靶向CD39和TGFBETA的新型缀合物分子的制作方法

技术特征：
1.一种缀合物分子，其包括能够干扰cd39和其底物之间相互作用的cd39抑制部分以及能够干扰tgfβ和其受体之间相互作用的tgfβ抑制部分。2.根据权利要求1所述的缀合物分子，其中所述cd39抑制部分能够干扰cd39和atp/adp之间的相互作用，并且/或者所述tgfβ抑制部分能够干扰tgfβ和tgfβ受体之间的相互作用。3.根据权利要求1或2所述的缀合物分子，其中所述cd39抑制部分为选自下组的cd39拮抗剂：cd39结合剂、靶向cd39编码序列的rnai、靶向cd39编码序列的反义核苷酸以及与cd39竞争结合其底物的试剂。4.根据权利要求1-3中任意一项所述的缀合物分子，其中所述tgfβ抑制部分为选自下组的tgfβ拮抗剂：tgfβ结合剂、靶向tgfβ编码序列的rnai、靶向tgfβ编码序列的反义核苷酸以及与tgfβ竞争结合其受体的试剂。5.根据权利要求1-4中任意一项所述的缀合物分子，其中所述cd39结合剂选自下组：特异性识别cd39的抗体或其抗原结合片段，以及与cd39结合的小分子化合物；并且/或者所述tgfβ结合剂选自下组：特异性识别tgfβ的抗体或其抗原结合片段，以及与tgfβ结合的小分子化合物。6.根据权利要求1-5中任意一项所述的缀合物分子，其中所述缀合物分子为融合蛋白，其包括与tgfβ结合域相连的cd39结合域。7.根据权利要求6所述的缀合物分子，其中所述tgfβ结合域与人类和/或小鼠tgfβ结合。8.根据权利要求6所述的缀合物分子，其中所述tgfβ结合域与人类tgfβ1、人类tgfβ2、和/或人类tgfβ3结合。9.根据权利要求6-8中任意一项所述的缀合物分子，其中所述tgfβ结合域包括tgfβ受体的胞外结构域(ecd)。10.根据权利要求9所述的缀合物分子，其中所述tgfβ受体为tgfβ受体i(tgfβri)、tgfβ受体ii(tgfβrii)或tgfβ受体iii(tgfβriii)。11.根据权利要求9或10所述的缀合物分子，其中所述ecd包括如seq id no：163、seq id no：164或seq id no：165所示的氨基酸序列，或与其具有至少85％序列同一性但仍然保持与tgfβ结合特异性的氨基酸序列。12.根据权利要求6-11中任意一项所述的缀合物分子，其中所述tgfβ结合域包括tgfβ受体的两个或更多个ecd。13.根据权利要求12所述的缀合物分子，其中所述两个或更多个ecd源自相同的tgfβ受体或源自至少两个不同的tgfβ受体。14.根据权利要求12所述的缀合物分子，其中所述两个或更多个ecd包括源自tgfβri的第一ecd和源自tgfβrii的第二ecd。15.根据权利要求12-14中任意一项所述的缀合物分子，其中所述两个或更多个ecd可操作地串联。16.根据权利要求15所述的缀合物分子，其中所述两个或更多个ecd通过第一连接子连接。17.根据权利要求16所述的缀合物分子，其中所述tgfβ结合域包括选自下组的氨基酸序列：seq id no：166、seq id no：167、seq id no：168、seq id no：169、seq id no：170、
seq id no：171或其任何组合。18.根据权利要求6-17中任意一项所述的缀合物分子，其中所述cd39结合域与人类cd39结合。19.根据权利要求6-18中任意一项所述的缀合物分子，其中所述tgfβ结合域通过第二连接子与cd39结合域连接。20.根据权利要求6-19中任意一项所述的缀合物分子，其中所述cd39结合域包括抗cd39抗体部分。21.根据权利要求20所述的缀合物分子，其中所述抗cd39抗体部分包括重链可变区和轻链可变区。22.根据权利要求21所述的缀合物分子，其中所述抗cd39抗体部分进一步包括附加到所述重链可变区的羧基末端的重链恒定区。23.根据权利要求21或22所述的缀合物分子，其中所述抗cd39抗体部分进一步包括附加到所述轻链可变区的羧基末端的轻链恒定区。24.根据权利要求21-23中任意一项所述的缀合物分子，其中所述tgfβ结合域在选自下组的位点结合到所述抗cd39抗体部分：所述抗cd39抗体部分的1)所述重链可变区的氨基末端；2)所述轻链可变区的氨基末端；3)所述重链可变区的羧基末端；4)所述轻链可变区的羧基末端；5)所述重链恒定区的羧基末端；以及6)所述轻链恒定区的羧基末端。25.根据权利要求21-24中任意一项所述的缀合物分子，其中所述融合蛋白包括两个或更多个tgfβ结合域，所述结合域(i)全部与所述抗cd39抗体部分的所述重链可变区连接或(ii)全部与所述抗cd39抗体部分的所述轻链可变区连接。26.根据权利要求21-24中任意一项所述的缀合物分子，其中所述融合蛋白包括两个和更多个tgfβ结合域，其分别与所述抗cd39抗体部分的重链和轻链可变区连接。27.根据权利要求21-24中任意一项所述的缀合物分子，其中所述融合蛋白包括两个或更多个tgfβ结合域，其全部与所述抗cd39抗体部分的所述重链恒定区连接。28.根据权利要求21-24中任意一项所述的缀合物分子，其中所述融合蛋白包括两个或更多个tgfβ结合域，其全部与所述抗cd39抗体部分的所述轻链恒定区连接。29.根据权利要求21-24中任意一项所述的缀合物分子，其中所述融合蛋白包括两个和更多个tgfβ结合域，其分别与所述抗cd39抗体部分的重链和轻链恒定区连接。30.根据权利要求6-29中任意一项所述的缀合物分子，其中所述融合蛋白包括两个、三个、四个、五个、六个或更多个tgfβ结合域。31.根据权利要求16-30中任意一项所述的缀合物分子，其中所述第一和/或第二连接子选自下组：可切割连接子、不可切割连接子、肽连接子、柔性连接子、刚性连接子、螺旋连接子和非螺旋连接子。32.根据权利要求31所述的缀合物分子，其中所述第一和/或第二连接子包括肽连接子。33.根据权利要求32所述的缀合物分子，其中所述肽连接子包括gs连接子。34.根据权利要求33所述的缀合物分子，其中所述gs连接子包括如seq id no:177(gggs)或seq id no:173(ggggs)所示的一个或多个重复，或者包括如seq id no:182(ggggsggggsggggsg)所示的氨基酸序列。
35.根据权利要求20-34中任意一项所述的缀合物分子，其中所述抗cd39抗体部分包括重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，所述轻链可变区包括lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中：a)所述hcdr1包括选自下组的氨基酸序列：nygmn(seq id no:1)、kywmn(seq id no:2)、nywmn(seq id no:3)、dtflh(seq id no:4)、dynmy(seq id no:5)和dtyvh(seq id no:6)；并且b)所述hcdr2包括选自下组的氨基酸序列：lintytgeptyaddfkd(seq id no:7)、eirlksnkygthyaesvkg(seq id no:8)、qirlnpdnyathx1aesvkg(seq id no:9)、x
