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基于数字PCR技术的ATRX和KDM5A突变检测的试剂盒、装置及应用的制作方法

2022-07-13 14:34:55 来源:中国专利 TAG:
基于数字pcr技术的atrx和kdm5a突变检测的试剂盒、装置及应用
技术领域
1.本发明涉及测序文库技术领域,具体涉及基于数字pcr技术的atrx和kdm5a 突变检测的试剂盒、装置及应用。


背景技术:

2.二代测序也称深度测序、大规模平行测序,其核心思想是边合成边测序 (sequencingby synthesis),即通过捕捉新合成的末端的标记来确定dna
3.的序列,目前主要有三种主流的测序平台:illumina公司hiseq平台;高通量测序技术是对传统测序一次革命性的改变,一次对几十万到几百万条dna 分子进行序列测定,因此在有些文献中称其为下一代测序技术(nextgeneration sequencing)足见其划时代的改变,同时高通量测序使得对一个物种的转录组和基因组进行细致全貌的分析成为可能,所以又被称为深度测序。
4.现有的基于数字pcr技术的试剂盒检测效率差,精准度不高,基于此,需进一步的改进处理。


技术实现要素:

5.本发明的目的在于基于数字pcr技术的atrx和kdm5a突变检测的试剂盒、装置及应用,以解决上述背景技术中提出的问题。
6.为实现上述目的,本发明提供如下技术方案:
7.基于数字pcr技术的atrx和kdm5a突变检测的试剂盒,包括突变型探针、浸润剂和添加剂按照重量比4:2:1构成;
8.所述浸润剂的制备方法为:
9.将十二烷基硫酸钠5-10份、盐酸1-3份和壳聚糖溶液1-5份进行混合,混合转速为100-300r/min,混合时间为10-20min,混合结束;
10.然后再加入改性二氧化硅1-5份,继续以100-200rmin的转速搅拌 20-30min,搅拌结束,随后再加入改性硅灰石1-3份,得到浸润剂。
11.优选地,所述改性二氧化硅的改性方法为:将二氧化硅送入到100-300℃下煅烧10-20min,煅烧结束,然后变温降至50-60℃,随后送入到水中静置,冷却至室温。
12.优选地,所述变温降至处理的具体操作步骤为:以1-5℃/min的速率降至 50-60℃。
13.优选地,所述壳聚糖溶液的质量分数为5-10%。
14.优选地,所述壳聚糖溶液的质量分数为7.5%。
15.优选地,所述改性硅灰石的改性方法为:将硅灰石送入到煅烧炉中进行煅烧,煅烧温度为100-300℃,煅烧时间为20-30min,煅烧结束,自然冷却至室温,得到改性硅灰石。
16.优选地,所述添加剂为氯化钠、氯化镁按照重量比3:1混合而成。
17.一种基于数字pcr技术的atrx和kdm5a突变检测的试剂盒用的装置,包括试剂盒、样品采集、基因采集和数据分析。
18.一种基于数字pcr技术的atrx和kdm5a突变检测的试剂盒用的装置在基因检测中的应用。
19.与现有技术相比,本发明的有益效果是:
20.本发明的试剂盒采用突变型探针、浸润剂和添加剂配制而成,突变型探针进行探测基因,浸润剂中的壳聚糖溶液、十二烷基硫酸钠能够将探针更好的探测基因,效果更为精准,同时通过改性二氧化硅的高比表面积,增强了产品原料的混合反应效果;加入的添加剂为原料提高能力,进一步的提高探测精准度。
具体实施方式
21.下面将结合本发明实施例,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
22.本实施例的基于数字pcr技术的atrx和kdm5a突变检测的试剂盒,包括突变型探针、浸润剂和添加剂按照重量比4:2:1构成;
23.所述浸润剂的制备方法为:
24.将十二烷基硫酸钠5-10份、盐酸1-3份和壳聚糖溶液1-5份进行混合,混合转速为100-300r/min,混合时间为10-20min,混合结束;
