用于癌症治疗的改进的人甲硫腺苷/腺苷消耗酶变体

用于癌症治疗的改进的人甲硫腺苷/腺苷消耗酶变体1.交叉引用2.本技术要求2020年1月7日提交的美国临时申请号62/958,161的权益，其被通过引用整体并入本文。3.关于联邦资助研究的声明4.本发明是在美国国立卫生研究院授予的项目号r01ca189623和r01ca240700的政府资助下完成的。政府对本发明享有一定的权利。5.序列表6.本技术包含已以ascⅱ格式电子提交的序列表，并在此通过引用将其整体并入本文。ascⅱ副本创建于2021年1月6日，命名为utfbp1227wo_st25，大小为84722字节。7.发明背景8.领域9.本发明大体涉及医学和生物学领域。更具体地，其涉及用于癌症治疗的消耗甲硫腺苷(mta)和/或腺苷(ado)的酶。甚至更具体地，其涉及适于人类治疗的具有mta和/或ado降解活性的人类酶的工程改造、药理学优化和工艺开发。10.相关领域的描述11.甲硫腺苷磷酸化酶(mtap)在染色体9p21.3处的纯合性基因缺失是在骨肉瘤、胰腺癌和脊索瘤中观察到的常见事件，约30-40％，在间皮瘤、t细胞急性淋巴细胞白血病和胶质瘤中观察到的丢失甚至更高(60‑ꢀ75％)(bertino等人，2011)。mtap将多胺合成的副产物甲硫腺苷(mta)分解为甲硫核糖-1'-磷酸(mtr-1'-p)和腺嘌呤，它们再循环进入甲硫氨酸和嘌呤补救途径。mtap丢失与侵袭性疾病和较差结局相关。实体瘤和淋巴瘤中的mtap缺失导致其底物mta的积累和分泌增加(stevens等人，2008；stevens等人，2009；stevens等人，2010)。一项在黑色素瘤细胞中进行的研究报告称，肿瘤中mta浓度显著高于正常组织，这与更显著的侵袭性和恶性特征相关(stevens等人，2009)。同样，肝细胞癌(hcc)中的mtap缺乏也显示出与增加的mta水平和hcc增殖密切相关，并增加了肝星状细胞中的促肿瘤基因表达谱(kirovski等人，2011)。12.mtap基因的丢失通常被认为是与cdkn2a(一种细胞周期调控因子)一起的简单旁观者(bystander)共缺失，因为它们在染色体9p21上邻近。然而，在胃癌和皮肤t细胞淋巴瘤的研究中，发现mtap缺失的发生与cdkn2a缺失无关，并且与较差结局相关(kim等人，2011；woollard等人，2016)。在小鼠基因敲除模型中，发现纯合子mtap-/-缺陷型小鼠具有胚胎致死表型，而mtap /-杂合子发育正常，但过早死于t细胞淋巴瘤(kadariya等人，2009)。与这些发现一致的是，常染色体显性遗传性恶性肿瘤，即骨干髓质狭窄伴恶性纤维组织细胞瘤(dmsmfh)，是由mtap基因内的突变引起的，这些突变导致外显子跳跃、选择性剪接，最终导致功能异常的mtap基因产物，表明肿瘤抑制作用与cdkn2a无关(camacho‑ꢀvanegas等人，2012)。13.mtap的缺失或抑制会导致mta的积累和排泄，而mta已被证明具有有效的免疫抑制特性。与mta一起孵育可阻止幼稚淋巴细胞的增殖和分化，并对活化的人类t细胞具有细胞毒性。特别是，mta阻止抗原特异性cd8 t细胞扩增，阻止活化标记物(如cd25和cd69)上调，并诱导预刺激的细胞毒性t淋巴细胞凋亡(henrich等人，2016)。早期的报道还指示，外源性mta抑制用抗原或同种异体细胞刺激的人淋巴细胞培养物的dna合成、蛋白质合成和增殖，这种效应可以通过洗涤细胞去除mta来逆转(vandenbark等人，1980)。从机制上讲，最近的报道指示，通过组蛋白甲基化调节染色质重塑和基因表达的sam依赖性蛋白精氨酸甲基转移酶(prmt)在促进mta的免疫抑制作用方面发挥重要作用。特别是，显示prmt5表达在记忆t细胞活化和扩增中发挥关键作用(webb，amici等人，2017)。据报道，虽然mta不是大多数甲基转移酶的重要抑制剂，但它是prmt5的一种非常有效的抑制剂，ki为0.26μm(marjon、cameron等人，2016)，且因此可能参与了mta的免疫抑制作用机制。例如，mta和prmt5抑制剂均被显示降低t细胞增殖、活性和功能(strobl、schaffer等人，2020)。14.mta还可以作为腺苷受体a2a和a2b的激动剂，在巨噬细胞中产生耐受性表型(keyel等人，2014)。同样，在使用恶性黑色素瘤的实验中，观察到mta通过诱导碱性成纤维细胞生长因子(bfgf)和基质金属蛋白酶3(mmp3)在成纤维细胞中引起肿瘤促进作用(stevens等人，2009)。mtap缺失通过mta的积累起抑制免疫效应细胞并促进耐受性基质细胞表型作用的结果这一证据现在表明了为什么这是癌症中最常见的基因缺失之一的明确机制。肿瘤分泌的mta可被视为免疫检查点，其帮助肿瘤细胞逃避免疫监控和清除。15.发明概述16.在一些实施方案中，本文提供的是组合物。在一个方面，组合物包含具有甲硫腺苷磷酸化酶活性的多肽，其中多肽的至少一个氨基酸残基已被工程改造以消除偶联位点。17.在一些实施方案中，多肽包含与seqidno:1的至少100个连续氨基酸具有至少80％同源性的氨基酸序列，并且包含对应于seqidno:1的苏氨酸18、苏氨酸197、丝氨酸178、缬氨酸233和甲硫氨酸196的氨基酸。在一些实施方案中，多肽的至少一个氨基酸残基包含第一赖氨酸或第一半胱氨酸。在一些实施方案中，对应于seqidno:1的赖氨酸225的氨基酸被工程改造以消除偶联位点。在一些实施方案中，对应于seqidno:1的赖氨酸238的氨基酸被工程改造以消除偶联位点。在一些实施方案中，对应于赖氨酸225的氨基酸或对应于赖氨酸238的氨基酸被精氨酸取代。18.在一些实施方案中，所述多肽用于将甲硫腺苷磷酸化成甲硫核糖-磷酸和腺嘌呤的kcat/km为至少1.5x105m-1s-1。在一些实施方案中，所述多肽用于将甲硫腺苷磷酸化成甲硫核糖-磷酸和腺嘌呤的kcat/km为约1.5x105m-1s-1至3.0x105m-1s-1。在一些实施方案中，所述多肽用于将甲硫腺苷磷酸化成甲硫核糖-磷酸和腺嘌呤的kcat/km为包含seqidno:1的甲硫腺苷磷酸化酶的vmax的至少50％。在一些实施方案中，多肽用于将甲硫腺苷磷酸化成甲硫核糖-磷酸和腺嘌呤的vmax为包含seqidno:1的甲硫腺苷磷酸化酶的vmax的至少50％。在一些实施方案中，多肽用于将甲硫腺苷磷酸化成甲硫核糖-磷酸和腺嘌呤的km不超过包含seqidno:1的甲硫腺苷磷酸化酶的km的两倍。19.在一些实施方案中，组合物包含至少一种与本文所述多肽偶联的聚合物，其中与未偶联的多肽相比，聚合物增加了多肽的血清半衰期。在一些实施方案中，至少一种聚合物是聚乙二醇。在一些实施方案中，聚乙二醇的平均分子量为约5000kda。在一些实施方案中，聚乙二醇的平均分子量为约500kda至约1000kda、约800kda至约1600kda、约1500kda至约3000kda、约2000kda至约4000kda、约2500kda至约5000kda、约3000kda至约6000kda、约4,000kda至约8,000kda、约6,000kda至约12,000kda、约10,000kda至约20,000kda、或约15,000kda至约30,000kda。在一些实施方案中，至少一种聚合物与多肽的第二赖氨酸或第二半胱氨酸偶联。20.在一些实施方案中，组合物包含本文所述的多肽的群体，其中该群体包含多肽的三聚体。在一些实施方案中，组合物包含本文所述的多肽的群体，其中至少80％的多肽包含至少一种聚合物。在一些实施方案中，至少80％的多肽包含至少三个所述至少一种聚合物。在一些实施方案中，至少80％的多肽包含至少六个所述至少一种聚合物。在一些实施方案中，每个多肽的聚合物数量构成高斯分布。在一些实施方案中，高斯分布具有每个多肽2±1、3±1、4±1或6±1个聚合物的众数。在一些实施方案中，高斯分布具有每个多肽8±1、3±1、4±1或6±1个聚合物的众数。21.在一些实施方案中，所述多肽用于将甲硫腺苷磷酸化成甲硫核糖-磷酸和腺嘌呤的kcat/km为至少1.5x105m-1s-1。在一些实施方案中，所述多肽用于将甲硫腺苷磷酸化成甲硫核糖-磷酸和腺嘌呤的kcat/km为约1.5x105m-1s-1至3.0x105m-1s-1。在一些实施方案中，所述多肽用于将甲硫腺苷磷酸化成甲硫核糖-磷酸和腺嘌呤的kcat/km为包含seqidno:1的甲硫腺苷磷酸化酶的vmax的至少50％。在一些实施方案中，多肽的甲硫腺苷磷酸化酶活性的vmax是包含seqidno:1的甲硫腺苷磷酸化酶的甲硫腺苷磷酸化酶活性的vmax的至少50％。在一些实施方案中，多肽的甲硫腺苷磷酸化酶活性的km不超过包含seqidno:1的甲硫腺苷磷酸化酶的甲硫腺苷磷酸化酶活性的km的两倍。22.在一些实施方案中，组合物还包含异源肽区段。在一些实施方案中，异源肽区段包含靶向部分。在一些实施方案中，靶向部分包括抗体或其片段，或肽。23.在一些实施方案中，本文提供的是核酸。在一个方面，核酸包含编码本文所述的多肽的核苷酸序列。24.在一些实施方案中，核酸被密码子优化的以便在细菌、真菌、昆虫或哺乳动物中表达。在一些实施方案中，核酸被密码子优化的以便在细菌中表达。在一些实施方案中，细菌是大肠杆菌(e.coli)。在一些实施方案中，核酸包含根据seqidno:4和6之一的序列。25.在一些实施方案中，本文提供的是表达载体。在一个方面，表达载体可以包含本文所述的核酸。26.在一些实施方案中，本文提供的是宿主细胞。在一个方面，宿主细胞包含本文所述的核酸。27.在一些实施方案中，宿主细胞是细菌细胞、真菌细胞、昆虫细胞或哺乳动物细胞。在一些实施方案中，细菌细胞是大肠杆菌(e.coli)细胞。28.在一些实施方案中，本文提供的是药物制剂。在一些实施方案中，药物制剂在药学上可接受的载体中包含本文所述的组合物。29.在一些实施方案中，本文提供的是治疗肿瘤患者的方法。在一个方面，治疗肿瘤患者的方法包括对患者施用有效量的包含具有甲硫腺苷磷酸化酶活性的多肽的组合物，其中多肽具有至少36小时的血清半衰期。30.在一些实施方案中，组合物是本文所述的药物制剂。在一些实施方案中，患者先前被诊断患有肿瘤。在一些实施方案中，患者患有实体瘤。在一些实施方案中，肿瘤包括血液肿瘤。在一些实施方案中，肿瘤包括黑色素瘤。在一些实施方案中，肿瘤包括乳腺癌。在一些实施方案中，肿瘤包括结肠癌。在一些实施方案中，肿瘤包括骨肉瘤、胰腺癌、脊索瘤、间皮瘤、t细胞all、胶质瘤、肾细胞癌、黑色素瘤、鳞状细胞癌、胆囊癌、胃癌或肝细胞癌。在一些实施方案中，肿瘤具有mtap缺失。在一些实施方案中，肿瘤具有相对于参考水平降低的甲硫腺苷磷酸化酶多肽水平。在一些实施方案中，肿瘤具有相对于参考水平降低的甲硫腺苷磷酸化酶活性水平。在一些实施方案中，肿瘤具有相对于参考水平升高的cd73水平。在一些实施方案中，肿瘤具有相对于参考水平升高的cd39水平。在一些实施方案中，肿瘤具有相对于参考水平升高的mta水平。在一些实施方案中，肿瘤具有相对于参考水平升高的ado水平。在一些实施方案中，参考水平是健康受试者的水平。在一些实施方案中，参考水平是患者健康组织的水平。31.在一些实施方案中，患者是人类患者。在一些实施方案中，制剂可通过以下方式给药：肿瘤内、静脉内、皮内、动脉内、腹膜内、病变内、颅内、关节内、前列腺内、胸膜内、气管内、眼内、鼻内、玻璃体内、阴道内、直肠内、肌内、皮下、结膜下、膀胱内、经粘膜，心包内、脐内、口服、通过吸入、通过注射、通过输注、通过连续输注、通过局部灌注直接进行靶细胞浴、经导管或经灌洗。在一些实施方案中，药物组合物增加对免疫疗法的敏感性。在一些实施方案中，患者先前未能对免疫检查点抑制剂的施用产生响应。32.在一些实施方案中，方法还包括对受试者施用至少第二抗癌疗法。在一些实施方案中，第二抗癌疗法包括手术疗法、化疗、放疗、冷冻疗法、激素疗法、免疫疗法或细胞因子疗法。在一些实施方案中，第二抗癌疗法包括免疫检查点抑制剂。33.在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂包括抗pd-l1抗体。在一些实施方案中，抗pd-l1抗体包括阿特珠单抗、阿维鲁单抗、德瓦鲁单抗、bms‑ꢀ036559或ck-301。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂包括抗pd1抗体。在一些实施方案中，抗pd1抗体包括纳武单抗、帕博利珠单抗、匹地利珠单抗、amp-223、amp-514、西米普利单抗或pdr-001。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂包括抗ctla-4抗体。在一些实施方案中，抗ctla-4疗法包括伊匹木单抗或曲美木单抗。在一些实施方案中，第二抗癌疗法包括过继性t细胞疗法。在一些实施方案中，过继性t细胞疗法在施用mtap酶之后施用。34.在一些实施方案中，本文提供的是治疗肿瘤患者的方法。在一个方面，治疗肿瘤患者的方法包括对患者施用过继性t细胞疗法，该疗法包含被工程改造以表达mtap酶的t细胞。在一些实施方案中，癌症的转移被延迟、减少或预防。35.在一些实施方案中，本文提供的是本文所述的mtap酶、本文所述的核酸、或本文所述的药物组合物用于制造用于对肿瘤患者治疗性应用的药物的用途。36.本文提供的是经工程改造的哺乳动物mtap酶(即mtase酶)，使得血清和肿瘤微环境中的mta和/或ado可被有效降解。如本文所述的经修饰的mtase酶和/或ado降解酶提供了包含人、灵长类动物、哺乳动物或原核生物的多肽序列，但与天然酶相比具有mta降解催化活性和/或ado降解催化活性的新型酶。因此，这些经修饰的酶可适用于癌症治疗，并且具有低免疫原性和提高的血清稳定性。在不受理论约束的情况下，任何给定的mtase酶可以仅有效降解mta，或者可以有效降解mta和ado二者。37.因此，在一个实施方案中，提供了经修饰的多肽，特别是具有mta降解活性和/或ado降解活性的mtap酶变体。例如，变体可衍生自人类酶，例如人类mtap。例如，酶变体可具有与天然mtap序列至少95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。天然多肽可具有根据seqidno:1和7-35中任一个的mtap序列。例如，酶变体可具有与seqidno:1至少95％相同的氨基酸序列。在某些方面，可能存在包含能够降解mta和/或ado的经修饰的mtase的多肽。在一些实施方案中，多肽可能能够在生理条件下降解mta和/或ado。例如，多肽对mta和/或ado(kcat/km)的催化效率可为至少或约10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000、104、105、106s-1m-1或其中可推导出的任何范围。38.为了提高血清稳定性，经修饰的mtase可以与一个或更多个聚醚分子连接。在一个特定的实施方案中，聚醚可以是聚乙二醇(peg)。经修饰的多肽可以通过特定的氨基酸残基(例如赖氨酸或半胱氨酸)连接到peg。39.在一些实施方案中，天然mtase可以通过一种或更多种其他修饰进行修饰，例如化学修饰、置换、插入、缺失和/或截短。在一个特定的实施方案中，天然mtase可以通过置换来修饰。例如，置换的数目可以是1个、2个、3个、4个或更多个。40.在一些情况下，所提供的是包含聚乙二醇化的天然人甲硫腺苷磷酸化酶(mtap)的酶群体的组合物，其中每个聚乙二醇化的mtap酶构成多肽的同源三聚体，每个多肽包含与seqidno:1至少95％相同的序列，其中至少约80％的聚乙二醇化mtap酶的每个亚基包含1个、2个、3个、4个或5个聚乙二醇(peg)分子。在一些方面，至少约80％的每个亚基包含1个、2个、3个、4个或5个peg分子的聚乙二醇化mtap酶的每个亚基的peg分子具有高斯分布。在一些方面，至少约80％的每个亚基包含1个、2个、3个、4个或5个peg分子的聚乙二醇化mtap酶具有每个亚基3±1个peg分子的众数。在一些方面，不超过20％的聚乙二醇化mtap酶的每个亚基包含0个、6个、7个、8个或更多个peg分子。在一些方面，peg分子具有约5000的分子量。41.在一些情况下，所提供的多肽包含天然人甲硫腺苷磷酸化酶(mtap)酶变体，其中所述变体mtap包含与seqidno:1至少95％相同的序列，并且相对于seqidno:1包含k225r(参见，例如，seqidno:3)或k238r(参见，例如，seqidno:5)的置换。在这种情况下，多肽可以被聚乙二醇化到任何期望的程度。42.在一些方面，本发明还考虑了包含与异源氨基酸序列连接的经修饰的mtase的多肽。例如，经修饰的mtase可以与异源氨基酸序列连接为融合蛋白。在一个特定的实施方案中，经修饰的mtase可以连接到氨基酸序列，例如iggfc、白蛋白、白蛋白结合肽或xten多肽，以增加体内半衰期。43.在一些方面，考虑了编码这种经修饰的mtase的核酸。在一个方面，核酸被密码子优化以便在细菌中表达。在特定的实施方案中，细菌是大肠杆菌(e.coli)。在其他方面，核酸被密码子优化以便在真菌(例如酵母)中、在昆虫细胞中或哺乳动物细胞中表达。本发明还考虑了包含这种核酸的载体，例如表达载体。在特定的实施方案中，编码经修饰的mtase的核酸可操作地连接到启动子上，包括但不限于异源启动子。在一个实施方案中，经修饰的mtase可通过载体(例如，基因治疗载体)递送至靶细胞。此类病毒可能已经通过重组dna技术进行了修饰，以使经修饰的mtase编码核酸能够在靶细胞中表达。这些载体可以来自非病毒(例如质粒)或病毒(例如腺病毒、腺相关病毒、逆转录病毒、慢病毒、疱疹病毒或痘苗病毒)来源的载体。非病毒载体优选与剂复合以促进dna穿过细胞膜进入。这类非病毒载体复合物的实例包括含有聚阳离子剂的制剂，其促进dna和基于脂质的递送系统的缩聚(condensation)。基于脂质的递送系统的实例包括基于脂质体的核酸递送。44.又在其他方面，本发明还考虑包含这类载体的宿主细胞。宿主细胞可以是细菌(例如大肠杆菌)、真菌细胞(例如酵母)、昆虫细胞或哺乳动物细胞。45.在一些实施方案中，将载体引入宿主细胞以表达经修饰的mtase。蛋白质可以以任何合适的方式表达。在一个实施方案中，蛋白质在宿主细胞中表达，使得蛋白质被糖基化。在另一个实施方案中，蛋白质在宿主细胞中表达，使得蛋白质被脱糖基化。46.在一些实施方案中，多肽或核酸在包含药学上可接受的载体的药物制剂中。多肽可以是天然peg化mtase多肽或经修饰的mtase多肽。核酸可以编码天然peg化mtase多肽或经修饰的mtase多肽。47.在一个实施方案中，提供了用于治疗患有癌症或有患癌风险的患者的方法，其包括对受试者施用治疗有效量的包含如上所述mtase的制剂。患者可以是任何动物，例如小鼠。例如，患者可以是哺乳动物，具体地是灵长类动物，且更具体地是人类患者。48.在一些方面，肿瘤是实体瘤。在一些方面，肿瘤是血液肿瘤。在一些实施方案中，肿瘤是骨肉瘤、胰腺癌、脊索瘤、间皮瘤、t细胞all、胶质瘤、肾细胞癌、黑色素瘤、鳞状细胞癌、胆囊癌、胃癌或肝细胞癌。49.在一些方面，肿瘤具有降低的mtap水平。在某些方面，肿瘤具有mtap缺失。在一些方面，肿瘤具有相对于参考样品升高的cd73水平。在一些方面，肿瘤具有相对于参考水平升高的cd73水平和任选地降低的mtap水平。在一些方面，肿瘤具有相对于参考样品升高的cd39水平。在一些方面，肿瘤具有相对于参考水平升高的mta水平。在一些方面，肿瘤具有相对于参考水平升高的ado水平。在一些方面，参考水平是患者健康组织的水平。在一些方面，参考水平是健康受试者的水平。50.在一些方面，患者先前接受过癌症治疗，且施用酶以防止癌症复发。在一些方面，方法是预防转移的方法。在一些方面，方法是提高免疫疗法敏感性的方法。在一些方面，患者先前未能对免疫检查点抑制剂的施用产生响应。在一些方面，方法还包括对受试者施用至少第二抗癌疗法。在一些方面，第二抗癌疗法是免疫检查点阻断、过继性t细胞疗法、手术疗法、化疗、放疗、冷冻疗法、激素疗法、免疫疗法或细胞因子疗法。在一些方面，第二抗癌疗法包括过继性t细胞疗法、抗pd1抗体、抗ctla-4抗体和/或抗pd-l1抗体。在某些方面，抗pd-l1抗体包括阿特珠单抗、阿维鲁单抗、德瓦鲁单抗、bms-036559或ck-301。在某些方面，抗pd1抗体包括纳武单抗、帕博利珠单抗、匹地利珠单抗、amp-223、amp-514、西米普利单抗或pdr-001。在某些方面，抗ctla-4疗法包括伊匹木单抗或曲美木单抗。在一些方面，过继性t细胞疗法在施用变体mtap酶之后施用。在一些方面，过继性t细胞疗法包括经工程改造以表达变体mtap酶的细胞。51.在一些实施方案中，癌症是对mta缺失敏感的任何癌症。在一个实施方案中，本发明考虑了治疗肿瘤细胞或癌症患者的方法，其包括施用包含这种多肽的制剂。在一些实施方案中，施用在杀死至少一部分癌症细胞的条件下进行。在另一个实施方案中，制剂包含这种在生理条件下具有mta降解活性的经修饰的mtase，并且还包含附接的聚乙二醇链。在一些实施方案中，制剂是包含任何上述mta酶变体和药学上可接受的赋形剂的药物制剂。此类药学上可接受的赋形剂对本领域技术人员是公知的。所有上述mtase变体可被考虑用于人类治疗。52.在体内应用中，治疗肿瘤细胞包括将肿瘤细胞群的营养介质与mtase接触。在本实施方案中，介质可以是血液、淋巴液、脊髓液和预期消耗mta的类似体液。53.根据本发明的某些方面，这种含有经修饰的mtase的制剂可通过以下方式施用：静脉内、皮内、动脉内、腹膜内、病变内、颅内、关节内、前列腺内、胸膜内、滑膜内、气管内、鼻内、玻璃体内、阴道内、直肠内、肿瘤内、肌内、皮下、结膜下、膀胱内、经粘膜、心包内、脐内、眼内、口服、局部、通过吸入、输注、持续输注、局部灌注、经导管、经灌洗、在脂质组合物(例如脂质体)中或通过本领域普通技术人员已知的其他方法或前述的任何组合。54.在一个实施方案中，提供了包含经修饰的mtase或编码经修饰的mtase的核酸的组合物，用于治疗受试者的肿瘤。在另一个实施方案中，使用经修饰的mtase或编码经修饰的mtase的核酸制造用于治疗肿瘤的药物。经修饰的mtase可以是实施方案中的任何经修饰的mtase。55.在本发明的方法和/或组合物的背景下讨论的实施方案可以用于本文所述的任何其他方法或组合物。因此，关于一种方法或组合物的实施方案也可以应用于本发明的其他方法和组合物。56.本发明的其他目的、特征和优势将通过以下详细描述变得明显。然而，应理解的是，详细描述和具体实例虽然指示本发明的优选实施方案，但仅作为示例性目的给出，因为根据该详细描述，在本发明的精神和范围内的各种变化和修改对于本领域技术人员将变得明显。57.附图简要说明58.本发明的新颖特征在所附权利要求书中具体阐述。通过参考以下阐述利用了本发明的原理的说明性实施方案的详细描述以及附图(本文的一个或多个附图)将获得对本发明的特征和优点的更好理解，其中：59.图1a-1e。所述的聚乙二醇化及其对来自智人(homosapiens)的mtap多肽的药理动力学影响。图1a提供了与0、10、20、50或100倍(x)摩尔过量的peg反应的智人mtap(hs-mtap)多肽的sds-page凝胶。图1b‑ꢀ1e比较了模拟peg化hs-mtap多肽和经10xpeg(图1b)、20xpeg(图1c)、50xpeg(图1d)和100xpeg(图1e)修饰的hs-mtap多肽的反应动力学。60.图2a-2c。特定的peg化及其对两种智人mtap多肽变体的酶动力学影响，所述变体当与超过5个peg部分偶联时保持高催化活性。图2a提供了具有k225r和k238r置换的hs-mtap多肽与0x或100xpeg反应的sds-page凝胶。显示了hs-mtap-k225r多肽与0x和100xpeg之间(图2b)和hs-mtap-k238r多肽与0x和100xpeg之间(图2c)的反应动力学比较。61.图3a-3b。mtap和cdkn2a在癌症和免疫抑制中的作用。图3a显示，当使用抗pd-l1抗体治疗时，与具有野生型cdkn2a或杂合型cdkn2a突变体的非小细胞肺癌(nsclc)患者相比，cdkn2a纯合型(cdkn2a-/-)的nsclc患者的无进展生存期较短。图3b显示，使mtap的一个或两个拷贝缺失有助于对头颈部癌症的免疫抑制。只在mtap基因座缺失时观察到cd8a在统计学上显著减少。62.图4a-4b。采用mtap多肽的癌症疗法。图4a说明了peg化mtap多肽如何可降解肿瘤微环境中的mta以增强t细胞浸润。图4b显示了在添加50mg/kghs-mtap后0小时、4小时或24小时，白血病同种异体移植瘤(l1210)微环境中mta水平的条形图。63.图5a-5c。peg化mtap多肽在癌症靶向治疗中的治疗潜力。图5a‑ꢀ5b是显示在用或mtan多肽或抗pd-1抗体抑制肿瘤生长，但它们的组合提供了比任一单独治疗更强的抑制作用。此外，在接受联合治疗的3只小鼠中观察到完全缓解(cr)，而使用任一单独治疗时只有1只小鼠达到cr。71.图13显示了使用或不使用peg化mtapk238r多肽(mtapk238r)治疗的小鼠中ct26细胞同种异体移植瘤的生长。与pbs对照相比，peg化mtapk238r治疗降低了ct26肿瘤的生长。此外，在用peg化mtapk238r多肽治疗的6只小鼠中有2只观察到完全缓解(cr)。72.发明详述73.本文所提供的是多肽、核酸、载体、宿主细胞、方法、药物组合物和提供用于癌症治疗的peg化mtap多肽的试剂盒。在一些情况下，peg化mtap多肽在包含血清的细胞外环境中可能具有更高的催化活性或蛋白质稳定性。74.虽然已在此展示和描述了本发明的优选实施方案，但对于本领域技术人员来说明显的是，这样的实施方案仅作为示例提供。在不背离发明的情况下，本领域技术人员现将进行许多变化、改变和取代。应该理解，可以使用本文所述的本发明实施方案的各种替代方案来实施本发明。意图以下权利要求书定义本发明的范围，并且落在这些权利要求范围内的方法和结构及其等效方案均被其覆盖。75.定义76.如本说明书所用，“一个/种(a)”或“一个/种(an)”可表示一个/种或更多个/种。如本权利要求书中所用，当与词“包括/含(comprising)”一起使用时，词“一个/种(a)”或“一个/种(an)”可表示一个/种或一个/种以上。77.除非明确指出仅指替代方案或替代方案是互斥的，否则权利要求书中使用的术语“或”用于表示“和/或”，但是本公开支持仅指替代方案和“和/或”的定义，。如本文所用，“另一个/种”可以表示至少第二个/种或更多个/种。78.遍布本技术中，术语“约”用于表示一个值包括用于确定该值的装置或方法的固有误差变化、所研究受试者之间存在的变化，或在所述及的的10％以内的值。79.如在本说明书和权利要求书中所使用的，词语“comprising(包括/含)”ꢀ(和任何形式的comprising(包括/含)，例如“comprise(包括/含)”和“comprises(包括/含)”)，“having(具有)”(和任何形式的having(具有)，例如“have(具有)”和“has(具有)”)，“including(包括)”(和任何形式的including(包括)，例如“includes(包括)”和“include(包括)”)或“containing(含有)”(和任何形式的containing(含有)，例如“contains(含有)”和“contain(含有)”)是包含性的或开放式的，并且不排除其他未提及的要素或方法步骤。80.术语“受试者”、“宿主”、“患者”和“个体”在本文中互换使用，以指代需要诊断或治疗的任何哺乳动物受试者，尤其是人类。其他受试者可能包括牛、犬、猫、豚鼠、兔、大鼠、小鼠、马等。81.当应用于细胞时，术语“接触的(contacted)”和“暴露的(exposed)”在本文中用于描述将治疗性构建体递送至靶器官或与靶细胞直接毗邻的过程。[0082]“同源性”或“同一性”或“相似性”可以指两个肽之间或两个核酸分子之间的序列相似性。同源性可以通过比较用于比较目的可以比对的每个序列中的位置来确定。当对比序列中的某个位置可以被相同的碱基或氨基酸占据时，分子在该位置就可以是同源的。序列之间的同源性程度可以是序列共有的匹配或同源位置的数量的函数。“不相关的”或“非同源的”序列与本公开的序列之一共享少于40％的同一性，或者可选择地少于25％的同一性。序列同源性可以指序列与参考序列的同一性百分比。实际上，无论任何特定的序列是否可能与本文所述的任何序列(其可对应于本文所述的特定核酸序列)具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、92％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性，这种特定的多肽序列可以常规地使用已知的计算机程序例如bestfit程序(wisconsin序列分析包(unix第8版)，geneticscomputergroup,universityresearchpark，575sciencedrive，madison，wis.53711))来确定。