一种来那度胺衍生物及其制备方法和应用与流程

1.本发明属于功能有机分子的技术领域，具体涉及一种来那度胺衍生物及其制备方法和应用。


背景技术：

2.来那度胺，化学名为3-(4-氨基-1,3-二氢-1-氧代-2h-异吲哚-2-基)-2,6-哌啶二酮，是沙利度胺的结构类似物之一。由美国celgene公司研发继沙利度胺后的第二代新型免疫调节剂。本品可通过激活t细胞，产生白介素-2(il-2)，改变自然杀伤细胞(nk细胞)的数目和功能，进而增强nk细胞依赖的细胞毒活性，而且几乎无神经毒性和致畸性。于2006年1月获美国fda批准上市，商品名revlimid，临床主要用于治疗5q缺失(第5对染色体长臂的间隙基因缺失)的骨髓增生异常综合征(mds)亚型、多发性骨髓瘤(mm)和淋巴瘤等，尤其对多发性骨髓瘤(mm)的治疗效果最为显著。
3.protac是一种异双功能分子，分子的一端连接结合靶蛋白的配体，一端连接e3连接酶的配体，中间通过合适的linker相连。protac降解靶蛋白是通过泛素蛋白酶体系统(ups)实现的，其大致过程如下，protac分子结合靶蛋白(poi)和e3连接酶，形成三元复合物，给靶蛋白打上泛素化的标签，泛素化的蛋白被细胞内的蛋白酶体26s识别并降解。其中，来那度胺结构目前被经常用于protac分子中连接e3连接酶的配体。
4.基于此，我们打算把该三氮唑结构跟来那度胺结构进行改造，希望通过既可以直接作用于ido1靶点抑制其活性，又可以通过泛素化降解ido1靶点，进而抑制ido1活性。


技术实现要素：

5.本发明通过对来那度胺结构进行改造，利用了结构拼接的原理，通过在来那度胺结构的基础上，引入三氮唑基团，从而提高了化合物的ido1抑制活性。
6.第一方面，本发明提供一种如式(ⅰ)所示化合物或其药学上可接受的盐：
[0007][0008]
其中，r为苯基、2,4-二氟苯基或
[0009]
第二方面，本发明提供一种制备式(ⅰ)所示化合物的方法，反应式如下：
[0010][0011]
制备方法如下：
[0012]
在带有搅拌器的反应瓶中，把式(ⅱ)化合物、对甲苯磺酰肼、氢氧化钡和碘加入到甲苯中，在氮气保护下加热至100℃，反应一段时间后加入来那度胺和乙酸铜，然后置于氧气氛围下，加热至50℃继续反应，向反应体系中加入稀盐酸溶液，搅拌一段时间后加入水，用乙酸乙酯萃取多次，合并有机相后浓缩，最后经过硅胶柱层析分离得式(ⅰ)化合物；其中，式(ⅱ)化合物中r的定义与式(ⅰ)化合物相同。
[0013]
本发明提供另一种制备式(ⅰ)所示化合物的方法，反应式如下：
[0014][0015]
制备方法如下：
[0016]
将来那度胺和三氟甲磺酰叠氮加入到叔丁醇、二氯甲烷和水的混合溶液中，再加入三乙胺和硫酸铜，加热至40℃搅拌反应，然后加入式(ⅲ)化合物和抗坏血酸钠，在回流条件下反应，反应结束加入二氯甲烷，过滤反应液，分出有机相，蒸除溶剂得式(ⅰ)化合物；
[0017]
或，
[0018]
将来那度胺加入到盐酸和水中，搅拌至完全溶解，缓慢加入溶有亚硝酸钠的水溶液，搅拌溶解后再加入叠氮化钠，在室温条件下搅拌反应，tlc监控原料反应完全后，将反应液倒入二氯甲烷中，再加入式(ⅲ)化合物和碘化亚铜，加热至回流反应，反应结束后分出有机相，有机相浓缩后经硅胶柱层析分离得到式(ⅰ)化合物；
[0019]
其中，式(ⅲ)化合物中r的定义与式(ⅰ)化合物相同。
[0020]
进一步的，所述来那度胺由下述方法制备：
