、宁神安眠之功效，从而条达气机，气静神安，在药理方面增加了镇静镇痛抗抑郁的功效，相对于单味药来说，药对具有更强的协同性，共奏疏肝解郁，安神健脑之功，让人情志舒畅，安然睡眠。
附图说明
17.图1：两组治疗前后psqi评分变化图。
具体实施方式
18.下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明记载的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本技术所附权利要求书所限定的范围。
19.实施例1
20.一种治疗肝郁型失眠的中药组合物(一)
21.按重量份配比称取各原料药：落花生枝叶30份；制香附9份，水煎煮。
22.实施例2
23.一种治疗肝郁型失眠的中药组合物(二)
24.按重量份配比称取各原料药：落花生枝叶6份；制香附30份，水煎煮。
25.实施例3
26.一种治疗肝郁型失眠的中药组合物(三)
27.按重量份配比称取各原料药：落花生枝叶10份；制香附27份，水煎煮。
28.实施例4
29.一种治疗肝郁型失眠的中药组合物(四)
30.按重量份配比称取各原料药：落花生枝叶20份；制香附6份，水煎煮。
31.实施例5
32.一种治疗肝郁型失眠的中药组合物(五)
33.按重量份配比称取各原料药：落花生枝叶6份；制香附9份，水煎煮。
34.实施例6
35.一种治疗肝郁型失眠的中药组合物(六)
36.按重量份配比称取各原料药：落花生枝叶30份；制香附27份，水煎煮。
37.实施例7
38.一种治疗肝郁型失眠的中药组合物(七)
39.按重量份配比称取各原料药：落花生枝叶10份；制香附6份，水煎煮。
40.实施例8
41.一种治疗肝郁型失眠的中药组合物(八)
42.按重量份配比称取各原料药：落花生枝叶20份；制香附30份，水煎煮。
43.实施例9动物实验(一)
44.落花生枝叶香附复方对小鼠自主活动的研究
45.落花生枝叶具有较好的镇静催眠作用，我们课题组十几年的潜心研究通过文献、药学、药效等实验、临床试验均表明有一定的镇静催眠作用；香附为莎草科植物莎草的干燥根茎，具有疏肝解郁，理气宽中，调经止痛作用。二者之间配伍使用，是否具有更好的药理效果？二者之间的配比关系更为合适？前期临床实践证明，可显著改善入睡时间、睡眠深度、醒后状态等各项临床指标，改善烦躁不安、胁胀纳差等并发症状，且远程疗效稳固，无不良反应，患者依从性好，体现出中医药疗效特色。尚未进行过实验研究。故此次拟对落花生枝叶 香附组成的复方，进行中药提取并平行比较几个组别是否有减少小鼠自主活动的作用。
46.一、材料：
47.1.落花生枝叶、香附。按照不同的产地和剂量进行配比，由上海市中医医院实验中心提取。
48.2.实验动物：清洁级雄性昆明种小鼠18g，由上海斯莱克实验动物有限公司提供。证号：scxk(沪)2002—0010。
49.3.实验仪器：电脑一台；小鼠自发活动光电测试仪一套，zh-zft型自发活动实验视频分析系统(安徽正华生物仪器设备有限公司)。
50.二、实验方法：
51.1.分组：落花 香附(海南9g)；落花 香附(河南9g)；落花 香附(广东9g)；落花 香附(海南15g)；落花 香附(河南15g)；落花 香附(广东15g)。
52.2.方法：采用自发活动实验视频分析系统自动视频记录、分析：总路程、活动轨迹、平均速度、休息时间、活动时间、活动次数、区域分布。并储存数据、分析数据。
53.3.给药途径和方法：
54.(1)落花 香附(海南9g)：随机分组，将小鼠按0.4ml/20g体重，灌胃给药，连续灌胃一周，在最后一个实验日灌胃后1小时放入自发活动仪中观察20分钟。
55.(2)落花 香附(河南9g)：随机分组，灌胃给0.4ml/20g体重，灌胃给药，连续灌胃一周，在最后一个实验日灌胃后1小时放入自发活动仪中观察20分钟。
56.(3)落花 香附(广东9g)：随机分组，灌胃给0.4ml/20g体重，灌胃给药，连续灌胃一周，在最后一个实验日灌胃后1小时放入自发活动仪中观察20分钟。
57.(4)落花 香附(海南15g)：随机分组，灌胃给0.4ml/20g体重，灌胃给药，连续灌胃一周，在最后一个实验日灌胃后1小时放入自发活动仪中观察20分钟。
58.(5)落花 香附(河南15g)：随机分组，灌胃给0.4ml/20g体重，灌胃给药，连续灌胃一周，在最后一个实验日灌胃后1小时放入自发活动仪中观察20分钟。