58
idpax
59
x
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nikydpkfqg(seq id no:151)、fidpyngytsynqkfkg(seq id no:11)和ridpaidnskydpkfqg(seq id no:12)；并且c)所述hcdr3包括选自下组的氨基酸序列：kgiyydyvwffdv(seq id no:13)、qldlywffdv(seq id no:14)、hgx2rgfay(seq id no:15)、spyyygsgyrifdv(seq id no:16)、iygyddayyfdy(seq id no:17)和yycalydgynvyamdy(seq id no:18)；并且d)所述lcdr1包括选自下组的氨基酸序列：kasqdinryia(seq id no:19)、rasqsisdylh(seq id no:20)、kssqslldsdgrthln(seq id no:21)、safssvnymh(seq id no:22)、satssvsymh(seq id no:23)和rssknllhsngityly(seq id no:24)；并且e)所述lcdr2包括选自下组的氨基酸序列：ytstllp(seq id no:25)、yasqsis(seq id no:26)、lvsklds(seq id no:27)、ttsnlas(seq id no:28)、stsnlas(seq id no:29)和rastlas(seq id no:30)；并且f)所述lcdr3包括选自下组的氨基酸序列：lqysnllt(seq id no:31)、qnghslplt(seq id no:32)、wqgtlfpwt(seq id no:33)、qqrstypft(seq id no:34)、qqritypft(seq id no:35)和aqllelpht(seq id no:36)；其中x1是y或f，x2是s或t，x
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是r或k，x
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是n、g、s或q，x
60
是g、a或d。36.根据权利要求35所述的缀合物分子，其中：a)所述hcdr1包括如seq id no:3所示的氨基酸序列，和/或b)所述hcdr2包括如seq id no:9所示的氨基酸序列，和/或c)所述hcdr3包括如seq id no:15所示的氨基酸序列，和/或d)所述lcdr1包括如seq id no:21所示的氨基酸序列，和/或e)所述lcdr2包括如seq id no:27所示的氨基酸序列，和/或f)所述lcdr3包括如seq id no:33所示的氨基酸序列，其中x1和x2如权利要求35中所定义。37.根据权利要求36所述的缀合物分子，其中：所述hcdr2包括选自下组的氨基酸序列：seq id no:37和seq id no:38，和/或所述hcdr3包括选自下组的氨基酸序列：seq id no:40和seq id no:41。38.根据权利要求35所述的缀合物分子，其中：a)所述hcdr1包括如seq id no:4所示的氨基酸序列，和/或b)所述hcdr2包括如seq id no:151所示的氨基酸序列，和/或c)所述hcdr3包括如seq id no:16所示的氨基酸序列，和/或d)所述lcdr1包括如seq id no:22所示的氨基酸序列，和/或
e)所述lcdr2包括如seq id no:28所示的氨基酸序列，和/或f)所述lcdr3包括如seq id no:34所示的氨基酸序列，其中x
58
、x
59
和x
60
如权利要求35中所定义。39.根据权利要求35-38中任意一项所述的缀合物分子，其中所述重链可变区包括：a)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no:1所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no:7所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no:13所示的序列；或b)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no:2所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no:8所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no:14所示的序列；或c)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no:3所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no:37所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no:40所示的序列；或d)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no:3所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no:38所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no:41所示的序列；或e)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no:4所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no:10所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no:16所示的序列；或f)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no:4所示的序列，所述hcdr2包括选自下组的序列：seq id no:134、135、136、137、138和139，所述hcdr3包括如seq id no:16所示的序列；或g)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no:5所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no:11所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no:17所示的序列；或h)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no:6所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no:12所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no:18所示的序列。