[0021][0022]
制备方法如下：
[0023]
在带有搅拌装置的反应瓶中，将4-硝基异吲哚啉-1-酮和2-溴-1,5-戊二酸甲酯加入n,n-二甲基甲酰胺中，搅拌溶解后再加入氢氧化钡，将反应体系加热至100℃，搅拌反应
一段时间后过滤反应液，然后转移至高压反应釜中，在向反应釜内加入edci、1-羟基苯并三唑、醋酸钯和氨水，在50℃下向反应釜内通入氢气，使反应釜内的压力达到1.5mpa，保持温度搅拌反应，反应结束后过滤反应液，滤液倒入水中，搅拌下用稀盐酸调节ph为6，然后用二氯甲烷萃取反应体系，有机相干燥后经浓缩再经硅胶柱层析分离得到来那度胺。
[0024]
进一步的，所述4-硝基异吲哚啉-1-酮由下述方法制备：
[0025][0026]
制备方法如下：
[0027]
将2-硝基-6-甲酸乙酯苄胺加入到n,n-二甲基甲酰胺中溶解，在氮气保护下依次加入二环己基碳二亚胺和4-二甲氨基吡啶，加完后搅拌30min，缓慢升至100℃反应，tlc监控2-硝基-6-甲酸乙酯苄胺反应完全后，浓缩反应体系，加入二氯甲烷溶解后再用水洗涤，经过无水硫酸镁干燥后，有机相浓缩后经硅胶柱层析分离得4-硝基异吲哚啉-1-酮；
[0028]
或，
[0029]
将2-硝基-6-甲酸乙酯苄胺加入到n,n-二甲基甲酰胺中完全溶解，在氮气保护下依次加入hatu和n,n-二异丙基乙胺，加完后搅拌缓慢升至50℃反应，tlc监控2-硝基-6-甲酸乙酯苄胺反应完全后，倒入水中，搅拌后加入二氯甲烷，搅拌后分出有机相，有机相再用水洗涤，经过无水硫酸镁干燥后，有机相浓缩后经硅胶柱层析分离得4-硝基异吲哚啉-1-酮；
[0030]
或，
[0031]
在高压反应釜中，把2-硝基-6-甲酸乙酯苄胺加入2n的盐酸和水中，搅拌完全溶解，然后在10℃条件下缓慢加入溶有亚硝酸钠的水溶液，保持反应体系密闭，滴加完全后搅拌反应，然后向反应釜中加入二氯甲烷，反应体系置于-5℃，向反应体系中缓慢通入氨气，反应体系压力达到0.5mpa后，升温至30℃反应，反应结束后过滤反应液，分出有机相，浓缩后得4-硝基异吲哚啉-1-酮。
[0032]
进一步的，所述4-硝基异吲哚啉-1-酮由下述方法制备：
[0033][0034]
制备方法如下：
[0035]
将2-甲酰基苯甲酸甲酯和盐酸羟胺加入到n,n-二甲基甲酰胺中完全溶解，在氮气保护下依次加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸盐和n,n-二异丙基乙胺，加完后搅拌30min，缓慢升至50℃反应，tlc监控2-甲酰基苯甲酸甲酯反应完全后，倒入水中，搅拌后用乙酸乙酯萃取，合并有机相，浓缩后加入苯中，再加入锌粉和无水乙酸，氮气保护下加热至回流反应，反应结束过滤反应液，置于-10℃条件下，缓慢滴加硝酸，搅拌1h后升至室温，然后缓慢滴加饱和的碳酸钾溶液；调节反应液ph为中性后，加入二氯甲烷萃取，经过无水硫酸镁干燥后，有机相浓缩后经硅胶柱层析分离得4-硝基异吲哚啉-1-酮。
[0036]
进一步的，所述4-硝基异吲哚啉-1-酮由下述方法制备：
[0037][0038]
制备方法如下：
[0039]