59.(6)落花 香附(广东15g)：随机分组，灌胃给0.4ml/20g体重，灌胃给药，连续灌胃一周，在最后一个实验日灌胃后1小时放入自发活动仪中观察20分钟。
60.三、统计方法和实验结果：
61.采用spss18.0统计软件lsd法做方差分析统计比较试验药物各时间段的活动差异。
62.四、实验结果：
[0063][0064][0065]
结论：综合上述六组，优选结果为落花生枝叶(姜堰30g) 香附(广东9g)组最好。
[0066]
实施例10临床疗效实验
[0067]
落花生枝叶香附复方的临床研究
[0068]
1临床资料
[0069]
1.1.1病例来源
[0070]
病例资料来自2021年3月到2021年11月期间在医院、门诊以及社会各界招募的志
愿者，中医诊断为肝郁型失眠患者。
[0071]
具体的随机化分配方法由药剂师通过操作统计分析系统软件得出随机数字，制作随机分配卡片，且对药物进行随机编盲，同时信封序号与药物序号相一致。纳入的病例进行试验时，按其入组的先后次序以及对应的序号发放药物。
[0072]
1.2诊断标准
[0073]
(一)西医诊断标准
[0074]
参照国际分类第三版标准，失眠学会于2017年发布了《中国失眠病诊疗指导意见》，其中有关于失眠的诊断有六个标准，这些标准应同时符合以下条件。
[0075]
(1)睡眠症状存在以下1条或以上症状：
[0076]
①
夜间入睡困难；
[0077]
②
睡眠持续困难；
[0078]
③
觉醒时间早于期望的时间；
[0079]
④
到了睡眠时间依然不肯睡觉；
[0080]
⑤
没有家长或照顾人的情况下失眠。
[0081]
(2)一种或更多与失眠有关的症状：
[0082]
①
容易疲劳或者萎靡不振；
[0083]
②
注意力或记忆力减退；
[0084]
③
社会，家庭，职业或学习能力下降；
[0085]
④
情绪不稳定或者易激惹；
[0086]
⑤
日间经常打瞌睡；
[0087]
⑥
表现出一些问题，例如过度的活动，冲动或者具有侵略性；
[0088]
⑦
缺乏积极性，能量或积极性降低；
[0089]
⑧
易犯错误或易出现事故；
[0090]
⑨
非常关注自身睡眠质量或不满意。
[0091]
(3)上述的睡眠－唤醒不能完全由周围的情况解释(如黑暗，安静，舒适，安全)或不适当的睡觉时机(如充分的休息)。
[0092]
(4)以上睡眠困难每星期至少出现3次。
[0093]
(5)连续3个月有上述的失眠及相应的日间临床表现。
[0094]
(6)上述失眠及相应的白天表现，不能用其他的失眠来更好地说明。
[0095]
(二)中医证候诊断标准
[0096]
以下是《中医病症诊断疗效标准》和《中医内科学》的有关资料，结合实际情况，对肝郁失眠进行辨证：
[0097]
(1)主症：睡眠难，睡眠容易醒来，睡眠多，容易醒来，醒来后很难再次入眠，一整晚不能睡觉。
[0098]
(2)兼症：心烦意乱、眩晕、耳鸣、胸闷、胁肋胀痛、眼睛干涩或看东西不清、喉咙有异物感、口干或口苦、尿不清、大便不清、舌红、苔黄、脉弦细。
[0099]
(3)分型包括肝阳上亢、肝亢犯肺、肝亢肾虚、肝亢脾虚、肝郁化火、肝郁瘀阻、肝郁犯胃、肝郁犯心，以肝为主，波及其他脏腑的均辨证为肝郁型失眠。
[0100]
1.3病例纳入与排除标准
[0101]
(一)病例纳入标准
[0102]
(1)符合(icsd-3)中失眠的诊断标准；
[0103]
(2)中医辨证结合失眠症中医症候量表评估符合肝郁型失眠症；
[0104]
(3)psqi评分在6分以上
[0105]
(4)年龄18至80岁门诊以及社会各界招募的患者，知情并同意接受随访观察；
[0106]
(5)平素仅偶尔服用安眠药，近2周未服用任何安眠类及精神类药物；
[0107]
(6)神志清楚，生命体征正常，能清楚表达并执行医嘱。
[0108]
(二)病例排除标准：
[0109]
(1)纳入标准不符者，排除继发失眠者；
[0110]
(2)hama≥14分；
[0111]
(3)hamd≥18分；
[0112]
(4)长期规律服用2种或以上助眠药物者；
[0113]
(5)长期服用精神类药品者；
[0114]
(6)合并有其他系统严重疾病，有大脑器质性疾病者；
[0115]
(7)哺乳期或妊娠期妇女；
[0116]
(8)药物依赖或长期酗酒者；
[0117]
(9)对香附或落花生枝叶或所含成分过敏者；
[0118]
(10)研究者评估不能入选或无法完成实验者。
[0119]