当使用bestfit或任何其他序列比对程序来确定某个特定序列，例如，是否与参考序列有95％的同一性时，可以设置参数，以便可以在参考序列的整个长度上计算同一性百分比，并且可以允许序列同源性空位高达总参考序列的5％。[0083]术语“多核苷酸”、“寡核苷酸”或“核酸”可互换使用，是指核苷酸，脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸或其类似物任意长度的聚合形式。多核苷酸可以有任意三维结构，可以执行任意已知或未知功能。以下是多核苷酸的非限制性示例：基因或基因片段(例如探针、引物、est或sage标签)、外显子、内含子、基因间dna(包括但不限于异染色质dna)、信使rna(mrna)、cdna、重组多核苷酸、分支多核苷酸、质粒、载体、序列的分离dna、序列的分离rna。多核苷酸可以包含修饰的核苷酸，例如甲基化核苷酸和核苷酸类似物。如果存在，可以在多核苷酸组装之前或之后对核苷酸结构进行修饰。核苷酸序列可以被非核苷酸成分中断。多核苷酸可以在聚合后被进一步修饰，例如通过与标记成分偶联。该术语也指双链和单链分子。核酸可以包括一个或更多个反应性部分，包括例如具有硫代磷酸主链的核酸。如本文所用，术语反应性部分包括能够通过共价、非共价或其他相互作用与另一分子(例如核酸或多肽)反应的任何基团。作为示例，核酸可以包括氨基酸反应性部分，其通过共价、非共价或其他相互作用与蛋白质或多肽上的氨基酸反应。除非另有规定或要求，否则本公开为多核苷酸的任何实施方案包括双链形式和已知或预测构成该双链形式的两个互补单链形式中的每一个。[0084]可用于本公开的方法的多核苷酸可以包括天然核酸序列及其变体、人工核酸序列或此类序列的组合。在一些实施方案中，本公开的多核苷酸指dna序列。在一些实施方案中，dna序列与类似rna序列是可互换的。在一些实施方案中，本公开的多核苷酸指rna序列。在一些实施方案中，rna序列与类似dna序列是可互换的。在一些实施方案中，在本文提供的序列中，多核苷酸的u和t可以互换。[0085]“标准(canonical)氨基酸”是指那些人体内天然存在的20种氨基酸。置换、突变或取代变体通常在蛋白质内的一个或更多个位点包含一种氨基酸与另一种氨基酸的交换，并且可以设计成调节多肽的一种或更多种特性，特别是其效应功能和/或生物利用度。[0086]取代可以是保守的，也可以不是保守的，保守取代即一个氨基酸被具有类似形状和电荷的一个氨基酸取代。保守取代在本领域中是公知的，包括例如以下变化：丙氨酸至丝氨酸；精氨酸至赖氨酸；天冬酰胺至谷氨酰胺或组氨酸；天冬氨酸至谷氨酸；半胱氨酸至丝氨酸；谷氨酰胺至天冬酰胺；谷氨酸至天冬氨酸；甘氨酸至脯氨酸；组氨酸至天冬酰胺或谷氨酰胺；异亮氨酸至亮氨酸或缬氨酸；亮氨酸至缬氨酸或异亮氨酸；赖氨酸至精氨酸；甲硫氨酸至亮氨酸或异亮氨酸；苯丙氨酸至酪氨酸、亮氨酸或蛋氨酸；丝氨酸至苏氨酸；苏氨酸至丝氨酸；色氨酸至酪氨酸；酪氨酸至色氨酸或苯丙氨酸；以及缬氨酸至异亮氨酸或亮氨酸。[0087]术语“蛋白质”、“肽”和“多肽”可互换使用，并且在其最广泛的意义上是指两个或更多个亚基的氨基酸、氨基酸类似物或拟肽的复合物(compound)。该术语还包括已被修饰的氨基酸聚合物；例如，二硫键形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化或任何其他操作，例如与标记成分偶联。[0088]术语“单位剂量”当述及治疗组合物使用时是指物理上离散的单位，其适合作为受试者的单一剂量，每个单位含有预定量的活性物质，该预定量被计算为与所需稀释剂(即载体或溶媒)关联产生所需的治疗效果。[0089]术语“细胞(cell或cells)”和“细胞群”互换使用，意指一个或更多个哺乳动物细胞。该术语包括细胞或细胞群的后代。本领域技术人员将认识到，“细胞”包括单个细胞的后代，并且后代与其原始母细胞之间由于自然的、偶然的或有意的突变或改变而存在变异。[0090]术语“免疫疗法”是指通过调节对疾病抗原的免疫应答来治疗疾病(例如癌症)。[0091]本文所用的术语“癌细胞”是指表现出肿瘤细胞表型的细胞，其特征可以是以下的一种或更多种，例如，异常细胞生长、异常细胞增殖、丧失密度依赖型生长抑制、不依赖锚定的生长潜力、在免疫低下的非人动物模型中促进肿瘤生长或发生的能力、或任何合适的细胞转化指标(indicator)。本文中“癌细胞”可以与“肿瘤细胞”或“癌细胞”互换使用，并包括实体瘤和液体瘤的癌细胞。在本文中“癌症”可以与“肿瘤”互换使用。[0092]本文所用的术语“实体瘤”或“实体癌”是指通常不包含囊肿或液体区域的肿瘤。实体瘤可以包括脑和其他中枢神经系统的肿瘤(包括但不限于脑膜、脑、脊髓、颅神经和中枢神经系统其他部位的肿瘤，例如胶质母细胞瘤或髓质母细胞瘤)；头颈癌；乳腺肿瘤；循环系统肿瘤(包括但不限于心脏、纵隔和胸膜以及其他胸内器官、血管肿瘤和肿瘤相关血管组织)；排泄系统肿瘤(包括但不限于肾脏、肾盂、输尿管、膀胱、其他和未指定的泌尿器官的肿瘤)；胃肠道肿瘤(包括但不限于食道、胃、小肠、结肠、结直肠、直肠乙状结肠交界处、直肠、肛门和肛管的肿瘤，涉及肝脏和肝内胆管、胆囊、胆道的其他和未指定部位、胰腺、其他和消化器官的肿瘤)；口腔肿瘤(包括但不限于唇、舌、牙龈、口底、腭、口的其他部位、腮腺、唾液腺其他部位、扁桃体、口咽、鼻咽、梨状窦、下咽及唇的其他部位、口腔和咽部的肿瘤)；生殖系统肿瘤(包括但不限于外阴、阴道、子宫颈、子宫体、子宫、卵巢和其他与女性生殖器官相关的部位、胎盘、阴茎、前列腺、睾丸和其他与男性生殖器官相关的部位的肿瘤)；呼吸道肿瘤(包括但不限于鼻腔、中耳、副鼻窦、喉、气管、支气管和肺部肿瘤，如小细胞肺癌或非小细胞肺癌)；骨骼系统肿瘤(包括但不限于四肢的骨和关节软骨、骨关节软骨和其他部位的肿瘤)；皮肤肿瘤(包括但不限于皮肤恶性黑色素瘤、非黑色素瘤皮肤癌、皮肤基底细胞癌、皮肤鳞状细胞癌、间皮瘤、卡波西肉瘤)；和涉及其他组织的肿瘤，包括周围神经和自主神经系统、结缔组织和软组织、腹膜后和腹膜、眼睛及附件、甲状腺、肾上腺和其他内分泌腺和相关结构的肿瘤、淋巴结的继发性和不明恶性肿瘤，呼吸和消化系统的继发性恶性肿瘤和其他部位的继发性恶性肿瘤。[0093]本文所用的术语“液体癌”或“液体肿瘤”是指存在于体液如血液、淋巴液和骨髓中的癌细胞。液体癌包括白血病、骨髓瘤、骨髓增生异常综合征(mds)和液体淋巴瘤。液体淋巴瘤包括含有囊肿或液体区域的淋巴瘤。本文所用的液体癌不包括实体瘤，例如肉瘤和癌或不包含囊肿或液体区域的实体淋巴瘤。[0094]如本文所用，术语“偶联物”是指通过共价键连接在一起的至少两个分子或分子部分。一旦分子或分子部分通过该键连接，则认为它们与另一个分子或分子部分“偶联”。因此，“非偶联”分子或分子部分不通过共价键连接。[0095]术语“peg化”是指聚乙二醇(peg)分子共价连接到另一分子(包括但不限于蛋白质或药物)的过程。经过peg化的蛋白质可以被称为“peg化的”。peg化多肽在定性或定量上可能具有与无peg的可比多肽或未peg化多肽不同的特性。[0096]术语“有效量”是指足以实现有益结果或预期临床结果的量。有效量可以在一次或更多次施用中施用。就本技术的目的而言，抗体或多肽的有效量是足以诊断、减轻、改善、稳定、逆转、减缓或延迟疾病状态进展的量。[0097]如本文所用，术语“融合蛋白”是指含有以非天然存在的方式可操作连接的蛋白质或蛋白质片段的嵌合蛋白。融合蛋白可以包含由来自一种以上天然存在的蛋白或重组产生的蛋白的多个结构域组成的蛋白，其中通常每个结构域提供不同的功能。在这方面，术语“接头”是指用于将这些结构域连接在一起的蛋白质片段——可选地用于保持融合蛋白结构域的构象和/或防止融合蛋白结构域之间可能损害其各自功能的不利相互作用。[0098]如本文所用，术语“半衰期”(1/2-life；t1/2)是指在体外或体内，例如，在哺乳动物体内注射后，多肽浓度下降一半所需的时间。[0099]术语“以可操作的组合”、“以可操作的顺序”和“可操作地连接的”是指这样的连接，其中被如此描述的成分处于允许其以其预期方式起作用的关系，例如核酸序列的连接方式使得核酸分子能够指导给定基因的转录或所需蛋白质分子的合成，或氨基酸序列的连接方式使得融合蛋白产生。[0100]如本文所用，术语“km”是指酶的米氏(michaelis-menten)常数，并被定义为给定的酶在酶催化反应中达到其最大速度一半时特异性底物的浓度。km可用于测量酶的底物结合亲和力。[0101]如本文所用，术语“kcat”是指每单位时间每种酶将其转化为产物的转换数(turnovernumber)或底物分子数，且其中酶以最大效率工作。kcat可用于测量酶的催化速率。[0102]如本文所用，术语“kcat/km”是特异性常数，其是对酶如何有效地将底物转化为产物的量度。kcat/km可用于测量酶的催化效率。[0103]如本文所用，术语“vmax”是指酶促反应的最大速率。当酶被底物饱和时，酶促反应可以达到最大速度。vmax是kcat和酶浓度的乘积。vmax可用于测量酶的催化速率。[0104]如本文所用，术语“催化活性”是指对酶转化底物或产生的酶动力学的任何定性或定量特性。催化活性可以使用本文的km、kcat、vmax或其任何衍生参数测量。也可以使用其他酶动力学量度。[0105]术语“mtase”是指催化mta磷酸化或水解为甲硫核糖-1-磷酸(mtr‑ꢀ1-r)或甲硫核糖(mtr)和腺嘌呤以及腺苷磷酸化或水解为核糖-1-磷酸或核糖和腺嘌呤的任何酶。它可以在多胺的代谢以及腺嘌呤和甲硫氨酸补救途径中发挥作用。它可以包括灵长类形式的，或特别是人类形式的mtap，或原核形式的mtan。[0106]术语“mtap”是指甲硫腺苷磷酸化酶。它可以催化mta磷酸化成甲硫核糖-1-磷酸(mtr-1-r)和腺嘌呤以及催化腺苷磷酸化成核糖-1-磷酸和腺嘌呤。人类形式的mtap可称为智人mtap或hs-mtap。除另有规定外，mtap可以指多肽或编码mtap多肽的基因或核酸。除另有规定外，否则mtap也可以指peg化mtap多肽或peg偶联的mtap多肽。[0107]术语“mtan”是指甲硫腺苷核苷酶。它可以催化mta水解为甲硫核糖(mtr)和腺嘌呤以及催化腺苷水解为核糖和腺嘌呤。原核形式的mtan可以包括细菌mtan，例如，肠炎沙门氏菌(salmonellaenterica)mtan或se-mtan。除非另有规定，否则mtan可以指多肽或编码mtan多肽的基因或核酸。除非另有规定，mtan也可以指peg化mtan多肽或peg偶联的mtan多肽。[0108]术语“人类”是指智人(homosapiens)。[0109]术语多肽的“偶联位点”是指作为共价结合、附着、偶联或连接到另一个实体的位点的氨基酸残基或化学基团。一种示例性实体是peg聚合物。[0110]用于治疗癌症的peg化甲硫腺苷磷酸化酶(mtap)多肽[0111]在一些情况下，mtase可以用于治疗疾病。在一些情况下，疾病可以包括癌症。在其他情况下，疾病可以包括与免疫系统相关的疾病。在一些情况下，疾病可以包括与甲硫腺苷磷酸化酶活性缺陷相关的状况。在一些情况下，甲硫腺苷磷酸化酶活性的缺陷可以由mtap的遗传或非遗传丢失、抑制、突变或下调引起。[0112]在一些情况下，mtase可具有甲硫腺苷磷酸化酶活性。在一些情况下，甲硫腺苷磷酸化酶活性可以包括可将甲硫腺苷(mta)磷酸化成甲硫核糖‑ꢀ磷酸和腺嘌呤的酶活性。在一些情况下，mtase可以包含mtap多肽。在一些情况下，mtase可以包含人mtap多肽。在其他情况下，mtase可以包含可将mta水解为甲硫核糖和腺嘌呤的酶活性。在一些情况下，mtase可以包含细菌mtan，例如肠炎沙门氏菌(salmonellaenterica)mtan。在一些情况下，甲硫腺苷磷酸化酶活性可以将磷酸盐和s-甲基-5'硫代腺苷转化为腺嘌呤和s-甲基-5-硫代-α-d-核糖1-磷酸。在一些情况下，甲硫腺苷磷酸化酶活性可以被5'-甲硫结核菌素或5'-氯间型霉素抑制。在一些情况下，mtap活性可以存在于细菌、酵母、小鼠、牛、人或其他生物体中。[0113]在一些情况下，mtase可以包含可催化mta或腺苷(ado)的多肽。在一些实施方案中，mtase可以降解细胞外或细胞内mta或ado。在一些情况下，细胞外mta或ado可以存在于肿瘤微环境(tme)中。在其他实施方案中，细胞外mta或ado可以存在于血清中。在一些实施方案中，mtase可以降解血清中的mta或ado。在其他实施方案中，mtase可以降解tme中的mta或ado。[0114]在一些实施方案中，mtase可以包含具有mta或ado降解活性的细菌、真菌、植物或动物多肽。在一些情况下，mtase多肽序列可以包含可以降解mta或ado的哺乳动物mtap多肽。在一些实施方案中，mtap多肽序列可以包含可以降解mta或ado的人多肽。在其他方面，mtase可以包含能够降解ado或mta的天然的或经修饰的mtap多肽。在又一方面，mtase可以包含天然存在的或经修饰的mtan或能够降解ado或mta的原核mtan。在一些方面，mtase多肽能够在生理条件下降解ado或mta。在其他情况下，mtase多肽能够在体外条件下降解ado或mta。[0115]在一些情况下，mtap多肽可以包括天然存在或非天然存在的mtap多肽。天然的mtap多肽可以包括具有野生型序列的mtap多肽。在一些实施方案中，天然存在的mtap多肽可以通过一种或更多种其他修饰例如化学修饰、置换、插入、缺失、融合或截短进行修饰。在一些实施方案中，天然存在的mtap多肽可以通过取代来修饰。在一些实施方案中，天然存在的mtap多肽可以通过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50或更多个置换来修饰。在一些实施方案中，天然存在的mtap多肽可以在其活性位点、碱基结合位点或甲硫核糖结合位点之外的位点通过保守置换、非保守置换、缺失或插入进行修饰，并仍然保持其催化活性。在其它情况下，天然存在的mtap多肽可以在可调节蛋白结合活性、蛋白稳定性、蛋白定位、非底物结合活性、化学修饰活性、蛋白化学修饰能力、蛋白折叠、蛋白转运、本文及其任何衍生物或本文及其任何组合的位置进行修饰。本文所述的调节可以包括增加或减少。[0116]在一些实施方案中，mtap多肽可以包含seqidno:1的序列或其部分。[0117]在一些情况下，具有mtap活性的mtap多肽可以包含与seqidno：1或其部分具有约至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性(或其中可衍生的任何范围)的序列。在一些实施方案中，具有mtap活性的mtap多肽可以包含seqidno：1的至少或最多约10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280或284个残基。在一些情况下，具有mtap活性的mtap多肽可以包含seqidno：1的残基1-10、5-15、10-20、15‑ꢀ25、20-30、25-35、30-40、35-45、40-50、45-55、50-60、55-65、60-70、65-75、70-80、75-85、80-90、85-95、90-100、95-105、100-110、105-115、110-120、115-125、120-130、125-135、130-140、135-145、140-150、145‑ꢀ155、150-160、155-165、160-170、165-175、170-180、175-185、180-190、185-195、190-200、195-205、200-210、205-215、210-220、215-225、220‑ꢀ230、225-235、230-240、235-245、240-250、245-255、250-260、255-265、260-270、265-275、270-280或275-284。在一些情况下，具有mtap活性的mtap多肽可以包含与seqidno:1的至少200个氨基酸具有约至少80％同一性的序列。在一些情况下，具有mtap活性的mtap多肽可以包含与seqidno:1的至少200个氨基酸具有约至少80％同一性的序列和seqidno:1的thr18、thr197、ser178、val233和met196。[0118]在一些情况下，三个mtap多肽可以以三个相同的约32kda的亚基(subunit)结合成为同源三聚体。在其他情况下，两个mtap多肽可以结合为同二聚体(appleby等人，1999)。在一些情况下，mtap多肽同三聚体可以包含通过c3对称性相关的三个相同或相似的亚基。在一些情况下，mtap多肽同源三聚体中每个mtap多肽的活性位点可位于每个mtap多肽之间的界面附近。在一些情况下，具有seqidno:1序列的mtap多肽的活性位点可以包含mtap多肽的t18、r60、h61、t93、a94、f177、s178、m196、t197、t219、d220、d222、v233、v236或l237。在一些情况下，具有seqidno:1序列的第一个mtap多肽的活性位点可以包含具有seqidno:1序列的第二个mtap多肽的h137或l279，形成同源三聚体中第一个mtap多肽的界面。在一些情况下，mtap多肽的活性组成部分可以包含seqidno:1的t18、r60、h61、t93、a94、f177、s178、h137、m196、t197、t219、d220、d222、v233、v236、l237或l279的结构等效残基。可以基于appleby等人(其被通过引用以其整体并入本文)描述的mtap多肽的三维结构来鉴别这种结构等效的残基。[0119]peg化mtap多肽[0120]在一些情况下，peg化的mtap多肽可以具有与未peg化的mtap多肽相比修饰的、消除的或添加的特性。在一些情况下，聚乙二醇化的mtap多肽可以具有与未peg化的mtap多肽相比被调节的特性。在一些情况下，peg化mtap多肽可具有被调节的尺寸、溶解度、接触蛋白水解酶的能力、免疫原性和抗原性、体内滞留、稳定性或其任何组合。在一些情况下，pfg化mtap多肽可以具有尺寸增加、溶解度增加、对蛋白水解酶的可及性降低、免疫原性和抗原性降低、体内滞留时间和稳定性增加或其任何组合。[0121]在一些情况下，mtap多肽可以在赖氨酸残基处被peg化。在一些情况下，可以对mtap多肽进行工程改造以去除赖氨酸残基，以防止赖氨酸残基被peg化。在一些情况下，可以对mtap多肽进行工程改造，用另一个氨基酸替换赖氨酸残基，以防止赖氨酸残基被peg化。在一些情况下，在mtap多肽中被另一氨基酸取代的赖氨酸残基可以位于靠近活性位点或结合位点的位置。在一些情况下，取代靠近活性位点或结合位点的赖氨酸残基可以防止在该赖氨酸残基处被peg化。在一些情况下，取代靠近活性位点或结合位点的赖氨酸残基可以防止peg分子或peg化反应影响mtap多肽的催化活性或底物特异性。在一些实施方案中，mtap多肽被取代或缺失的赖氨酸残基可以包含seqidno:1的赖氨酸(或k)11、32、40、49、51、71、82、147、157、158、166、206、225、238、241、246、248、271或其任意组合。在一些情况下，mtap多肽被取代或缺失的赖氨酸残基可以包含seqidno:1的k225或k238或其任意组合。在一些情况下，mtap多肽的赖氨酸残基可以被包括丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸或其衍生物的任何一种天然氨基酸取代。在其他情况下，mtap多肽的赖氨酸可以被任何天然或非天然氨基酸残基或其任何衍生物取代。在一些情况下，mtap多肽的赖氨酸可以被精氨酸取代。[0122]在一些情况下，mtap多肽可以在半胱氨酸残基处被peg化。在一些情况下，可以对mtap多肽进行工程改造以去除半胱氨酸残基，从而防止半胱氨酸残基被peg化。在一些情况下，可以对mtap多肽进行工程改造以用另一个氨基酸替换半胱氨酸残基，以防止半胱氨酸残基被peg化。在一些情况下，在mtap多肽中被另一氨基酸取代的半胱氨酸可以位于靠近活性位点或结合位点的位置。在一些情况下，取代活性位点或结合附近的半胱氨酸残基可以防止在该半胱氨酸残基peg化。在一些情况下，取代活性位点或结合位点附近的半胱氨酸残基可以防止peg分子或peg化反应影响mtap多肽的催化活性或底物特异性。在一些情况下，被取代或缺失的mtap多肽的半胱氨酸残基可以包含seqidno:1的半胱氨酸(或c)55、86、95、131、136、145、163、211、223、或其任意组合。在一些情况下，被取代或缺失的mtap多肽的赖氨酸残基可以包含seqidno:1的c96、c136或c223或其任意组合。在一些情况下，mtap多肽的半胱氨酸残基可以用包括丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸的任何一种天然氨基酸或本文所述的其衍生物取代。在其他情况下，mtap多肽的半胱氨酸可以用任何天然或非天然氨基酸残基或本文所述的其任何衍生物取代。在一些情况下，mtap多肽的半胱氨酸可以用精氨酸取代。[0123]在一些实施方案中，mtap多肽可以包含对应于seqidno:1的k225r突变的突变。在一些情况下，具有k225r突变的mtap多肽可以包含seqidno:3的序列或其部分。[0124]在一些情况下，mtap多肽可以包含与seqidno：3或其部分具有约至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性(或其中可衍生的任何范围)的序列。在一些实施方案中，mtap多肽可以包含seqidno：3的至少或最多约10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280或284个残基。在一些情况下，mtap多肽可以包含seqidno：3的残基1-10、5-15、10-20、15‑ꢀ25、20-30、25-35、30-40、35-45、40-50、45-55、50-60、55-65、60-70、65-75、70-80、75-85、80-90、85-95、90-100、95-105、100-110、105-115、110-120、115-125、120-130、125-135、130-140、135-145、140-150、145‑ꢀ155、150-160、155-165、160-170、165-175、170-180、175-185、180-190、185-195、190-200、195-205、200-210、205-215、210-220、215-225、220‑ꢀ230、225-235、230-240、235-245、240-250、245-255、250-260、255-265、260-270、265-275、270-280或275-284。在一些情况下，mtap多肽可以包含与seqidno:3的至少200个氨基酸具有至少80％同一性的序列。在一些情况下，mtap多肽可以包含与seqidno:3的至少200个氨基酸具有至少80％同一性的序列和seqidno:3的thr18、thr197、ser178、val233和met196。[0125]在一些实施方案中，mtap多肽可以包含对应于seqidno:1的k238r突变的突变。在一些情况下，具有k238r突变的mtap多肽可以包含seqidno:5的序列或其部分。[0126]在一些情况下，mtap多肽可以包含与seqidno：5或其部分具有约至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性(或其中可衍生的任何范围)的序列。在一些实施方案中，mtap多肽可以包含seqidno：5的至少或最多约10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280或284个残基。在一些情况下，mtap多肽可以包含seqidno：5的残基1-10、5-15、10-20、15‑ꢀ25、20-30、25-35、30-40、35-45、40-50、45-55、50-60、55-65、60-70、65-75、70-80、75-85、80-90、85-95、90-100、95-105、100-110、105-115、110-120、115-125、120-130、125-135、130-140、135-145、140-150、145‑ꢀ155、150-160、155-165、160-170、165-175、170-180、175-185、180-190、185-195、190-200、195-205、200-210、205-215、210-220、215-225、220‑ꢀ230、225-235、230-240、235-245、240-250、245-255、250-260、255-265、260-270、265-275、270-280或275-284。在一些情况下，mtap多肽可以包含与seqidno:5的至少200个氨基酸具有约至少80％同一性的序列。在一些情况下，mtap多肽可以包含与seqidno:5的至少200个氨基酸具有约至少80％同一性的序列和seqidno:5的thr18、thr197、ser178、val233和met196。[0127]在一些情况下，本文所述的任何mtap或mtan多肽的甲硫腺苷磷酸化酶活性的测量可以包括测量mtap多肽的v0、vmax、km、kcat或其组合。在一些情况下，测量可以包括体外反应。在其他情况下，测量可以包括体内反应。[0128]在一些情况下，peg化或非peg化野生型或变体mtap多肽或具有k225r突变或k238r突变的peg化或非peg化mtap多肽对于mta或ado可以具有至少约1x10^4m-1s-1、2x10^4m-1s-1、3x10^4m-1s-1、4x10^4m-1s-1、5x10^4m-1s-1、6x10^4m-1s-1、7x10^4m-1s-1、8x10^4m-1s-1、9x10^4m-1s-1、1x10^5m-1s-1、1.1x10^5m-1s-1、1.2x10^5m-1s-1、1.3x10^5m-1s-1、1.4x10^5m-1s-1、1.5x10^5m-1s-1、1.6x10^5m-1s-1、1.7x10^5m-1s-1、1.8x10^5m-1s-1、1.9x10^5m-1s-1、2x10^5m-1s-1、2.1x10^5m-1s-1、2.2x10^5m-1s-1、2.3x10^5m-1s-1、2.4x10^5m-1s-1、2.5x10^5m-1s-1、2.6x10^5m-1s-1、2.7x10^5m-1s-1、2.8x10^5m-1s-1、2.9x10^5m-1s-1、3x10^5m-1s-1、3.1x10^5m-1s-1、3.2x10^5m-1s-1、3.3x10^5m-1s-1、3.4x10^5m-1s-1、3.5x10^5m-1s-1、3.6x10^5m-1s-1、3.7x10^5m-1s-1、3.8x10^5m-1s-1、3.9x10^5m-1s-1、4x10^5m-1s-1、4.1x10^5m-1s-1、4.2x10^5m-1s-1、4.3x10^5m-1s-1、4.4x10^5m-1s-1、4.5x10^5m-1s-1、4.6x10^5m-1s-1、4.7x10^5m-1s-1、4.8x10^5m-1s-1、4.9x10^5m-1s-1、5x10^5m-1s-1、6x10^5m-1s-1、7x10^5m-1s-1、8x10^5m-1s-1、9x10^5m-1s-1、1x10^6m-1s-1、2x10^6m-1s-1、3x10^6m-1s-1、4x10^6m-1s-1或5x10^6m-1s-1的kcat/km。