40.根据权利要求35-39中任意一项所述的缀合物分子，其中所述轻链可变区包括：a)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no:19所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no:25所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no:31所示的序列；或b)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no:20所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no:26所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no:32所示的序列；或c)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no:21所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no:27所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no:33所示的序列；或d)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no:22所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no:28所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no:34所示的序列；或e)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no:23所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no:29所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no:35所示的序列；或f)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no:24所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no:30所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no:36所示的序列。41.根据权利要求35-40中任意一项所述的缀合物分子，其中：a)所述hcdr1包括如seq id no:1所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no:7所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no:13所示的序列；所述lcdr1包括如seq id no:19所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no:25所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no:31所示的序列；或
b)所述hcdr1包括如seq id no:2所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no:8所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no:14所示的序列；所述lcdr1包括如seq id no:20所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no:26所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no:32所示的序列；或c)所述hcdr1包括如seq id no:3所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no:37所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no:40所示的序列；所述lcdr1包括如seq id no:21所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no:27所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no:33所示的序列；或d)所述hcdr1包括如seq id no:3所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no:38所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no:41所示的序列；所述lcdr1包括如seq id no:21所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no:27所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no:33所示的序列；或e)所述hcdr1包括如seq id no:4所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no:10所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no:16所示的序列；所述lcdr1包括如seq id no:22所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no:28所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no:34所示的序列；或f)所述hcdr1包括如seq id no:4所示的序列，所述hcdr2包括选自下组的序列：seq id no:134、135、136、137、138和139，所述hcdr3包括如seq id no:16所示的序列；所述lcdr1包括如seq id no:22所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no:28所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no:34所示的序列；或g)所述hcdr1包括如seq