25.然后再加入改性二氧化硅1-5份,继续以100-200rmin的转速搅拌 20-30min,搅拌结束,随后再加入改性硅灰石1-3份,得到浸润剂。
26.本实施例的改性二氧化硅的改性方法为:将二氧化硅送入到100-300℃下煅烧10-20min,煅烧结束,然后变温降至50-60℃,随后送入到水中静置,冷却至室温。
27.本实施例的变温降至处理的具体操作步骤为:以1-5℃/min的速率降至 50-60℃。
28.本实施例的壳聚糖溶液的质量分数为5-10%。
29.本实施例的壳聚糖溶液的质量分数为7.5%。
30.本实施例的改性硅灰石的改性方法为:将硅灰石送入到煅烧炉中进行煅烧,煅烧温度为100-300℃,煅烧时间为20-30min,煅烧结束,自然冷却至室温,得到改性硅灰石。
31.本实施例的添加剂为氯化钠、氯化镁按照重量比3:1混合而成。
32.本实施例的一种基于数字pcr技术的atrx和kdm5a突变检测的试剂盒用的装置,包括试剂盒、样品采集、基因采集和数据分析。
33.本实施例的一种基于数字pcr技术的atrx和kdm5a突变检测的试剂盒用的装置在基因检测中的应用。
34.实施例1.
35.本实施例的基于数字pcr技术的atrx和kdm5a突变检测的试剂盒,包括突变型探针、浸润剂和添加剂按照重量比4:2:1构成;
36.所述浸润剂的制备方法为:
37.将十二烷基硫酸钠5份、盐酸1份和壳聚糖溶液1份进行混合,混合转速为100r/
min,混合时间为10min,混合结束;
38.然后再加入改性二氧化硅1份,继续以100rmin的转速搅拌20min,搅拌结束,随后再加入改性硅灰石1份,得到浸润剂。
39.本实施例的述改性二氧化硅的改性方法为:将二氧化硅送入到100℃下煅烧 10min,煅烧结束,然后变温降至50℃,随后送入到水中静置,冷却至室温。
40.本实施例的变温降至处理的具体操作步骤为:以1℃/min的速率降至50℃。
41.本实施例的壳聚糖溶液的质量分数为5%。
42.本实施例的改性硅灰石的改性方法为:将硅灰石送入到煅烧炉中进行煅烧,煅烧温度为100℃,煅烧时间为20min,煅烧结束,自然冷却至室温,得到改性硅灰石。
43.本实施例的添加剂为氯化钠、氯化镁按照重量比3:1混合而成。
44.本实施例的一种基于数字pcr技术的atrx和kdm5a突变检测的试剂盒用的装置,包括试剂盒、样品采集、基因采集和数据分析。
45.本实施例的一种基于数字pcr技术的atrx和kdm5a突变检测的试剂盒用的装置在基因检测中的应用。
46.实施例2.
47.本实施例的基于数字pcr技术的atrx和kdm5a突变检测的试剂盒,包括突变型探针、浸润剂和添加剂按照重量比4:2:1构成;
48.所述浸润剂的制备方法为:
49.将十二烷基硫酸钠10份、盐酸3份和壳聚糖溶液5份进行混合,混合转速为300r/min,混合时间为20min,混合结束;
50.然后再加入改性二氧化硅5份,继续以200rmin的转速搅拌30min,搅拌结束,随后再加入改性硅灰石3份,得到浸润剂。
51.本实施例的改性二氧化硅的改性方法为:将二氧化硅送入到300℃下煅烧 20min,煅烧结束,然后变温降至60℃,随后送入到水中静置,冷却至室温。
52.本实施例的变温降至处理的具体操作步骤为:以5℃/min的速率降至60℃。
53.本实施例的壳聚糖溶液的质量分数为10%。
54.本实施例的改性硅灰石的改性方法为:将硅灰石送入到煅烧炉中进行煅烧,煅烧温度为300℃,煅烧时间为30min,煅烧结束,自然冷却至室温,得到改性硅灰石。
55.本实施例的添加剂为氯化钠、氯化镁按照重量比3:1混合而成。
56.本实施例的一种基于数字pcr技术的atrx和kdm5a突变检测的试剂盒用的装置,包括试剂盒、样品采集、基因采集和数据分析。