将2-甲酸甲酯基苄溴和叠氮化钠加入到n,n-二甲基甲酰胺中，在室温条件下搅拌反应，然后加入氨水，在氮气保护下依次加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸盐和n,n-二异丙基乙胺，加完后搅拌，缓慢升至75℃反应；反应结束倒入水中，搅拌后用乙酸乙酯萃取，有机相经无水硫酸钠干燥后浓缩，再向浓缩物中加入四氢呋喃，然后加入二氯四羰基二铑、三苯基膦和水，在氮气保护下加热至回流反应；反应结束过滤反应液，真空浓缩后加入苯和乙酸的混合溶液，置于-10℃条件下，缓慢滴加硝酸，搅拌升至室温，然后缓慢滴加碳酸钾溶液，调节反应液ph为中性，再加入二氯甲烷萃取，经过无水硫酸镁干燥后，有机相浓缩后经硅胶柱层析分离得4-硝基异吲哚啉-1-酮。
[0040]
进一步的，所述4-硝基异吲哚啉-1-酮由下述方法制备：
[0041][0042]
制备方法如下：
[0043]
将邻二苯甲酸加入到二氯亚砜中，加热至60℃搅拌反应，然后真空浓缩反应体系，加入二氯甲烷完全溶解浓缩物，置于-10℃条件下，搅拌下缓慢滴加含量为25％的氨水，滴加完后，缓慢升至室温反应，反应结束后加入饱和氯化钠溶液，搅拌后分出有机相，经无水硫酸钠干燥后浓缩，然后向浓缩物加入1,4-二氧六环和二甲基亚砜的混合溶液，再加入氯化铝和过硫酸铵，加热至100℃反应，再加入偶氮二异丁腈，保持温度继续反应；反应结束后过滤反应液，真空浓缩，然后再加入乙酸乙酯和饱和氯化钠溶液，搅拌后分出有机相，浓缩后加入苯和乙酸的混合溶液，置于-10℃条件下，缓慢滴加硝酸，搅拌1h后升至室温，然后缓慢滴加碳酸钾溶液，调节反应系统为中性，加入二氯甲烷萃取，经过无水硫酸镁干燥后，有机相浓缩后经硅胶柱层析分离得4-硝基异吲哚啉-1-酮。
[0044]
第三方面，本发明提供一种式(ⅰ)化合物在制备抑制ido1的药物中的应用。
[0045]
本发明的有益效果为：
[0046]
本发明提供一种能够进入ido1靶点中的含有三氮唑结构的化合物，利用了结构拼接的原理，通过在来那度胺结构的基础上，引入三氮唑基团。既可以通过泛素化降解ido1靶点，进而抑制ido1活性。
附图说明
[0047]
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0048]
图1是本发明实施例4产物的1hnmr图谱。
[0049]
图2是本发明实施例4产物的
13
cnmr图谱。
[0050]
图3是本发明化合物g1的1hnmr图谱。
[0051]
图4是本发明化合物g2的1hnmr图谱。
具体实施方式
[0052]
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明中的技术方案，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。
[0053]
实施例1
[0054][0055]
在带有搅拌器的反应装置里，把n-boc-苄胺21g加入冰乙酸300ml中，反应温度置于5℃条件下，通过恒压滴液漏斗缓慢滴加发烟硝酸13g，滴加完后再通过恒压滴液漏斗滴加浓硫酸20g，滴加完后缓慢升温至室温，搅拌反应约10h，tlc监控n-boc-苄胺反应完全，降至室温，反应液倒入冰水2000ml中，搅拌过程中有固体析出，过滤反应液，滤饼加入二氯甲烷500ml，然后缓慢滴加饱和碳酸钠溶液，可以见固体逐渐溶解在二氯甲烷中，然后分出有机相，向有机相中再加入二碳酸二叔丁酯21g，室温搅拌反应1h，加入水搅拌后再次分出有机相，浓缩后得到2-硝基-n-boc-苄胺23.19g。
[0056]
lc-ms(esi):m/z 253[m h]

.