在一些情况下，peg化或非peg化野生型或变体mtap多肽或具有k225r突变或k238r突变的peg化或非peg化mtap多肽对于mta或ado可以具有从1x10^4至2x10^4m-1s-1、从1.5x10^4至2.5x10^4m-1s-1、从2x10^4至3x10^4m-1s-1、从2.5x10^4至3.5x10^4m-1s-1、从3x10^4至4x10^4m-1s-1、从3.5x10^4至4.5x10^4m-1s-1、从4x10^4至5x10^4m-1s-1、从4.5x10^4至5.5x10^4m-1s-1、从5x10^4至6x10^4m-1s-1、从5.5x10^4至6.5x10^4m-1s-1、从6x10^4至7x10^4m-1s-1、从6.5x10^4至7.5x10^4m-1s-1、从7x10^4至8x10^4m-1s-1、从7.5x10^4至8.5x10^4m-1s-1、从8x10^4至9x10^4m-1s-1、从8.5x10^4至1x10^5m-1s-1、从9x10^5至1.1x10^5m-1s-1、从1x10^5至1.2x10^5m-1s-1、从1.1x10^5至1.3x10^5m-1s-1、从1.2x10^5至1.4x10^5m-1s-1、从1.3x10^5至1.5x10^5m-1s-1、从1.4x10^5至1.6x10^5m-1s-1、从1.5x10^5至1.7x10^5m-1s-1、从1.6x10^5至1.8x10^5m-1s-1、从1.7x10^5至1.9x10^5m-1s-1、从1.8x10^5至2x10^5m-1s-1、从1.9x10^5至2.1x10^5m-1s-1、从2x10^5至2.2x10^5m-1s-1、从2.1x10^5至2.3x10^5m-1s-1、从2.2x10^5至2.4x10^5m-1s-1、从2.3x10^5至2.5x10^5m-1s-1、从2.4x10^5至2.6x10^5m-1s-1、从2.5x10^5至2.7x10^5m-1s-1、从2.6x10^5至2.8x10^5m-1s-1、从2.7x10^5至2.9x10^5m-1s-1、从2.8x10^5至3x10^5m-1s-1、从2.9x10^5至3.1x10^5m-1s-1、从3x10^5至3.2x10^5m-1s-1、从3.1x10^5至3.3x10^5m-1s-1、从3.2x10^5至3.4x10^5m-1s-1、从3.3x10^5至3.5x10^5m-1s-1、从3.4x10^5至3.6x10^5m-1s-1、从3.5x10^5至3.7x10^5m-1s-1、从3.6x10^5至3.8x10^5m-1s-1、从3.7x10^5至3.9x10^5m-1s-1、从3.8x10^5至4x10^5m-1s-1、从3.9x10^5至4.1x10^5m-1s-1、从4x10^5至4.2x10^5m-1s-1、从4.1x10^5至4.3x10^5m-1s-1、从4.2x10^5至4.4x10^5m-1s-1、从4.3x10^5至4.5x10^5m-1s-1、从4.4x10^5至4.6x10^5m-1s-1、从4.5x10^5至4.7x10^5m-1s-1、从4.6x10^5至4.8x10^5m-1s-1、从4.7x10^5至4.9x10^5m-1s-1、从4.8x10^5至5x10^5m-1s-1的kcat/km。在一些情况下，peg化或非peg化野生型或变体mtap多肽或具有k225r突变或k238r突变的peg化或非peg化mtap多肽对于mta或ado可以具有从约1.9x10^5至约2.3x10^5m-1s-1的kcat/km。在一些情况下，peg化或非peg化野生型或变体mtap多肽或具有k225r突变或k238r突变的peg化或非peg化mtap多肽对于mta或ado可以具有约1.9x10^5m-1s-1的kcat/km。在一些情况下，peg化或非peg化野生型或变体mtap多肽或具有k225r突变或k238r突变的peg化或非peg化mtap多肽对于mta或ado可以具有约2.3x10^5m-1s-1的kcat/km。在一些情况下，peg化或非peg化野生型或变体mtap多肽或具有k225r突变或k238r突变的peg化或非peg化mtap多肽对于mta或ado可以具有从约1.5x10^5至约3x10^5m-1s-1的kcat/km。在一些情况下，peg化或非peg化野生型或变体mtap多肽或具有k225r突变或k238r突变的peg化或非peg化mtap多肽对于mta或ado可以具有约1.5x10^5m-1s-1的kcat/km。在一些情况下，peg化或非peg化野生型或变体mtap多肽或具有k225r突变或k238r突变的peg化或非peg化mtap多肽对于mta或ado可以具有约3x10^5m-1s-1的kcat/km。[0129]在一些情况下，具有k225r突变或k238r突变的peg化或非peg化mtap多肽或具有赖氨酸或半胱氨酸突变的peg化或非peg化mtap多肽的甲硫腺苷磷酸化酶活性可以具有包含seqidno:1的peg化或非peg化mtap多肽的vmax的至少30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。在一些情况下，具有k225r突变或k238r突变的peg化或非peg化mtap多肽或具有赖氨酸或半胱氨酸突变的peg化或非peg化mtap多肽的甲硫腺苷磷酸化酶活性可以具有包含seqidno:1的peg化或非peg化mtap多肽的vmax的30％至50％、40％至60％、50％至70％、60％至80％、70％至90％或80％至100％。在一些情况下，具有k225r突变或k238r突变的peg化或非peg化mtap多肽或具有赖氨酸或半胱氨酸突变的peg化或非peg化mtap多肽的甲硫腺苷磷酸化酶活性可以具有包含seqidno:1的peg化或非peg化mtap多肽的vmax的至少50％。[0130]在一些情况下，具有k225r突变或k238r突变的peg化或非peg化mtap多肽或具有赖氨酸或半胱氨酸突变的peg化或非peg化mtap多肽的甲硫腺苷磷酸化酶活性可以具有包含seqidno:1的peg化或非peg化mtap多肽的kcat/km的至少30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、105％、110％、115％、120％、125％、130％、135％、140％、145％、150％、155％、160％、165％、170％、175％、180％、185％、190％、195％或200％。在一些情况下，具有k225r突变或k238r突变的peg化或非peg化mtap多肽或具有赖氨酸或半胱氨酸突变的peg化或非peg化mtap多肽的甲硫腺苷磷酸化酶活性可以具有包含seqidno:1的peg化或非peg化mtap多肽的km的30至50％、40至60％、50至70％、60至80％、70至90％、80至100％、90至110％、100至150％、120至180％、150至200％、170至220％、200至250％、220至270％、250至350％、300至400％、350至450％或400至500％的km。在一些情况下，具有k225r突变或k238r突变的peg化或非peg化mtap多肽或具有赖氨酸或半胱氨酸突变的peg化或非peg化mtap多肽的甲硫腺苷磷酸化酶活性可以具有包含seqidno:1的peg化或非peg化mtap多肽的km的不低于两倍或至少200％。[0131]在一些情况下，具有k225r突变或k238r突变的peg化或非peg化mtap多肽或具有赖氨酸或半胱氨酸突变的peg化或非peg化mtap多肽的甲硫腺苷磷酸化酶活性可以具有包含seqidno:1的peg化或非peg化mtap多肽的kcat的30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、110％、120％、130％、140％、150％、160％、170％、180％、190％、200％、210％、220％、230％、240％、250％、260％、270％、280％、290％、300％、310％、320％、330％、340％、350％、360％、370％、380％、390％、400％、410％、420％、430％、440％、450％、460％、470％、480％、490％、500％、510％、520％、530％、540％、550％、560％、570％、580％、590％、600％、610％、620％、630％、640％、650％、660％、670％、680％、690％、700％、710％、720％、730％、740％、750％、760％、770％、780％、790％、800％、810％、820％、830％、840％、850％、860％、870％、880％、890％、900％、910％、920％、930％、940％、950％、960％、970％、980％、990％或1000％的kcat。在一些情况下，具有k225r突变或k238r突变的peg化或非peg化mtap多肽或具有赖氨酸或半胱氨酸突变的peg化或非peg化mtap多肽的甲硫腺苷磷酸化酶活性可以具有包含seqidno:1的peg化或非peg化mtap多肽的kcat的30％至50％、40％至60％、50％至70％、60％至80％、70％至90％、80％至100％、90％至110％、100％至150％、120％至180％、150％至200％、170％至220％、200％至250％、220％至270％、250％至350％、300％至400％、350％至450％、400％至500％、450％至550％、500％至600％、550％至650％、600％至700％、650％至750％、700％至800％、750％至850％、800％至900％、850％至950％或900％至1,000％。在一些情况下，具有k225r突变或k238r突变的peg化或非peg化mtap多肽或具有赖氨酸或半胱氨酸突变的peg化或非peg化mtap多肽的甲硫腺苷磷酸化酶活性可以具有包含seqidno:1的peg化或非peg化mtap多肽的kcat的至少50％。[0132]在一些情况下，具有k225r突变或k238r突变的peg化或非peg化mtap多肽或具有赖氨酸或半胱氨酸突变的peg化或非peg化mtap多肽的甲硫腺苷磷酸化酶活性可以具有包含seqidno:1的peg化或非peg化mtap多肽kcat/km的30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、110％、120％、130％、140％、150％、160％、170％、180％、190％、200％、210％、220％、230％、240％、250％、260％、270％、280％、290％、300％、310％、320％、330％、340％、350％、360％、370％、380％、390％、400％、410％、420％、430％、440％、450％、460％、470％、480％、490％、500％、510％、520％、530％、540％、550％、560％、570％、580％、590％、600％、610％、620％、630％、640％、650％、660％、670％、680％、690％、700％、710％、720％、730％、740％、750％、760％、770％、780％、790％、800％、810％、820％、830％、840％、850％、860％、870％、880％、890％、900％、910％、920％、930％、940％、950％、960％、970％、980％、990％或1000％。在一些情况下，具有k225r突变或k238r突变的peg化或非peg化mtap多肽或具有赖氨酸或半胱氨酸突变的peg化或非peg化mtap多肽的甲硫腺苷磷酸化酶活性可以具有包含seqidno:1的peg化或非peg化mtap多肽kcat/km的30％至50％、40％至60％、50％至70％、60％至80％、70％至90％、80％至100％、90％至110％、100％至150％、120％至180％、150％至200％、170％至220％、200％至250％、220％至270％、250％至350％、300％至400％、350％至450％、400％至500％、450％至550％、500％至600％、550％至650％、600％至700％、650％至750％、700％至800％、750％至850％、800％至900％、850％至950％或900％至1,000％。在一些情况下，具有k225r突变或k238r突变的peg化或非peg化mtap多肽或具有赖氨酸或半胱氨酸突变的peg化或非peg化mtap多肽的甲硫腺苷磷酸化酶活性可以具有包含seqidno:1的peg化或非peg化mtap多肽的kcat/km的至少50％。[0133]在一些情况下，mtap多肽的peg化不会改变mtap多肽的二级或三级结构。在其他情况下，mtap多肽的peg化可以改变mtap多肽的二级或三级结构，而不影响mtap活性。在一些情况下，mtap多肽的peg化可以改变mtap多肽的分子大小、电荷或受体结合能力。在一些情况下，mtap多肽的peg化可以降低网状内皮系统(res)、肾脏、脾脏或肝脏对mtap多肽的清除率。在一些情况下，mtap多肽的peg化可以增加mtap多肽的循环时间。在一些情况下，mtap多肽的peg化可创建mtap多肽的空间位阻、掩蔽或屏蔽，阻止其被酶或蛋白质接近。在一些情况下，空间位阻、掩蔽或屏蔽也可以降低mtap多肽的免疫原性或抗原性。在其他情况下，用于mtap多肽peg化的peg分子可以包含亲水的、柔性的和生物相容的间隔区。在其他情况下，用于mtap多肽peg化的peg分子还可以包含马来酰亚胺、乙烯基砜、吡啶基二硫化物、胺、羧酸或nhs酯。[0134]在一些情况下，mtap多肽的peg化可以调节mtap多肽的血清半衰期。在其他情况下，mtap多肽的peg化可以增加mtap多肽的血清半衰期。[0135]在一些情况下，mtase的peg化可以增加酶的流体动力学半径，从而增加血清持久性。在某些方面，所公开的多肽可与任何靶向剂偶联，例如具有特异且稳定地结合到外部受体或靶细胞上的结合位点能力的配体(例如，美国专利公开号2009/0304666)。[0136]在一些实施方案中，mtap多肽的peg化可以使mtap多肽的流体动力学半径增加至少约30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、120％、140％、160％、180％、200％、250％、300％、350％、400％、500％、600％、700％、800％、900％或1000％。在一些情况下，mtap多肽的peg化可以使mtap多肽的流体动力学半径增加30％至50％、40％至60％、50％至70％、60％至80％、70％至90％、80％至100％、90％至110％、100％至150％、120％至180％、150％至200％、170％至220％、200％至250％、220％至270％、250％至350％、300％至400％，350％至450％、400％至500％、450％至550％、500％至600％、550％至650％、600％至700％、650％至750％、700％至800％、750％至850％、800％至900％、850％至950％或900％至1000％的量。[0137]在一些实施方案中，peg化mtap多肽可以具有至少约1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、11小时、12小时、18小时、24小时、36小时、48小时、49小时、50小时、51小时、52小时、53小时、54小时、55小时、56小时、57小时、58小时、59小时、60小时、61小时、65小时、66小时、67小时、68小时、69小时、70小时、71小时、72小时、84小时、96小时、108小时、120小时、132小时、144小时、156小时、168小时、180小时、190小时或200小时的血清半衰期。在其他情况下，在一些实施方案中，peg化mtap多肽可以具有从1至5小时、从2小时至6小时、从3小时至7小时、从4小时至8小时、从5小时至9小时、从6小时至10小时、从7小时至11小时、从8小时至12小时、从9小时至13小时、从10小时至14小时、从11小时至15小时、从12小时至16小时、从13小时至17小时，从14小时至18小时、从12小时至24小时、从18小时至30小时、从24小时至36小时、从30小时至42小时、从36小时至48小时、从42小时至46小时、从43小时至47小时、从44小时至48小时、从45小时至49小时、从46小时至50小时、从47小时至51小时、从48小时至52小时、从49小时至53小时，从50小时至54小时、从51小时至55小时、从52小时至56小时、从53小时至57小时、从54小时至58小时、从55小时至59小时、从56小时至60小时、从57小时至61小时、从58小时至62小时、从59小时至63小时、从60小时至64小时、从61小时至65小时、从62小时至66小时、从63小时至67小时、从64小时至68小时、从65小时至69小时、从66小时至70小时、从67小时至71小时、从68小时至72小时、从66小时至78小时、从72小时至84小时、从78小时至90小时、从84小时至96小时、从90小时至102小时、从96小时至108小时、从102小时至114小时、从108小时至120小时、从114小时至126小时、从120小时至132小时、从126小时至138小时、从132小时至144小时、从138小时至150小时、从156小时至168小时、从162小时至174小时、从168小时至180小时、从174小时至186小时、从180小时至192小时、从186小时至198小时或从192小时至204小时的血清半衰期。在其他情况下，peg化多肽可以具有至少或约57小时的血清半衰期。在其他情况下，peg化多肽可以具有至少或约36小时的血清半衰期。[0138]在一些情况下，peg化mtap多肽可以具有比未peg化mtap多肽的血清半衰期长至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、150％、200％、250％、300％、350％、400％、450％、500％、550％、600％、650％、700％、750％、800％、850％、900％、950％或1000％的血清半衰期。在一些情况下，peg化mtap多肽可以具有比未peg化mtap多肽的血清半衰期长10％至100％、50％至150％、100％至200％、150％至250％、200％至300％、250％至350％、300％至400％、350％至450％、400％至500％、450％至550％、500％至600％、550％至650％、600％至700％、650％至750％、700％至800％、750％至850％、800％至900％、850％至950％或900％至1000％的血清半衰期。[0139]在一些情况下，peg化mtap多肽可以具有比未peg化mtap多肽的细胞外半衰期长至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、150％、200％、250％、300％、350％、400％、450％、500％、550％、600％、650％、700％、750％、800％、850％、900％、950％、1000％的细胞外半衰期。在一些情况下，peg化mtap多肽可以具有比未peg化mtap多肽的细胞外半衰期长10％至100％、50％至150％、100％至200％、150％至250％、200％至300％、250％至350％、300％至400％、350％至450％、400％至500％、450％至550％、500％至600％、550％至650％、600％至700％、650％至750％、700％至800％、750％至850％、800％至900％、850％至950％或900％至1000％的细胞外半衰期。[0140]在一些情况下，包含赖氨酸取代或缺失的mtap多肽可允许mtap最大程度地peg化，而不会使mtap多肽的甲硫腺苷磷酸化酶活性降低超过10％、20％、30％、40％或50％。在一些情况下，包含k225r取代、k238r取代、其结构等效物或其组合的mtap多肽可允许mtap最大程度地peg化，其甲硫腺苷磷酸化酶活性与非peg化mtap多肽的甲硫腺苷磷酸化酶活性相比未降低超过10％、20％、30％、40％或50％。在一些情况下，包含k225r取代、k238r取代、其结构等效物或其组合的mtap多肽可允许mtap最大程度地peg化，且防止mtap多肽的甲硫腺苷磷酸化酶活性与未peg化的mtap多肽的甲硫腺苷磷酸化酶活性相比降低。在一些情况下，包含k225r取代、k238r取代、其结构等效物或其组合的mtap多肽与未peg化的mtap多肽相比可增加其甲硫腺苷磷酸化酶活性。在一些情况下，测量mtap多肽的甲硫腺苷磷酸化酶活性可以包括测量mta或ado降解活性。在一些情况下，可以通过任何检测mta或ado降解产生的产物(例如检测腺嘌呤)的测定来测量mta或ado降解活性。在一些情况下，可以通过任何检测mta或ado降解产生的产物(如检测腺嘌呤、磷酸甲硫核糖、甲硫核糖或s-甲基-5-硫代-α-d-核糖1-磷酸)的量的测定来测量mta或ado降解活性。在一些情况下，可以通过任何检测在mta或ado降解中底物(包括mta、ado或s-甲基-5'硫代腺苷)的量的测定来测量mta或ado降解活性。在其他情况下，可以通过任何检测mtap多肽被包括甲硫结核菌素或5'-氯间型霉素的抑制剂抑制的水平的测定来测量mta或ado降解活性。[0141]在一些情况下，mtap多肽的修饰可以创建、诱导或修饰以产生或包括mtap多肽的预期特性。在一些情况下，预期特性可以包括增加mtap多肽的酶活性或多肽丰度。在一些情况下，mtap多肽可以进行修饰以调节其甲硫腺苷磷酸化酶活性。这种调节可以包括增加或减少甲硫腺苷磷酸化酶活性。在一些情况下，修饰可以包括增加mtap多肽的表达或稳定性。在一些情况下，修饰可以包括除去可引发针对mtap多肽的免疫反应的序列或结构。在其他情况下，修饰可以包括增加、删除或替换mtap多肽的氨基酸残基。[0142]在一些情况下，修饰可以包括编码mtap多肽的核酸中核苷酸的缺失、插入或取代，而不影响mtap多肽的氨基酸。这种修饰可以包括编码mtap多肽的核酸转录本的5’utr或3’utr中的修饰。在一些情况下，修饰还可以包括编码mtap多肽的核酸转录本的任何非编码序列，例如内含子序列。在其他情况下，修饰还可以包括编码mtap多肽的核酸转录本的编码区域中的修饰。[0143]在一些情况下，此类氨基酸残基可以包含本文所述的活性位点。在其他情况下，也可以基于结构分析、同源性分析或计算机预测来鉴定其他残基。在其他情况下，可能产生具有不同修饰位点的多肽群。在一些情况下，可以从突变群体中选择具有增强mta和/或ado降解活性的突变多肽。预期突变体的选择可以包括用于测量本文所述的甲硫腺苷磷酸化酶活性的方法。在一些情况下，可以选择具有本文所述的任何预期特性的突变多肽。在一些情况下，mtap多肽可以包含异源肽或化学修饰。异源多肽可以包括本文所述的任何此类多肽。在一些情况下，mtap多肽可以包含本文所述的化学反应。[0144]在一些情况下，peg化mtap多肽可以包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35或更多个peg分子。在一些情况下，peg化mtap多肽可以包含1至10个、2至11个、3至12个、4至13个、5至14个、6至15个、7至16个、8至17个、9至18个、10至19个、11至20个、12至21个、13至22个、14至23个、15至24个、16至25个、17至26个、18至27个、19至28个、20至29个、21至30个、22至31个、23至32个、24至33个、25至34个、26至35个peg分子。在一些情况下，与mtap多肽偶联的peg分子的数量可以遵循高斯分布。在一些情况下，peg化mtap多肽可以具有约80％的概率与1个、2个、3个、4个或5个peg分子偶联。在一些情况下，peg化mtap多肽可以具有约20％的概率与0个、6个、7个或8个peg分子偶联。在其他情况下，peg化mtap多肽可以具有约20％的概率与0、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35或更多个peg分子偶联。在一些情况下，peg化mtap多肽可以具有约1％的概率与8个以上的peg分子偶联。在一些情况下，与mtap多肽偶联的peg分子数的众数可以包括1±1、2±1、3±1、4±1、5±1、6±1、7±1、8±1、9±1、10±1、1±2、2±2、3±2、4±2、5±2、6±2、7±2、8±2、9±2、10±ꢀ2、1±3、2±3、3±3、4±3、5±3、6±3、7±3、8±3、9±3或10±3。在一些情况下，与mtap多肽偶联的peg分子数的众数可以包括2±1、3±1、4±1或6±1。在一些情况下，与mtap多肽偶联的peg分子数的众数可以包括8±3。[0145]在一些情况下，所述聚乙二醇具有约500kda至约1000kda、约800kda至约1600kda、约1500kda至约3000kda、约2000kda至约4000kda、约2500kda至约5000kda、约3000kda至约6000kda、约4,000kda至约8,000kda、约6,000kda至约12,000kda、约10,000kda至约20,000kda或约15,000kda至约30,000kda的平均分子量。[0146]在一些情况下，peg可以与seqidno:1的lys11、lys32、lys40、lys49、lys51、lys71、lys82、lys147、lys158、lys166、lys206、lys225、lys238、lys241、lys246、lys248或lys271或具有mtap酶活性的同源mtap多肽的相应位置或其任何组合偶联。在一些情况下，peg可以与seqidno:1的cys55、cys86、cys95、cys131、cys136、cys145、cys211或cys223或具有mtap酶活性的同源mtap多肽的相应位置或其任何组合偶联。[0147]在一些情况下，peg化mtap多肽对于mta和/或ado可以具有至少或约1x10^3、2x10^3、3x10^3、4x10^3、5x10^3、6x10^3、7x10^3、8x10^3、9x10^3、1x10^4、2x10^4、3x10^4、4x10^4、5x10^4、6x10^4、7x10^4、8x10^4、9x10^4、1x10^5、2x10^5、3x10^5、4x10^5、5x10^5、6x10^5、7x10^5、8x10^5、9x10^5、1x10^6、2x10^6、3x10^6、4x10^6、5x10^6、6x10^6、7x10^6、8x10^6、9x10^6、1x10^7、2x10^7、3x10^7、4x10^7、5x10^7、6x10^7、7x10^7、8x10^7、9x10^7、1x10^8、2x10^8、3x10^8、4x10^8、5x10^8、6x10^8、7x10^8、8x10^8或9x10^8s-1m-1的的催化效率(kcat/km)。在一些情况下，mtap多肽对于mta和/或ado可以具有0.5x10^3至2x10^3、1.5x10^3至3x10^3、2.5x10^3至4x10^3、3.5x10^3至5x10^3、4.5x10^3至6x10^3、5.5x10^3至7x10^3、6.5x10^3至8x10^3、7.5x10^3至9x10^3、8.5x10^3至1x10^4、0.5x10^4至2x10^4、1.5x10^4至3x10^4、2.5x10^4至4x10^4、3.5x10^4至5x10^4、4.5x10^4至6x10^4、5.5x10^4至7x10^4、6.5x10^4至8x10^4、7.5x10^4至9x10^4、8.5x10^4至1x10^5、0.5x10^5至2x10^5、1.5x10^5至3x10^5、2.5x10^5至4x10^5、3.5x10^5至5x10^5、4.5x10^5至6x10^5、5.5x10^5至7x10^5、6.5x10^5至8x10^5、7.5x10^5至9x10^5、8.5x10^5至1x10^6、0.5x10^6至2x10^6、1.5x10^6至3x10^6、2.5x10^6至4x10^6、3.5x10^6至5x10^6、4.5x10^6至6x10^6、5.5x10^6至7x10^6、6.5x10^6至8x10^6、7.5x10^6至9x10^6、8.5x10^6至1x10^7、0.5x10^7至2x10^7、1.5x10^7至3x10^7、2.5x10^7至4x10^7、3.5x10^7至5x10^7、4.5x10^7至6x10^7、5.5x10^7至7x10^7、6.5x10^7至8x10^7、7.5x10^7至9x10^7、8.5x10^7至1x10^8、0.5x10^8至2x10^8、1.5x10^8至3x10^8、2.5x10^8至4x10^8、3.5x10^8至5x10^8、4.5x10^8至6x10^8、5.5x10^8至7x10^8、6.5x10^8至8x10^8或7.5x10^8至9x10^8s-1m-1的kcat/km。在一些情况下，peg化mtap多肽对于mta和/或ado可以具有至少或约10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000、1x10^4、1x10^5、1x10^6s-1m-1或可从其中得出的任何范围的kcat/km。在一些情况下，mtap多肽对于mta和/或ado可以具有至少或约1x10^5s-1m-1的kcat/km。