(三)病例终止标准如下：
[0120]
(1)试验过程中自行非药物治疗、饮酒或应用其他药物者；
[0121]
(2)试验过程中未按要求服药而影响疗效者或自行退出；
[0122]
(3)临床试验中出现不良反应较严重、严重并发症。
[0123]
(四)病例脱落标准如下：
[0124]
(1)疗效观察记录不全，无法判断疗效者；
[0125]
(2)无法在2个疗程的实验时间内完成相应的治疗项目者。
[0126]
1.4伦理和研究注册
[0127]
本研究依托上海市中医医院睡眠研究所，对肝郁型失眠患者进行单中心、随机、双盲、平行对照临床研究。本研究经上海市中医医院伦理委员会审查批准(批准号：2020shl-ky-10)，经中国临床试验中心注(chictr2000035673)。遵循自愿原则，本项目所搜集的临床数据只供科研使用，并严格保密。在将研究的目标和过程告诉病人和家属，说服病人的合作，并获得他们的全力支持，签署相关知情同意书。
[0128]
2实验方法
[0129]
2.1样本量估算方法
[0130]
采用完全随机设计的两个总体率假设检验的样本估算公式，参照卫生部“十一五”规划教材《医学统计学》计算得出。样本计算采取单中心随机双盲安慰剂平行对照原则计算方法病例数量，采用有效性原则设计本临床试验。根据落花生枝叶前期试验假定对照组药物治愈率为40％，估计新药治愈率可能达到80％，且根据理论，新药有效率不能比对照药低。研究者认为新药疗效至少要优于对照药10％才有临床意义。采用均等(1:1)有效性设计方案，设α＝0.05(单侧)，β＝0.2(单侧)，δ＝10％，估计样本量：
[0131][0132]
代入公式，得：n＝34.84，取整为n＝35。即每组需要病例数35例。
[0133]
因为临床试验病人退出以及失访的可能性比较大，如果退出或失眠病人超过总数的20％，试验结果将不准确。为顺利完成试验，本次按照20％失访退出率，计算出失访退出的病例为14例，最后得到样本总量84例，每组42例。
[0134]
2.2分组方法
[0135]
采用随机双盲法及性能对照实验以及诊断标准筛选出符合条件的失眠患者84例，采用随机数字表方法将患者分为2组：对照组和观察组，两组各42例。
[0136]
2.3操作方法
[0137]
对照组：极低剂量落花生枝叶香附复方颗粒(是观察组1/10剂量)(落花生枝叶(姜堰3g) 香附(广东0.9g)。
[0138]
用法：每次一袋，早晚饭后冲服200ml，共服一个疗程56袋(共28剂)。
[0139]
疗程：共观察6周，每2周随访一次(第2周末、第4周末)，第6周末电话随访。
[0140]
观察组：落花生枝叶香附复方颗粒(落花生枝叶(姜堰30g) 香附(广东9g)(姜堰天江制药有限公司生产)。
[0141]
用法：每次一袋，早晚饭后冲服200ml，共服一个疗程56袋(共28剂)，并嘱托患者规律作息。
[0142]
疗程：共观察6周，每2周随访一次(第2周末、第4周末)，第6周末电话随访。
[0143]
在治疗前对所有受试者进行睡眠健康宣教，在治疗期间要求受试者有正常生活方式，规律作息，睡觉之前不喝咖啡、浓茶等有兴奋作用的饮品。
[0144]
2.4主要观察指标
[0145]
2.2.4.1匹兹堡睡眠质量指数(psqi)
[0146]
为了评价治疗前、治疗2周、治疗前4周后的睡眠质量，要求受试者在治疗前、治疗2周、治疗4周的进行psqi评分。使用psqi对最近一个月睡眠质量进行评估，psqi评分包含18个项目，共分为7个部分，每个部分分别对应的分数为0分，1分，2分，3分。7个部分总得分为psqi总评分，总分为0-21分，总分数6分以下为正常，6-7代表轻度失眠，8-14为中度失眠，大于14分为重度失眠。见附录1。
[0147]
2.5次要观察指标
[0148]
2.2.5.1spiegel自评量表
[0149]
主要评价受试者治疗前、治疗2周、治疗4周的睡眠情况，让受试者按照自评量表的6个项目进行评分。每个项目评分根据不同程度评分，每项评分总和为spiegel总分，总分为42分，以12分、18分、24分为分界线分为正常、轻度失眠、中度失眠、重度失眠4个等级。详见附录2。
[0150]
2.2.5.2中医症候积分
[0151]
在治疗前和治疗4周后，将第一天的受试者进行问卷调查，并按照患者的症状和体征，如实填写中医症状积分表，并对治疗前后的症状进行评分。中医证候积分表由23种症状组成，根据症状等级分为0分，2分、4分、6分。评分后根据症状的分值范围，将症状分级，≤15分为轻微；16～30分为中度；≥31分为重度。见附录3。