[0057]
实施例2
[0058][0059]
在带有搅拌装置的反应瓶中，将2-硝基-n-boc-苄胺25g和碳酸钙10g加入乙醇400ml溶液中，搅拌后再缓慢滴加溶有氯化碘16.5g的乙醇溶液200ml，滴加完后在室温条件下搅拌1.5h，然后向反应体系中加入水800ml，ph试纸检测反应体系为弱碱性或中性，如果为酸性补加碳酸钙调节到中性，继续搅拌1h，真空浓缩出乙醇，再加入二氯甲烷300ml，搅拌后分出有机相，水相用二氯甲烷200ml萃取多次，合并有机相，然后在向二氯甲烷体系中加入三氟乙酸57g，缓慢加热至40℃，搅拌3h，加入水1000ml，用三乙胺调节体现ph为7～8，然后分出有机相，用无水硫酸钠干燥后浓缩得到2-硝基-6-碘苄胺26.04g。
[0060]
lc-ms(esi):m/z 278[m h]

.
[0061]
实施例3
[0062][0063]
在带有换气装置和搅拌装置的高压反应釜中，把2-硝基-6-碘-苄胺28g、乙酸钯2.3g、1,1'-双(二苯基膦)二茂铁5.6g、三苯基膦5.3g和三乙醇胺15g加入无水甲醇1000ml中，搅拌后通入co使体系压力达到2.0mpa，升温至60℃，保持温度搅拌反应24h，过滤反应液，反应液真空浓缩后经过柱层析纯化(硅胶柱，洗脱剂＝石油醚：乙酸乙酯＝1:3)，得到2-硝基-6-甲酸乙酯苄胺17.92g。
[0064]
lc-ms(esi):m/z 211[m h]

.
[0065]
实施例4
[0066][0067]
在带有搅拌器的反应装置中，把2-硝基-6-甲酸乙酯苄胺21g加入到n,n-二甲基甲酰胺800ml中完全溶解，在氮气保护下依次加入二环己基碳二亚胺20g和4-二甲氨基吡啶2.5g，加完后搅拌30min，缓慢升至100℃，然后反应15h，tlc监控2-硝基-6-甲酸乙酯苄胺反应完全后，但是反应体系比较杂，真空浓缩反应体系，加入二氯甲烷1000ml溶解后再用水300ml洗涤多次，经过无水硫酸镁干燥后，有机相浓缩后经硅胶柱层析(洗脱剂：pe:ea＝5:1)分离得到产品4.69g。
[0068]1h nmr(400mhz,dmso-d6):8.97(s,1h),8.44(d,j＝8.0hz,1h),8.12(d,j＝8.0hz,1h),7.81(t,j1＝8.0hz,j2＝8.0hz,1h),4.80(s,2h)；
[0069]
13
c nmr(100mhz,dmso-d6):168.1,143.9,139.9,136.3,130.3,129.9,127.1,46.4。
[0070]
实施例5
[0071][0072]
在带有搅拌器的反应装置中，把2-硝基-6-甲酸乙酯苄胺21g加入到n,n-二甲基甲酰胺1000ml中完全溶解，在氮气保护下依次加入hatu38g和n,n-二异丙基乙胺20g，加完后搅拌30min，缓慢升至50℃，然后反应20h，tlc监控2-硝基-6-甲酸乙酯苄胺反应完全后，但是反应体系比较杂，然后倒入水1000ml中，搅拌后加入二氯甲烷1000ml，搅拌后分出有机相，有机相再用水洗涤多次，经过无水硫酸镁干燥后，有机相浓缩后经硅胶柱层析分离得到产品4.18g。