[0148]在一些实施方案中，当在携带肿瘤的受试者中施用时，peg化的mtap或mtan可以使浸润肿瘤微环境(tme)的t细胞数量增加未施用或施用前浸润tme的t细胞数量的约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、150％、200％、250％、300％、350％、400％、450％、500％、550％、600％、650％、700％、750％、800％、850％、900％、950％、1000％、2000％、3000％、4000％、5000％、6000％、7000％、8000％、9000％、10000％或20000％。在一些实施方案中，当在携带肿瘤的受试者中施用时，peg化的mtap可以将浸润tme的t细胞数量增加未施用或施用前浸润tme的t细胞数量的10％至30％、20％至40％、30％至50％、40％至60％、50％至70％、60％至80％、70％至90％、80％至100％、90％至150％、100％至200％、150％至250％、200％至300％、250％至350％、300％至400％、350％至450％、400％至500％、450％至550％、500％至600％、550％至650％、600％至700％、650％至750％、700％至800％、750％至850％、800％至900％、850％至950％、900％至1000％、950％至2000％、1500％至2500％、2000％至3000％、2500％至3500％、3000％至4000％、3500％至4500％、4000％至5000％、4500％至5500％、5000％至6000％、5500％至6500％、6000％至7000％、6500％至7500％、7000％至8000％、7500％至8500％、8000％至9000％、8500％至9500％、9000％至10000％或9500％至20000％。[0149]mtap在癌症和免疫抑制中的作用[0150]在一些情况下，mtap是癌症的标记物。在一些情况下，mtap的功能丧失性突变可能导致或促进癌症。在其他情况下，mtap的纯合性基因缺失可能导致或促进癌症。在其他情况下，mtap的纯合性基因缺失或功能丧失性突变可能与较差的治疗结局相关。在一些情况下，与mtap缺失或功能丧失相关的癌症包括骨肉瘤、胰腺癌、脊索瘤、间皮瘤、急性t淋巴细胞白血病或胶质瘤。在一些情况下，mtap或mtap活性的基因或非基因丢失或抑制可增加癌细胞增殖。在一些情况下，mtap或mtap活性的基因或非基因丢失或抑制可增加癌细胞或非癌细胞中的促肿瘤基因的表达。在一些情况下，mtap或mtap活性的基因或非基因丢失或抑制可增加肝细胞癌增殖。在一些情况下，mtap或mtap活性的基因或非基因丢失或抑制可增加肝星状细胞中促肿瘤基因的表达。[0151]在一些情况下，mtap的基因丢失可导致mta分泌增加和mta积累。在一些情况下，mtap活性的丧失可导致mta分泌增加和mta积累。在其他情况下，抑制mtap表达也可导致mta分泌增加和mta积累。在一些情况下，mta的积累可能是细胞外的。在其他情况下，mta的积累可能是细胞内的。在其他情况下，癌症中mtap的丧失或抑制可以导致tme中mta的积累。在一些情况下，tme可以包括肿瘤周围的环境或周围组织，其包括非肿瘤细胞、血管、免疫细胞、成纤维细胞、信号分子或细胞外基质(ecm)。在一些情况下，与无mta积累的癌症相比，有mta积累的癌症(而非正常组织)具有更高的侵袭性和恶性程度。[0152]在一些情况下，与染色体9q21.3的基因缺失相关的癌症风险可包括mtap的缺失或功能丧失。在一些情况下，染色体9q21.3中mtap的缺失和cdkn2a的缺失可独立地促成癌症的发生。在一些情况下，mtap的杂合性基因缺失与t细胞淋巴瘤有关。在一些情况下，mtap基因内导致外显子跳跃、选择性剪接或功能失调的mtap多肽的突变与癌症(与cdkn2a突变无关)相关。在一些情况下，癌症可以包括骨干髓质狭窄伴恶性纤维组织细胞瘤(dmsmfh)。[0153]在一些情况下，mta的积累可导致免疫抑制。在一些情况下，由mtap的基因或非基因丢失或抑制导致的免疫抑制、mta的积累或两者的组合可以包括抑制t细胞的增殖或分化。在一些情况下，免疫抑制可以包括抑制抗原特异性cd8 t细胞的扩增。在其他情况下，免疫抑制可以包括抑制t细胞中cd25或cd69的上调表达。在一些情况下，免疫抑制可以包括诱导预刺激的细胞毒性t淋巴细胞的凋亡。在一些情况下，mta的积累(例如，添加外源性mta)也可以抑制dna合成、蛋白质合成和用抗原或同种异体细胞刺激的人淋巴细胞培养物的增殖。在一些情况下，mta积累的影响可以通过去除mta(例如，洗涤外源性mta)来逆转。在一些情况下，mta可以作为腺苷受体a2a和a2b的激动剂，在巨噬细胞中产生耐受性表型。在其他情况下，mta也可以通过诱导碱性成纤维母细胞生长因子(bfgf)和基质金属蛋白酶3(mmp3)在成纤维细胞中导致肿瘤。在一些情况下，肿瘤分泌的mta可以使肿瘤细胞逃避免疫系统的监控和清除。在一些情况下，mta可以通过抑制t细胞上的prmt5受体而导致免疫抑制。在一些情况下，mta可以抑制prmt5。在一些情况下，mta可以在体外抑制prmt5。在其他情况下，mta可以在体内抑制prmt5。在一些情况下，mta可以抑制prmt5，其抑制常数约为0.26μm。在一些情况下，mta对prmt5的抑制可以减少t细胞的增殖、活力或功能。[0154]在一些情况下，因mtap或mtap活性的基因或非基因丢失或抑制而导致的细胞外ado的积累也可以导致免疫抑制。在一些情况下，ado在tme中的积累还可以导致对抗pd/li抗体或抗ctla4抗体的耐受。在一些情况下，ado可以由濒死细胞释放。在一些情况下，ado可以结合腺苷受体。在一些情况下，ado可以结合g蛋白偶联的ado受体，其包括a1r、a2a3、a2br或a3r。在一些情况下，ado可以通过cd73从amp转化而来。在其他情况下，amp可以通过cd39从adp或atp转化而来。[0155]用peg化mtap多肽治疗癌症[0156]在一些情况下，peg化mtap多肽可以用于治疗癌症。在一些情况下，癌症可以包含mtap基因的基因缺失。在一些情况下，癌症可以包含mtap基因的功能丧失性突变。在一些情况下，癌症可以包含mtap多肽的活性丧失。在一些情况下，癌症可以包含mtap多肽活性的丧失或降低，而编码mtap多肽的基因无基因突变。在一些情况下，癌症可以包含mtap多肽活性的丧失或降低，而编码mtap多肽的基因无基因突变。在一些情况下，癌症可以包含甲硫腺苷磷酸化酶活性的丧失或降低。在一些情况下，可以基于与参考水平的比较来鉴定mtap多肽活性的丧失或降低或甲硫腺苷磷酸化酶活性的丧失。[0157]在一些情况下，参考活性水平可能包括正常或健康组织或受试者的活性水平。在一些情况下，正常或健康受试者可能不包含会增加或降低mtap多肽或甲硫代腺苷磷酸化酶的活性的疾病或病症。正常或健康的受试者可能是健康的。在其他情况下，正常或健康的受试者可能没有癌症。在一些情况下，与人群中的普通受试者相比，正常或健康受试者可能没有更高的癌症风险。在其他情况下，受试者的参考活性水平可以包括受试者的正常或健康组织的活性水平。在其他情况下，受试者的参考活性水平可能包括另一名受试者的正常或健康组织的活性水平。在一些情况下，组织的参考活性水平可能包括处于健康状态的可比组织的活性水平。在其他情况下，受试者的参考活性水平可能包括另一名正常或健康受试者的正常或健康组织的活性水平。在一些情况下，也可以在体外定义参考水平。在一些情况下，mtap多肽或甲硫腺苷磷酸化酶的参考活性水平可以包括具有mtap多肽的野生型序列、表达水平或丰度水平的细胞的mtap多肽或甲硫腺苷磷酸化酶的活性水平。[0158]在一些情况下，与参考水平相比，癌症或癌细胞中的mtap表达或活性至少降低10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％。[0159]在一些情况下，使用mtap多肽或peg-mtap治疗降低肿瘤微环境中mta的细胞外浓度至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％。包含mtap缺失的癌症或癌细胞可以包括膀胱、脑、乳腺、血红素、结肠、肺、胰腺或皮肤癌细胞。[0160]在一些情况下，参考水平可以包括健康受试者的水平。在其他情况下，参考水平可以包括健康受试者的组织的水平。在一些情况下，参考水平可以包括被施用本文所述药物组合物的受试者的健康组织的水平。[0161]在一些实施方案中，peg化的mtap多肽可能具有低免疫原性风险。在其他情况下，mtap多肽可能不具有低免疫原性风险。[0162]在一些情况下，癌症可能包括恶性细胞类型，例如在实体瘤或血液肿瘤中发现的那些。在一些情况下，癌症可能包括选自由以下组成的组的器官的肿瘤：胰、结肠、盲肠、胃、胆囊、皮肤、脑、头、颈、卵巢、肾、喉、肉瘤、肺、膀胱、黑色素瘤、前列腺和乳房。在一些情况下，癌症可能包括血液肿瘤，其包括骨髓肿瘤、t或b细胞恶性肿瘤、白血病、淋巴瘤、母细胞瘤、骨髓瘤等。在一些情况下，癌症可能还包括癌瘤(carcinoma)、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤、白血病、鳞状细胞癌、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞癌)、腹膜癌、肝细胞癌、胃癌(包括胃肠癌和胃肠道间质癌)、胰腺癌、胶质母细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、胆囊癌、乳腺癌、结肠癌、结直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌、肾细胞癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、各类头颈癌、头颈鳞状细胞癌、黑色素瘤、浅表扩散性黑色素瘤、雀斑样恶性黑色素瘤、肢端雀斑样黑色素瘤、结节性黑色素瘤以及b细胞淋巴瘤(包括低度/滤泡性非霍奇金淋巴瘤(nhl)；小淋巴细胞(sl)nhl；中度/滤泡性nhl；中度弥漫性nhl；高度免疫母细胞性nhl；高度成淋巴细胞性nhl；高度小无裂细胞性nhl；巨块型nhl；套细胞淋巴瘤；aids相关淋巴瘤；和华氏巨球蛋白血症)、慢性淋巴细胞白血病(cll)、急性淋巴细胞白血病(all)、毛细胞白血病、多发性骨髓瘤、急性髓细胞样白血病(aml)和慢性成髓细胞白血病。[0163]在一些情况下，癌症可能包括恶性赘生物；癌瘤；未分化癌瘤；巨细胞癌和梭形细胞癌；小细胞癌；乳头状癌；鳞状细胞癌；淋巴上皮癌；基底细胞癌；毛母质癌；移行细胞癌；乳头状移行细胞癌；腺癌；恶性胃泌素瘤；胆管癌；肝细胞癌；混合性肝细胞癌和胆管癌；小梁性腺癌；腺样囊性癌；腺瘤性息肉内的腺癌；腺癌(家族性结肠息肉病)；实体癌；恶性类癌瘤；细支气管-肺泡腺癌(bronchiolo-alveolaradenocarcinoma)；乳头状腺癌；嫌色细胞癌；嗜酸细胞癌；嗜酸性腺癌；嗜碱细胞腺癌；透明细胞腺癌；颗粒细胞癌；滤泡腺癌；乳头状和滤泡状腺癌；无包膜形成的硬化性癌；肾上腺皮质癌；子宫内膜样癌；皮肤附属器癌；大汗腺腺癌；皮脂腺癌；盯聍腺癌；粘液表皮样癌；囊腺癌；乳头状囊腺癌；乳头状浆液性囊腺癌；粘液性囊腺癌；粘液腺癌；印戒细胞癌；浸润性导管癌；髓样癌；小叶癌；炎性癌；佩吉特氏病(乳腺)；腺泡细胞癌；腺鳞癌；腺癌伴鳞状化生；恶性胸腺瘤；恶性卵巢间质瘤；恶性泡膜细胞瘤；恶性颗粒细胞瘤；恶性男性母细胞瘤；赛尔托利细胞癌；恶性莱迪希细胞瘤；恶性脂质细胞瘤；恶性副神经节瘤；恶性乳腺外副神经节瘤；嗜铬细胞瘤；血管球肉瘤；恶性黑色素瘤；无色素性黑色素瘤；浅表扩散性黑色素瘤；巨大色素痣内恶性黑色素瘤；上皮样细胞黑素瘤；恶性蓝痣；肉瘤；纤维肉瘤；恶性纤维组织细胞瘤；黏液肉瘤；脂肪肉瘤；平滑肌肉瘤；横纹肌肉瘤；胚胎性横纹肌肉瘤；小泡型横纹肌肉瘤；间质肉瘤；恶性混合瘤；缪勒(mullerian)混合瘤；肾母细胞瘤；肝母细胞瘤；癌肉瘤；恶性间叶瘤；恶性布伦纳瘤；恶性叶状肿瘤；滑膜肉瘤；恶性间皮瘤；无性细胞瘤；胚胎性癌；恶性畸胎瘤；卵巢甲状腺肿样瘤(恶性)；绒毛膜癌；恶性中肾瘤；血管肉瘤；恶性血管内皮瘤；卡波西肉瘤；恶性血管外皮细胞瘤；淋巴管肉瘤；骨肉瘤；皮质旁骨肉瘤；软骨肉瘤；恶性软骨母细胞瘤；间质软骨肉瘤；骨巨细胞瘤；尤文肉瘤；恶性牙源性肿瘤；成釉细胞牙肉瘤；恶性成釉细胞瘤；成釉细胞纤维肉瘤；恶性松果体瘤；脊索瘤；恶性胶质瘤；室管膜瘤；星形细胞瘤；原浆性星形细胞瘤；纤维性星形细胞瘤；星形母细胞瘤；胶质母细胞瘤；少突神经胶质瘤；成少突神经胶质细胞瘤；原发性神经外胚层瘤；小脑肉瘤；成神经节细胞瘤；成神经细胞瘤；视网膜母细胞瘤；嗅神经源性肿瘤；恶性脑膜瘤；神经纤维肉瘤；恶性神经鞘瘤；恶性颗粒细胞瘤；恶性淋巴瘤；霍奇金病；霍奇金；类肉芽肿；恶性小淋巴细胞性淋巴瘤；恶性大细胞、弥漫性淋巴瘤；恶性滤泡性淋巴瘤；蕈样肉芽肿病；其他特定的非霍奇金淋巴瘤；恶性组织细胞增生症；多发性骨髓瘤；肥大细胞肉瘤；免疫增殖性小肠疾病；白血病；淋巴系白血病；浆细胞性白血病；红白血病；淋巴肉瘤细胞性白血病；髓细胞性白血病；嗜碱细胞性白血病；嗜酸细胞性白血病；单核细胞性白血病；肥大细胞白血病；巨核母细胞白血病；髓样肉瘤；和毛细胞性白血病。[0164]核酸[0165]在一些情况下，编码mtap多肽的核酸可包括dna、rna、lna、pna或本文描述的任何可以编码mtap多肽的衍生物。在一些情况下，包含seqidno:2的核酸编码包含seqidno:1的mtap多肽。在一些情况下，包含seqidno:4的核酸编码包含seqidno:3的mtap多肽。在一些情况下，包含seqidno:6的核酸编码包含seqidno:5的mtap多肽。[0166]在一些情况下，编码mtap多肽的核酸还可以根据用于表达多肽的生物体进行密码子优化。[0167]mtap多肽的peg化[0168]在一些情况下，mtap多肽的peg化可以通过将peg的反应性衍生物与mtap多肽孵育来实现。在一些情况下，peg化可以是共价的。在其他情况下，peg化可以是非共价的。在一些情况下，mtap多肽的peg化可能意味mtap多肽与peg偶联。在其他情况下，peg化可包括将peg分子与天然或重组mtap多肽、本文所述的其片段、或本文所述的其部分连接。[0169]在一些情况下，peg分子可在mtap多肽的赖氨酸、丝氨酸、组氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、n-末端胺、苯丙氨酸、c-末端半胱氨酸、精氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、n-末端、c-末端或其任意组合处被附接、偶联或连接至mtap多肽上。在一些情况下，peg分子可能在mtap多肽的赖氨酸或半胱氨酸处被附着、偶联或连接至mtap多肽上。在一些情况下，c-末端羧酸也可以用于mtap多肽的peg化。在一些情况下，peg分子可能在mtap多肽的赖氨酸或半胱氨酸处被附着、偶联或连接至mtap多肽上。[0170]在一些情况下，peg分子可以在每个末端用相同的活性部分激活，即，peg分子是“同双功能的”。在其他情况下，peg分子可以在每个末端激活不同的活性部分，即，然后peg分子是“异双功能的”或“异功能的”。在一些情况下，可以制备peg分子的化学活性或活化衍生物，以将peg分子附接到mtap多肽上。[0171]在一些情况下，peg分子可能在琥珀酰亚胺酯、醛、马来酰亚胺、对硝基苯基碳酸酯、其任何衍生物或其任何组合处被附接、偶联或连接至mtap多肽上。在一些情况下，用于mtap多肽peg化的peg分子的产生可包括使peg分子和与羟基反应的基团反应，所述基团包括酸酐、酰氯、氯甲酸酯或碳酸酯。在其他情况下，用于mtap多肽peg化的peg分子的产生可包括使peg分子与和官能团反应的基团反应，所述基团包括醛、酯或酰胺。在一些情况下，甲氧基peg分子可以用于mtap多肽的peg化。在一些情况下，聚乙二醇(peg二醇)也可以用于mtap多肽的peg化。在一些情况下，二醇基团可以在两端被修饰，从而得到异二聚体或同二聚体peg化mtap多肽。[0172]在一些情况下，mtap多肽可以在亲核位点被peg化。在其他情况下，亲核位点可以包含未质子化的巯基或氨基或胺基。在一些情况下，赖氨酸侧链或蛋白质n端上的氨基或胺基可用于mtap多肽的peg化。在一些情况下，蛋白质可以通过赖氨酸侧链或蛋白质n端的胺基或氨基的烷基化与peg分子偶联。在一些情况下，peg-醛、nhs-peg、peg三氟乙基磺酸酯、peg异硫氰酸酯或琥珀酰亚胺peg分子可以用于偶联mtap多肽上赖氨酸侧链上的氨基。在其他情况下，琥珀酰亚胺碳酸酯(peg-sc)、苯并三唑碳酸酯(peg-btc)、碳酸苯基酯(phenylcarbonate)、羰基咪唑或噻唑烷-2-硫酮也可以用于mtap多肽的peg化。在一些情况下，氰尿酰氯活化的peg分子可以用于与mtap多肽的赖氨酸的伯胺基反应。在一些情况下，使用氰基硼氢化钠，peg醛衍生物(例如甲氧基peg丙醛或mpeg丙醛)可以用于通过还原性烷基化与mtap多肽的赖氨酸的氨基形成稳定的仲胺连接。在一些情况下，低ph反应可以用于直接peg化氨基的特定基团。这种特定的氨基基团可以包括具有低pka的氨基。[0173]在一些情况下，未质子化的巯基可以包含半胱氨酸的侧链。在一些情况下，peg马来酰亚胺、peg碘乙酸盐、peg硫醇或peg乙烯基砜可以用于在半胱氨酸处peg化mtap多肽。在一些情况下，天然半胱氨酸可以用于peg化。在其他情况下，可以将半胱氨酸残基工程改造到mtap多肽中以便于peg化。这种工程改造可以包括向mtap多肽添加半胱氨酸。在其他情况下，半胱氨酸可以替换mtap多肽的任何氨基酸残基。在一些情况下，基于半胱氨酸的peg化可以包括使连接到peg的马来酰亚胺基团与游离半胱氨酸反应。在一些情况下，游离半胱氨酸可能不参与二硫键。[0174]在一些情况下，peg可在mtap多肽的二硫键处与mtap多肽偶联。在一些情况下，基于二硫键的peg化可包括在温和条件下还原二硫化物，并用双(巯基)特异性试剂标记二硫化物中涉及的半胱氨酸。在这些情况下，二硫代马来酰亚胺可以用于产生基于二硫键的peg化。[0175]在一些情况下，peg可在酪氨酸残基处与mtap多肽偶联。在一些情况下，mtap多肽的酪氨酸可与4-苯基-3h-1,2,4-三唑-3,5(4h)-二酮(ptad)反应，在mtap和peg之间形成共价键。在一些情况下，可能首先产生peg-ptad偶联物，并与mtap多肽的酪氨酸反应。[0176]在一些情况下，可以通过直接化学合成mtap多肽来制备peg化物，其中mtap多肽被连接到固相合成肽(spps)上，并且peg在偶联步骤之一中被掺入，或者通过直接化学连接mtap多肽的天然化学特征来掺入。在一些情况下，天然化学特征可以包括本文所述的peg化偶联位点中存在的化学特征。在一些情况下，天然化学特征还可以包括含烷基化的残基。在其他情况下，可以使用huisgen1,3-偶极环加成将叠氮peg偶联物连接到含烷基化的残基上。在其他情况下，可以使用fmoc-天冬酰胺将peg与mtap多肽偶联，其中在spps期间将fmoc-天冬酰胺掺入到mtap多肽中。[0177]在一些情况下，对于mtap多肽的基于胺的peg化，在peg化反应中要优化的参数可包括多肽浓度、peg与多肽的摩尔比、温度或ph、反应时间。在一些情况下，对于mtap多肽的基于巯基的peg化，在peg化反应中要优化的参数可包括多肽浓度、peg与多肽的摩尔比、温度、ph、反应时间或氧气排除。在一些情况下，peg化反应可影响mtap多肽的稳定性。在开始peg化反应之前，应该知道peg分子的反应性。例如，在一些情况下，如果peg分子在mtap多肽的peg化反应中只有70％的活性，所用的peg分子的量应确保只有活性的peg分子可计入mtap与peg反应的化学计量中。[0178]聚乙二醇(peg)[0179]在一些情况下，peg分子可包含聚合物。在一些情况下，peg分子可包含乙二醇或环氧乙烷的均聚物。在一些情况下，peg分子可包含聚氧化乙烯(peo)或聚氧乙烯(poe)。在一些情况下，peg分子可包含式i：[0180][0181]其中n为单元数量。在一些情况下，peg分子可具有44.05n 18.02g/mol的分子量，其中n是如式i中的单元数量。在一些情况下，peg分子物质的分子量可以用于计算单元的数量，例如本文的式i或其衍生物的单元数量，反之亦然。在一些情况下，peg分子还可能具有分子式h-(o-ch2-ch2)n-oh或c2nh4n 2on 1，其中n是单元数量。[0182]在一些情况下，peg分子可被表示为peg-n，其中n可包括单元数量，例如式i中的n。在一些情况下，peg分子还可具有分子式h-(o-ch2-ch2)n-oh或c2nh4n 2on 1，其中n是单元数量。在一些情况下，具有不同单元数量的peg分子可能具有不同的性质。在一些情况下，低分子量的peg分子可以是粘稠的或无色的液体。在其他情况下，高分子量的peg分子可以以高熔点结晶。高熔点可以高于70℃。[0183]在一些情况下，peg分子可能具有约100kda、150kda、200kda、250kda、300kda、350kda、400kda、450kda、500kda、550kda、600kda、650kda、700kda、750kda、800kda、850kda、900kda、950kda、1000kda、1050kda、1100kda、1150kda、1200kda、1250kda、1300kda、1350kda、1400kda、1450kda、1500kda、1550kda、1600kda、1650kda、1700kda、1750kda、1800kda、1850kda、1900kda、1950kda、2000kda、2050kda、2100kda、2150kda、2200kda、2250kda、2300kda、2350kda、2400kda、2450kda、2500kda、2550kda、2600kda、2650kda、2700kda、2750kda、2800kda、2850kda、2900kda、2950kda、3000kda、3050kda、3100kda、3150kda、3200kda、3250kda、3300kda、3350kda、3400kda、3450kda、3500kda、4000kda、5000kda、6000kda、7000kda、8000kda、9000kda、10000kda、11000kda、12000kda、13000kda、14000kda、15000kda、16000kda、17000kda、18000kda、19000kda、20000kda、21000kda、22000kda、23000kda、24000kda、25000kda、26000kda、27000kda、28000kda、29000kda、30000kda、31000kda、32000kda、33000kda、34000kda、35000kda或大于35000kda的平均分子量。在一些情况下，peg分子可具有约100kda至约1000kda、约500kda至约1500kda、约1000kda至约2000kda、约1500kda至约2500kda、约2000kda至约3000kda、约2500kda至约3500kda、约3000kda至约4000kda、约3500kda至约4500kda、约4000kda至约5000kda、约4500kda至约5500kda、约5000kda至约6000kda、约5500kda至约6500kda、约6000kda至约7000kda、约6500kda至约7500kda、约7000kda至约8000kda、约7500kda至约8500kda、约8000kda至约9000kda、约8500kda至约9500kda、约9000kda至约10000kda、约9500kda至约10500kda、约10000kda至约11000kda、约10500kda至约11500kda、约11000kda至约12000kda、约11500kda至约12500kda、约12000kda至约13000kda、约12500kda至约13500kda、约13000kda至约14000kda、约13500kda至约14500kda、约14000kda至约15000kda、约14500kda至约15500kda、约15000kda至约16000kda、约15500kda至约16500kda、约16000kda至约17000kda、约16500kda至约17500kda、约17000kda至约18000kda、约17500kda至约18500kda、约18000kda至约19000kda、约18500kda至约19500kda、约19000kda至约20000kda、约19500kda至约20500kda、约20000kda至约21000kda、约20500kda至约21500kda、约21000kda至约22000kda、约21500kda至约22500kda、约22000kda至约23000kda、约22500kda至约23500kda、约23000kda至约24000kda、约23500kda至约24500kda、约24000kda至约25000kda、约24500kda至约25500kda、约25000kda至约26000kda、约25500kda至约26500kda、约26000kda至约27000kda、约26500kda至约27500kda、约27000kda至约28000kda、约27500kda至约28500kda、约28000kda至约29000kda、约28500kda至约29500kda、约29000kda至约30000kda、约29500kda至约30500kda、约30000kda至约31000kda、约30500kda至约31500kda、约31000kda至约32000kda、约31500kda至约32500kda、约32000kda至约33000kda、约32500kda至约33500kda、约33000kda至约34000kda、约33500kda至约34500kda或约34000kda至约35000kda的平均分子量。在一些情况下，peg分子可能具有约5000kda的平均分子量。在其他情况下，peg分子可能具有约500kda至约1000kda、约800kda至约1600kda、约1500kda至约3000kda、约2000kda至约4000kda、约2500kda至约5000kda、约3000kda至约6000kda、约4,000kda至约8,000kda、约6,000kda至约12,000kda、约10,000kda至约20,000kda、或约15,000kda至约30,000kda的平均分子量。[0184]在一些情况下，peg分子可以包含从-40℃至-70℃的玻璃转化温度(tg)。在一些情况下，peg分子可以溶解在极性或非极性溶剂中。在一些情况下，peg分子可以溶解在亲水性溶剂中。在一些情况下，peg分子可以溶解在有机溶剂中。一种此类有机溶剂可以包括醇、二氯甲烷、丙酮、甲苯、乙腈、苯、二氯甲烷、氯仿、及其衍生物或其任何组合。在其他情况下，peg分子也可以是两亲的。[0185]在一些情况下，peg分子可具有支链、星形、线性、梳状结构及其衍生物；或其任何组合。在一些情况下，peg分子可能包含末端羟基。在其他情况下，peg分子可以将末端羟基转化为对称或不对称的官能团。在一些情况下，peg分子或包含peg分子的任何制品可以是生物惰性的。为生物惰性可包括对生物反应的抵抗。一种此类生物反应可包括降解peg分子或包含peg的任何制品。在其他情况下，为生物惰性可能意味着具有最小的固有生物活性。在一些情况下，peg分子可能具有低免疫原性。在一些情况下，peg分子可能不具有免疫原性。实体的免疫原性可以包括当实体被呈递或施用于免疫系统或被免疫系统检测时，该实体引发或激活针对该实体的免疫反应的能力。在一些情况下，当被施用或呈递于免疫系统时，peg分子可能不会引发针对peg分子的免疫反应。在其他情况下，peg分子可能是无毒的。在一些情况下，peg分子可以产生高渗透压。在一些情况下，peg分子可以被交联成水凝胶。在其他情况下，peg分子可能不带电荷。[0186]在一些情况下，peo或poe可能具有至少约1x10^5g/mol、2x10^5g/mol、3x10^5g/mol、4x10^5g/mol、5x10^5g/mol、6x10^5g/mol、7x10^5g/mol,8x10^5g/mol、9x10^5g/mol、1x10^6g/mol、2x10^6g/mol、3x10^6g/mol、4x10^6g/mol、5x10^6g/mol、6x10^6g/mol、7x10^6g/mol、8x10^6g/mol、9x10^6g/mol、1x10^7g/mol或更大的分子量。