[0152]
2.2.5.3epworth睡眠量表
[0153]
在治疗前与治疗4周填写epworth嗜睡量表，对病人白天的睡眠状况进行半客观评价。该量表共8项因子，每个因子按0、1分、2分、3分记分，总分24分，按照总分分为瞌睡、过度瞌睡、有危险性的瞌睡三个等级。见附录4。
[0154]
2.2.5.4安全性评估
[0155]
(1)如实记录两组患者在试验期间发生的不良反应的时间和程度。
[0156]
(2)分析是否与试验药物相关，是否需要停止试验。
[0157]
(3)在用药前后对患者的生命体征、安全性指标进行检测，对出现异常的患者进行后续随访，详细记录其转归情况。
[0158]
2.6疗效评定标准
[0159]
2.6.1总疗效判定标准
[0160]
综合效果指标依据《中药新药临床研究指导原则》及psqi评分、spiegel减分率，于1993颁布。
[0161]
(1)临床痊愈：减分比例大于76％，或已恢复到正常或6h睡眠，有深度睡眠以及清醒后精力旺盛；
[0162]
(2)显效：减分比例为51％
～
75％之间，睡眠质量显著改善，睡眠时间提高3小时或以上；
[0163]
(3)有效：减分比例在25-50％之间，与对照组相比，患者的睡眠时间均低于3小时；
[0164]
(4)无效：减分比例小于25％，未见明显改善或减轻。
[0165]
采用莫尼地平减分率算法：计算公式＝[(治疗前积分－治疗后积分)
÷
治疗前计分]
×
100％。
[0166]
总有效率算法：总有效率＝(显效数 治愈数 有效数)/总例数
×
100％.
[0167]
2.6.2中医症候疗效判定标准
[0168]
治疗前后变化参照中医症候积分表制定如下标准：
[0169]
(1)临床痊愈：中药学辨证分数减少95％以上，临床症状完全消失或几乎消失；
[0170]
(2)显效：中医症候积分减分70％
～
94％，临床症状改善明显；
[0171]
(3)有效：中医症候积分降低30％
～
69％，临床症状基本改善；
[0172]
(4)无效：中医症候积分降低30％以下，临床症状未见好转或加重。
[0173]
2.7数据统计方法
[0174]
根据意向性分析的原则，对治疗前后数据应用spss22.0软件对数据进行分析。两组性别属于计数资料，采用χ2检验。两组病人的年纪、性别构成比、婚姻、居住情况、病程、psqi积分、中医证候积分、eworth嗜睡量表积分采用两独立样本t检验、wilcoxon两独立样本秩和检验。组内治疗前后比较，采用配对t检验或wilcoxon配对秩和检验。各治疗时间点采用重复测量方差分析，两组有效率的比较采用秩和检验。以α＝0.05为检验水准，若p＜0.05可视为差异具有统计学意义。
[0175]
3实验结果
[0176]
3.1一般资料比较
[0177]
3.1.1脱落率比较
[0178]
本次研究共纳入84例。观察组共完成38例，脱落4例(1例诉服药后头晕，心跳加快，
停服无症状，要求停用；3例依从性差)，脱落率9.52％；对照组完成36例，脱落6例(1例因动手术医生劝阻不要服用；2例因工作忙碌；3例服药依从性差)，脱落率11.29％。共计脱落10例，共完成74例，合计脱落率11.90％，两组脱落率无统计学差异，病例缺失数据沿用末次采集数据。详见表2-1。
[0179]
表2-1两组病例脱落率(n％)比较
[0180][0181][0182]
3.1.2基本资料比较
[0183]
本次研究共纳入84例受试者，男性27例，女性57例。两组受试者性别构成上女性多于男性，性别构成为计数资料，采用卡方检验，χ2＝0.491，p＝0.483》0.05，无统计学差异，可进行比较。详见表2-2。
[0184]
表2-2两组受试者性别构成比(n％)比较
[0185][0186]
两组受试者年龄为计量资料，不同时满足正态分布，采用秩和检验，z＝-1.119，p＝0.263》0.05，无统计学差异，两组具有可比性，详见表2-3。
[0187]
表2-3两组受试者年龄(岁)比较m(iqr)
[0188][0189]
两组受试者婚姻状况为计数资料，经卡方检验，两组受试者标准化检验统计量为χ2＝0.369，p＝0.712，无统计学差异，两组可进行比较。详见表2-4。
[0190]
表2-4两组受试者婚姻状况(n％)比较