[0073]
实施例6
[0074][0075]
在高压反应釜中，把2-硝基-6-甲酸乙酯苄胺21g加入2n的盐酸300ml和水300ml中，搅拌完全溶解，然后在10℃条件下缓慢加入溶有亚硝酸钠7g的水溶液100ml，保持反应体系密闭，滴加完全后搅拌反应5h，然后向反应釜中加入二氯甲烷500ml，注意保持氮气保护，然后反应体系置于-5℃，向反应体系中缓慢通入氨气，注意快速搅拌，刚开始反应体系呈现酸性，氨气吸收很快，慢慢反应体系压力升高，达到0.5mpa，升温至30℃，反应3h，过滤反应液，分出有机相，浓缩后得到产品16.1g。
[0076]
实施例7
[0077][0078]
在带有搅拌器的反应装置中，把2-甲酰基苯甲酸甲酯16.5g和盐酸羟胺8.5g加入到n,n-二甲基甲酰胺1000ml中完全溶解，在氮气保护下依次加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸盐38g和n,n-二异丙基乙胺20g，加完后搅拌30min，缓慢升至50℃，然后反应20h，tlc监控2-甲酰基苯甲酸甲酯反应完全后，倒入水1000ml中，搅拌后用乙酸乙酯400ml萃取多次，合并有机相，浓缩后加入苯700ml中，再加入锌粉6.5g和无水乙酸300ml，在氮气保护下加热至回流，反应4h，过滤反应液，置于-10℃条件下，缓慢滴加硝酸6.3g，搅拌1h，升至室温，然后缓慢滴加饱和的碳酸钾溶液，调节反应系统为中性，加入二氯甲烷300ml萃取多次，经过无水硫酸镁干燥后，有机相浓缩后经硅胶柱层析分离得到4-硝基异吲哚啉-1-酮15.93g。
[0079]
实施例8
[0080][0081]
在带有搅拌器的反应装置中，把2-甲酸甲酯基苄溴16.5g和叠氮化钠8g加入到n,n-二甲基甲酰胺1000ml中，在室温条件下搅拌反应3h，然后加入氨水，在氮气保护下依次加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸盐38g和n,n-二异丙基乙胺20g，加完后搅拌30min，缓慢升至75℃，然后反应10h，倒入水1000ml中，搅拌后用乙酸乙酯400ml萃取多次，合并有机相，经无水硫酸钠干燥后浓缩，再加入四氢呋喃600ml中，然后加入二氯四羰基二铑2g、三苯基膦26g和水200ml，在氮气保护下加热至回流，反应14h；过滤反应液，真空浓缩后加入苯700ml和乙酸300ml的混合溶液，置于-10℃条件下，缓慢滴加硝酸10g，搅拌1h，升至室温，然后缓慢滴加碳酸钾溶液，调节反应系统为中性，加入二氯甲烷300ml萃取多次，经过无水硫酸镁干燥后，有机相浓缩后经硅胶柱层析分离得到4-硝基异吲哚啉-1-酮15.77g。
[0082]
实施例9
[0083][0084]
