固体形式的S1P-受体调节剂的制作方法

固体形式的s1p-受体调节剂
技术领域
1.本技术涉及固体形式的s1p-受体调节剂，其可用于治疗与s1p活性相关的疾病或病症，包括cns病症。


背景技术：

2.1-磷酸鞘氨醇(s1p)是一种生物活性鞘脂，其介导多种细胞反应，例如增殖、细胞骨架组织和迁移、粘附和紧密连接组装以及形态发生。s1p可以与定位于质膜的g蛋白偶联受体的内皮细胞分化基因家族(edg受体)的成员结合。迄今为止，该家族的五个成员已被鉴定为不同细胞类型中的s1p受体，s1p1(edg-1)、s1p2(edg-5)、s1p3(edg-3)、s1p4(edg-6)和s1p5(edg-8)。s1p可以在许多细胞类型中产生细胞骨架重排，以调节中枢神经系统(cns)和外周器官系统中的免疫细胞运输、血管稳态和细胞通信。
3.已知s1p由血管内皮分泌，并且以200-900纳摩尔的浓度存在于血液中，并与白蛋白和其他血浆蛋白结合。这既提供了细胞外液中的稳定储库，又提供了向高亲和力细胞表面受体的有效递送。s1p以低纳摩尔亲和力与五种受体s1p1-5结合。此外，血小板还含有s1p，并且可能会局部释放以引起例如血管收缩。受体亚型s1p1、s1p2和s1p3被广泛表达并代表心血管系统中的主要受体。此外，s1p1也是淋巴细胞上的受体。s1p4受体几乎完全存在于造血和淋巴系统中。s1p5主要(但不完全)在中枢神经系统中表达。s1p5的表达似乎仅限于小鼠中的少突胶质细胞，即大脑的髓鞘细胞，而在大鼠和人类中发现了星形胶质细胞和内皮细胞水平的表达，但在少突胶质细胞上没有。
4.s1p受体调节剂是在一种或多种s1p受体上作为(抗)激动剂发出信号的化合物。鉴于不需要的心血管和/或免疫调节作用，本发明涉及s1p5受体的调节剂，特别是激动剂，并且优选涉及对s1p1和/或s1p3受体具有选择性的激动剂。现已发现s1p5激动剂可用于治疗认知障碍，特别是与年龄相关的认知衰退。
5.正在进行研究以开发可用于治疗与年龄相关的认知衰退和痴呆症的疗法。例如，化合物(1s,3s)-3-(2-(4-((4-氯苄基)氧基)苯基)-6,7-二氢噁唑并[4,5-c]吡啶-5(4h)-基)环丁烷-1-羧酸和s1p受体的其他小分子调节剂在例如美国专利8,796,262中报道。因此，需要新的固体形式的s1p受体调节剂，用于制备具有与例如促进安全、有效和高质量药物产品的制造相关的合适性质的药学上有用的制剂和剂型。