[0191][0192][0193]
两组受试者居住情况为计数资料，经卡方检验，检验统计量χ2＝0.369，p＝0.799《
0.05，无统计学差异，两组可进行比较，详见表2-5。
[0194]
表2-5两组受试者居住状况(n％)比较
[0195][0196]
两组病例病程为计量资料，不同时满足正态检验，采用四分位数间距描述，经秩和检验，检验统计量z＝-1.55，p＝0.291》0.05，无统计学差异，两组可进行比较。详见表2-6。
[0197]
表2-6两组受试者病程比较m(iqr)
[0198][0199]
3.2psqi量表积分比较
[0200]
两组psqi评分在治疗前比较，t＝-1.526，p＝0.131》0.05，无统计学差异，可以进行比较。详见表2-7。
[0201]
表2-7两组治疗前psqi评分比较(x
±
s)
[0202][0203]
两组自身治疗前与治疗2周psqi评分比较，对照组统计量t＝-5.053，p《0.001，有统计学差异，观察组统计量z＝7.847，p《0.001，有统计学差异。详见表2-8。
[0204]
表2-8治疗前与治疗2周psqi评分比较(x
±
s)
[0205][0206]
两组自身治疗前与治疗4周psqi评分比较，对照组统计量t＝8.603，p《0.001；观察组统计量t＝9.477，p《0.001，有统计学差异。详见表2-9。
[0207]
表2-9治疗前与治疗4周psqi评分比较(x
±
s)
[0208][0209]
两组自身治疗2周与治疗4周psqi评分比较，对照组统计量t＝3.100，p＝0.003《
0.05，有统计学差异；观察组统计量z＝-2.873，p＝0.004《0.05，有统计学差异。详见表2-10。
[0210]
表2-10治疗2周与治疗4周psqi评分比较(x
±
s)
[0211][0212]
对治疗2周与治疗4周采用配对t检验比较，治疗后两组psqi评分无统计学差异。各治疗时间点psqi评分符合正态分布，采用多因素重复测量方差分析对治疗前、治疗2周、治疗4周psqi评分进行比较。治疗前与治疗4周psqi评分的主效应有统计学差异(p《0.001)，由表2-11可知，治疗前的平均psqi评分为(12.45 13.10)/2＝13.775，治疗2周的平均psqi评分为(9.79 8.64)/2＝9.215，治疗后的平均psqi评分为(8.88 7.69)/2＝8.285，治疗4周psqi评分主效应估计值为13.775-8.285＝5.49。如果不考虑治疗时间，两组的组别主效应无差别(p＝0.070》0.05)。对照组平均psqi评分(12.45 9.79 8.88)/3＝10.373，观察组的平均psqi评分(13.10 8.64 7.69)/3＝9.81，观察组与对照组psqi评分组别主效应的估计值9.81-10.373＝-0.563。由表2-11及图1可知，治疗时间与处理因素有交互作用，即观察组与对照组治疗前后的psqi评分变化程度不同。按照表2-11计算对照组与观察组单独效应，对照组与观察组治疗前基线资料无统计学差异(表2-7)，但观察组的psqi评分平均降低5.41，对照组的psqi评分平均降低3.57，组别因素与治疗时间交互作用f＝3.536，p＝0.034《0.05，说明观察组psqi评分降低优于对照组。
[0213]
表2-11治疗干预降低psqi评分的重复测量方差分析结果
[0214][0215]
两组psqi评分疗效分布情况比较，采用u检验，统计量z＝673.500，p＝0.047《0.05，有统计学差异。对照组总有效率59.5％，观察组总有效率73.2％，观察组总有效率明显高于对照组。详情见表2-12。
[0216]
表2-12两组psqi有效率(n％)比较
[0217][0218]
两组间psqi量表子项评分比较，治疗前psqi子项评分均无统计学差异(p》0.05)。治疗2周入睡时间p＝0.002《0.05，有统计学差异，治疗4周入睡时间p＝0.007《0.05，有统计学差异，其余各项p》0.05，无统计学差异。详情见表2-13。
[0219]
表2-13两组psqi量表子项评分比较(x
±
s)
[0220][0221][0222]
3.3spiegel量表比较
[0223]
两组患者在服药之前的spiegel得分的对比研究，统计量z＝-0.842，p＝0.402》0.05，无统计学差异，具有可比性。
[0224]