[0187]融合蛋白[0188]在一些情况下，mtap多肽可以包含异源物体。在一些情况下，异源物体可以包含异源肽。在一些情况下，mtap多肽和异源肽可以被连接为融合蛋白。在一些情况下，包含mtap多肽和异源肽的融合蛋白可以构造在同一翻译单元中，其中mtap多肽和异源肽可以共享相同的atg起始密码子。在其他情况下，mtap多肽和异源肽可以通过共价键连接。这种共价键可以包括肽键。在其他情况下，mtap多肽和异源肽可能具有非共价键。在一些情况下，mtap多肽和异源肽可不构造在同一翻译单元中。[0189]在一些情况下，mtap多肽可包含细胞靶向部分，其包括抗体、生长因子、激素、肽、适体、化学品、药物、核酸、细胞因子、及其任何衍生物、及其任何生物等效物或其任何组合。例如，根据实施方案的细胞靶向部分可以与皮肤癌细胞(如黑色素瘤细胞)结合。已表明，gp240抗原在多种黑色素瘤中表达，但在正常组织中不表达。因此，在实施方案的某些方面，提供了细胞靶向构建体，其包含mtap多肽和与gp240结合的细胞靶向部分。在一些情况下，gp240结合分子可以是抗体，例如zme-018(225.28s)抗体或9.2.27抗体。在更优选的实施方案中，gp240结合分子可能是单链抗体，例如scfvmel抗体。因此，在本发明的一个非常具体的实施方案中，提供了细胞靶向构建体，其包含与scfvmel偶联的mtase。[0190]在一些情况下，包含细胞靶向部分的mtap多肽可以被定向到乳腺癌细胞。在一些情况下，细胞靶向部分可以与her-2/neu结合。在其他情况下，mtap多肽可包含抗her-2/neu抗体。在一些情况下，融合蛋白包含mtap多肽和包含单链抗her-2/neu抗体scfv23的靶向部分。在其他情况下，包含mtap多肽和包含与her-2/neu结合的scfv(frp5)的靶向部分的融合蛋白也可以用于当前实施方案的组合物和方法中(vonminckwitz等人，2005)。[0191]在一些情况下，细胞靶向部分可以与多种类型的癌细胞结合。在一些情况下，8h9单克隆抗体和由其衍生的与在乳腺癌、肉瘤和神经母细胞瘤上表达的糖蛋白结合的单链抗体(onda等人，2004)可以用作靶向部分。在其他情况下，细胞靶向部分可包含美国专利申请号2004/005647和winthrop等人(2003)中所述的与muc-1(一种在多种癌症类型上表达的抗原)结合的细胞靶向剂。在一些情况下，应当理解，在某些实施方案中，根据实施方案的细胞靶向构建体可以靶向多种癌症或肿瘤类型。[0192]某些细胞表面分子在肿瘤细胞中高度表达，包括激素受体，例如人绒毛膜促性腺激素受体和促性腺激素释放激素受体(nechushtan等人，1997)。在一些情况下，与癌细胞表达的激素受体结合的激素肽可以在癌症治疗中用作特异性靶向癌症的细胞靶向部分。[0193]在一些情况下，免疫检查点阻断抑制剂可以用作细胞靶向部分。在一些情况下，免疫检查点阻断抑制剂可以用于与mtap多肽形成融合蛋白。在其他情况下，拮抗pd-1、pdl-1或pdl-2的抗体或其片段(例如scfv)(例如，美国专利号8,735,553、8,354,509和8,008,449；pct申请号wo2009/101611和wo2009/114335中描述的抗体)可以与mtap多肽融合。在另一个实例中，识别ctla-4的抗体或其片段(例如scfc)(例如，美国专利号8,119,129和pct申请号wo01/14424、wo98/42752和wo00/37504)可以与mtap多肽融合。在一些情况下，可以将本文所述的任何检查点阻断分子用作细胞靶向部分。[0194]接头[0195]在一些情况下，mtap多肽可以通过双功能交联剂与异源物体化学偶联。在一些情况下，mtap多肽可以通过肽接头与异源物体化学偶联。[0196]在一些情况下，合适的肽接头包括gly-ser接头。[0197]双功能交联剂已被广泛用于各种目的，并且在本领域是公知的，其包括亲和基质的制备、多种结构的修饰和稳定、配体和受体结合位点的鉴定和结构研究。[0198]在一些情况下，双功能交联剂可以包括同双功能试剂。在一些情况下，携带两个相同官能团的同双功能试剂可以高效地诱导相同和不同大分子或大分子亚基之间的交联，并将多肽配体连接到其特定的结合位点。在一些情况下，双功能交联剂可以包括含有两个不同官能团的异双功能试剂。在一些情况下，异双功能试剂可以通过两个不同官能团的不同反应性选择性地和顺序性地控制交联。在一些情况下，双功能交联剂可以根据其官能团(例如氨基、巯基、胍基、吲哚基、羧基-特异性基团)的特异性进行划分。在一些情况下，针对游离氨基的交联剂可以基于其商业可得性、合成的简易性以及其可以应用的温和反应条件被使用。[0199]在一些情况下，异双功能交联剂可以包含伯胺反应性基团和巯基反应性基团。在另一个实例中，描述了异双功能交联剂和使用该交联剂的方法(美国专利号5,889,155，被特别通过引用以其整体并入本文)。交联剂将亲核的肼残基与亲电子的马来酰亚胺残基结合，在一个实例中，允许醛与游离巯基偶联。交联剂经修饰后可交联各种官能团。[0200]此外，本领域技术人员已知的任何其他连接剂/偶联剂和/或机制可以用于组合mtap多肽，其包括抗体-抗原相互作用、亲和素-生物素连接、酰胺键、酯键、硫酯键、醚键、硫醚键、磷酸酯键、磷酰胺键、酸酐键、二硫键、离子和疏水相互作用、双特异性抗体和抗体片段或其组合。[0201]在一些情况下，可以使用在血液中具有合理稳定性的交联剂。已知有多种类型的含二硫键的接头可成功用于偶联靶向剂和治疗剂/预防剂。在一些情况下，包含空间上被阻碍的二硫键的接头可以使与该接头偶联的分子在体内具有更大的稳定性。因此，这些接头是一组连接剂。[0202]在一些情况下，非受阻接头也可以根据本文使用。其他有用的交联剂(认为不含有或生成受保护的二硫化物)包括sata、spdp和2-亚氨基硫烷(wawrzynczak和thorpe，1987)。这种交联剂的使用在本领域中是被充分理解的。在一些情况下，可以使用柔性接头。[0203]在一些情况下，一旦化学偶联，就可以纯化肽，以将偶联物从未偶联的剂和其他污染物中分离出来。在一些情况下，大量纯化技术可用于提供足够纯度的偶联物，使其具有临床用途。在一些情况下，纯化方法可以包括基于通常最常用的尺寸分离的方法，例如凝胶过滤、凝胶渗透或高效液相色谱法。也可以使用其他色谱技术，例如蓝色-琼脂糖凝胶分离。例如使用弱去污剂，如n-月桂酰肌氨酸钠(sls)从包涵体中纯化融合蛋白的常规方法可能是有用的。[0204]载体[0205]本文所提供的核酸可以通过任何合适的方式递送。在一些情况下，合适的方法包括载体。可以使用任何载体系统，包括但不限于：质粒载体、微环载体、线性dna载体、犬骨状载体(doggybonevector)、逆转录病毒载体、慢病毒载体、腺病毒载体、痘病毒载体；疱疹病毒载体和腺相关病毒载体、脂质体、纳米颗粒、外泌体、细胞外囊泡、纳米网、其修饰形式、其生产质量管理规范形式、其嵌合体和其任何组合。在一些情况下，载体可用于引入本文所提供的多核苷酸。在一些情况下，多核苷酸包含与本文所提供的rna区域杂交的靶向序列。在一些实施方案中，纳米颗粒载体可以包括基于聚合物的纳米颗粒、基于氨基脂质的纳米颗粒、金属纳米颗粒(例如基于金的纳米颗粒)、这些中的任何一个的一部分、或其任何组合。[0206]在一些情况下，载体可以不是病毒载体。非病毒方法可以包括裸递送包含多核苷酸等的组合物。在一些情况下，当以裸多核苷酸递送时，本文所提供的修饰可以被掺入到多核苷酸中以增加稳定性和对抗降解。在其他情况下，非病毒方法可以利用纳米颗粒、脂质体等。[0207]宿主细胞[0208]在一些情况下，宿主细胞可以是任何可被转化以允许表达和分泌mtap多肽及其偶联物的细胞。在一些情况下，宿主细胞可以包括细菌、哺乳动物细胞、酵母或丝状真菌。在一些情况下，细菌可以包括埃希氏菌属(escherichia)和芽孢杆菌属(bacillus)。在一些情况下，细菌可以包括大肠杆菌(escherichiacoli(e.coli))或肠沙门氏菌(salmonellaenterica)。在其他情况下，属于酵母菌属(saccharomyces)、克鲁维氏酵母属(kiuyveromyces)、汉森氏酵母属(hansenula)或毕赤酵母属(pichia)的酵母可以用作宿主细胞。在一些情况下，丝状真菌可以用作表达宿主，其包括曲霉菌属(aspergillus)、木霉属(trichoderma)、脉孢菌属(neurospora)、青霉属(penicillium)、头孢菌属(cephalosporium)、绵霉属(achlya)、足孢子菌属(podospora)、内座壳属(endothia)、毛霉菌属(mucor)、旋孢腔菌属(cochliobolus)或梨孢属(pyricularia)。[0209]在一些情况下，宿主细胞，细菌或酵母菌株可以包括大肠杆菌mc1061、枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)brb1的衍生物(sibakov等人，1984)、金黄色葡萄球菌(staphylococcusaureus)sai123(iordanescu，1975)或铅青链球菌(streptococcuslividans)(hopwood等人，1985)、酿酒酵母菌(saccharomycescerevisiae)ah22(mellor等人，1983)、粟酒裂殖酵母(schizosaccharomycespombe)、构巢曲霉菌(aspergillusnidulans)、泡盛曲霉(aspergillusawamori)(ward，1989)或里氏木霉(trichodermareesei)(penttila等人，1987；harkki等人，1989)。[0210]在一些情况下，mtap多肽可以在哺乳动物宿主细胞中表达。在一些情况下，哺乳动物宿主细胞可以包括中国仓鼠卵巢细胞(cho-k1；atccccl61)、大鼠垂体细胞(gh1；atccccl82)、helas3细胞(atccccl2.2)、大鼠肝癌细胞(h-4-ii-e；atcccrl1548)、sv40转化的猴肾细胞(cos-1；atcccrl1650)和小鼠胚胎细胞(nih-3t3；atcccrl1658)。[0211]在一些情况下，表达mtap多肽的哺乳动物宿主细胞可以在通常用于培养亲代细胞系的条件下培养。在一些情况下，表达mtap多肽的哺乳动物宿主细胞可以在含有生理盐和营养素的标准培养基中培养，例如标准rpmi、mem、imem或dmem，通常补充5％-10％的血清，例如胎牛血清。在其他情况下，培养条件可以包括在37℃下在静止或滚动培养物中培养，直到达到预期蛋白质水平。[0212]在一些情况下，昆虫宿主细胞可以用于表达mtap多肽。在一些情况下，昆虫宿主细胞可以包括sf9、sf21、highfive或s2细胞。在其他情况下，昆虫表达宿主细胞可以包含杆状病毒表达系统。[0213]施用[0214]在一些情况下，本文的peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或其药物组合物可以包括将本文的peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或其药物组合物包装到组合物或制剂中以在受试者中递送或施用。在一些情况下，本文的peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或其药物组合物的施用可以指能够用于将本文的peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或其药物组合物递送至预期生物作用位点的方法。递送可以包括直接应用于身体的受影响组织或区域。递送可以包括颅内注射。递送可以包括实质注射、鞘内注射、心室内注射或脑池内注射。本文的peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或其药物组合物可以通过任何方法施用。施用方法可以是通过吸入、动脉内注射、脑室内注射、脑池内注射、肌内注射、眶下注射、实质内注射、腹腔注射、椎管内注射、鞘内注射、静脉内注射、脑室内注射、立体定向注射、皮下注射或其任何组合。递送可以包括胃肠外施用(包括静脉内、皮下、鞘内、腹膜内、肌内、血管内或逐步输注)、口服施用、吸入施用、十二指肠内施用、直肠施用。递送可以包括对表面的外表面(如皮肤)进行局部施用(如洗剂、霜剂、软膏)。在一些情况下，施用是通过实质注射、鞘内注射、心室内注射、脑池内注射、静脉内注射或鼻内施用或其任何组合。在一些情况下，受试者可以在没有监督的情况下施用组合物。在一些情况下，受试者可以在医务人员(例如，医师、护士、医师助理、护工、临终关怀工作者等)的监督下施用组合物。医务人员可以施用该组合物。在一些情况下，美容专业人员可以施用该组合物。在一些情况下，peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或本文及其药物组合物也可以通过蠕动方式递送、直接注射到尿道中或通过连接到可能含有mta或ado的潜在生物传感器的导管的泵施用。在一些情况下，peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或本文所述的其药物组合物可以通过以下方式施用：肿瘤内、静脉内、皮内、动脉内、腹腔内、病变内、颅内、关节内、前列腺内、胸膜内、气管内、眼内、鼻内、玻璃体内、阴道内、直肠内、肌内、皮下、结膜下、膀胱内、经粘膜，心包内、脐内、口服、通过吸入、通过注射、通过输注、通过连续输注、通过局部灌注直接进行靶细胞浴、经导管或经灌洗。[0215]本文所述的治疗患有癌症个体的方法可以包括在患有癌症或怀疑患有癌症的个体中施用本文的peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或其药物组合物。本文所述的治疗患有癌症个体的方法也可以包括在未患癌症或未怀疑患癌症的个体中施用本文的peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或其药物组合物。[0216]本文的peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或其药物组合物的施用或应用可进行至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100天连续或非连续天的治疗持续时间。治疗持续时间可以是从约1至约30天、从约2至约30天、从约3至约30天、从约4至约30天、从约5至约30天、从约6至约30天、从约7至约30天、从约8至约30天、从约9至约30天、从约10至约30天、从约11至约30天、从约12至约30天、从约13至约30天、从约14至约30天、从约15至约30天、从约16至约30天、从约17至约30天、从约18至约30天、从约19至约30天、从约20至约30天、从约21至约30天、从约22至约30天、从约23至约30天、从约24至约30天、从约25至约30天、从约26至约30天、从约27至约30天、从约28至约30天或从约29至约30天。[0217]在一些情况下，本文的peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或其药物组合物的施用或应用可进行至少约1周、至少约1个月、至少约1年、至少约2年、至少约3年、至少约4年、至少约5年、至少约6年、至少约7年、至少约8年、至少约9年、至少约10年、至少约15年、至少约20年或更长的治疗持续时间。施用可以在受试者的整个生命周期内重复进行，例如在受试者的生命周期内每月一次或每年一次。施用可以在受试者生命的大部分时间内重复进行，例如每月一次或每年一次，持续至少约1年、5年、10年、15年、20年、25年、30年或更长时间。[0218]在一些情况下，施用任何本文的peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或其药物组合物以减少疾病或病症的症状和/或减少疾病或病症。在一些情况下，有效量可能足以达到预期效果。在治疗或预防应用的背景下，有效量将取决于所讨论病症的类型和严重程度以及个体受试者的特征，例如一般健康状况、年龄、性别、体重和对本文的peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或其药物组合物的耐受性。[0219]给药[0220]本文的peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或其药物组合物的施用或应用可每天至少进行1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24次。在一些情况下，本文公开的个性化肿瘤疫苗或药物组合物的施用或应用可以每周进行至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21次。在一些情况下，本文的peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或其药物组合物的施用或应用可每月进行至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89或90次。[0221]本文的peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或其药物组合物可按单一剂量或多个分剂量施用/应用。在一些情况下，本文的peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或其药物组合物可以在第一时间点和第二时间点施用。在一些情况下，可以施用本文的peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或其药物组合物，使得第一次施用先于另一次施用，施用时间差为1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、4天、7天、2周、4周、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、1年或更长。[0222]在一些情况下，本文的peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或包含所述peg化mtap多肽的药物组合物可以减小肿瘤尺寸。在其它情况下，peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或药物组合物可以将肿瘤尺寸减小施用peg化mtap多肽之前肿瘤尺寸的0％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。在一些情况下，peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或药物组合物可以将肿瘤尺寸减小施用peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或药物组合物之前肿瘤尺寸的1-10％、5-15％、10-20％、15-25％、20-30％、25-35％、30-40％、35-45％、40-50％、45-55％、50-60％、55-65％、60-70％、65-75％、70-80％、75-85％、80-90％、85-95％或90-100％。[0223]在一些情况下，有效量的peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或药物组合物可以减少癌细胞的数量。在一些情况下，peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或本文及其所述药物组合物可以将癌细胞的数量减少施用peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或药物组合物之前癌细胞数量的0％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。在一些情况下，有效量的本文的peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或其药物组合物可以将癌细胞的数量减少施用peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或药物组合物之前癌细胞数量的1-10％、5-15％、10-20％、15-25％、20-30％、25-35％、30‑ꢀ40％、35-45％、40-50％、45-55％、50-60％、55-65％、60-70％、65-75％、70-80％、75-85％、80-90％、85-95％或90-100％。[0224]在一些情况下，本文所述的peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或包含所述peg化mtap多肽的药物组合物可以减少或预防肿瘤的转移。在其它情况下，peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或药物组合物可以减少或预防肿瘤转移，减少的量为施用peg化的mtap多肽之前肿瘤转移的0％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。在一些情况下，peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或药物组合物可以减少或预防肿瘤转移，减少的量为施用peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或药物组合物之前肿瘤转移的1-10％、5-15％、10-20％、15-25％、20-30％、25-35％、30-40％、35-45％、40-50％、45-55％、50-60％、55-65％、60-70％、65-75％、70-80％、75-85％、80-90％、85-95％或90-100％。在一些情况下，有效量的本文的peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或其药物组合物可将肿瘤转移延迟1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、1年、2年、3年、4年、5年、6年、7年、8年、9年、10年、11年、12年、13年、14年、15年、16年、17年、18年、19年、20年、21年、22年、23年、24年、25年、26年、27年、28年、29年、30年、31年、32年、33年、34年、35年、36年、37年、38年、39年、40年、41年、42年、43年、44年、45年、46年、47年、48年、49年、50年或50年以上。在一些情况下，有效量的本文的peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或其药物组合物可以将肿瘤转移延迟1天至1个月、25天至6个月、5个月至12个月、10个月至2年、1年至5年、4年至10年、9年至15年、14年至20年、19年至25年、24年至30年、29年至35年、34年至40年、39年至45年或者44年至50年的时间量。[0225]在一些情况下，有效量的本文的peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或其药物组合物可以延长施用peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或药物组合物的受试者的寿命。在一些情况下，有效量的本文的peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或其药物组合物可将施用peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或药物组合物的受试者的寿命延长1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、1年、2年、3年、4年、5年、6年、7年、8年、9年、10年、11年、12年、13年、14年、15年、16年、17年、18年、19年、20年、21年、22年、23年、24年、25年、26年、27年、28年、29年、30年、31年、32年、33年、34年、35年、36年、37年、38年、39年、40年、41年、42年、43年、44年、45年、46年、47年、48年、49年、50年或50年以上。在一些情况下，有效量的本文的peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或其药物组合物可将施用peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或药物组合物的受试者的寿命延长1天至1个月、25天至6个月、5个月至12个月、10个月至2年、1年至5年、4年至10年、9年至15年、14年至20年、19年至25年、24年至30年、29年至35年、34年至40年、39年至45年或者44年至50年。[0226]在一些情况下，有效量的本文的peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或其药物组合物可以延迟施用peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或药物组合物的受试者的癌症发作。在一些情况下，有效量的本文的peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或其药物组合物可以将施用peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或药物组合物的受试者的癌症发作延迟1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、1年、2年、3年、4年、5年、6年、7年、8年、9年、10年、11年、12年、13年、14年、15年、16年、17年、18年、19年、20年、21年、22年、23年、24年、25年、26年、27年、28年、29年、30年、31年、32年、33年、34年、35年、36年、37年、38年、39年、40年、41年、42年、43年、44年、45年、46年、47年、48年、49年、50年或50年以上。在一些情况下，有效量的本文的peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或及其药物组合物可以将施用peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或药物组合物的受试者的癌症发作延迟1天至1个月、25天至6个月、5个月至12个月、10个月至2年、1年至5年、4年至10年、9年至15年、14年至20年、19年至25年、24年至30年、29年至35年、34年至40年、39年至45年或者44年至50年的时间量。[0227]在一些情况下，有效量的本文的peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或其药物组合物可以将mta水平降低10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、150％、200％、250％、300％、350％、400％、450％、500％、550％、600％、650％、700％、750％、800％、850％、900％、950％、1000％、2000％、3000％、4000％、5000％、6000％、7000％、8000％、9000％、10000％、20000％、30000％、40000％、50000％、60000％、70000％、80000％、90000％或100000％。