基于宏基因组学的农产品表面的微生物采样及检测方法

技术特征：
1.一种基于宏基因组学的农产品表面的微生物采样方法，其特征在于，包括以下步骤：s1、使用一次性医用消毒棉签蘸取无菌生理盐水，在一次性灭菌规格板规定的区域内进行采样；s2、在农产品表面采集样品，取所述步骤s1所得棉签在每个区域打圈50次；s3、将所述步骤s2所得采样后的棉签放入无菌pbw溶液中，4℃下保存备用。2.如权利要求1所述的基于宏基因组学的农产品表面的微生物采样方法，其特征在于，所述步骤s1中消毒为使用75％酒精消毒。3.如权利要求1所述的基于宏基因组学的农产品表面的微生物采样方法，其特征在于，所述步骤s1中的无菌生理盐水为：体积分数为0.9％生理盐水在121℃下，进行高压蒸汽灭菌15分钟制得。4.如权利要求1所述的基于宏基因组学的农产品表面的微生物采样方法，其特征在于，所述步骤s2中采集样品的区域大小为3cm*3cm。5.如权利要求1所述的基于宏基因组学的农产品表面的微生物采样方法，其特征在于，所述步骤s3中的无菌pbw溶液的制备方法为：取蛋白胨10g、牛肉膏3g、氯化钠5g、蒸馏水1000g，调整ph值至7.4后，在121℃下进行高压蒸汽灭菌15分钟。6.一种基于宏基因组学的农产品表面的微生物的检测方法，其特征在于，使用如权利要求1至5中任一项所述的基于宏基因组学的农产品表面的微生物采样方法进行采样，所述检测方法还包括以下步骤：s4、样品预处理：将所述步骤s3得的pbw溶液及棉签振荡后取出所述棉签，离心收集下层菌液于收集管中，在所述收集管中添加溶菌酶混合均匀，并37℃孵育15min，形成样本溶液；s5、核酸dna提取：使用所述步骤s4得到的样本溶液进行核酸dna的提取；s6、高通量测序文库的构建：采用mgieasy酶切dna文库制备试剂套装进行样本dna文库构建；s7、高通量测序并进行分析。

技术总结
本发明涉及一种基于宏基因组学的农产品表面的微生物采样及检测方法，属于微生物技术领域。采样方法包括以下步骤：使用一次性医用消毒棉签蘸取无菌生理盐水，在一次性灭菌规格板规定的区域内进行采样；在农产品表面采集样品，取棉签在每个区域打圈50次；将采样后的棉签放入无菌Pbw溶液中，4℃下保存备用。还提供一种基于宏基因组学的农产品表面的微生物检测方法，其中在预处理过程中添加溶菌酶。本申请的采样过程不会对农产品表面造成损伤，避免了侵入性采样对农产品造成的刺激，安全性更高，适合农产品采样使用。且收集到的生物量较大，后续最终获得的总DNA浓度及质量能够达到微生物群落分析测序的要求。微生物群落分析测序的要求。


技术研发人员：周宇轩 李恒 周哲敏 刘笑
受保护的技术使用者：苏州大学
技术研发日：2022.05.23
技术公布日：2022/7/15