表2-14两组治疗前spiegel评分比较(x
±
s)
[0225][0226]
两组自身对比，对照组治疗前与治疗2周比较，统计量t＝7.917，p《0.001，有统计学差异。
[0227]
表2-15治疗前与治疗2周spiegel量表评分比较(x
±
s)
[0228][0229]
两组自身对比，治疗前与治疗4周比较，对照组统计量t＝7.917，p《0.001，有统计学差异；观察组统计量t＝9.213，p《0.001，有统计学差异。
[0230]
表2-16治疗前与治疗4周spiegel量表评分比较(x
±
s)
[0231][0232]
两组自身对比，治疗2周与治疗4周比较，对照组统计量t＝2.557，p《0.014，有统计学差异，观察组统计量z＝-3.356，p＝0.001《0.05，有统计学差异。
[0233]
两组间比较，治疗治疗2周统计量z＝-1.201，p＝0.230》0.05，无统计学差异；治疗4周统计量z＝-1.730，p＝0.084》0.05，无统计学差异。
[0234]
表2-17治疗2周与治疗4周spiegel量表评分比较(x
±
s)
[0235][0236]
两组spiegel量表评分疗效分布情况比较，采用u检验，统计量z＝656.000，p＝0.035《0.05，有统计学差异。对照组总有效率57.1％，观察组总有效率78.6％，观察组总有效率明显高于对照组。
[0237]
表2-18两组spiegel量表有效率(n％)比较
[0238]
[0239]
spiegel量表子项目评分比较，治疗前spiegel量表子项目评分差异均无统计学意义，治疗2周每晚上床到入睡时间p＝0.019《0.05，有统计学差异，治疗4周每晚上床到入睡时间p＝0.042《0.05，有统计学差异，观察组每晚上床到入睡时间评分降低优于对照组。治疗2周睡眠深度p＝0.031《0.05，有统计学差异，观察组睡眠深度改善优于对照组。其余各项p》0.05，无统计学差异。两组spiegel量表子项目评分比较见表2-19
[0240]
表2-19两组spiegel量表子项目评分比较
[0241][0242]
3.4epworth嗜睡量表比较
[0243]
两组受试者治疗前后组内比较，差异没有统计学意义(p》0.05)，治疗前和治疗后两组比较，差异没有统计学意义。两组治疗前后epworth嗜睡量表比较m(iqr)见表2-20。
[0244]
表2-20两组治疗前后epworth嗜睡量表比较m(iqr)
[0245]
[0246]
3.5中医症候积分比较
[0247]
两组内治疗后与治疗前对比，对照组统计量z＝-0.426，p《0.001，有统计学差异，观察组统计量z＝-7.387，p《0.001，有统计学差异。治疗4周两组间中医症候积分比较，p＝0.370》0.05，差异无统计学意义。两组中医症候积分比较m(iqr)见表2-21。
[0248]
表2-21两组中医症候积分比较m(iqr)
[0249][0250]
两组中医症候积分疗效分布情况比较，采用u检验，对照组有效率59.5％，观察组有效率69％，检验统计量z＝773.000，p＝0.298》0.05，无统计学差异。两组中医症候积分有效率(n％)比较见表2-22。
[0251]
表2-22两组中医症候积分有效率(n％)比较
[0252][0253]
结果：psqi积分：两组自身治疗前与治疗2周、治疗前与治疗4周、治疗2周与治疗4周psqi评分比较，都有统计学差异(p《0.05)。两组治疗前、治疗2周、治疗4周psqi评分进行比较，治疗前与治疗4周psqi评分的主效应有统计学差异(p《0.001)，两组治疗4周psqi评分治疗时间主效应估计值为13.775-8.285＝5.49，不考虑治疗时间，两组的组别主效应无差别。观察组与对照组评分主效应的估计值9.81-10.373＝-0.563，治疗时间与处理因素有交互作用，即观察组与对照组治疗前后的psqi评分变化程度不同，计算对照组与观察组单独效应，观察组的psqi评分平均降低5.41，对照组的psqi评分下降3.57，组别因素与治疗时间交互作用f＝3.536，p＝0.034《0.05，说明观察组psqi评分降低优于对照组。两组间psqi评分子项比较，治疗2周与治疗4周，入睡时间p《0.05，有统计学差异，观察组在改善入睡时间上优于对照组。两组psqi评分疗效分布情况比较，对照组总有效率59.5％，观察组总有效率73.2％，p＝0.047《0.05，有统计学差异，观察组总有效率明显高于对照组。