在一些情况下，有效量的本文的peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或其药物组合物可以将mta水平降低10％至30％、20％至40％、30％至50％、40％至60％、50％至70％、60％至80％、70％至90％、80％至100％、90％至150％、100％至200％、150％至250％、200％至300％、250％至350％、300％至400％、350％至450％、400％至500％、450％至550％、500％至600％、550％至650％、600％至700％、650％至750％、700％至800％、750％至850％、800％至900％、850％至950％、900％至1000％、950％至2000％、1500％至2500％、2000％至3000％、2500％至3500％、3000％至4000％、3500％至4500％、4000％至5000％、4500％至5500％、5000％至6000％、5500％至6500％、6000％至7000％、6500％至7500％、7000％至8000％、7500％至8500％、8000％至9000％、8500％至9500％、9000％至10000％、9500％至20000％、15000％至25000％、20000％至30000％、25000％至35000％、30000％至40000％、35000％至45000％、40000％至50000％、45000％至55000％、50000％至60000％、55000％至65000％、60000％至70000％、65000％至75000％、70000％至80000％、75000％至85000％、80000％至90000％、85000％至95000％或90000％至100000％。[0228]在一些情况下，有效量的本文的peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或其药物组合物可以将ado水平降低10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、150％、200％、250％、300％、350％、400％、450％、500％、550％、600％、650％、700％、750％、800％、850％、900％、950％、1000％、2000％、3000％、4000％、5000％、6000％、7000％、8000％、9000％、10000％、20000％、30000％、40000％、50000％、60000％、70000％、80000％、90000％或100000％。在一些情况下，有效量的本文的peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸、或其药物组合物可以将ado水平降低10％至30％、20％至40％、30％至50％、40％至60％、50％至70％、60％至80％、70％至90％、80％至100％、90％至150％、100％至200％、150％至250％、200％至300％、250％至350％、300％至400％、350％至450％、400％至500％、450％至550％、500％至600％、550％至650％、600％至700％、650％至750％、700％至800％、750％至850％、800％至900％、850％至950％、900％至1000％、950％至2000％、1500％至2500％、2000％至3000％、2500％至3500％、3000％至4000％、3500％至4500％、4000％至5000％、4500％至5500％、5000％至6000％、5500％至6500％、6000％至7000％、6500％至7500％、7000％至8000％、7500％至8500％、8000％至9000％、8500％至9500％、9000％至10000％、9500％至20000％、15000％至25000％、20000％至30000％、25000％至35000％、30000％至40000％、35000％至45000％、40000％至50000％、45000％至55000％、50000％至60000％、55000％至65000％、60000％至70000％、65000％至75000％、70000％至80000％、75000％至85000％、80000％至90000％、85000％至95000％或90000％至100000％。[0229]在一些情况下，mta或ado水平的降低可以在哺乳动物的体内循环中进行，如果需要在组织培养物或其他生物介质中减少mta或ado，则可以在体外进行，且在体外程序中，生物流体、细胞或组织在体外被操纵，随后返回患者哺乳动物体内。在一些情况下，可以减少循环、培养基、生物流体或细胞中的mta或ado，以减少被处理材料可接触的mta或ado的数量，且因此包括在mta或ado降解条件下使待去除的材料与降解mta或ado的量的mtap多肽接触，以降解被接触材料中的环境mta或ado。[0230]在一些情况下，本文的peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或其药物组合物的mta或ado降解效率可以根据应用而变化很大；并且可以取决于材料中存在的mta和/或ado的量、预期消耗率以及材料暴露于所施用材料的耐受性而变化很大。在一些情况下，材料中的mta或ado水平，以及因此材料中的mta或ado消耗率，可以通过本领域公知的各种化学和生物化学方法容易地进行监测。在一些情况下，在本文中进一步描述了降解mta或ado的量，且范围可以从每毫升(ml)待处理材料0.001至100单位(u)mtase，优选约0.01至10u，且更优选约0.1至5umtase。[0231]在一些情况下，降解mta或ado的条件可以包括与mtap多肽的生物活性兼容的缓冲液和温度条件，包括与酶兼容的适中温度、盐和ph条件，例如生理条件。示例性条件可以包括约4-40℃、相当于约0.05m至0.2mnacl的离子强度和约5至9的ph，同时包括生理条件。[0232]在一些情况下，可以将本文的peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或其药物组合物常规地静脉内施用，如通过注射单位剂量。[0233]在一些情况下，待施用量取决于待治疗的受试者、受试者全身利用酶的能力以及预期治疗效果的程度。在一些情况下，待施用所需酶的精确量可能取决于从业人员的判断，并且是每个人特有的。在一些情况下，本文公开了用于全身应用的合适剂量范围，并且其可能取决于施用途径。在一些情况下，也可以考虑用于初始施用和加强注射的合适方案，其特征在于初始施用之后通过后续注射或其他施用方式以一个或更多个小时的间隔重复给药。在一些情况下，施用方式是本文描述的，并且特别优选保持mtap多肽的持续高血清和组织水平且反之保持mta或ado的低血清和组织水平的施用方式。在一些情况下，可以考虑足以将血液中的浓度维持在体内治疗规定的范围内的持续静脉内输注。[0234]在一些情况下，有效量的peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或药物组合物可以基于所施用的材料进行调节。在一些情况下，有效量的peg化mtap多肽、编码peg化mtap多肽的核酸或药物组合物可以基于本文所述及其所寻求的治疗预期结局而变化。[0235]在一些情况下，mtap多肽的治疗有效量可以包括经计算以实现预期效果，包括减少患者循环中的mta或ado的预定量。因此，mtap多肽施用的剂量范围是足以产生预期效果的剂量范围。剂量不宜过大，以免引起不良副作用，如高黏度综合征、肺水肿、充血性心力衰竭等。通常，剂量将随患者的年龄、病情、性别和疾病程度而变化，并且可以由本领域技术人员确定。如果出现任何并发症，可由医生个人调整剂量。[0236]在其他情况下，mtap多肽的治疗有效量可以是这样的量，即当以生理上可耐受的组合物施用时，足以达到血管内(血浆)或局部浓度为约0.001至约100单位(u)mtase/ml，优选高于约0.1umtase/ml，更优选高于1umtase/ml。典型剂量可以基于体重施用，且范围在约5至1000u/kg/天、优选约5至100u/kg/天、更优选约10至50u/kg/天和更优选约20至40u/kg/天。[0237]在一些实施方案中，剂量还可以包括约1x10^1微克/kg/体重、约2x10^1微克/kg/体重、约3x10^1微克/kg/体重、约4x10^1微克/kg/体重、约5x10^1微克/kg/体重、约6x10^1微克/kg/体重、约7x10^1微克/kg/体重、约8x10^1微克/kg/体重、约9x10^1微克/kg/体重、约1x10^2微克/kg/体重、约2x10^2微克/kg/体重、约3x10^2微克/kg/体重、约4x10^2微克/kg/体重、约5x10^2微克/kg/体重、约6x10^2微克/kg/体重、约7x10^2微克/kg/体重、约8x10^2微克/kg/体重、约9x10^2微克/kg/体重、约1x10^3微克/kg/体重、约2x10^3微克/kg/体重、约3x10^3微克/kg/体重、约4x10^3微克/kg/体重、约5x10^3微克/kg/体重、约6x10^3微克/kg/体重、约7x10^3微克/kg/体重、约8x10^3微克/kg/体重、约9x10^3微克/kg/体重、约1x10^4微克/kg/体重、约2x10^4微克/kg/体重、约3x10^4微克/kg/体重、约4x10^4微克/kg/体重、约5x10^4微克/kg/体重、约6x10^4微克/kg/体重、约7x10^4微克/kg/体重、约8x10^4微克/kg/体重、约9x10^4微克/kg/体重、约1x10^5微克/kg/体重、约2x10^5微克/kg/体重、约3x10^5微克/kg/体重、约4x10^5微克/kg/体重、约5x10^5微克/kg/体重、约6x10^5微克/kg/体重、约7x10^5微克/kg/体重、约8x10^5微克/kg/体重、约9x10^5微克/kg/体重、约1x10^6微克/kg/体重、约2x10^6微克/kg/体重、约3x10^6微克/kg/体重、约4x10^6微克/kg/体重、约5x10^6微克/kg/体重、约6x10^6微克/kg/体重、约7x10^6微克/kg/体重、约8x10^6微克/kg/体重、约9x10^6微克/kg/体重、约1x10^7微克/kg/体重、约2x10^7微克/kg/体重、约3x10^7微克/kg/体重、约4x10^7微克/kg/体重、约5x10^7微克/kg/体重、约6x10^7微克/kg/体重、约7x10^7微克/kg/体重、约8x10^7微克/kg/体重、约9x10^7微克/kg/体重、约1x10^8微克/kg/体重、约2x10^8微克/kg/体重、约3x10^8微克/kg/体重、约4x10^8微克/kg/体重、约5x10^8微克/kg/体重、约6x10^8微克/kg/体重、约7x10^8微克/kg/体重、约8x10^8微克/kg/体重、约9x10^8微克/kg/体重、约1x10^9微克/kg/体重、约2x10^9微克/kg/体重、约3x10^9微克/kg/体重、约4x10^9微克/kg/体重、约5x10^9微克/kg/体重、约6x10^9微克/kg/体重、约7x10^9微克/kg/体重、约8x10^9微克/kg/体重、约9x10^9微克/kg/体重、约1x10^10微克/kg/体重、约2x10^10微克/kg/体重、约3x10^10微克/kg/体重、约4x10^10微克/kg/体重、约5x10^10微克/kg/体重、约6x10^10微克/kg/体重、约7x10^10微克/kg/体重、约8x10^10微克/kg/体重或约9x10^10微克/kg/体重。在一些实施方案中，剂量还可以包括从0.5x10^1至2x10^1微克/kg/体重、从1.5x10^1至3x10^1微克/kg/体重、从2.5x10^1至4x10^1微克/kg/体重、从3.5x10^1至5x10^1微克/kg/体重、从4.5x10^1至6x10^1微克/kg/体重、从5.5x10^1至7x10^1微克/kg/体重、从6.5x10^1至8x10^1微克/kg/体重、从7.5x10^1至9x10^1微克/kg/体重、从8.5x10^1至1x10^1微克/kg/体重、从0.5x10^2至2x10^2微克/kg/体重、从1.5x10^2至3x10^2微克/kg/体重、从2.5x10^2至4x10^2微克/kg/体重、从3.5x10^2至5x10^2微克/kg/体重、从4.5x10^2至6x10^2微克/kg/体重、从5.5x10^2至7x10^2微克/kg/体重、从6.5x10^2至8x10^2微克/kg/体重、从7.5x10^2至9x10^2微克/kg/体重、从8.5x10^2至1x10^3微克/kg/体重、从0.5x10^3至2x10^3微克/kg/体重、从1.5x10^3至3x10^3微克/kg/体重、从2.5x10^3至4x10^3微克/kg/体重、从3.5x10^3至5x10^3微克/kg/体重、从4.5x10^3至6x10^3微克/kg/体重、从5.5x10^3至7x10^3微克/kg/体重、从6.5x10^3至8x10^3微克/kg/体重、从7.5x10^3至9x10^3微克/kg/体重、从8.5x10^3至1x10^4微克/kg/体重、从0.5x10^4至2x10^4微克/kg/体重、从1.5x10^4至3x10^4微克/kg/体重、从2.5x10^4至4x10^4微克/kg/体重、从3.5x10^4至5x10^4微克/kg/体重、从4.5x10^4至6x10^4微克/kg/体重、从5.5x10^4至7x10^4微克/kg/体重、从6.5x10^4至8x10^4微克/kg/体重、从7.5x10^4至9x10^4微克/kg/体重、从8.5x10^4至1x10^5微克/kg/体重、从0.5x10^5至2x10^5微克/kg/体重、从1.5x10^5至3x10^5微克/kg/体重、从2.5x10^5至4x10^5微克/kg/体重、从3.5x10^5至5x10^5微克/kg/体重、从4.5x10^5至6x10^5微克/kg/体重、从5.5x10^5至7x10^5微克/kg/体重、从6.5x10^5至8x10^5微克/kg/体重、从7.5x10^5至9x10^5微克/kg/体重、从8.5x10^5至1x10^6微克/kg/体重、从0.5x10^6至2x10^6微克/kg/体重、从1.5x10^6至3x10^6微克/kg/体重、从2.5x10^6至4x10^6微克/kg/体重、从3.5x10^6至5x10^6微克/kg/体重、从4.5x10^6至6x10^6微克/kg/体重、从5.5x10^6至7x10^6微克/kg/体重、从6.5x10^6至8x10^6微克/kg/体重、从7.5x10^6至9x10^6微克/kg/体重、从8.5x10^6至1x10^7微克/kg/体重、从0.5x10^7至2x10^7微克/kg/体重、从1.5x10^7至3x10^7微克/kg/体重、从2.5x10^7至4x10^7微克/kg/体重、从3.5x10^7至5x10^7微克/kg/体重、从4.5x10^7至6x10^7微克/kg/体重、从5.5x10^7至7x10^7微克/kg/体重、从6.5x10^7至8x10^7微克/kg/体重、从7.5x10^7至9x10^7微克/kg/体重、从8.5x10^7至1x10^8微克/kg/体重、从0.5x10^8至2x10^8微克/kg/体重、从1.5x10^8至3x10^8微克/kg/体重、从2.5x10^8至4x10^8微克/kg/体重、从3.5x10^8至5x10^8微克/kg/体重、从4.5x10^8至6x10^8微克/kg/体重、从5.5x10^8至7x10^8微克/kg/体重、从6.5x10^8至8x10^8微克/kg/体重、从7.5x10^8至9x10^8微克/kg/体重、从8.5x10^8至1x10^9微克/kg/体重、从0.5x10^9至2x10^9微克/kg/体重、从1.5x10^9至3x10^9微克/kg/体重、从2.5x10^9至4x10^9微克/kg/体重、从3.5x10^9至5x10^9微克/kg/体重、从4.5x10^9至6x10^9微克/kg/体重、从5.5x10^9至7x10^9微克/kg/体重、从6.5x10^9至8x10^9微克/kg/体重、从7.5x10^9至9x10^9微克/kg/体重、从8.5x10^9至1x10^10微克/kg/体重、从0.5x10^10至2x10^10微克/kg/体重、从1.5x10^10至3x10^10微克/kg/体重、从2.5x10^10至4x10^10微克/kg/体重、从3.5x10^10至5x10^10微克/kg/体重、从4.5x10^10至6x10^10微克/kg/体重、从5.5x10^10至7x10^10微克/kg/体重、从6.5x10^10至8x10^10微克/kg/体重、从7.5x10^10至9x10^10微克/kg/体重或从8.5x10^10至1x10^10微克/kg/体重。[0238]对动物患者施用的组合物的实际剂量可以通过身体和生理的因素确定，例如体重、病症的严重程度、被治疗疾病的类型、先前或同时进行的治疗干预、患者的原发病以及施用途径。依据剂量和施用途径，优选剂量和/或有效剂量的施用次数可能会根据受试者的反应而变化。在任何情况下，负责施用的从业人员将确定组合物中活性成分的浓度和个体受试者的适当剂量。[0239]在某些实施方案中，药物组合物可以包含例如至少约0.1％的活性化合物。在其它实施方案中，活性化合物可以占例如单位重量约2％至约75％之间，或约25％至约60％之间，和其中可推导出的任何范围。自然地，每种治疗上有用的组合物中的活性化合物的量可以以这样的方式制备，即在任何给定单位剂量的化合物中获得合适的剂量。制备此类药物制剂的本领域技术人员将考虑因素，例如溶解度、生物利用度、生物半衰期、施用途径、产品保质期以及其他药理学考虑因素，且因此，可能需要多种剂量和治疗方案。[0240]在其他非限制性实例中，剂量还可能包括每次施用约1微克/kg/体重、约5微克/kg/体重、约10微克/kg/体重、约50微克/kg/体重、约100微克/kg/体重、约200微克/kg/体重、约350微克/kg/体重、约500微克/kg/体重、约1毫克/kg/体重、约5毫克/kg/体重、约10毫克/kg/体重、约50毫克/kg/体重、约100毫克/kg/体重、约200毫克/kg/体重、约350毫克/kg/体重、约500毫克/kg/体重、约1000毫克/kg/体重或更多，以及其中可推导出的任何范围。在本文所列数量的可推导范围的非限制性实例中，基于上述数量，可以施用约5毫克/kg/体重至约100毫克/kg/体重、约5微克/kg/体重至约500毫克/kg/体重等的范围。[0241]蛋白质纯化[0242]在一些情况下，蛋白质纯化技术可以包括在一个水平上涉及将细胞、组织或器官均质化和粗品分级分离成多肽和非多肽级分的技术。在某些情况下，除非另有规定，目的蛋白质或多肽可以使用色谱和电泳技术进一步纯化，以实现部分或完全纯化(或纯化至同质性)。在一些情况下，特别适合制备纯肽的分析方法是离子交换色谱法、凝胶排阻色谱法、聚丙烯酰胺凝胶电泳法、亲和色谱法、免疫亲和色谱法，且也可以使用等电聚焦法。在一些情况下，纯化肽的方法可以是快速蛋白液相色谱(fplc)或者甚至高效液相色谱(hplc)。[0243]在一些情况下，纯化的蛋白质或肽可以包含可与其它成分分离的组合物，其中所述蛋白质或肽被相对于其天然可获得状态纯化至任何程度。在其他情况下，分离或纯化的蛋白质或肽也可以包含不受其可能天然存在的环境影响的蛋白质或肽。在一些情况下，纯化的蛋白质可以包含已经过分级分离以去除各种其他成分的蛋白质或肽组合物，并且该组合物基本上保留了其表达的生物活性。在其他情况下，正在纯化的蛋白质可以包含形成组合物主要成分的蛋白质或肽。在一些情况下，组合物的主要成分可以在组合物中包含约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％或更多的蛋白质。[0244]在一些情况下，蛋白质纯化可以包括用硫酸铵、peg、抗体等沉淀或通过热变性，然后离心；色谱步骤包括离子交换、凝胶过滤、反相、羟基磷灰石和亲和色谱；等电聚焦；凝胶电泳；以及这些技术和其他技术的组合。如本领域中公知的，认为可以改变进行各种纯化步骤的顺序，或者可以省略某些步骤，且仍然可以得到一种适当的方法来制备基本上纯化的蛋白质或肽。[0245]根据本公开，用于定量蛋白质或肽纯化程度的各种方法是本领域技术人员已知的。在某些情况下，这些方法可以包括测定活性级分的比活性，或通过sds/page分析评估级分内多肽的量。在一些情况下，方法可以包括评估级分的纯度，即计算该级分的比活性，将其与初始提取物的比活性进行比较，并由此从中计算纯度，通过“‑倍纯化数”进行评估。在一些情况下，用于表示活性量的实际单位可能取决于在纯化后选择的特定测定技术，并且表达的蛋白质或肽是否表现出可检测的活性。[0246]在一些情况下，蛋白质或肽可能不总是以其最纯化的状态提供。在一些情况下，纯化低于大多数的产品可能在某些实施方案中具有实用性。在一些情况下，部分纯化可以通过组合使用更少的纯化步骤或通过利用相同的一般纯化方案的不同形式来完成。例如，应理解，使用hplc设备执行的阳离子交换柱色谱与使用低压色谱系统的相同技术相比通常会产生更多“倍”的纯化。表现出较低相对纯化程度的方法可能在蛋白质产品的总回收量或在维持所表达蛋白的活性方面具有优势。[0247]在某些实施方案中，可以分离或纯化蛋白质或肽，例如mtap或peg化mtap多肽。例如，可以将his标签或亲和表位包含在此类mtap或peg化mtap多肽中以促进纯化。亲和色谱是依赖于待分离物质与其能特异结合的分子之间的特异性亲和力的色谱程序。这是受体-配体类型的相互作用。柱材料通过将其中一个结合配偶体共价偶联到不溶性基质而合成。然后，柱材料能够从溶液中特异性吸附所述物质。通过将条件更改为不会发生结合的条件(例如，改变ph、离子强度、温度等)进行洗脱。基质应该是不在任何明显的程度上吸附分子并且具有广泛的化学、物理和热稳定性的物质。配体应以不影响其结合特性的方式偶联。配体还应提供相对紧密的结合。在不破坏样本或配体的情况下洗脱所述物质应当是可能的。[0248]尺寸排阻色谱法(sec)是一种色谱方法，其中根据分子的大小或更专业的术语“流体动力学体积”来分离溶液中的分子。它通常用于大分子或大分子复合物，如蛋白质和工业聚合物。通常，当使用水溶液运送样品通过色谱柱时，该技术被称为凝胶过滤色谱法，与使用有机溶剂作为流动相时使用的名称凝胶渗透色谱法相对。[0249]sec的基本原理是，不同大小的颗粒将以不同的速率通过固定相洗脱(过滤)。这就导致根据大小分离溶液的颗粒。如果所有颗粒同时或几乎同时上样，相同大小的颗粒应该一起洗脱。每个尺寸排阻柱有一个可以被分离的分子量范围。排阻极限定义了该范围上限处的分子量，并且是分子太大而被截留在固定相中的情况。渗透极限定义了分离范围下限处的分子量，并且是足够小的分子可以完全渗透到固定相的孔中的情况，且低于该分子质量的所有分子都很小，以至于它们可以洗脱为一条带。[0250]高效液相色谱法(或高压液相色谱法，hplc)是生物化学和分析化学中经常用于分离、鉴定和定量化合物的柱色谱形式。hplc利用容纳色谱填料(固定相)的柱、使流动相穿过柱的泵和显示分子保留时间的检测器。保留时间取决于固定相、被分析的分子和所用溶剂之间的相互作用。[0251]在一些情况下，也可以使用本文未描述的本领域技术人员公知的任何蛋白质纯化技术。[0252]药物组合物[0253]在一些情况下，药物组合物可以增加对免疫治疗的敏感性。在一些情况下，通过药物组合物增加对免疫治疗的敏感性可以包括对受试者进行免疫治疗的有效量、剂量或治疗效果或生物学效应。在一些情况下，通过药物组合物增加对免疫治疗的敏感性可以包括测量对受试者进行免疫治疗的有效量、剂量或治疗效果或生物学效应与对未接受该药物组合物的另一受试者进行免疫治疗的有效量、剂量或治疗效果或生物学效应。在一些情况下，通过药物组合物增加对免疫治疗的敏感性可以包括测量对受试者进行免疫治疗的有效量、剂量或治疗效果或生物学效应与该受试者接受药物组合物之前进行的免疫治疗的有效量、剂量或治疗效果或生物学效应。在一些情况下，药物组合物可以使免疫治疗敏感性增加10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、150％、200％、250％、300％、350％、400％、450％、500％、550％、600％、650％、700％、750％、800％、850％、900％、950％、1000％、2000％、3000％、4000％、5000％、6000％、7000％、8000％、9000％、10000％、20000％、30000％、40000％、50000％、60000％、70000％、80000％、90000％或100000％。在一些情况下，药物组合物可以使免疫治疗敏感性增加10％至30％、20％至40％、30％至50％、40％至60％、50％至70％、60％至80％、70％至90％、80％至100％、90％至150％、100％至200％、150％至250％、200％至300％、250％至350％、300％至400％、350％至450％、400％至500％、450％至550％、500％至600％、550％至650％、600％至700％、650％至750％、700％至800％、750％至850％、800％至900％、850％至950％、900％至1000％、950％至2000％、1500％至2500％、2000％至3000％、2500％至3500％、3000％至4000％、3500％至4500％、4000％至5000％、4500％至5500％、5000％至6000％、5500％至6500％、6000％至7000％、6500％至7500％、7000％至8000％、7500％至8500％、8000％至9000％、8500％至9500％、9000％至10000％、9500％至20000％、15000％至25000％、20000％至30000％、25000％至35000％、30000％至40000％、35000％至45000％、40000％至50000％、45000％至55000％、50000％至60000％、55000％至65000％、60000％至70000％、65000％至75000％、70000％至80000％、75000％至85000％、80000％至90000％、85000％至95000％或90000％至100000％。[0254]考虑mtap多肽可以全身或局部施用。它们可以使用本文所述的任何途径施用。[0255]不期望本发明受限于治疗制剂的特定性质。例如，这种组合物可以与生理上可耐受的液体、凝胶或固体载体、稀释剂和赋形剂一起提供在制剂中。这些治疗制剂可以以类似于其它治疗剂的方式施用给哺乳动物用于兽医用途，例如施用给家畜，以及临床用于人类。一般而言，治疗效果所需的剂量将根据使用类型和施用方式以及个体受试者的特殊要求而变化。[0256]这种组合物通常被制备成液体溶液或悬浮液，作为注射剂。合适的稀释剂和赋形剂是例如水、盐水、葡萄糖、甘油等及其组合。此外，如果需要，组合物可以含有少量的辅助物质，如润湿剂或乳化剂、稳定剂或ph缓冲剂。[0257]通常，药物组合物可以包含溶解或分散在药学上可接受的载体中的有效量的一种或更多种mtase或其它剂。短语“药学上或药理学上可接受的”是指当对动物例如人(如合适的话)施用时不会产生不良反应、过敏反应或其他不想要的反应的分子实体和组合物。根据本公开，本领域技术人员将知晓制备含有通过本文公开的方法分离的至少一种mtase或另外的活性成分的药物组合物，如第18版雷明登药学大全(1990)所举例说明的(其被通过引用并入本文)。此外，应当理解，对于动物(例如人)施用，制剂应当符合fda生物标准办公室所要求的无菌、热原性、一般安全性和纯度标准。[0258]如本文所用，“药学上可接受的载体”包括如本领域普通技术人员已知的任何和所有溶剂、分散介质、包衣、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如，抗细菌剂、抗真菌剂)、等渗剂、吸收延迟剂、盐、防腐剂、药物、药物稳定剂、凝胶、粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、调味剂、染料、类似物质及其组合(参见，例如第18版雷明登药学大全(1990)，其被通过引用并入本文)。除非任何常规载体与活性成分不相容，否则考虑其在药物组合物中的使用。[0259]本发明的某些实施方案可以包含不同类型的载体，这取决于它是以固体、液体还是气溶胶形式施用，以及施用途径(例如注射)是否需要无菌。组合物可以静脉内、皮内、经皮、鞘内、动脉内、腹膜内、鼻内、阴道内、直肠内、肌内、皮下、粘膜、口服、表面、局部、通过吸入(例如气雾剂吸入)、通过注射、通过输注、通过连续输注、通过局部灌注直接进行靶细胞浴、经导管、经灌洗、在脂质组合物(例如脂质体)中、或通过本领域普通技术人员已知的其它方法或前述方法的任何组合来施用(参见，例如第18版雷明登药学大全(1990)，其被通过引用并入本文)。[0260]修饰的多肽可以配制成游离碱、中性或盐形式的组合物。药学上可接受的盐包括酸加成盐，例如与蛋白质组合物的游离氨基形成的盐，或与无机酸(例如盐酸或磷酸)形成的盐，或与有机酸如乙酸、草酸、酒石酸或扁桃酸形成的盐。