在带有搅拌器的反应装置中，把邻二苯甲酸17g加入到二氯亚砜300ml中，加热至60℃搅拌反应1.5h，然后真空浓缩反应体系，加入二氯甲烷500ml完全溶解浓缩物，置于-10℃条件下，搅拌下缓慢滴加含量为25％的氨水50ml，滴加完后，缓慢升至室温，搅拌1h，加入饱和氯化钠溶液200ml搅拌后分出有机相，经无水硫酸钠干燥后浓缩，然后加入1,4-二氧六环500ml和二甲基亚砜500ml的混合溶液，再加入氯化铝13.5g和过硫酸铵23g，加热至100℃搅拌1.5h，再加入偶氮二异丁腈8.2g保持温度继续搅拌反应5h，然后过滤反应液后真空浓缩，除去1,4-二氧六环，然后再加入乙酸乙酯500ml和饱和氯化钠溶液1000ml中，搅拌后分出有机相，浓缩后加入苯700ml和乙酸300ml的混合溶液，置于-10℃条件下，缓慢滴加硝酸10g，搅拌1h，升至室温，然后缓慢滴加碳酸钾溶液，调节反应系统为中性，加入二氯甲烷100ml萃取多次，经过无水硫酸镁干燥后，有机相浓缩后经硅胶柱层析(洗脱剂：pe:ea＝8:1)分离得到4-硝基异吲哚啉-1-酮16.02g。
[0085]
实施例10
[0086][0087]
在带有搅拌装置的反应瓶中，将4-硝基异吲哚啉酮18g和2-溴-1,5-戊二酸甲酯23g加入n,n-二甲基甲酰胺1000ml中，搅拌溶解后再加入氢氧化钡17g，将反应体系加热至100℃，搅拌反应3h后过滤反应液，然后转移至高压反应釜中，在向反应釜内加入edci 19g、1-羟基苯并三唑13.5g、醋酸钯2.3g和氨水100ml，在50℃条件下搅拌30min，降温至20℃后真空排除反应体系中的气体，向反应釜内通入氢气，使反应釜内的压力达到1.5mpa，然后升温50℃搅拌反应10h，反应结束后过滤反应液，滤液倒入水1000ml中，搅拌下用稀盐酸调节ph为6，然后用二氯甲烷300ml萃取反应体系多次，合并有机相，干燥后经浓缩再经硅胶柱层析分离得到来那度胺22.04g。
[0088]
实施例11
[0089][0090]
在带有搅拌器的反应瓶中，把n-丙酮基-2-溴苯胺23g、对甲苯磺酰肼22g、氢氧化钡25g和碘20g加入到甲苯1000ml中，在氮气保护下加热至100℃，反应3h，然后加入来那度
胺26g和乙酸铜9g，然后置于氧气氛围下，加热至50℃继续反应17h，向反应体系中加入2n的稀盐酸溶液1000ml，搅拌7.5h后过滤反应液，再加入水500ml，用乙酸乙酯500ml萃取多次，合并有机相后浓缩，浓缩物在丙酮400ml中，0℃条件下搅拌洗涤后抽滤，固体烘干后再经过硅胶柱层析(v石油醚：v乙酸乙酯＝8:1)分离得到化合物g1 39.8g。
[0091]1h nmr(400mhz,dmso-d6):11.03(s,1h),8.48(s,1h),7.85-7.83(m,1h),7.75-7.67(m,2h),7.31(t,j1＝8.0hz,j2＝8.0hz,1h),7.03-6.92(m,2h),6.34(t,j1＝4.0hz,j2＝8.0hz,1h),5.18-5.14(m,1h),4.60(d,j＝8.0hz,2h),4.38-4.21(m,2h),3.53-3.46(m,1h),3.02-2.92(m,1h),2.67(d,j＝16.0hz,1h),2.41-2.31(m,1h),2.13-2.03(m,1h).