id no:5所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no:11所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no:17所示的序列；所述lcdr1包括如seq id no:23所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no:29所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no:35所示的序列；或h)所述hcdr1包括如seq id no:6所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no:12所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no:18所示的序列；所述lcdr1包括如seq id no:24所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no:30所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no:36所示的序列。42.根据权利要求35-41中任意一项所述的缀合物分子，其中所述抗cd39抗体部分进一步包括一个或多个重链框架区hfr1、hfr2、hfr3和hfr4和/或一个或多个轻链框架区lfr1、lfr2、lfr3和lfr4，其中：所述hfr1包括选自下组的序列：seq id no:84-86、115、119-120和131；所述hfr2包括选自下组的序列：seq id no:87-90和121-123；所述hfr3包括选自下组的序列：seq id no:91-97、116-117和124-125；所述hfr4包括选自下组的序列：seq id no:79和118；所述lfr1包括选自下组的序列：seq id no:98-103和127-129；所述lfr2包括选自下组的序列：seq id no:104、105和130；所述lfr3包括选自下组的序列：seq id no:106-110和132-133，和所述lfr4包括选自下组的序列：seq id no:83和153。
43.根据权利要求35-42中任意一项所述的缀合物分子，其中所述抗cd39抗体部分包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括选自下组的氨基酸序列：seq id no:60、62、64、66、140、141、142、146、147和39，或与其具有至少80％序列同一性，但仍然保持与人类cd39特异性结合特异性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包括选自下组的氨基酸序列：seq id no:61、63、65、67、143、144、145、111、112和63，或与其具有至少80％序列同一性，但仍然保持与人类cd39特异性结合特异性的氨基酸序列。44.根据权利要求35-43中任意一项所述的缀合物分子，其中所述抗cd39部分包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括选自下组的氨基酸序列：seq id no:68、70、72和74，或与其具有至少80％序列同一性，但仍然保持与人类cd39特异性结合特异性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包括选自下组的氨基酸序列：seq id no:69、71、73和75，或与其具有至少80％序列同一性，但仍然保持与人类cd39特异性结合特异性的氨基酸序列。45.根据权利要求35-44中任意一项所述的缀合物分子，其中所述抗cd39抗体部分包括：a)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:42所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:51所示的序列，或b)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:43所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:52所示的序列，或c)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:44所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:53所示的序列，或d)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:45所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:54所示的序列，或e)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:47所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:56所示的序列，或f)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:49所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:58所示的序列，或g)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:50所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:59所示的序列，或h)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:60所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:63所示的序列，或i)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:62所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:63所示的序列，或j)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:64所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:63所示的序列，或k)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:66所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:63所示的序列，或l)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:60所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:65所示的序列，或