与游离羧基形成的盐也可以衍生自无机碱，例如钠、钾、铵、钙或铁的氢氧化物；或有机碱如异丙胺、三甲胺、组氨酸或普鲁卡因。配制后，溶液将以与剂型相容的方式和治疗有效量施用。该制剂易于以各种剂型施用，例如配制成用于肠胃外施用的剂型，如注射溶液或用于递送至肺部的气雾剂，或者配制成用于消化道(alimentary)施用的剂型，如药物释放胶囊等。[0261]进一步根据本发明的某些方面，适于施用的组合物可以在含有或不含有惰性稀释剂的药学上可接受的载体中提供。载体应该是可吸收的，且包括液体、半固体(即糊剂)或固体载体。除非任何常规介质、剂、稀释剂或载体对接受者或对其中所含组合物的治疗效果有害，否则其在用于实施该方法的可施用组合物中的使用是合适的。载体或稀释剂的实例包括脂肪、油、水、盐溶液、脂质、脂质体、树脂、粘合剂、填充剂等，或其组合。该组合物还可以包含各种抗氧化剂以延缓一种或更多种成分的氧化。此外，防腐剂(例如各种抗细菌剂和抗真菌剂)可以产生预防微生物的作用，所述防腐剂包括但不限于对羟苯甲酸酯(例如，对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯)、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞或其组合。[0262]根据本发明的某些方面，组合物以任何方便和实用的方式与载体组合，即通过溶液、悬浮液、乳化、混合、包封、吸收等。此类程序对本领域技术人员是常规的。[0263]在本发明的具体实施方案中，组合物与半固体或固体载体充分组合或混合。混合可以以任何方便的方式进行，例如研磨。也可以在混合过程中加入稳定剂，以保护组合物不丧失治疗活性，即在胃中变性。用于组合物中的稳定剂的实例包括缓冲剂、氨基酸如甘氨酸和赖氨酸、碳水化合物如葡萄糖、甘露糖、半乳糖、果糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、山梨醇、甘露醇等。[0264]在进一步的实施方案中，本发明可以涉及包括mtap多肽、一种或更多种脂质和水性溶剂的药物脂质溶媒组合物的使用。如本文所用，术语“脂质”将被定义为包括特征性地不溶于水且可用有机溶剂提取的各种物质中的任一种。这一大类化合物是本领域技术人员公知的，且作为本文使用的术语“脂质”，其不限于任何特定的结构。实例包括含有长链脂肪烃的化合物及其衍生物。脂质可以是天然存在的或合成的(即，由人设计或生产的)。然而，脂质通常是一种生物物质。生物脂质在本领域是公知的，并且包括例如中性脂肪、磷脂、甘油磷脂、类固醇、萜烯类、溶血脂质、鞘糖脂、糖脂、硫脂、具有醚和酯连接的脂肪酸的脂质、可聚合脂质及其组合。当然，本领域技术人员理解为脂质的除了本文具体描述的那些之外的化合物也包括在所述组合物和方法中。[0265]本领域普通技术人员将熟悉可用于将组合物分散在脂质溶媒中的技术的范围。例如，可以通过本领域普通技术人员已知的任何方式，用脂质溶解、用脂质乳化、与脂质混合、与脂质组合、与脂质共价键合、作为悬浮液包含在脂质中、包含在胶束或脂质体中或与之复合、或以其他方式与脂质或脂质结构缔合，而将mtase或其融合蛋白分散在含有脂质的溶液中。分散体可能导致也可能不导致脂质体的形成。[0266]联合治疗[0267]在某些实施方案中，本实施方案的组合物和方法涉及与第二种或另外的疗法组合施用mtap多肽。该方法和组合物包括联合疗法时，增强了治疗或保护效果，和/或增加了另一种疗法的治疗效果。治疗和预防方法和组合物可以以有效实现预期效果的组合量提供。该过程可能涉及施用mtap多肽和第二种疗法二者。可以将组织、器官或细胞暴露于包含一种或更多种剂(即mtap多肽或第二种剂)的一种或更多种组合物或药物制剂，或者通过将组织、器官和/或细胞与两种或更多种不同的组合物或制剂接触，其中一种组合物提供1)mtap多肽，2)第二种剂，或3)mtap多肽和第二种剂。此外，考虑了这种联合疗法可以与手术疗法结合使用。[0268]可以在第二种治疗之前、期间、之后或以相对于第二种治疗的各种组合施用mtap多肽。施用的间隔可以从同时到几分钟到几天到几周不等。在将mtap多肽与第二种剂分开提供给患者的实施方案中，通常会确保在每次递送之间不会经过太长的时间段，使得这两种治疗仍然能够对患者产生有利的联合作用。在这种情况下，考虑可以在彼此相隔约12小时至24小时或72小时内，更具体地，彼此相隔约6小时至12小时内向患者提供mtap多肽和第二种疗法。在一些情况下，可能需要显著延长治疗时间段，其中在分别施用之间间隔几天(2、3、4、5、6或7)至几周(1、2、3、4、5、6、7或8)。[0269]在某些实施方案中，疗程将持续1-90天或更长时间(该范围包括中间天数)。考虑mtap多肽可以在第1天至第90天(该范围包括中间天数)任何一天或其任意组合给药，而另一种治疗可在第1天至第90天(该范围包括中间天数)的任何一天或其任意组合给药。在一天内(24小时内)，可以给患者一次或多次施用治疗方案。此外，在一个疗程后，考虑有一段时间不施用任何治疗。取决于患者的状况，例如他们的预后、强度、健康状况等，该时间段可以持续1-7天，和/或1-5周，和/或1-12个月或更长时间(该范围包括中间天数)预计必要时将重复治疗周期。[0270]可以采用各种组合。对于以下实例，mtap多肽为“a”，且第二种疗法为“b”：[0271]a/b/ab/a/bb/b/aa/a/ba/b/bb/a/aa/b/b/bb/a/b/bb/b/b/ab/b/a/ba/a/b/ba/b/a/ba/b/b/ab/b/a/ab/a/b/ab/a/a/ba/a/a/bb/a/a/aa/b/a/aa/a/b/a。[0272]考虑到剂的毒性(如果有的话)，对患者施用本实施方案的任何化合物或疗法将遵循这些化合物施用的通用方案。因此，在一些实施方案中，存在监测由联合疗法造成的毒性的步骤。[0273]化疗[0274]根据本实施方案，可使用多种化疗剂。术语“化疗”是指使用药物治疗癌症。“化疗剂”用于表示在癌症治疗中被施用的化合物或组合物。这些剂或药物按其在细胞内的活性模式分类，例如，其是否以及在哪个阶段影响细胞周期。可选地，剂可以根据其直接交联dna、插入dna或通过影响核酸合成引起染色体和有丝分裂畸变的能力来表征。[0275]化疗剂的实例包括烷化剂，如塞替派和环磷酰胺；烷基磺酸酯，例如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶类，如苯佐替哌、卡波醌、美妥替哌和乌瑞替哌(uredopa)；乙撑亚胺类和甲基蜜胺类，包括六甲蜜胺、曲他胺、三亚乙基磷酰胺(trietylenephosphoramide)、三亚乙基硫代磷酸胺和三羟甲蜜胺；多聚乙酰类(特别是布拉他辛和布拉他辛酮)；喜树碱(包括合成类似物托泊替康)；苔藓抑素；卡利他汀；cc-1065(包括其合成类似物阿多来新、卡折来新和比折来新)；念珠藻素类(特别是念珠藻素1和念珠藻素8)；多拉司他汀；倍癌霉素(包括合成类似物kw-2189和cb1-tm1)；软珊瑚醇(eleutherobin)；水鬼蕉碱；匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)；海绵抑制素；氮芥类，如苯丁酸氮芥、萘氮芥、胆磷酰胺(cholophosphamide)、雌莫司汀、异环磷酰胺、氮芥、盐酸氧氮芥、美法仑、新氮芥、苯芥胆甾醇、泼尼莫司汀、曲磷胺和乌拉莫司汀；亚硝基脲类，如卡莫司汀、氯脲菌素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀和雷莫司汀；抗生素，例如烯二炔类抗生素(例如，卡奇霉素，特别是卡奇霉素γ1和卡奇霉素ω1)；达内霉素(dynemicin)，包括达内霉素a；双膦酸盐，如氯膦酸盐；埃斯培拉霉素(esperamicin)；以及新制癌菌素发色团和相关色蛋白烯二炔抗生素发色团、阿克拉霉素、放线菌素、安曲霉素、重氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素、卡柔比星、洋红霉素、嗜癌素、色霉素、放线菌素、柔红霉素、地托比星、6-重氮-5-氧代-l‑ꢀ正亮氨酸、多柔比星(包括吗啉代-多柔比星、氰基吗啉代-多柔比星、2-吡咯啉基-多柔比星和脱氧多柔比星)，表柔比星，依索比星、伊达比星、麻西罗霉素、丝裂霉素类，如丝裂霉素c、麦考酚酸、诺拉霉素、橄榄霉素、培洛霉素、泊非霉素、嘌呤霉素、三铁阿霉素(quelamycin)、罗多比星、链黑霉素、链脲菌素、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁和佐柔比星；抗代谢物，如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-fu)；叶酸类似物，如二甲叶酸、喋罗呤和三甲曲沙；嘌呤类似物，如氟达拉滨、6-巯嘌呤、硫咪嘌呤和硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、二脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨和氟尿苷；雄激素类，如卡鲁睾酮、丙酸甲雄烷酮、环硫雄醇、美雄烷和睾内酯；抗肾上腺药，如米托坦和曲洛司坦；叶酸补充剂，如亚叶酸；醋葡醛内酯；醛磷酰胺糖苷；氨基乙酰丙酸；恩尿嘧啶；氨吖啶；倍斯布西；比生群；依达曲沙；地磷酰胺；秋水仙胺；地吖醌；伊佛米新；依利醋铵；埃博霉素；依托格鲁；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明(lonidainine)；美登木素生物碱，如美登素和安丝菌素；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇；二胺硝吖啶(nitraerine)；喷司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；洛索蒽醌；鬼臼酸；2-乙基酰肼；丙卡巴肼；psk多糖复合物；雷佐生；利索新；西佐喃；锗螺胺；细交链孢菌酮酸；三亚胺醌；2,2',2"-三氯三乙胺；单端孢霉烯类(尤其是t-2毒素、疣孢菌素a(verracurina)、杆孢菌素a和蛇形菌素)；乌拉坦；长春地辛；达卡巴嗪；甘露莫司汀；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；gacytosine；阿糖胞苷(“ara-c”)；环磷酰胺；紫衫烷类，例如紫杉醇和多西他赛、吉西他滨；6-硫鸟嘌呤；巯嘌呤；铂配位络合物，如顺铂、奥沙利铂和卡铂；长春花碱(vinblastine)；铂；依托泊苷(vp-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞滨；米托蒽醌；替尼泊苷；依达曲沙；道诺霉素；氨基蝶呤；希罗达；伊班膦酸盐；伊立替康(例如，cpt-11)；拓扑异构酶抑制剂rfs2000；二氟甲基鸟氨酸(dmfo)；类视黄醇，如视黄酸；卡培他滨；卡铂、丙卡巴肼、普卡霉素、吉西他滨、诺维本、法呢基-蛋白转移酶抑制剂、反式铂，和上述任何一种的药学上可接受的盐、酸或衍生物。[0276]放疗[0277]导致dna损伤并已被广泛使用的其他因素包括通常已知的定向递送至肿瘤细胞的γ射线、x射线和/或放射性同位素。还考虑了其他形式的dna损伤因子，例如微波、质子束辐照(美国专利5,760,395和4,870,287)和紫外线辐照。很可能的是，所有这些因素对dna、dna前体、dna的复制和修复以及染色体的组装和维护产生广泛的损伤。x射线的剂量范围从长期(3周至4周)每日50伦琴至200伦琴的剂量到单次2000伦琴至6000伦琴的剂量。放射性同位素的剂量范围变化很大，且取决于同位素的半衰期、发出的辐射强度和类型以及赘生性细胞的吸收。[0278]免疫疗法[0279]本领域技术人员应理解，免疫疗法可以与实施方案的方法联合或结合使用。在癌症治疗的背景下，免疫疗法通常依赖于使用免疫效应细胞和分子来靶向和破坏癌细胞。利妥昔单抗就是这样的实例。例如，免疫效应物可以是肿瘤细胞表面上一些标记物的特异性抗体。抗体可以单独作为疗法的效应物，或其可以招募其他细胞来实际影响细胞杀伤。抗体还可以与药物或毒素(化疗剂、放射性核素、蓖麻毒素a链、霍乱毒素、百日咳毒素等)结合，并仅用作靶向剂。可选地，效应物可以是携带与肿瘤细胞靶标直接或间接相互作用的表面分子的淋巴细胞。各种效应细胞包括细胞毒性t细胞和nk细胞。[0280]在免疫疗法的一个方面，肿瘤细胞必须携带一些易于靶向(即，不存在于大多数其他细胞上)的标记物。存在许多肿瘤标记物并且这些标记物中的任何一个可能适合在本实施方案的背景下被靶向。常见的肿瘤标志物包括cd20、癌胚抗原、酪氨酸酶(p97)、gp68、tag-72、hmfg、唾液酸路易斯抗原、muca、mucb、plap、层粘连蛋白受体、erbb和p155。免疫疗法的另一个方面是将抗癌作用与免疫刺激作用相结合。还存在免疫刺激分子，其包括：细胞因子，如il-2、il-4、il-12、gm-csf、γ-ifn；趋化因子，如mip-1、mcp-1、il-8；和生长因子，如flt3配体。[0281]目前正在研究或使用的免疫疗法的实例是免疫佐剂，例如牛分枝杆菌、恶性疟原虫(plasmodiumfalciparum)、二硝基氯苯和芳族化合物(美国专利5,801,005和5,739,169；huit和hashimoto，1998；christodoulides等人，1998)；细胞因子疗法，例如干扰素α、β和γ、il-1、gm-csf和tnf(bukowski等人，1998；davidson等人，1998；hellstrand等人，1998)；基因疗法，例如，tnf、il-1、il-2和p53(qin等人，1998；austin-ward和villaseca，1998；美国专利5,830,880和5,846,945)；和单克隆抗体，例如抗cd20、抗神经节苷脂gm2和抗p185(hollander，2012；hanibuchi等人，1998；美国专利5,824,311)。考虑一种或更多种抗癌疗法可与本文所述的抗体疗法一起使用。[0282]在一些实施方案中，免疫疗法可以是免疫检查点抑制剂。免疫检查点要么上调信号(如共刺激分子)，要么下调信号。免疫检查点要么上调信号(如共刺激分子)，要么下调信号。免疫检查点阻断剂可能靶向的免疫检查点蛋白质包括腺苷a2a受体(a2ar)、b7-h3(也称为cd276)、b和t淋巴细胞衰减器(btla)、ccl5、cd27、cd38、cd8a、cmklr1、细胞毒性t淋巴细胞相关蛋白4(ctla-4，也称为cd152)、cxcl9、cxcr5、糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体相关蛋白(gitr)、hla-drb1、icos(也称为cd278)、hla-dqa1、hla-e、吲哚胺2,3-双加氧酶1(ido1)、杀伤细胞免疫球蛋白(kir)、淋巴细胞活化基因-3(lag3，也称为cd223)、mer酪氨酸激酶(mertk)、nkg7、ox40(也称为cd134)、程序性死亡配体1(pd-l1，也称为cd274)、pdcd1lg2、psmb10、stat1、具有ig和itim结构域的t细胞免疫受体(tigit)、t细胞免疫球蛋白结构域和粘蛋白3(tim-3)、t细胞活化的v结构域ig抑制因子(vista，也称为c10orf54)和4-1bb(cd137)。特别是，免疫检查点抑制剂靶向pd-1轴和/或ctla-4。[0283]免疫检查点抑制剂可以是药物，例如小分子、配体或受体的重组形式，或者抗体，例如人抗体(例如，国际专利公开wo2015/016718；pardoll，natrevcancer，12(4)：252-264，2012；两者均通过引用并入本文)。可以使用免疫检查点蛋白的已知抑制剂或其类似物，特别是可以使用嵌合的、人源化的或人形式的抗体。如本领域技术人员所知，替代物和/或等效名称可对本公开中提到的某些抗体使用。在本公开的背景下，这样的替代物和/或等效名称是可互换的。例如，已知帕博利珠单抗也以替代和等效名称mk-3475和帕博利珠单抗命名。[0284]在一些实施方案中，pd-1结合拮抗剂是抑制pd-1与其配体结合伴侣结合的分子。在特定方面，pd-1配体结合伴侣是pdl1和/或pdl2。在另一个实施方案中，pd-l1结合拮抗剂是抑制pd-l1与其结合伴侣结合的分子。在特定方面，pd-l1结合伴侣是pd-1和/或b7-1。在另一个实施方案中，pd-l2结合拮抗剂是抑制pd-l2与其结合伴侣结合的分子。在特定方面，pd-l2结合伴侣是pd-1。拮抗剂可以是抗体、其抗原结合片段、免疫粘附素、融合蛋白或寡肽。美国专利号8,735,553、8,354,509和8,008,449中描述了示例性抗体，所有这些通过引用并入本文。在本文提供的方法中使用的其他pd-1轴拮抗剂是本领域已知的，例如在美国专利公开号2014/0294898、2014/022021和2011/0008369中所述，所有这些通过引用并入本文。[0285]在一些实施方案中，pd-1结合拮抗剂是抗pd-1抗体(例如，人抗体、人源化抗体或嵌合抗体)。在一些实施方案中，抗pd-1抗体选自由纳武单抗、帕博利珠单抗和ct-011组成的组。在一些实施方案中，pd-1结合拮抗剂是免疫粘附素(例如免疫粘附素，其包含与恒定区(例如免疫球蛋白序列的fc区)融合的pd-l1或pd-l2的胞外或pd-1结合部分)。在一些实施方案中，pd-1结合拮抗剂是amp-224。纳武单抗，也称为mdx-1106-04、mdx-1106、ono-4538、bms-936558和是wo2006/121168中描述的抗pd-1抗体。帕博利珠单抗，也称为mk-3475、merck3475、派姆单抗(lambrolizumab)、和sch-900475，是wo2009/114335中描述的抗pd-1抗体。ct-011，也称为hbat或hbat-1，是wo2009/101611中描述的抗pd-1抗体。amp-224，也称为b7-dcig，是wo2010/027827和wo2011/066342中描述的pdl2-fc融合可溶性受体。[0286]在本文提供的方法中可以被靶向的另一种免疫检查点蛋白是细胞毒性t淋巴细胞相关蛋白4(ctla-4)，也称为cd152。人ctla-4的完整cdna序列具有genbank登记号l15006。ctla-4存在于t细胞表面，在与抗原呈递细胞表面的cd80或cd86结合时，充当“关闭”开关。ctla‑ꢀ4与t细胞共刺激蛋白cd28相似，且两种分子均与抗原呈递细胞上的cd80和cd86(也分别称为b7-1和b7-2)结合。ctla-4向t细胞传递抑制信号，而cd28传递刺激信号。在调节性t细胞中也发现了胞内ctla‑ꢀ4，并可能对其功能重要。通过t细胞受体和cd28激活t细胞导致ctla‑ꢀ4(一种b7分子的抑制性受体)表达增加。[0287]在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是抗ctla-4抗体(例如，人抗体、人源化抗体或嵌合抗体)、其抗原结合片段、免疫粘附素、融合蛋白或寡肽。适用于在本方法中使用的抗人ctla-4抗体(或由其衍生的vh和/或vl结构域)可使用本领域公知的方法产生。可选地，可以使用本领域认可的抗ctla-4抗体。例如，美国专利号8,119,129；pct公开号wo01/14424、wo98/42752、wo00/37504(cp675,206，也称为曲美木单抗；原替西木单抗(ticilimumab))；美国专利号6,207,156；hurwitzetal.(1998)procnatlacadsciusa,95(17):10067-10071；camachoetal.(2004)jclinoncology,22(145):abstractno.2505(antibodycp-675206)；和mokyretal.(1998)cancerres,58:5301-5304中公开的抗ctla-4抗体可用于本文公开的方法中。上述出版物中每一个的教导均特此通过引用并入本文。也可以使用与这些本领域公认的抗体中的任何一种竞争结合ctla-4的抗体。例如，人源化ctla-4抗体在国际专利申请号wo2001/014424、wo2000/037504和美国专利号8,017,114中描述；所有这些通过引用并入本文。[0288]示例性抗ctla-4抗体是伊匹木单抗(也称为10d1、mdx-010、mdx‑ꢀ101和)或其抗原结合片段和变体(参见,例如wo01/14424)。在其他实施方案中，抗体包括伊匹木单抗的重链和轻链cdr或vr。因此，在一个实施方案中，抗体包括伊匹木单抗vh区的cdr1、cdr2和cdr3结构域，以及伊匹木单抗vl区的cdr1、cdr2和cdr3结构域。在另一个实施方案中，该抗体与上文提到的抗体竞争结合ctla-4上的同一表位。在另一个实施方案中，该抗体与上文提到的抗体具有至少约90％的可变区氨基酸序列同一性(例如，与伊匹木单抗至少约90％、95％或99％的可变区同一性)。用于调节ctla-4的其他分子包括ctla-4配体和受体，如美国专利号5844905、5885796和国际专利申请号wo1995001994和wo1998042752中所述，所有这些被通过引用并入本文；且免疫粘附素，如美国专利号8329867号中所述的，其被通过引用并入本文。[0289]在本文提供的方法中可以被靶向的另一种免疫检查点蛋白质是淋巴细胞活化基因-3(lag3)，也称为cd223。人lag-3的完整蛋白序列具有genbank登记号np_002277。lag-3存在于活化的t细胞、自然杀伤细胞、b细胞和浆细胞样树突状细胞的表面。当与抗原呈递细胞表面的ii类mhc结合时，lag-3充当“关闭”开关。lag-3的抑制激活效应t细胞和抑制性调节t细胞二者。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是抗lag-3抗体(例如，人抗体、人源化抗体或嵌合抗体)、其抗原结合片段、免疫粘附素、融合蛋白或寡肽。适用于在本方法中使用的抗人lag-3抗体(或由其衍生的vh和/或vl结构域)可使用本领域熟知的方法产生。可选地，可以使用本领域认可的抗lag-3抗体。示例性抗lag-3抗体是瑞拉利单抗(也称为bms-986016)或其抗原结合片段和变体(参见，例如wo2015/116539)。其他示例性抗lag-3抗体包括tsr-033(参见，例如wo2018/201096)、mk‑ꢀ4280和regn3767。mgd013是wo2017/019846中描述的抗lag-3/pd‑ꢀ1双特异性抗体。fs118是wo2017/220569中描述的抗lag-3/pd-l1双特异性抗体。[0290]在本文提供的方法中可以被靶向的另一种免疫检查点蛋白质是t细胞活化的v结构域ig抑制因子(vista)，也称为c10orf54。人vista的完整蛋白序列具有genbank登记号np_071436。vista发现于白细胞上，且抑制t细胞效应功能。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是抗vista3抗体(例如，人抗体、人源化抗体或嵌合抗体)、其抗原结合片段、免疫粘附素、融合蛋白或寡肽。适用于在本方法中使用的抗人vista抗体(或由其衍生的vh和/或vl结构域)可以使用本领域公知的方法产生。可选地，可以使用本领域认可的抗vista抗体。示例性抗vista抗体是jnj‑ꢀ61610588(也称为奥瓦利单抗)(参见，例如，wo2015/097536、wo2016/207717、wo2017/137830、wo2017/175058)。vista也可以用选择性地靶向pd-l1和vista的小分子ca-170抑制(参见，例如，wo2015/033299、wo2015/033301)。[0291]本文提供的方法中可以被靶向的另一种免疫检查点蛋白质是吲哚胺2，3-双加氧酶(ido)。人ido的完整蛋白序列具有genbank登记号np_002155。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是小分子ido抑制剂。示例性小分子包括bms-986205、艾卡哚司他(incb24360)和那伏莫德(navoximod)(gdc-0919)。[0292]本文提供的方法中可以被靶向的另一种免疫检查点蛋白质是cd38。人cd38的完整蛋白序列具有genbank登记号np_001766。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是抗cd38抗体(例如，人抗体、人源化抗体或嵌合抗体)、其抗原结合片段、免疫粘附素、融合蛋白或寡肽。适用于在本方法中使用的抗人cd38抗体(或由其衍生的vh和/或vl结构域)可使用本领域公知的方法产生。可选地，可以使用本领域认可的抗cd38抗体。示例性抗cd38抗体是达雷木单抗(daratumumab)(参见，例如，美国专利号7,829,673)。[0293]本文提供的方法中可以被靶向的另一种免疫检查点蛋白质是icos，也称为cd278。人icos的完整蛋白序列具有genbank登记号np_036224。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是抗icos抗体(例如，人抗体、人源化抗体或嵌合抗体)、其抗原结合片段、免疫粘附素、融合蛋白或寡肽。适用于在本方法中使用的抗人icos抗体(或由其衍生的vh和/或vl结构域)可以使用本领域公知的方法产生。可选地，可以使用本领域认可的抗icos抗体。示例性抗icos抗体包括jtx-2011(参见，例如，wo2016/154177、wo2018/187191)和gsk3359609(参见，例如，wo2016/059602)。[0294]本文提供的方法中可以被靶向的另一种免疫检查点蛋白质是具有ig和itim结构域的t细胞免疫受体(tigit)。人tigit的完整蛋白序列具有genbank登记号np_776160。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是抗tigit抗体(例如，人抗体、人源化抗体或嵌合抗体)、其抗原结合片段、免疫粘附素、融合蛋白或寡肽。适用于在本方法中使用的抗人tigit抗体(或由其衍生的vh和/或vl结构域)可以使用本领域公知的方法产生。可选地，可以使用本领域认可的抗tigit抗体。示例性抗tigit抗体是mk‑ꢀ7684(参见，例如，wo2017/030823、wo2016/028656)。[0295]本文提供的方法中可以被靶向的另一种免疫检查点蛋白质是ox40，也称为cd134。人ox40的完整蛋白序列具有genbank登记号np_003318。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是抗ox40抗体(例如，人抗体、人源化抗体或嵌合抗体)、其抗原结合片段、免疫粘附素、融合蛋白或寡肽。适用于在本方法中使用的抗人ox40抗体(或由其衍生的vh和/或vl结构域)可使用本领域公知的方法产生。可选地，可以使用本领域认可的抗ox40抗体。示例性抗ox40抗体是pf-04518600(参见，例如，wo2017/130076)。ator-1015是靶向ctla4和ox40的双特异性抗体(参见，例如，wo2017/182672、wo2018/091740、wo2018/202649、wo2018/002339)。[0296]在本文提供的方法中可以被靶向的另一种免疫检查点蛋白质是糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体相关蛋白(gitr)，也称为tnfrsf18和aitr。人gitr的完整蛋白序列具有genbank登记号np_004186。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是抗gitr抗体(例如，人抗体、人源化抗体或嵌合抗体)、其抗原结合片段、免疫粘附素、融合蛋白或寡肽。适用于在本方法中使用的抗人gitr抗体(或由其衍生的vh和/或vl结构域)可以使用本领域公知的方法产生。可选地，可以使用本领域认可的抗gitr抗体。示例性抗gitr抗体是trx518(参见，例如，wo2006/105021)。[0297]本文提供的方法中可以被靶向的另一种免疫检查点蛋白质是t细胞免疫球蛋白和粘蛋白3(tim3)，也称为havcr2。人tim3的完整蛋白序列具有genbank登记号np_116171。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是抗tim3抗体(例如，人抗体、人源化抗体或嵌合抗体)、其抗原结合片段、免疫粘附素、融合蛋白或寡肽。