[0092]
实施例12
[0093][0094]
在带有搅拌装置的反应瓶中，将来那度胺2.6g加入到盐酸50ml和水50ml中，搅拌至完全溶解，缓慢加入溶有亚硝酸钠0.81g的水溶液10ml，滴加进去，搅拌溶解后再加入叠氮化钠0.8g，在室温条件下搅拌10min，tlc监控原料反应完全后，将反应液倒入二氯甲烷50ml中，再加入n-丙炔基-2-溴苯胺2.1g和碘化亚铜0.2g，加热至回流反应5h，然后分出有机相，水相再用二氯甲烷20ml萃取多次，合并有机相，浓缩后经硅胶柱层析分离得到g1 4.37g。
[0095]
实施例13
[0096][0097]
在带有搅拌器的反应瓶中，把苯乙酮12g和对甲苯磺酰肼22g和氢氧化钡25g和碘20g加入到甲苯1000ml中，在氮气保护下加热至100℃，反应3h，然后加入来那度胺26g和乙酸铜9g，然后置于氧气氛围下，加热至60℃继续反应20h，向反应体系中加入2n的稀盐酸溶液1000ml，搅拌3.5h后过滤反应液，再加入水500ml，用乙酸乙酯400ml萃取多次，合并有机相后浓缩，浓缩物在丙酮400ml中，0℃条件下搅拌洗涤后抽滤，固体烘干后再经过硅胶柱层析(v石油醚：v乙酸乙酯＝8:1)分离得到化合物g2 30.7g。
[0098]1h nmr(400mhz,dmso-d6):11.02(s,1h),9.36(s,1h),8.16(d,j＝8.0hz,1h),7.97(d,j＝8.0hz,2h),7.91(d,j＝4.0hz,1h),7.82(t,j1＝8.0hz,j2＝8.0hz,1h),7.52(t,j1＝8.0hz,j2＝8.0hz,2h),7.41(t,j1＝8.0hz,j2＝8.0hz,1h),5.22-5.17(m,1h),4.86-4.72
(m,2h),2.97-2.88(m,1h),2.64-2.61(m,1h),2.08-2.03(m,1h).
[0099]
实施例14
[0100][0101]
将来那度胺(2.6g)和三氟甲磺酰叠氮1.9g加入到叔丁醇100ml、二氯甲烷10ml、水5ml和甲基叔丁基醚5ml的混合溶液中，再加入三乙胺3g、硫酸铜0.32g和碳酸氢钾1.0g，加热至50℃搅拌反应17h后，加入苯乙炔1.1g和抗坏血酸钠0.7g，在回流条件下反应5h，加入二氯甲烷200ml，过滤反应液，用稀盐酸调节反应液ph为中性，分出有机相，水相用二氯甲烷100ml萃取两次，合并有机相经无水硫酸镁干燥后，蒸除溶剂得到固体，经甲醇重结晶提纯得到化合物g2 3.35g。
[0102]
实施例15
[0103][0104]
在带有搅拌装置的反应瓶中，将来那度胺2.6g加入到盐酸50ml和水50ml中，搅拌至完全溶解，缓慢加入溶有亚硝酸钠0.81g的水溶液10ml，滴加进去，搅拌溶解后再加入叠氮化钠0.8g，在室温条件下搅拌10min，tlc监控原料反应完全后，将反应液倒入二氯甲烷50ml中，再加入苯乙炔1.1g和碘化亚铜0.2g，加热至回流反应9h，然后分出有机相，水相再用二氯甲烷20ml萃取多次，合并有机相，浓缩后经硅胶柱层析分离得到g2 3.71g。
[0105]
实施例16
[0106][0107]
在带有搅拌器的反应瓶中，把2,4-二氟苯乙酮1.6g、对甲苯磺酰肼2.2g、氢氧化钡2.5g和碘2g加入到甲苯300ml中，在氮气保护下加热至100℃，反应5h，然后加入来那度胺2.6g和乙酸铜1g，然后置于氧气氛围下，加热至50℃继续反应24h，向反应体系中加入2n的
稀盐酸溶液100ml和饱和氯化钠溶液50ml，搅拌2h后再补加水100ml，用乙酸乙酯200ml萃取多次，合并有机相后浓缩，浓缩物用二氯甲烷200ml溶解，再用氯化钠溶液洗涤多次，无水硫酸镁干燥后再次浓缩，最后经过硅胶柱层析(v石油醚：v乙酸乙酯＝10:1)分离得到化合物g3 2.41g。
[0108]1h nmr(400mhz,dmso-d6):11.04(s,1h),9.31(s,1h),8.14-8.12(m,1h),7.95(d,j＝8.0hz,2h),7.92(d,j＝4.0hz,1h),7.50-7.48(m,1h),7.41(t,j1＝8.0hz,j2＝8.0hz,1h),5.22-5.18(m,1h),4.89-4.85(m,1h),4.77-4.75(m,1h),2.97-2.88(m,1h),2.64-2.61(m,1h),2.08-2.05(m,1h).