[0254]
spiegel量表评分比较：两组自身对比，治疗前与治疗2周比较，p《0.001，都有统计学差异；治疗前与治疗4周比较，p《0.001，都有有统计学差异；治疗2周与治疗4周比较，p《0.05，都有统计学差异。两组间比较，治疗2周，p＝0.230》0.05，无统计学差异；治疗4周，p＝0.084》0.05，无统计学差异。两组spiegel量表评分疗效分布情况比较，采用u检验，统计量z＝656.000，p＝0.035《0.05，有统计学差异。对照组总有效率57.1％，观察组总有效率78.6％，观察组总有效率明显高于对照组。spiegel量表子项目评分比较，治疗前spiegel量表子项目评分差异均无统计学意义，治疗2周每晚上床到入睡时间p＝0.019《0.05，有统计学差异，治疗4周每晚上床到入睡时间p＝0.042《0.05，有统计学差异，观察组每晚上床到入睡时间评分降低优于对照组。治疗2周睡眠深度p＝0.031《0.05，有统计学差异，观察组睡眠
深度改善优于对照组。其余各项p》0.05，无统计学差异。
[0255]
epworth睡眠量表分析：通过表可得知，两组自身治疗后与治疗前对比，差异无统计学意义(p》0.05)，治疗后两组得分对比，差异无统计学意义(p》0.05)。
[0256]
中医症候疗效分析：通过表可得知，两组自身治疗后与治疗前对比，差异存在统计学意义(p《0.05)，治疗后两组得分对比，差异没有统计学意义(p》0.05)。两组中医症候分布疗效对比，对照组总有效率59.5％，观察组总有效率69％，检验统计量z＝773.000，p＝0.298》0.05，无统计学差异。
[0257]
结论：观察组与对照组的治疗方法对于肝郁型失眠患者疗效确切，均能改善psqi量表积分、spiegel量表积分，中医症候积分。在治疗4周的时间里，观察组psqi睡眠总评分改善明显优于对照组，观察组psqi评分子项入睡时间明显优于对照组。观察组psqi评分总有效率明显高于对照组；观察组spiegel量表积分改善总有效率明显高于对照组，观察组对入睡时间及睡眠深度的改善优于对照组，中医症候评分疗效总体疗效相当。
[0258]
实施例11动物实验(二)
[0259]
失眠症是一种持续相当长时间的睡眠的质和/或量令人不满意的状况[1]。近十几年来，随着社会发展加速和竞争加剧，人群失眠症发病率迅速上升。给人们的正常工作和生活带来严重的不良影响[1-2]。其中，在失眠患者中，肝郁引起的失眠所占比重较大[3]。落花生枝叶复方是基于院内制剂“落花安神合剂”的临床验方，长期临床应用中反复考核疗效，以“落花安神合剂”为基础形成的落花生枝叶复方。落花生枝叶复方是在全国名老中医王翘楚教授多年从医经验的基础上，针对失眠症病机特点，结合中西医理论，采用从肝论治法，经临床反复论证后形成的治疗慢性失眠症的临床验方。本实验旨在观察肝郁失眠大鼠行为学及5-ht的变化，进一步探讨落花生枝叶复方防治失眠的作用机制。
[0260]
1.材料与方法
[0261]
1.1实验材料
[0262]
1.1.1实验动物
[0263]
spf级sprague-dawley(sd)雄性大鼠50只，体质量(200
±
20)g，由上海斯莱克实验动物有限公司提供，生产许可证号：scxk(沪)2012-0002，饲养于恒温(22
±
1)℃和12∶12固定照明节律的环境下，并可自由摄取食物和水。
[0264]
1.1.2实验药物
①
落花生枝叶复方1(落花生枝叶30g 制香附9g)；
②
落花生枝叶复方2(落花生枝叶30g 柴胡9g)；
③
落花生枝叶复方3(落花生枝叶30g 佛手9g)；
④
落花生枝叶39g；
⑤
制香附39g。
[0265]
1.1.3主要试剂：对氯苯丙氨酸(pcpa，美国sigma公司)；
[0266]
1.1.4主要仪器：morris水迷宫视频跟踪系统(成都泰盟软件有限公司)；thermo fresco-17离心机(美国)、bio-rad 680酶标仪(美国)、mmm-group恒温培养箱(德国)、eppendorf移液器(德国)、实验耗材吸头eppendorf、ep管axygen。。
[0267]
1.2实验方法
[0268]
1.2.1实验分组：50只大鼠依据随机数字表法分为：落花生枝叶复方1组、落花生枝叶复方2组、落花生枝叶复方3组、落花生枝叶组、制香附组，每组10只。