57.本实施例的一种基于数字pcr技术的atrx和kdm5a突变检测的试剂盒用的装置在基因检测中的应用。
58.实施例3.
59.本实施例的基于数字pcr技术的atrx和kdm5a突变检测的试剂盒,包括突变型探针、浸润剂和添加剂按照重量比4:2:1构成;
60.所述浸润剂的制备方法为:
61.将十二烷基硫酸钠7.5份、盐酸2份和壳聚糖溶液3份进行混合,混合转速为200r/min,混合时间为15min,混合结束;
62.然后再加入改性二氧化硅3份,继续以150rmin的转速搅拌25min,搅拌结束,随后再加入改性硅灰石2份,得到浸润剂。
63.本实施例的改性二氧化硅的改性方法为:将二氧化硅送入到200℃下煅烧 15min,煅烧结束,然后变温降至55℃,随后送入到水中静置,冷却至室温。
64.本实施例的变温降至处理的具体操作步骤为:以3℃/min的速率降至55℃。
65.本实施例的壳聚糖溶液的质量分数为7.5%。
66.本实施例的改性硅灰石的改性方法为:将硅灰石送入到煅烧炉中进行煅烧,煅烧温度为200℃,煅烧时间为25min,煅烧结束,自然冷却至室温,得到改性硅灰石。
67.本实施例的添加剂为氯化钠、氯化镁按照重量比3:1混合而成。
68.本实施例的一种基于数字pcr技术的atrx和kdm5a突变检测的试剂盒用的装置,包括试剂盒、样品采集、基因采集和数据分析。
69.本实施例的一种基于数字pcr技术的atrx和kdm5a突变检测的试剂盒用的装置在基因检测中的应用。
70.实施例4.
71.本实施例的基于数字pcr技术的atrx和kdm5a突变检测的试剂盒,包括突变型探针、浸润剂和添加剂按照重量比4:2:1构成;
72.所述浸润剂的制备方法为:
73.将十二烷基硫酸钠6份、盐酸2份和壳聚糖溶液2份进行混合,混合转速为150r/min,混合时间为13min,混合结束;
74.然后再加入改性二氧化硅2份,继续以130rmin的转速搅拌22min,搅拌结束,随后再加入改性硅灰石1.5份,得到浸润剂。
75.本实施例的改性二氧化硅的改性方法为:将二氧化硅送入到130℃下煅烧13min,煅烧结束,然后变温降至53℃,随后送入到水中静置,冷却至室温。
76.本实施例的变温降至处理的具体操作步骤为:以2℃/min的速率降至52℃。
77.本实施例的壳聚糖溶液的质量分数为6%。
78.本实施例的改性硅灰石的改性方法为:将硅灰石送入到煅烧炉中进行煅烧,煅烧温度为120℃,煅烧时间为22min,煅烧结束,自然冷却至室温,得到改性硅灰石。
79.本实施例的添加剂为氯化钠、氯化镁按照重量比3:1混合而成。
80.本实施例的一种基于数字pcr技术的atrx和kdm5a突变检测的试剂盒用的装置,包括试剂盒、样品采集、基因采集和数据分析。
81.本实施例的一种基于数字pcr技术的atrx和kdm5a突变检测的试剂盒用的装置在基因检测中的应用。
82.因此,无论从哪一点来看,均应将实施例看作是示范性的,而且是非限制性的,本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定,因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
83.此外,应当理解,虽然本说明书按照实施方式加以描述,但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案,说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见,本领域技术人员应当将说明书作为一个整体,各实施例中的技术方案也可以经适当组合,形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
再多了解一些

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