一种碳苷黄酮-山萘酚8-C-葡萄糖苷的制备方法

技术特征：
1.一种碳苷黄酮-山萘酚8-c-葡萄糖苷的制备方法，其特征在于：将重组菌bl-tccgt-i在含有链霉素和氯霉素的lb培养基中过夜培养，转接到添加链霉素和氯霉素的lb培养基中，振荡培养后加入异丙基β-d-硫代吡喃半乳糖苷诱导剂，诱导培养；随后以离心收获重组菌株细胞，并使用添加链霉素和氯霉素的m9-gly培养基将重组菌株静息细胞重悬至od600＝40；随后添加山萘酚和诱导剂异丙基β-d-硫代吡喃半乳糖苷，同时加入二甲基亚砜和纤维二糖，换用八层纱布后以继续转化培养；在培养过程中，在24h和72h时，同时向培养基中加入山萘酚和纤维二糖，在24h、48h、72h和96h时向培养基中加入甘油；对培养后的产物进行超声树脂吸附，随后同时进行超声处理和乙醇解吸。2.如权利要求1所述碳苷黄酮-山萘酚8-c-葡萄糖苷的制备方法，其特征在于：所述重组菌的制备方法为将trollius chinensis来源的c-glycosyltransferase基因、escherichia coli w来源的sucrose permease基因、saccharophagus degradans来源的cellobiose phosphorylase基因和bifidobacterium bifidum来源的utp-glucose-1-phosphate uridylyltransferase基因的重组质粒导入大肠杆菌，获得的重组菌bl-tccgt-i。3.如权利要求2所述碳苷黄酮-山萘酚8-c-葡萄糖苷的制备方法，其特征在于：所述重组菌还包括重组菌bl-tccgt，bl star-tccgt，jm109-tccgt和er2566-tccgt，通过以下方法制备：将trollius chinensis来源的c-glycosyltransferase基因导入不同的大肠杆菌，获得重组菌bl-tccgt，bl star-tccgt，jm109-tccgt和er2566-tccgt。4.如权利要求2所述碳苷黄酮-山萘酚8-c-葡萄糖苷的制备方法，其特征在于：所述重组菌还包括重组菌bl star-tccgt-i，jm109-tccgt-i和er2566-tccgt-i，通过以下方法制备：将trollius chinensis来源的c-glycosyltransferase基因，escherichia coliw来源的sucrose permease基因，saccharophagus degradans来源的cellobiose phosphorylase基因和bifidobacterium bifidum来源的utp-glucose-1-phosphate uridylyltransferase基因的重组质粒导入不同的大肠杆菌，获得重组菌bl star-tccgt-i，jm109-tccgt-i和er2566-tccgt-i。5.如权利要求2所述碳苷黄酮-山萘酚8-c-葡萄糖苷的制备方法，其特征在于：所述重组菌还包括重组菌bl-tccgt-ii，bl star-tccgt-ii，jm109-tccgt-ii和er2566-tccgt-ii，通过以下方法制备：将trollius chinensis来源的c-glycosyltransferase基因，escherichia coliw来源的sucrose permease基因，bifidobacterium adolescentis来源的sucrose phosphorylase基因和bifidobacterium bifidum来源的utp-glucose-1-phosphate uridylyltransferase基因的重组质粒导入不同的大肠杆菌，获得重组菌bl-tccgt-ii，bl star-tccgt-ii，jm109-tccgt-ii和er2566-tccgt-ii。6.如权利要求2～5所述任一碳苷黄酮-山萘酚8-c-葡萄糖苷的制备方法，其特征在于：
所述trollius chinensis来源的c-glycosyltransferase基因序列为优化后基因，核苷酸序列如seq id no.1所示；所述escherichia coliw来源的sucrose permease基因序列并携带启动子和核糖体结合位点，核苷酸序列如seq id no.2所示；所述bifidobacterium adolescentis来源的sucrose phosphorylase基因序列为优化后基因，核苷酸序列如seq id no.3所示；所述bifidobacterium bifidum来源的utp-glucose-1-phosphate uridylyltransferase基因序列为优化后基因，核苷酸序列如seq id no.4所示；所述saccharophagus degradans来源的cellobiose phosphorylase基因序列为优化后基因，核苷酸序列如seq id no.5所示。7.如权利要求1所述碳苷黄酮-山萘酚8-c-葡萄糖苷的制备方法，其特征在于：利用大孔树脂hpd100对山萘酚8-c-葡萄糖苷进行吸附，吸附条件为80rpm，25℃，超声功率0w；以25℃，240w超声功率和80％乙醇解吸1小时，获得的样品经真空干燥得到山萘酚8-c-葡萄糖苷制品。8.如权利要求7所述碳苷黄酮-山萘酚8-c-葡萄糖苷的制备方法，其特征在于：所述大孔树脂还可选择nka-9，dm 301，ab-8，d101和hp20。9.如权利要求7所述碳苷黄酮-山萘酚8-c-葡萄糖苷的制备方法，其特征在于：所述吸附条件中超声功率可以选择0-240w，吸解条件中超声功率可选择0-280w，可选乙醇的体积分数为：40-100％。10.如权利要求1所述碳苷黄酮-山萘酚8-c-葡萄糖苷的制备方法，其特征在于：所述lb培养基中链霉素添加量为40～60g/ml，氯霉素添加量为30～40g/ml，山萘酚添加量为2～6g/l，异丙基β-d-硫代吡喃半乳糖苷添加量为0.02mm，二甲基亚砜添加量为总体积分数2～6％，纤维二糖添加量为8～12g/l。

技术总结
本发明公开了一种碳苷黄酮-山萘酚8-C-葡萄糖苷的制备方法，以构建的重组菌为基础，通过转化策略的调整及转化条件的优化，抑制了山萘酚8-C-葡萄糖苷的降解，大幅度提高了重组菌产山萘酚8-C-葡萄糖苷的产量，山萘酚8-C-葡萄糖苷的产量达到16.6g/L，底物的摩尔转化率达到94.87％。在此基础上，通过大孔树脂的筛选和纯化体系的优化，实现了山萘酚8-C-葡萄糖苷的高效制备。高效制备。高效制备。


技术研发人员：裴建军 吴杨宝 刘洋 赵林果
受保护的技术使用者：南京林业大学
技术研发日：2022.05.27
技术公布日：2022/8/12