[0109]
实施例17
[0110]
从co2培养箱中取出具有活力的人宫颈癌hela细胞培养皿，分别进行如下操作：在酒精灯旁进行无菌操作，打开皿盖，吸出培养液于废液缸中，用2ml的pbs洗培养瓶中的培养液两次，用0.25％的胰蛋白酶进行消化，待观察发现出现细胞间隙增大、细胞变成小圆圈形状时终止消化，使用移液枪吹打培养瓶底部使细胞脱落，将所得的细胞悬浮液转移至无菌离心管中，设置离心机为1000r/min，3min，进行离心，然后缓慢倾倒离心管中的上清液，加入2～5ml的培养液，于倒置显微镜下进行细胞计数。根据计数结果，将处于对数期生长的具有活力的人宫颈癌hela细胞以每孔50000个细胞的数目铺于96孔细胞培养板中，用含10％胎牛血清的rpmi1640培养5～6小时，加入100μl用培养基稀释好的待测化合物g1,g2,g3和来拿度胺(浓度分别为0.1μm，1.0μm，10.0μm，0.3μm，3.0μm，30.0μm)和重组人源干扰素γ(终浓度为100ng/mg)激活hela细胞中的ido1表达。操作完后将96孔细胞培养板放入富含5％二氧化碳的37℃细胞培养箱中培养18小时后，用一定量的6.1n的三氯乙酸终止反应，然后置于50℃孵育30分钟。细胞培养液经沉淀后，取上清液用对二甲基氨基苯甲醛显色后经多功能酶标仪检测480nm处的吸光度。将不含药物只有ifnγ培养基处理的组作为100％(at)，只含0.1％dmso培养基处理的组作为空白对照0％(ab)；根据下面的公式计算不同条件处理时的吸光度：吸光度％＝(a-ab)/(at-ab)，a：药物处理 100ng/ml ifnγ，ab：空白对照，at：没有药物只含有100ng/ml ifnγ；根据使用graph pad prism 8.0软件生成具有ic
50
值的抑制曲线。具体测试结果如下表1所示：
[0111]
表1-测试结果
[0112]
[0113][0114]
化合物g1对ido1的抑制活性最好，达到0.17μm，活性比带有苯基结构的效果好，因为苯胺基结构可以插入ido1靶点口袋内部的疏水性口袋，并把三氮唑结构牵引至疏水性口袋旁边的血红素上方，可以与血红素中的亚铁离子形为配位能力。我没进而通过计算机药物辅助设计手段，通过与ido1靶点4pk5的分子对接可以发现，2-溴苯胺基结构可以插入疏水性口袋，三氮唑可以与血红素发生作用，来拿度胺结构处于ido1靶点蛋白的外部位置，由于马来酰亚胺结构具有亲水性，因此不但也可以与ido1外围的亲水性氨基酸发生作用关系，可以吸引e3泛素酶靠近，进而对ido1靶点蛋白进行泛素化；而苯基结构和2,4-二氟苯基结构，由于结构太短，不能够把三氮唑牵引至主要的活性靶点附近，作用力比较小。
[0115]
尽管通过参考附图并结合优选实施例的方式对本发明进行了详细描述，但本发明并不限于此。在不脱离本发明的精神和实质的前提下，本领域普通技术人员可以对本发明的实施例进行各种等效的修改或替换，而这些修改或替换都应在本发明的涵盖范围内/任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以权利要求所述的保护范围为准。