胱氨酸结支架平台的制作方法

技术特征：
1.一种结合血管内皮生长因子a(vegf-a)的非天然存在的胱氨酸结肽(ckp)，其中所述ckp包含胱氨酸支架结构：z1c1l1c2l2c3l3c4l4c5l5c6z2其中：z1和z2是任意氨基酸；l1是环1并且具有选自由以下组成的组的结构：x1x2x3x4x5x6(seq id no:2)、x1x2x3x4x5x6x7(seq id no:3)、x1x2x3x4x5x6x7x8(seq id no:4)、x1x2x3x4x5x6x7x8x9(seq id no:5)和x1x2x3x4x5x6x7x8x9x
10
(seq id no:6)，其中x
1-x
10
中的每一个是任意氨基酸；l2是环2并且具有结构：x1x2x3x4x5(seq id no:7)，其中x1–
x5中的每一个是任意氨基酸或非天然氨基酸；l3是环3并且具有结构：x1x2x3，其中x1–
x3中的每一个是任意氨基酸或非天然氨基酸；l4是环4并且具有结构：x1，其中x1是任意氨基酸或非天然氨基酸；l5是环5并且具有结构：x1x2x3x4x5(seq id no:7)，其中x1–
x5中的每一个是任意氨基酸或非天然氨基酸；其中所述非天然氨基酸选自由以下组成的组：l-炔丙基甘氨酸-peg
6-、l-磺基酪氨酸、l-正亮氨酸、l-1-萘基丙氨酸、l-2-萘基丙氨酸、l-2-氯代色氨酸、l-3-氟代酪氨酸、l-4-氟苯丙氨酸、γ-苄基-l-脯氨酸、γ-(4-氟-苄基)-l-脯氨酸、4-oh-l-脯氨酸、4-氟-l-脯氨酸、4-[4-(三氟甲基)-苄基]-l-脯氨酸、3,4-二氟-l-苯丙氨酸、3,4-二氯-l-苯丙氨酸、4-氯-l-苯丙氨酸、3-f,4-cl-l-苯丙氨酸、2-吡啶酮(nh对位)-l-丙氨酸、吡啶酮(nh间位)-l-丙氨酸、3-(1-n-甲基吲哚)-l-丙氨酸、3-(1-n-乙基吲哚)-l-丙氨酸、3-(1-n-异丙基吲哚)-l-丙氨酸、3-(5-氮杂-吲哚)-l-丙氨酸、4-甲基-l-苯丙氨酸、2-萘基-l-丙氨酸、l-4,4
’‑
联苯基丙氨酸、3-(3-喹啉基)-l-丙氨酸、3-(2-喹啉基)-l-丙氨酸、3-(2-喹喔啉基)-l-丙氨酸、4-甲基-2-吡啶基-丙氨酸、4-乙基-2-吡啶基-l-丙氨酸、苯并噻唑-l-丙氨酸、苯并噻吩-l-丙氨酸、3-异喹啉基-l-丙氨酸、叔丁基-l-丙氨酸(也称为l-新戊基甘氨酸)、3-环丁基-l-丙氨酸、环戊基-l-丙氨酸、5,5,5-三氟-l-亮氨酸、叔丁基-l-甘氨酸(也称为l-叔-亮氨酸)、l-环戊基甘氨酸、l-环丁基甘氨酸、3,4-羟基-l-苯丙氨酸、3,4-氟-l-苯丙氨酸、3-氟,4-oh-l-苯丙氨酸、2-氯-l-酪氨酸、2-甲基-l-酪氨酸、2-乙基-l-酪氨酸、4-(萘-1-酚)-l-丙氨酸、d-丝氨酸、l-β-高丝氨酸、l-β-丙氨酸、n-α-甲基甘氨酸、甘氨酰胺、丙三醇甘氨酸酯、乙二醇甘氨酸酯、氧杂环丁烷-3-基甘氨酸酯和甘氨酸吗啉酰胺；其中所述ckp以500pm或更佳的亲和力结合vegf-a。2.一种非天然存在的胱氨酸结肽(ckp)，其包含选自由以下组成的组的氨基酸：gcdvx1qpywgcgpdi-d/e-cls-n/k/x
2-cichwynscg(seq id no:534)、gcdvx1qpywgcgpdi-n/k/x
2-cls-d/e-cichwynscg(seq id no:535)、gcnix1lpywgcgrdf-d/e-cme-n/k/x
2-cicqyyqscg(seq id no:538)、gcnix1lpywgcgrdf-n/k/x
2-cme-d/e_cicqyyqscg(seq id no:539)、gcnix1lpfwgcgrdf-d/e-cvs-n/k/x
2-cicqyyqscg(seq id no:540)和gcnix1lpfwgcgrdf-n/k/x
2-cvs-d/e-cicqyyqscg(seq id no:541)，其中x1是正亮氨酸并且x2是鸟氨酸。3.一种结合vegf-a的非天然存在的胱氨酸结肽(ckp)，其中所述ckp包含胱氨酸支架结构：
z1c1l1c2l2c3l3c4l4c5l5c6z2其中：z1和z2是任意氨基酸，多于一个氨基酸，或非天然氨基酸；l1是环1并且具有选自由以下组成的组的结构：x1x2x3x4x5x6x7x8、x1x2x3x4x5x6x7x8x9和x1x2x3x4x5x6x7x8x9x
10
，其中x
1-x
10
中的每一个是任意氨基酸或非天然氨基酸；l2是环2并且具有结构：x1x2x3x4x5，其中x1–
x5中的每一个是任意氨基酸或非天然氨基酸；l3是环3并且具有结构：x1x2x3，其中x1–
x3中的每一个是任意氨基酸或非天然氨基酸；l4是环4并且具有结构：x1，其中x1是任意氨基酸或非天然氨基酸；l5是环5并且具有结构：x1x2x3x4x5，其中x1–