m)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:62所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:65所示的序列，或n)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:64所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:65所示的序列，或o)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:66所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:65所示的序列，或p)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:60所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:67所示的序列，或q)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:62所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:67所示的序列，或r)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:64所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:67所示的序列，或s)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:66所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:67所示的序列，或t)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:140所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:61所示的序列，或u)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:141所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:61所示的序列，或v)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:142所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:61所示的序列，或w)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:140所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:143所示的序列，或x)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:141所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:143所示的序列，或y)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:142所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:143所示的序列，或z)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:140所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:144所示的序列，或aa)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:141所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:144所示的序列，或bb)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:142所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:144所示的序列，或cc)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:140所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:145所示的序列，或dd)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:141所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:145所示的序列，或ee)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:142所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:145所示的序列，或ff)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:146所示的序
列，所述轻链可变区包括如seq id no:111所示的序列，或gg)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:146所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:112所示的序列，或hh)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:147所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:111所示的序列，或ii)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:39所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:63所示的序列，或jj)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:68所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:69所示的序列，或kk)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:70所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:69所示的序列，或ll)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:72所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:69所示的序列，或mm)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:74所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:69所示的序列，或nn)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:68所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:71所示的序列，或oo)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:70所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:71所示的序列，或pp)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:72所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:71所示的序列，或qq)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:74所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:71所示的序列，或rr)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:68所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:73所示的序列，或ss)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:70所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:73所示的序列，或tt)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:72所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:73所示的序列，或uu)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:74所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:73所示的序列，或vv)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:68所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:75所示的序列，或ww)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:70所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:75所示的序列，或xx)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:72所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:75所示的序列，或yy)重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括如seq id no:74所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:75所示的序列。
46.根据权利要求35-45中任意一项所述的缀合物分子，其中所述抗cd39抗体部分进一步包括一个或多个氨基酸残基取代或修饰，但仍然保持与人类cd39特异性结合的特异性。47.根据权利要求46所述的缀合物分子，其中所述取代或修饰中的至少一个在所述重链可变区或轻链可变区中的一个或多个cdr序列和/或一个或多个非cdr序列中。48.根据权利要求21-47中任意一项所述的缀合物分子，其中所述恒定区源自人免疫球蛋白(ig)，或可选地人igg。49.根据权利要求48所述的缀合物分子，其中所述恒定区源自人igg1、igg2、igg3、igg4、iga1、iga2或igm。50.根据权利要求35-49中任意一项所述的缀合物分子，其中所述抗cd39抗体部分为人源化的。51.根据权利要求19-50中任意一项所述的缀合物分子，其中所述抗cd39抗体部分为双功能抗体(diabody)、fab、fab’、f(ab’)2、fd、fv片段、二硫键稳定的fv片段(dsfv)、(dsfv)2、双特异性dsfv(dsfv-dsfv’)、二硫键稳定的双抗体(ds diabody)、单链抗体分子(scfv)、scfv二聚体(双价的双功能抗体)、多特异性抗体(multispecific antibody)、骆驼化单域抗体(camelized single domain antibody)、纳米抗体(nanobody)、域抗体(domain antibody)或双价域抗体。52.根据前述任意一项权利要求所述的缀合物分子，其中所述缀合物分子能够以不超过10-8
m的ec
50
特异性地与人类cd39结合，所述ec
50
通过facs检测法测定。53.根据前述任意一项权利要求所述的缀合物分子，其中所述缀合物分子具有选自下组的一种或多种性质：a)通过facs检测法测定，特异性地与人类cd39结合，但不与小鼠cd39特异性地结合；b)以不超过10-8
m的ec
50
特异性地与食蟹猴cd39结合，所述ec
50
通过facs检测法测定；c)以不超过10-7
m(例如，不超过5x10-8
m、不超过3x10-8
m、不超过2x10-8
m、不超过1x10-8
m、或不超过8x10-9
m)的k
d
值特异性地与人类cd39结合，所述k
d
值通过biacore检测法测定；d)以不超过10-8
m(例如，不超过8x10-9 m、不超过5x10-9 m、不超过4x10-9 m、不超过3x10-9 m、不超过1x10-9 m、或不超过9x10-10 m)的k