适用于在本方法中使用的抗人tim3抗体(或由其衍生的vh和/或vl结构域)可使用本领域公知的方法产生。可选地，可以使用本领域认可的抗tim3抗体。示例性抗tim3抗体包括ly3321367(参见，例如，wo2018/039020)、mbg453(参见，例如，wo2015/117002)和tsr-022(参见，例如，wo2018/085469)。[0298]本文提供的方法中可以被靶向的另一种免疫检查点蛋白质是4-1bb，也称为cd137、tnfrsf9和ila。人4-1bb的完整蛋白序列具有genbank登记号np_001552。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是抗4-1bb抗体(例如，人抗体、人源化抗体或嵌合抗体)、其抗原结合片段、免疫粘附素、融合蛋白或寡肽。适用于在本方法中使用的抗人4-1bb抗体(或由其衍生的vh和/或vl结构域)可使用本领域公知的方法产生。可选地，可以使用本领域认可的抗4-1bb抗体。示例性抗4-1bb抗体是pf-05082566(乌托鲁单抗；参见，例如，wo2012/032433)。[0299]在一些实施方案中，免疫疗法可以是过继免疫疗法，其包括转移离体产生的自体抗原特异性t细胞。用于过继免疫疗法的t细胞可以通过抗原特异性t细胞的扩增或通过基因工程对t细胞的重定向来产生(park，rosenberg等人，2011)。肿瘤特异性t细胞的分离和转移已被证明在治疗黑色素瘤中是成功的。通过转基因t细胞受体或嵌合抗原受体(car)的基因转移，已经成功地在t细胞中产生了新的特异性(jena，dotti等人，2010)。car是由靶向部分组成的合成受体，该靶向部分与单个融合分子中的一个或更多个信号结构域相关联。一般而言，car的结合部分由单链抗体(scfv)的抗原结合结构域组成，其包括通过柔性接头连接的单克隆抗体的轻链和可变片段。基于受体或配体结构域的结合部分也已被成功使用。第一代car的信号结构域来源于cd3ζ链或fc受体γ链的胞质区域。car已经成功地允许t细胞针对来自各种恶性肿瘤(包括淋巴瘤和实体瘤)的肿瘤细胞表面表达的抗原进行重定向(jena，dotti等人，2010)。[0300]在一个实施方案中，本技术提供了用于治疗癌症的联合疗法，其中所述联合疗法包括过继性t细胞疗法和检查点抑制剂。在一方面，过继性t细胞疗法包括自体和/或同种异体t细胞。在另一方面，使自体和/或同种异体t细胞靶向肿瘤抗原。可以在施用过继性t细胞疗法之前和/或同时对患者施用mtap多肽。在另一方面，自体和/或同种异体t细胞可以被工程改造以表达mtap多肽。[0301]手术[0302]大约60％的癌症患者将接受某种类型的手术，包括预防性、诊断性或分期性、治疗性和姑息性手术。治疗性手术包括切除术，其中所有或部分癌组织被物理去除、切除和/或破坏，并且可以与其他疗法结合使用，例如本实施方案所述的治疗方案、化疗、放疗、激素疗法、基因疗法、免疫疗法和/或替代疗法。肿瘤切除是指物理去除至少部分肿瘤。除肿瘤切除外，手术治疗包括激光手术、冷冻手术、电切术和显微镜下控制的手术(莫氏手术)。[0303]切除部分或全部癌细胞、组织或肿瘤后，体内可能会形成空腔。可以通过对该区域灌注、直接注射或局部应用其他抗癌疗法来完成治疗。这种治疗可以重复进行，例如，每1天、2天、3天、4天、5天、6天或7天，或每1周、2周、3周、4周和5周，或每1月、2月、3月、4月、5月、6月、7月、8月、9月、10月、11月或12月。这些治疗的剂量也可能不同。[0304]其他剂[0305]考虑其他剂可以与本实施方案的某些方面组合使用以改善治疗的疗效。这些其他剂包括影响细胞表面受体上调和gap(缝隙)连接的剂、细胞抑制剂和分化剂、细胞粘附抑制剂、增加过度增殖细胞对凋亡诱导剂敏感性的剂或其他生物剂。通过增加gap连接数量增加细胞间信号传递，将增加对邻近过度增殖细胞群的抗过度增殖效应。在其他实施方案中，细胞抑制剂或分化剂可与本实施方案的某些方面组合使用以改善治疗的抗过度增殖疗效。考虑细胞粘附抑制剂改善本实施方案的疗效。细胞粘附抑制剂的实例有粘着斑激酶(fak)抑制剂和洛伐他汀。还考虑了增加过度增殖细胞对凋亡敏感性的其他剂，例如抗体c225，可以与本实施方案的某些方面结合使用以改善治疗疗效。[0306]试剂盒[0307]本发明的某些方面可以提供试剂盒，例如治疗试剂盒。例如，试剂盒可以包含一种或更多种本文所述的药物组合物和任选的其使用说明书。试剂盒还可以包括一个或更多个用于完成这种组合物的施用的装置。例如，受试者试剂盒可以包括药物组合物和用于实现将组合物直接静脉注射到癌性肿瘤中的导管。在其它实施方案中，受试者试剂盒可包含预填充mtap多肽的安瓿，任选地配制成药物或冻干，用于与递送装置一起使用。[0308]试剂盒可以包括带有标签的容器。合适的容器包括例如瓶子、小瓶和试管。容器可以由多种材料形成，例如玻璃或塑料。容器可以容纳组合物，其包括例如上文所述的对治疗或非治疗应用有效的mtap多肽。例如以上所述，容器上的标签可指示组合物用于特定治疗或非治疗应用，还可指示体内或体外使用的指导。本发明的试剂盒将典型地包括上述容器和一个或更多个其它容器，所述其它容器包括从商业和用户角度来看合乎需要的材料，包括缓冲液、稀释剂、过滤器、针、注射器和带有使用说明的包装说明书。实施例[0309]包括以下实施例以展示本发明的优选实施方案。本领域技术人员应当理解，以下实施例中公开的技术代表了发明人发现的在本发明的实践中作用良好的技术，因此可以认为构成实施本发明的优选模式。然而，根据本公开，本领域技术人员应当理解，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以对所公开的特定实施方案进行许多改变，并且仍然获得相似或类似的结果。[0310]实施例1：特定peg化及其对来自智人的mtap多肽的药理动力学影响[0311]本文所提供的是mtap多肽和与peg偶联的mtap多肽。[0312]纯化了智人mtap(hs-mtap)酶(seqidno:1)。通过对使用idt软件设计的大肠杆菌密码子优化的基因块的重叠延伸聚合酶链反应(pcr)构建了dna构建体，其包含编码来自智人mtap的mtap酶的开放阅读。全长基因包括n-末端ncol限制性酶切位点、n-末端his6标签、大肠杆菌密码子优化的hs-mtap基因、终止密码子和c-末端ecori限制性酶切位点。使用上述限制性位点将组装的dna构建体克隆到pet-28a 载体(novagen)中。然后用该构建体转化bl21(de3)大肠杆菌以进行表达。细胞在含50mg/l卡那霉素的tb培养基(terrificbroth)中于37℃、210rpm转速下振荡生长。当通过加入iptg(终浓度为0.5mm)并在37℃下继续振荡过夜达到od600约1.0时，诱导表达。然后通过离心收获细胞，并重悬在含有50mm磷酸钠(ph7.4)、300mmnacl、1mm苯甲基磺酰氟和1μg/mldnase的裂解缓冲液中。通过法式压滤壶(frenchpress)进行裂解，并通过在4℃下以20000xg离心1h清除裂解液中的颗粒。然后通过5μm针头过滤器过滤上清液，并将其应用于在50mm磷酸钠(ph7.4)、300mmnacl缓冲液中预平衡的ni-nta/琼脂糖柱(qiagen)上。将裂解液加入色谱柱中后，用5个柱体积(cv)的50mm磷酸钠(ph7.4)、300mmnacl、20mm咪唑缓冲液洗涤树脂。然后设定流速，用100cv含1％v/vtriton-xll4的无内毒素pbs(coming)缓慢洗涤色谱柱，以去除任何脂多糖(lps或内毒素)，脂多糖是细菌表达系统的典型污染物。然后用250mm咪唑在5cv无内毒素pbs中洗脱洗涤过的酶，并用第二份5cv无内毒素pbs冲洗树脂。此时，将酶缓冲液置换至新鲜pbs中以去除咪唑，并加入10％甘油。将等分试样在液氮中速冻以在-80℃下储存。或者，立即将酶缓冲液置换至新鲜制备的无菌100mm磷酸钠(ph8.4)中，以去除咪唑并为peg化做准备。基于sds-page分析，酶纯度通常》95％，且典型产量平均约为65mg/l培养物。通过测量abs280nm并使用计算的酶消光系数29,950m-1cm-1评估蛋白质的量。[0313]将纯化的无内毒素hs-mtap多肽彻底置换缓冲液至新鲜制备的100mm磷酸钠(ph8.4)中，并浓缩至5mg/ml。将所得溶液与10x、20x、50x或100x摩尔过量的固体甲氧基peg琥珀酰亚胺碳酸酯5000mw(nofcorporation)混合，并允许在室温下反应1h。在100kda截留离心过滤装置(amicon)中，通过置换缓冲液至新鲜、无内毒素的pbs中，将未反应的peg从溶液中除去。使用chromo-lal动力学显色内毒素检测试剂盒(associatesofcapecod,inc.)对内毒素水平进行定量。以上述方式洗涤的酶通常导致纯化的hs-mtap的内毒素水平《10eu/mg。[0314]通过sds-page和凝胶密度测定法检查peg化材料，以确定每种反应条件下的peg化程度，如图1a所示。在这些条件下，发现peg与hs‑ꢀmtap的比值遵循高斯分布。10x制备物(prep)显示出每个亚基约2个peg分子的众数，20x制备物显示出每个亚基约4个peg分子的众数，50x制备物显示出每个亚基约6个peg分子的众数，且100x制备物显示出每个亚基约8个peg分子的众数。[0315]天然hs-mtap和每种差异peg化hs-mtap制备物(通过peg摩尔倍数过量定义(即0x、10x、20x、50x和100x))的动力学通过分光光度测定法定量为时间和底物浓度的函数，如其他地方所述(singh，shi等人，2004)。所得数据被拟合至具有附加2阶速率常数的米氏方程，以描述在较高底物浓度下观察到的双相线性速率。在这些条件下，10x和20x制备物在所有受试底物浓度下均显示出保存良好的动力学活性，如图1b和1c所示。与0x制备物相比，50x和100x制备物在较低底物浓度下显示活性降低，如图1d和1e所示。[0316]peg化动力学由缓冲液组成、ph以及peg和蛋白质反应物的浓度决定。与peg偶联的伯胺试剂很容易非酶促水解；因此，需要大大摩尔过量的peg以实现赖氨酸修饰。peg化动力学也将在一定程度上取决于蛋白质中发现的赖氨酸残基的数量及其局部环境，其中表面暴露的赖氨酸残基将比埋藏的残基更容易反应。因此，开发了针对被peg化的给定蛋白质的简单的经验性方法，其中反应条件以及特定ph下的特定缓冲液组成被用于所述的蛋白质和peg浓度，从而可靠地实现peg的预期分布。[0317]考虑所有这些数据，在0μm至25μm之间的底物浓度范围内保持高催化速率的peg化野生型hs-mtap(seqidno：1)的优选实施方案是具有确定数量的peg化事件遵循高斯分布的制剂，其中≥80％的蛋白质每亚基包含1个、2个、3个、4个或5个peg分子，众数为3±1个peg分子，并且约20％的蛋白质具有0个、6个、7个、8个或更多个peg分子。实施例2：特定peg化及其对来自智人的两种mtap多肽变体的药理动力学影响[0318]用编码hs-mtap多肽(seqidno：1)的基因作为起点生成在高peg：蛋白比下具有酶活性改善的变体。peg化共价修饰hs-mtap的赖氨酸残基和广泛peg化对酶动力学产生负面影响，表明活性位点附近的特定赖氨酸残基的peg偶联可能影响对催化重要的结构域的活动。位于活性位点附近环上的几个赖氨酸残基通过重叠延伸pcr单独突变为精氨酸残基。最终组装的pcr产物用ncoi和ecori消化，并使用t4dna连接酶连接到pet28a载体中。如前所述，随后将每种变体表达、纯化并与100倍摩尔过量的固体甲氧基peg琥珀酰亚胺碳酸酯5000mw(nofcorporation)偶联。对于酶的天然形式和100xpeg化形式，测定了这些变体的反应动力学。鉴定了两种变体(k225r，seqidno：3；和k238r，seqidno：5)，即使当广泛peg化时(图2a)在所有底物浓度下仍保持高kcat/km(图2b和2c)。mtap-k225r的kcat/km为1.9x105m-1s-1。mtap-k238r的kcat/km为2.3x105m-1s-1。100xpeg化mtap-k225r的kcat/km为1.9x105m-1s-1。100xpeg化mtap-k238r的kcat/km为2.3x105m-1s-1。[0319]因此，hs-mtap-k225r和hs-mtap-k238r变体代表了对野生型酶的改善，因为通过赖氨酸peg化提高体内稳定性的构想可以在任何预期量的peg偶联下实施而不损害催化活性。mtap一起，用同种型对照抗体或抗cd8抗体处理小鼠，通过瘤周注射，每周三次，持续2周。如前所述，mtap治疗延迟了肿瘤生长，六只小鼠中有两只达到完全缓解(cr)(图6a和6c)。使用抗cd8抗体消耗cd8 t细胞增强了对照小鼠中的肿瘤生长(图6b)，并阻断了mtap多肽的有益作用(图6d)。这些结果表明，当通过施用mtap消耗肿瘤微环境中的mta时，cd8 t细胞能够降低肿瘤生长。用实施例2中所述的peg化mtap变体，预期会有类似的结果。[0327]peg-mtap治疗导致肿瘤微环境中肿瘤浸润淋巴细胞数量增多，其包括cd8 /k167 、cd4 /k167 和cd8 /颗粒酶b t细胞，如图7所示。在使用peg-mtap进行体内治疗时，t细胞增殖状态也得到拯救。使用实施例2的peg化mtap变体，预期会有类似结果。[0328]使用peg-mtap治疗也增加b16-f10黑色素瘤同种异体移植物的免疫细胞浸润。使用两种剂量的peg-mtap或溶媒治疗后，评估了通过facs分析从荷b16-f10mtap-/-肿瘤样本的c57/bl6小鼠中观察到的淋巴细胞组(给药后24小时分析)。与溶媒治疗对照相比，治疗组表现出cd4 t细胞和nk1.1 自然杀伤细胞百分比的大量增加以及增殖性cd8 颗粒酶b t细胞百分比的大量增加(图8a-8c)。用实施例2中所述的peg化mtap变体，预期会有类似的结果。[0329]实施例5：通过降解mta处理l1210小鼠白血病同种异体移植物[0330]肠炎沙门氏菌(salmonellaenterica)的酶，甲硫腺苷核苷酶(mtan)也代谢mta。对每只dba/2小鼠(n＝17)通过皮下侧腹注射接种5x10^4个高侵袭性l1210小鼠白血病细胞系细胞。允许肿瘤再建立8天(肿瘤均值＝90mm3)后，将小鼠分成两组。对照组(n＝8)采用pbs溶媒对照治疗，每三天瘤周注射一次，直至肿瘤达到》2500mm3的尺寸。实验组(n＝9)除使用50mg/kg的活性peg-se-mtan外，以相同方式接受治疗，每三天瘤周注射一次，直至肿瘤达到》2500mm3的终点尺寸。与溶媒对照组相比，施用peg‑ꢀse-mtan的治疗组中l1210白血病肿瘤的生长速率显著(3.5倍)降低(图9a)，导致具有统计学意义的生存期延长，p《0.0035(图9b)。使用实施例2中描述的peg化mtap变体，预期会有类似的结果。[0331]peg-se-mtan还增加淋巴细胞浸润至l1210小鼠白血病同种异体移植物中。三次peg-mtan或溶媒对照治疗后，评估了通过facs分析从荷l1210同种异体移植物的dba/2小鼠的肿瘤和肿瘤引流淋巴结(tdln)中观察到的淋巴细胞组。与体外观察结果一致，peg-mtan施用导致肿瘤浸润淋巴细胞(til)群大量增加，cd4 尤其是cd8 t细胞增殖显著增强(图10a-10c)。非常重要的是，治疗后的tdln还显示t细胞大量增加，髓源性细胞群减少(图10d-10f)，表明t细胞活化增强。用实施例2的peg化mtap变体，预期会有类似结果。[0332]实施例6：peg-mtan/抗ctla4治疗小鼠4t1乳腺癌同种异体移植物的疗效[0333]为了评估通过消耗ado并结合抗ctla4抗体免疫检查点抑制来控制肿瘤生长的疗效，将50000个4t1细胞接种到四个balb/c小鼠群组的乳腺脂肪垫中，并允许建立肿瘤。4t1是一种mtap高cd73 肿瘤模型，其中预期肿瘤微环境中存在ado，但不存在mta。小鼠用溶媒、peg‑ꢀmtan(50mg/kg)、抗ctla4抗体(10mg/kg，集落uc10-4f10-11，bioxcell)或peg-mtan/抗ctla4抗体的组合治疗。peg-mtan和抗ctla4单剂组均减缓了原发性肿瘤的生长，且联合用药更有效，至少表明了治疗相加性(图11a)。由于4t1形成肺转移瘤，检查了肺组织以量化肿瘤定植。与溶媒对照组相比，所有治疗组表现出显著更少的转移性肿瘤肺结节(图11b)，并举例说明了ado在转移中的作用。用实施例2的peg化mtap变体，预期会有类似结果。[0334]实施例7：peg-mtan多肽/抗pd-l抗体治疗小鼠ct26结肠癌同种异体移植物(mtap低cd73 )的疗效[0335]已知ct26细胞系是无cdkn2的纯合子(castle等人，2014)，通常与mtap共缺失；然而，已发现虽然mtap未缺失，但是其表达严重受损。此外，该细胞系表达cd73(sun等人，2017)，因此预期将在肿瘤微环境中产生腺苷。为了检查ado和/或mta消耗剂在mtap低cd73 肿瘤模型中作为单剂或与抗pd-1抗体免疫检查点抑制剂疗法联合使用的任何潜在疗效，四组荷ct26肿瘤balb/c小鼠接受了同种型对照抗体、peg-mtan多肽(50mg/kg3x周)、抗pd-1抗体(集落rmp1-14，bioxcell#be0146，10mg/kg2x周)，或peg-mtan和抗pd-1联合用药治疗，总共持续2周。与对照相比，抗pd-l抗体和peg-mtan多肽均引起异质性效应(heteroscedasticeffect)，但重要的是在两个单剂组中均产生了完全缓解(cr)。引人注目的是，抗pd-l/peg-mtan组合在整个组中表现出肿瘤生长抑制，并导致三种提示累加或协同疗效的完全响应(图12a-12d)。[0336]使用实施例2的peg化mtap变体，预期会有类似结果。如果甲硫腺苷磷酸化酶活性的缺陷导致癌症或疾病，则本文所述的治疗方案也可靶向其它癌症或疾病。[0337]实施例8：高peg化peg-mtap多肽对ct26同种异体移植瘤的疗效[0338]用pbs或实施例2的高peg化mtapk238变体多肽(50mg/kg，3x周)治疗两组荷ct26肿瘤的balb/c小鼠。高peg化mtapk238变体降低了肿瘤生长并导致六只接受治疗小鼠中的两只完全缓解(图13)。[0339]实施例9：用于测量mtap多肽的动力学参数的测定[0340]本文提供了测量mtap多肽降解mta并产生腺嘌呤的动力学参数的方法。[0341]通过分光光度测定对mtap多肽或peg化mtap多肽的动力学参数进行定量，其中酶底物mta的最大吸光度的衰减作为时间的函数被监测，如别处所述(singh等人，2004)。在pbs(ph7.4)中制备mta溶液，导致终浓度范围为6mm至200pm。mta与其降解产物腺嘌呤在275nm处的λmax的消光系数相差1,600m-1cm-1，而其他反应产物(甲硫核糖-1'-磷酸/甲硫核糖)在275nm处没有明显吸收。通过添加酶溶液(终浓度：10nm)并将其与底物溶液快速混合来启动反应，然后通过在37℃下测量275nm处的吸光度随时间的变化来监测底物mta的损失。将所得数据进行处理，并拟合至米氏方程以测定动力学常数。计算动力学参数，如vmax、v0、kcat、km、其衍生参数或其他参数。[0342]实施例10：mtase多肽的动力学稳定性[0343]实施例1和2的peg化hs-mtap多肽和实施例5的peg化se-mtan的动力学稳定性通过将这些酶在37℃的100mm磷酸盐缓冲液(ph7.4)中孵育确定。在四天的过程中，从孵育物中取出等份的mtap多肽，并如实施例9所述评估其降解mta的能力。对所得数据进行处理，并拟合至指数方程，以确定衰减率。在这些条件下，发现实施例2的peg化hs-mtap多肽具有57小时的半衰期(t1/2)，并且发现实施例5中的se-mtan具有56小时的类似t1/2。[0344]实施例11：mtase多肽的体内稳定性[0345]mtap多肽或peg-mtap多肽的体内稳定性通过将多肽静脉内注射到哺乳动物或人类受试者中确定。在不同时间点采集血液样品。使用elisa测定对血浆或血清中多肽的量进行定量。血清半衰期由注射到受试者体内后多肽浓度下降一半的时间确定。[0346]根据本公开，本文公开和要求的所有方法可以在没有过度实验的情况下进行和执行。虽然已经根据优选实施方案描述了本发明的组合物和方法，但是对于本领域技术人员来说明显的是，在不脱离本发明的概念、精神和范围的情况下，可以对本文所述方法和方法的步骤或步骤顺序进行变化。更具体地说，明显的是，化学和生理上相关的某些剂可以替代本文所述剂，同时会获得相同或相似的结果。认为所有这些对于本领域技术人员明显的类似替代和修改被认为落入所附权利要求限定的本发明的精神、范围和概念内。[0347]参考文献[0348]以下参考文献，在其提供了补充本文所述内容的示例性程序或其他细节的程度上被具体通过引用并入本文。[0349]美国专利号4,870,287[0350]美国专利号5,739,169[0351]美国专利号5,760,395[0352]美国专利号5,801,005[0353]美国专利号5,824,311[0354]美国专利号5,830,880[0355]美国专利号5,846,945[0356]美国专利号5,889,155[0357]美国专利公开号2009/0304666[0358]applebyetal，thestructureofhuman5′‑deoxy-5′‑methylthioadenosinephosphorylaseatatresolutionprovidesinsightsintosubstratebindingandcatalysis，structure.jun15；7(6)：629-41，1999.[0359]austin-wardandvillaseca，revistamedicadechile，126(7)：838-845，1998.[0360]ausubeletal，currentprotocolsinmolecularbiology，greenepublishingassociatesandwileyinterscience，n.y.，1994.[0361]bertinoetal，targetingtumorsthatlackmethylthioadenosinephosphorylase(mtap)activity：currentstrategies.cancerbiology&therapy，11(7)：627-632，2011.[0362]bradfordetal，adenosinedeaminase(ada)-deficientseverecombinedimmunedeficiency(scid):molecularpathogenesisandclinicalmanifestations.journalofclinicalimmunology，37(7)：626-637，2017.[0363]bukowskietal，signaltransductionabnormalitiesintlymphocytesfrompatientswithadvancedrenalcarcinoma：clinicalrelevanceandeffectsofcytokinetherapy.clinicalcancerres.，4(10)：2337-2347，1998.[0364]camachoetal，phase1clinicaltrialofanti-ctla4humanmonoclonalantibodycp-675，206inpatients(pts)withadvancedsolidmalignancies.jclinoncology，22(145):abstractno.2505(antibodycp-675206)，2004.[0365]camacho-vanegasetal，primategenomegainandloss：abonedysplasia，musculardystrophy，andbonecancersyndromeresultingfrommutatedretroviral-derivedmtaptranscripts.theamericanjournalofhumangenetics，90(4)：614-627，2012.[0366]castleetal，immunomic，genomicandtranscriptomiccharacterizationofct26colorectalcarcinoma.bmcgenomics，15：190，2014.[0367]christodoulidesetal，immunizationwithrecombinantclass1outer-membraneproteinfromneisseriameningitidis：influenceofliposomesandadjuvantsonantibodyavidity，recognitionofnativeproteinandtheinductionofabactericidalimmuneresponseagainstmeningococci.microbiology，144(pt11)：3027-3037，1998.[0368]davidsonetal，intralesionalcytokinetherapyincancer：apilotstudyofgm-csfinfusioninmesothelioma.j.immunother.，21(5)：389-398，1998.[0369]foyeetal，foye'sprinciplesofmedicinalchemistry，lippincottwilliams&wilkins，2007.[0370]gaoetal，lossofifn-γpathwaygenesintumorcellsasamechanismofresistancetoanti-ctla-4therapy.cell，oct6；167(2)：397-404，2016[0371]gillandvonhippel，calculationofproteinextinctioncoefficientsfromaminoacidsequencedata.analbiochem，182(2)：319-326，1989.[0372]hanibuchietal，therapeuticefficacyofmouse-humanchimericanti-gangliosidegm2monoclonalantibodyagainstmultipleorganmicrometastasesofhumanlungcancerinnkcell-depletedscidmice.int.j.cancer，78(4)：480-485，1998.[0373]harkkietal，anovelfungalexpressionsystem：secretionofactivecalfchymosinfromthefilamentousfungustrichodermareesei.biotechnology，7：596-603，1989.[0374]hellstrandetal，histamineandcytokinetherapy.actaoncologica，37(4)：347-353，1998.[0375]henrichetal，suppressiveeffectsoftumorcell-derived5′‑deoxy-5′‑methylthioadenosineonhumantcells.oncolmmnunology，5(8)：el184802，2016.[0376]hollander，immunotherapyforb-celllymphoma：currentstatusandprospectiveadvances.front.immun.，3：3，2012.[0377]hopwoodetal，in：geneticmanipulationofstreptomyces，alaboratorymanual，thejohninnesfoundation，norwich，conn.，1985.[0378]hooveretal，thestructureofhumanmacrophageinflammatoryprotein-3alpha/ccl20.[0379]hurwitzetal，ctla-4blockadesynergizeswithtumor-derivedgranulocyte-macrophagecolony-stimulatingfactorfortreatmentofanexperimentalmammaryc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