编码ALDH2多肽的mRNA分子、应用及mRNA药物的制作方法

技术特征：
1.编码aldh2多肽的核酸分子，其特征在于，包括(a)～(c)任一种：(a)具有seq id no.15～18任一条所示的编码aldh2多肽的核苷酸序列的mrna分子；(b)在(a)限定的核苷酸序列中经过取代、缺失或添加一个或几个核苷酸，具有编码aldh2多肽功能且与原核苷酸序列具有相同gc碱基对百分比含量的由(a)衍生的mrna分子；(c)在严格条件下与(a)或(b)限定的mrna分子杂交，且aldh2多肽的核酸分子。2.构建体，其特征在于，所述构建体包括权利要求1所述的核酸分子，所述构建体的核苷酸序列还包括utr序列、5’帽子和poly(a)序列；优选地，所述5’帽子包括7-甲基-鸟苷-5
’‑
三磷酸-5
’‑
腺苷、鸟苷-5
’‑
三磷酸-5
’‑
腺苷、7-甲基-鸟苷-5
’‑
三磷酸-5
’‑
鸟苷、鸟苷-5
’‑
三磷酸-5
’‑
鸟苷和m7g(5’)(2
’‑
omea)pg中的一种或几种；优选为m7g(5’)(2
’‑
omea)pg；优选地，所述poly(a)序列中碱基a的数量为60～120，进一步优选为100；优选地，所述utr序列包括5’utr序列和3’utr序列；进一步优选地，所述5’utr序列具有seq id no.1或seq id no.13所示的核苷酸序列；进一步优选地，所述3’utr序列具有seq id no.3或seq id no.14所示的核苷酸序列。3.权利要求1所述核酸分子或权利要求2所述构建体在制备mrna药物中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述mrna药物的用途包括(
ⅰ
)或(
ⅱ
)：(
ⅰ
)补充aldh2酶；(
ⅱ
)预防和/或治疗酒精代谢性疾病；优选地，所述酒精代谢性疾病包括酒精引发的肝损伤或酒精性肝炎。5.mrna药物，其特征在于，所述mrna药物包括权利要求1所述的核酸分子或权利要求2所述的构建体。6.根据权利要求5所述的mrna药物，其特征在于，所述mrna药物还包括包裹权利要求1所述核酸分子或权利要求2所述构建体的脂质纳米颗粒，所述脂质纳米颗粒组成包括dlin-mc3-dma、dscp、胆固醇和peg-dmg。7.根据权利要求6所述的mrna药物，其特征在于，所述脂质纳米颗粒按照摩尔份数计包括，20～50份的dlin-mc3-dma、5～20份的dscp、20～50份的胆固醇和1～5份的peg-dmg。8.根据权利要求7所述的mrna药物，其特征在于，所述脂质纳米颗粒按照摩尔份数计包括50份的dlin-mc3-dma、10份的dscp、38.5份的胆固醇和1.5份peg-dmg。9.权利要求5～8任一项所述mrna药物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：(a)将编码aldh2多肽的rna溶解于缓冲液，将浓度调整为0.05mg/ml～0.5mg/ml，得到水相；(b)将dlin-mc3-dma、dopg、胆固醇和peg-dmg溶解于无水乙醇，将有机相中的脂质成分的浓度调整至5mg/ml～7mg/ml，得到有机相；(c)将步骤(a)的水相和步骤(b)的有机相按照1：3的体积比混合，除去乙醇后浓缩至体系中的mrna的浓度为50μg/ml～1000μg/ml，得到包含编码aldh2多肽的rna的脂质纳米颗粒。10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：(a)将编码aldh2多肽的rna溶解于ph4的柠檬酸盐缓冲液，将浓度调整为0.1mg/ml，得到水相；
(b)将dlin-mc3-dma、dopg、胆固醇和peg-dmg溶解于无水乙醇，将有机相中的脂质成分的浓度调整至6mg/ml，得到有机相；(c)将步骤(a)的水相和步骤(b)的有机相按照1：3的体积比，使用微流控设备，按照12ml/min的流速混合，混合液立刻用ph7.4的pbs溶液稀释100倍，并使用切向流过滤除去溶液中乙醇，然后浓缩至体系中的mrna的浓度为550μg/ml，得到包含编码aldh2多肽的rna的脂质纳米颗粒。

技术总结
本发明涉及制药技术领域，尤其是涉及编码ALDH2多肽的mRNA分子、应用及mRNA药物。经过小鼠生存实验验证表明，采用本发明提供的编码ALDH2多肽的mRNA分子制备得到的mRNA药物，能够提高白酒灌胃小鼠的生存率，并且生存率随着药物剂量的提高而提高。同时Western Blot检测、ALDH2多肽活性检测、乙醇代谢产物含量检测和肝脏病理切片检测的多种检测结果表明，该mRNA药物能够在小鼠体内成功表达ALDH2多肽，显著提高ALDH2多肽活性，并在肝脏发挥促进乙醛代谢的作用，从而提高白酒灌胃小鼠生存率。从而提高白酒灌胃小鼠生存率。从而提高白酒灌胃小鼠生存率。


技术研发人员：彭育才 张振东 方子辉 刘隽 刘琪 罗丽平 雷奕欣 李爽
受保护的技术使用者：珠海丽凡达生物技术有限公司
技术研发日：2022.06.21
技术公布日：2022/8/12