d
值特异性与人类cd39结合，所述k
d
值通过octet分析测定；e)以不超过50nm(例如，不超过1nm、不超过5nm、不超过10nm、或不超过30nm)的ic
50
抑制在表达cd39的细胞中的atp酶活性，所述ic
50
通过atp酶活性分析测定；f)能够以不超过10nm(例如，不超过5nm、不超过3nm、不超过2nm、不超过1nm、不超过0.5nm、或不超过0.2nm)的浓度增强atp介导的单核细胞活化，所述浓度通过facs分析cd80、cd86和/或cd40的表达测定；g)能够以不超过25nm的浓度增强pbmc中atp介导的t细胞活化，所述浓度通过il-2分泌、ifn-γ分泌、cd4

或cd8

t细胞增殖测定；h)能够以不超过25nm(或不超过10nm、或不超过5nm、或不超过1nm、或不超过0.5nm)的浓度增强atp介导的树突细胞(dc)活化，所述浓度通过facs检测法、或通过活化的dc促进t细胞增殖的能力、或通过活化的dc促进混合淋巴细胞反应(mlr)分析中的ifn-γ产生的能力来分析cd83的表达测定；i)能够以不超过1nm(例如，不超过0.1nm、不超过0.01nm)的浓度阻断由腺苷(由atp水
解)诱导的cd4

t细胞增殖的抑制，所述浓度通过facs检测法测定；j)能够以nk细胞或巨噬细胞依赖性方式抑制哺乳动物中的肿瘤生长；k)能够逆转被eatp抑制的人cd8

t细胞增殖，通过t细胞增殖、cd25

细胞和活细胞群体测定；以及l)能够以不超过50nm(或者不超过12.5nm、或者不超过3.13nm、或者不超过0.78nm、或者不超过0.2nm、或者不超过0.049nm、或者不超过0.012nm、或者不超过0.003nm、或者不超过0.0008nm)的浓度增强由lps刺激诱导的人巨噬细胞il1β释放，所述浓度通过elisa检测法测定。54.根据权利要求1-34中任意一项所述的缀合物分子，其中所述cd39结合域与包括重链可变区和轻链可变区的抗体竞争结合人类cd39，所述重链可变区包括如seq id no:43所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:52所示的序列。55.根据权利要求1-34中任意一项所述的缀合物分子，其中所述cd39结合域与包括重链可变区和轻链可变区的抗体竞争结合人类cd39，所述重链可变区包括如seq id no:44所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:53所示的序列；或与包括重链可变区和轻链可变区的抗体竞争结合人类cd39，所述重链可变区包括如seq id no:45所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:54所示的序列。56.根据权利要求1-34中任意一项所述的缀合物分子，其中所述cd39结合域与包括重链可变区和轻链可变区的抗体竞争结合人类cd39，所述重链可变区包括如seq id no:47所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:56所示的序列。57.根据前述任意一项权利要求所述的缀合物分子，其中所述cd39结合域与cd39表位特异性结合，其中所述表位包括选自下组的一个或多个残基：q96、n99、e143、r147、r138、m139、e142、k5、e100、d107、v81、e82、r111和v115。58.根据权利要求57所述的缀合物分子，其中所述表位包括选自下组的一个或多个残基：q96、n99、e143和r147。59.根据权利要求57所述的缀合物分子，其中所述表位包括选自下组的一个或多个残基：r138、m139和e142。60.根据权利要求57所述的缀合物分子，其中所述表位包括选自下组的一个或多个残基：k5、e100和d107。61.根据权利要求57所述的缀合物分子，其中所述表位包括选自下组的一个或多个残基：v81、e82、r111和v115。62.根据前述任意一项权利要求所述的缀合物分子，其中所述cd39结合域与包含如seq id no:162所示的氨基酸序列的人cd39特异性结合。63.根据权利要求56-62中任意一项所述的缀合物分子，其中所述cd39结合域并非源自抗体9-8b、抗体t895和抗体i394中的任何一种，其中：抗体9-8b包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括如seq id no:46所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:48所示的序列；抗体t895包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括如seq idno:55所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:57所示的序列；以及抗体i394包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括如seq id no:113所示
的序列，所述轻链可变区包括如seq id no:114所示的序列。64.根据上述任意一项权利要求所述的缀合物分子，其中所述缀合物分子具有选自下组的一种或多种性质：a)与人类tgfβ1、人类tgfβ2和/或人类tgfβ3特异性结合；b)以相似的亲和性与人类tgfβ1和小鼠tgfβ1特异性结合；c)以不超过3x10-11 m(例如，不超过2x10-11 m、不超过1x10-11 m、不超过0.9x10-11 m、不超过0.8x10-11 m、不超过0.7x10-11 m、不超过0.6x10-11
m、不超过0.5x10-11 m)的ec
50
值与人类tgfβ1特异性结合，所述ec
50
通过elisa检测法测定；d)能够以不超过4x10-10 m(例如，不超过3x10-10 m、不超过2x10-10 m、不超过1x10-10 m、不超过0.5x10-10 m)的ic
50
值阻断人类tgfβ1和tgfβrii结合，所述ic
50
值通过阻断分析法测定；e)能够以剂量依赖性方式与人类cd39结合，所述剂量依赖性方式通过facs检测法测定；f)能够同时与cd39和tgfβ结合，通过elisa分析法或facs检测法测定；g)能够以不超过4x10-11 m的值ic
50
抑制tgfβ信号，所述ic
50
通过tgf-βsmad报告分析测定；h)能够以不超过7x10-10 m(例如，不超过6x10-10 m、不超过5x10-10 m、不超过4x10-10 m、不超过3x10-10 m、不超过2x10-10 m、不超过1x10-10
m、不超过0.5x10-10 m)的ic
50
值抑制在表达cd39细胞中的atp酶活性，所述ic
50
通过atp酶活性分析测定；i)能够以不超过4x 10-10
m(例如，不超过3x 10-10
m、不超过2x 10-10