[0269]
1.2.2肝郁失眠大鼠模型制造：采用该领域被广泛认可的大鼠慢性夹尾刺激和pcpa腹腔注射复合制造肝郁失眠模型。各组动物先采用夹尾刺激法致肝郁：即将大鼠每笼5
只喂养，用尖端包裹纱布的大弯止血钳，夹住其中1只大鼠的尾巴，令其与笼中其他大鼠撕打，从而激怒全笼大鼠，令全笼大鼠处于对峙状态，每次刺激30min，2次/天，连续刺激1周，使大鼠感到郁怒不适而不得发，见情绪抑郁、胡须下垂、叫声尖细，即符合肝郁表现。
[0270]
将pcpa溶于弱碱性生理盐水中，配置成混悬液，以300mg/(kg
·
只)对大鼠进行腹腔注射，1次/d，连续2d，观察发现大鼠昼夜节律消失，白天夜晚活动不停，睡眠减少直至消失，进食及饮水增多，体毛凌乱无华，精神萎靡，再次刺激时，反抗明显减弱，整体观察与正常动物明显不同，表明造模成功[7-8]。
[0271]
1.2.3给药方法:各组动物按照设定的剂量，给予相应的药物；各组均按20ml/kg体质量灌胃，连续灌胃14d。
[0272]
1.3观察检测指标
[0273]
1.3.1一般状态观察大鼠的精神活动状态、皮毛颜色是否有光泽、进食饮水量、对外界刺激的反应及体质量变化等。
[0274]
1.3.2检测方法：连续给药14天后，采用光电管法电脑自动记数，记录大鼠的平行移动距离。将大鼠放入活动箱内先适应5min，再记录10min活动。以平移距离为筛选指标进行筛选，用药前10分钟活动次数高于1750或低于1100予以剔除。合格动物进行灌胃给药，放入活动箱内5min后开始记录大鼠活动次数作为药理实验数据。并储存数据、分析数据。
[0275]
1.3.3统计学分析:采用spss 21.0软件进行统计学分析。计量资料以(x
±
s)表示，组间比较采用t检验，重复测量资料采用重复测量方差分析；计数资料以例数或百分比表示，组间比较采用χ2检验。以p＜0.05为差异具有统计学意义。
[0276]
表一落花生枝叶复方提取物对大鼠自主活动的影响(光电管法)n＝10
[0277][0278]
注：水对照组与用药组比较：*p《0.05；
[0279]
1.3.4.结果：
[0280]
通过对各组服用对应药物后，进行自主活动检测，各组实验动物在给药前后，自主
活动均有所减少，不同时间段，减少活动的幅度不同；不同组别之间同一时间段比较落花生枝叶复方1组减少活动的作用最明显且稳定；经过综合比较，落花生枝叶复方1组(落花生枝叶 制香附)效果最好。
[0281]
2.1行为学检测:造模结束1周后采用morris水迷宫学习记忆行为测试[6]评估大鼠的学习记忆能力。morris水迷宫实验分为两部分:(1)定位航行试验。先将大鼠放入水池中(不放平台)自由游泳，让其熟悉morris水迷宫环境。训练开始时，将平台置于一象限，将受试大鼠头朝池壁按顺时针方向依次由第一象限、第二象限、第三象限、第四象限入水点放入水中。如果大鼠在2min内找到平台(逃避潜伏期)，记录2min内实际逃避潜伏期时间；如果在2min内未找到平台，将其引上平台并停留10s，逃避潜伏期时间记录为2min。每天于固定时间段训练，4次/d，每次120s，持续4d。每天取4次逃避潜伏期时间的平均值作为当日的成绩。
[0282]
2.2结果
[0283]
2.2.1各组大鼠morris水迷宫结果
[0284]
1)定位航行实验结果。
[0285]
服药2周后实验结果见表2。落花生枝叶复方1组大鼠随着实验天数的增加，寻找到平台的时间不断缩短，说明大鼠的空间学习能力不断提高，而其余四组找到平台的时间相比，无统计学差异。(p》0.05)。
[0286]
表1各组大鼠定位航行实验结果(x
±
s)
[0287][0288]
注：与假手术组比较，*p《0.05，**p《0.01
[0289]
讨论
[0290]
失眠治疗以疏肝为主，疏肝以解郁藏魂，魂藏即能神安。本实验采用该领域被广泛认可的大鼠慢性夹尾刺激和pcpa腹腔注射复合制造肝郁失眠大鼠模型。自主活动实验是研究大鼠情绪反应的常用方法，反映动物探索学习、恐惧警觉状态的行为特征，其中水平活动得分和垂直活动得分反映大鼠的活跃性和兴奋性。本研究结果显示：落花生枝叶复方1组(落花生枝叶 制香附)可改善肝郁失眠大鼠在新环境中的自主行为、探究行为，减少焦虑，改善大鼠学习记忆能力的作用。
[0291]
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为
本发明的保护范围。