x5中的每一个是任意氨基酸或非天然氨基酸；其中所述非天然氨基酸选自由以下组成的组：l-炔丙基甘氨酸-peg
6-、l-磺基酪氨酸、l-正亮氨酸、l-1-萘基丙氨酸、l-2-萘基丙氨酸、l-2-氯代色氨酸、l-3-氟代酪氨酸、l-4-氟苯丙氨酸、γ-苄基-l-脯氨酸、γ-(4-氟-苄基)-l-脯氨酸、4-oh-l-脯氨酸、4-氟-l-脯氨酸、4-[4-(三氟甲基)-苄基]-l-脯氨酸、3,4-二氟-l-苯丙氨酸、3,4-二氯-l-苯丙氨酸、4-氯-l-苯丙氨酸、3-f,4-cl-l-苯丙氨酸、2-吡啶酮(nh对位)-l-丙氨酸、吡啶酮(nh间位)-l-丙氨酸、3-(1-n-甲基吲哚)-l-丙氨酸、3-(1-n-乙基吲哚)-l-丙氨酸、3-(1-n-异丙基吲哚)-l-丙氨酸、3-(5-氮杂-吲哚)-l-丙氨酸、4-甲基-l-苯丙氨酸、2-萘基-l-丙氨酸、l-4,4
’‑
联苯基丙氨酸、3-(3-喹啉基)-l-丙氨酸、3-(2-喹啉基)-l-丙氨酸、3-(2-喹喔啉基)-l-丙氨酸、4-甲基-2-吡啶基-丙氨酸、4-乙基-2-吡啶基-l-丙氨酸、苯并噻唑-l-丙氨酸、苯并噻吩-l-丙氨酸、3-异喹啉基-l-丙氨酸、叔丁基-l-丙氨酸(也称为l-新戊基甘氨酸)、3-环丁基-l-丙氨酸、环戊基-l-丙氨酸、5,5,5-三氟-l-亮氨酸、叔丁基-l-甘氨酸(也称为l-叔-亮氨酸)、l-环戊基甘氨酸、l-环丁基甘氨酸、3,4-羟基-l-苯丙氨酸、3,4-氟-l-苯丙氨酸、3-氟,4-oh-l-苯丙氨酸、2-氯-l-酪氨酸、2-甲基-l-酪氨酸、2-乙基-l-酪氨酸、4-(萘-1-酚)-l-丙氨酸、d-丝氨酸、l-β-高丝氨酸、l-β-丙氨酸、n-α-甲基甘氨酸、甘氨酰胺、丙三醇甘氨酸酯、乙二醇甘氨酸酯、氧杂环丁烷-3-基甘氨酸酯和甘氨酸吗啉酰胺；并且其中参照具有seq id no:1中所示的氨基酸序列的野生型喷瓜胰蛋白酶抑制剂eeti-ii蛋白，所述ckp具有改变的二硫键连接；其中所述改变的二硫键连接是c1-c4、c2-c3和c5-c6；并且其中所述ckp具有至少20％的α螺旋含量百分比。4.一种非天然存在的ckp，其与抗体g6.31竞争结合vegf-a。5.一种非天然存在的ckp，其与根据权利要求1-4中任一项所述的ckp竞争结合vegf-a。6.一种结合vegf-a上的表位的非天然存在的ckp，所述表位包括至少一个选自由以下组成的组的氨基酸残基：v14、v15、f17、d19、y21、q22、y25、i46、k48、n62、d63、l66、m81、i83、k84、p85、h86、g88、q89、i91、c104、r105和p106。7.根据权利要求1-6中任一项所述的ckp，其与治疗剂缀合。8.一种治疗受试者中以血管生成和/或血管通透性或渗漏为特征的眼部疾病的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求1-7中任一项所述的ckp。9.一种制剂，其包含根据权利要求1-7中任一项所述的ckp和plga。10.一种结合人低密度脂蛋白受体相关蛋白6(lrp6)的非天然存在的胱氨酸结肽(ckp)，其中所述ckp包含胱氨酸支架结构：
z1c1l1c2l2c3l3c4l4c5l5c6z2；其中：z1和z2是任意氨基酸；l1是环1并且具有选自由以下组成的组的结构：x1x2x3x4x5x6、x1x2x3x4x5x6x7、x1x2x3x4x5x6x7x8、x1x2x3x4x5x6x7x8x9和x1x2x3x4x5x6x7x8x9x
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，其中x
1-x
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中的每一个是任意氨基酸；l2是环2并且具有结构：x1x2x3x4x5，其中x1–
x5中的每一个是任意氨基酸；l3是环3并且具有结构：x1x2x3，其中x1–
x3中的每一个是任意氨基酸；l4是环4并且具有结构：x1，其中x1是任意氨基酸；并且l5是环5并且具有结构：x1x2x3x4x5，其中x1–
x5中的每一个是任意氨基酸。

技术总结
本发明提供结合VEGF-A的非天然存在的胱氨酸结肽(CKP)。另外，提供使用结合VEGF-A的非天然存在的CKP的方法，所述方法包括诊断和治疗组合物和方法。还提供结合低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP6)的非天然的CKP。相关蛋白6(LRP6)的非天然的CKP。相关蛋白6(LRP6)的非天然的CKP。


技术研发人员：拉米
受保护的技术使用者：豪夫迈
技术研发日：2016.09.15
技术公布日：2022/7/29