m、不超过1x 10-10
m或者不超过0.5x 10-10
m)的k
d
值与人类cd39特异性结合，所述k
d
值通过octet分析法测定；j)能够以不超过4x 10-11
m(例如，不超过3x 10-11
m、不超过2x 10-11
m、不超过1x 10-11
m、不超过0.5x 10-11
m)的k
d
值与人类tgfβ1特异性结合，所述k
d
值通过octet分析法测定；k)能够恢复t细胞功能，通过treg抑制分析法测定；l)能够以剂量依赖性方式抑制人类t细胞凋亡；m)能够通过刺激促进人类t细胞存活和活化；n)能够阻断tgfβ诱导的foxp3在总t细胞中的表达；并且o)能够恢复atp诱导的对人t细胞增殖的抑制。65.根据前述任意一项权利要求所述的缀合物分子，其进一步包括一个或多个缀合物部分。66.根据权利要求65所述的缀合物分子，其中所述缀合物部分包括清理修饰剂、化疗剂、毒素、放射性同位素、镧系元素、发光标记、荧光标记、酶底物标记、dna烷化剂、拓扑异构酶抑制剂、微管蛋白结合剂、纯化部分或其他抗癌药物。67.一种药物组合物，其包括根据前述任意一项权利要求所述的缀合物分子以及一种或多种药学上可接受的运载体。68.一种分离的多核苷酸，其编码根据权利要求1-67中任意一项所述的缀合物分子。69.一种载体，其包括根据权利要求68所述的分离的多核苷酸。70.一种宿主细胞，其包括根据权利要求69所述的载体。71.一种试剂盒，其包括根据权利要求1-66中任意一项所述的缀合物分子和/或根据权
利要求67所述的药物组合物，以及第二治疗剂。72.一种表达根据权利要求1-66中任意一项所述的缀合物分子的方法，其包括在表达根据权利要求70所述的载体的条件下培养根据权利要求69所述的宿主细胞。73.一种在受试者中治疗、预防或减轻与cd39和/或tgfβ相关的疾病、病症或状况的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1-66中任意一项所述的缀合物分子和/或根据权利要求67所述的药物组合物。74.一种在受试者中治疗、预防或减轻可通过降低cd39的atp酶活性而可治疗的疾病的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1-66中任意一项所述的缀合物分子和/或根据权利要求67所述的药物组合物。75.一种在受试者中治疗、预防或减轻与腺苷介导的t细胞、单核细胞、巨噬细胞、dc、apc、nk和/或b细胞活性的抑制相关的疾病的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1-66中任意一项所述的缀合物分子和/或根据权利要求67所述的药物组合物。76.一种在受试者中治疗、预防或减轻与增加的tgfβ水平和/或活性相关的疾病的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1-66中任意一项所述的缀合物分子和/或根据权利要求67所述的药物组合物。77.根据权利要求73-76中任意一项所述的方法，其中所述疾病、病症或状况是癌症、胰腺萎缩或纤维化。78.根据权利要求77所述的方法，其中所述癌症是肛门癌、阑尾癌、星形细胞瘤、基底细胞癌、胆囊癌、胃癌、肺癌、支气管癌、骨癌、肝胆管癌、胰腺癌、乳腺癌、肝癌、卵巢癌、睾丸癌、肾癌、肾盂和输尿管癌、唾液腺癌、小肠癌、尿道癌、膀胱癌、头颈癌、脊柱癌、脑癌、宫颈癌、子宫癌、子宫内膜癌、结肠癌、结直肠癌、直肠癌、食道癌、胃肠道癌、皮肤癌、前列腺癌、垂体癌、阴道癌、甲状腺癌、喉癌、胶质母细胞瘤、黑素瘤、骨髓增生异常综合症、肉瘤、畸胎瘤、慢性淋巴细胞白血病(cll)、慢性髓性白血病(cml)、急性淋巴细胞白血病(all)、急性髓性白血病(aml)、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、t或b细胞淋巴瘤、胃肠道间质瘤、软组织肿瘤、肝细胞癌或腺癌。79.根据权利要求77所述的方法，其中所述癌症是白血病、淋巴瘤、膀胱癌、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤、卵巢癌、黑素瘤、前列腺癌、甲状腺癌、食道癌或乳腺癌。80.根据权利要求73-76中任意一项所述的方法，其中所述受试者已经被鉴定为具有表达cd39和/或tgfβ的癌细胞或浸润肿瘤的免疫细胞或免疫抑制细胞，可选地其水平显著地高于非癌细胞或非免疫抑制细胞上正常发现的水平。81.根据权利要求80所述的方法，其中所述免疫抑制细胞是调节性t细胞。82.根据权利要求81所述的方法，其中所述受试者已经被鉴定为在肿瘤环境中具有与对照受试者通常具有的调节性t细胞活性相比过度活跃的调节性t细胞。83.根据权利要求81或82所述的方法，其中预期所述受试者从免疫抑制的逆转或功能失调的耗尽t细胞的逆转中受益。84.根据权利要求73-76中任意一项所述的方法，其中所述疾病、病症或状况是自身免疫性疾病或感染。85.根据权利要求84所述的方法，其中所述自身免疫性疾病是免疫性血小板减少症、系
统性硬皮病、硬化症、成人型呼吸窘迫综合征、湿疹、哮喘、干燥综合征、艾迪生氏病、巨细胞动脉炎、免疫复合体肾炎、免疫性血小板减少性紫癜、自身免疫性血小板减少症、乳糜泻(celiac disease)、牛皮癣、皮炎、结肠炎或系统性红斑狼疮。86.根据权利要求84所述的方法，其中，所述感染是hiv感染、hbv感染、hcv感染、炎性肠病或克罗恩氏病。87.根据权利要求73-86中任意一项所述的方法，其中所述受试者是人类。88.根据权利要求73-87中任意一项所述的方法，其中所述施用是经由口服、鼻内、静脉内、皮下、舌下或肌内施用。89.根据权利要求73-88中任意一项所述的方法，其进一步包括施用治疗有效量的第二治疗剂。90.根据权利要求89所述的方法，其中所述第二治疗剂选自下组：化疗剂、抗癌药、放射治疗剂、免疫治疗剂、抗血管生成剂、靶向治疗剂、细胞治疗剂、基因治疗剂、激素治疗剂、抗病毒剂、抗生素、镇痛药、抗氧化剂、金属螯合剂和细胞因子。91.一种调节cd39阳性细胞中cd39活性的方法，其包括将所述cd39阳性细胞暴露于根据权利要求1-66中任意一项所述的缀合物分子和/或根据权利要求67所述的药物组合物。92.根据权利要求91所述的方法，其中cd39阳性细胞是免疫细胞。93.根据权利要求1-66中任意一项所述的缀合物分子和/或根据权利要求67的所述药物组合物在制备用于治疗、预防或减轻受试者中与cd39或tgfβ相关的疾病、病症或状况的药物中的用途。

技术总结
本发明提供了包括能够干扰CD39和其底物之间相互作用的CD39抑制部分和能够干扰TGFβ和其受体之间相互作用的TGFβ抑制部分的缀合物分子、编码所述缀合物分子的分离的多核苷酸、包含所述缀合物分子的药物组合物及其用途。途。途。


技术研发人员：孙大为 吴志浩 孙俊 耿亚男 高瑞 唐莉莉 杜庆林 邱阳生 R
受保护的技术使用者：科望（上海）生物医药科技有限公司
技术研发日：2021.11.25
技术公布日：2022/9/13