技术实现要素：

[0006]
本文提供了固体形式的(1s,3s)-3-(2-(4-((4-氯苄基)氧基)苯基)-6,7-二氢噁唑并[4,5-c]吡啶-5(4h)-基)环丁烷-1-羧酸(“化合物1”)。
[0007]
本文还提供药物组合物，其包括如本文所述的固体形式，以及一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。
[0008]
本公开还提供调节s1p受体(例如，s1p5)活性的方法，包括使化合物1或其固体形式与s1p受体接触。本发明还提供了一种治疗患者cns病症的方法，包括：给患者施用治疗有
效量的固体形式的化合物1。
[0009]
本公开还提供了使用如本文所述的固体形式的治疗方法。本公开还提供了本文所述的固体形式在制备用于治疗的药物中的用途。本公开还提供了本文所述的用于治疗的固体形式。
附图说明
[0010]
图1显示了化合物1形式a的x射线粉末衍射(xrpd)图。
[0011]
图2显示化合物1形式a的差示扫描量热法(dsc)热分析图。
[0012]
图3显示化合物1形式a的热重分析(tga)热分析图。
[0013]
图4显示了化合物1形式b的xrpd图。
[0014]
图5显示化合物1形式b的dsc热分析图。
[0015]
图6显示化合物1形式b的tga热分析图。
[0016]
图7显示化合物1形式b的动态蒸气吸附(dvs)等温线图。
[0017]
图8显示了化合物1形式c的xrpd图。
[0018]
图9显示化合物1形式c的dsc热分析图。
[0019]
图10显示化合物1形式c的tga热分析图。
[0020]
图11显示了化合物1形式d的xrpd图。
[0021]
图12显示了化合物1形式e的xrpd图。
[0022]
图13显示了从缓慢冷却dmso中的化合物1获得的固体的xrpd叠加图，如实施例18b中所述。
[0023]
图14显示了由实施例19中描述的放大实验制备的化合物1形式a的xrpd图。
[0024]
图15显示了由实施例19中描述的放大实验制备的化合物1形式a的dsc热分析图。
[0025]
图16显示了从实施例19中描述的放大实验制备的化合物1形式a的tga热分析图。
[0026]
图17显示了由实施例19中描述的放大实验制备的化合物1形式a的1h-nmr谱。
[0027]
图18显示了从实施例19中描述的放大实验制备的化合物1形式a的plm图像。
[0028]
图19显示了在实施例20中描述的dvs实验之前和之后的化合物1形式a的xrpd叠加图。
[0029]
图20a显示了从实施例21实验21a-21d中描述的水活度研究获得的固体的xrpd叠加图。
[0030]
图20b显示了从实施例21实验21e-21h中描述的水活度研究获得的固体的xrpd叠加图。
[0031]
图21a显示了从实施例21实验21i-21l中描述的水活度研究获得的固体的xrpd叠加图。
[0032]
图21b显示了从实施例21实验21m-21p中描述的水活度研究获得的固体的xrpd叠加图。
具体实施方式
[0033]
本公开涉及(1s,3s)-3-(2-(4-((4-氯苄基)氧基)苯基)-6,7-二氢噁唑并[4,5-c]吡啶-5(4h)-基)环丁烷-1-羧酸(化合物1)的固体形式，包括结晶形式和无定形形式，等等。
化合物1的结构如下所示。
[0034][0035]
化合物1
[0036]
化合物1在美国专利号8,796,262中有描述，其全部内容通过引用并入本文。
[0037]
化合物1可以以一种或多种固体形式分离。本文所述的固体形式(例如结晶形式)可具有某些优点，例如，它们可具有期望的性质，例如易于处理、易于加工、储存稳定性和易于纯化。此外，结晶形式可用于改善药物产品的性能特征，例如溶出曲线、保质期和生物利用度。
[0038]
如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“约”在与提供用于描述具体固体形式的数值或数值范围(例如，特定温度或温度范围，例如描述熔化、脱水或玻璃化转变；质量变化，例如作为温度或湿度函数的质量变化；溶剂或水含量，例如就质量或百分比而言；或峰位置，例如在例如
13
c nmr、dsc、tga和xrpd的分析中)相关地使用时指所述数值或数值范围可能偏离本领域普通技术人员认为合理的程度，同时仍描述了所述具体固体形式。具体而言，术语“约”在本文中使用时表示数值或数值范围的变化可以为所述数值或数值范围的5％、4％、3％、2％、1％、0.9％、0.8％、0.7％、0.6％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％或0.1％，同时仍描述所述具体固体形式。术语“约”在涉及2θ度值时是指 /-0.2度2θ。
[0039]
如本文所用，短语“固体形式”是指本文提供的化合物，其为无定形状态或结晶状态(“结晶形式”或“结晶固体”或“结晶固体形式”)，其中本文以结晶状态提供的化合物可任选地包括晶格内的溶剂或水，例如以形成溶剂化的或水合的结晶形式。在一些实施方案中，本文提供的化合物处于如本文所述的结晶状态。
[0040]
如本文所用，术语“峰”或“特征峰”是指具有最大峰高/强度的至少约3％的相对高度/强度的xrpd反射。
[0041]
如本文所用，术语“结晶”或“结晶形式”是指化合物的结晶固体形式，包括但不限于单组分或多组分结晶形式，例如，包括溶剂化物、水合物、包合物和共晶。例如，结晶是指具有规则重复和/或有序排列的分子，并具有可区分的晶格。术语“结晶形式”是指结晶物质的某种晶格构型。相同物质的不同结晶形式通常具有不同的晶格(例如，晶胞)，通常具有归因于它们不同晶格的不同物理性质，并且在某些情况下，具有不同的水或溶剂含量。不同的晶格可以通过固态表征方法来识别，例如通过x射线粉末衍射(xrpd)。其他表征方法，例如差示扫描量热法(dsc)、热重分析(tga)、动态蒸气吸附(dvs)等，进一步帮助确定结晶形式以及帮助确定稳定性和溶剂/水含量。
[0042]
特定物质例如本文所述的化合物1的不同结晶形式可包括该物质的无水形式和该物质的溶剂化/水合形式，其中无水形式和溶剂化/水合形式中的每一种通过不同的xrpd图案或其他固态表征方法相互区分，从而表示不同的晶格。在一些情况下，单个结晶形式(例如，通过独特的xrpd图案识别)可以具有可变的水或溶剂含量，其中晶格基本上保持不变(就像xrpd图案一样)，尽管在水和/或溶剂方面有组成变化。
[0043]
xrpd反射图(峰)通常被认为是特定结晶形式的指纹。众所周知，xrpd峰的相对强
度可能会广泛变化，这取决于样品制备技术、晶体尺寸分布、使用的过滤器、样品安装程序和使用的特定仪器等。在某些情况下，可观察到新的峰或现有的峰可能消失，这取决于机器的类型或设置(例如，是否使用ni过滤器)。如本文所用，术语“峰”是指具有最大峰高/强度的至少约3％或至少约4％的相对高度/强度的反射。此外，仪器变化和其他因素会影响2θ值。因此，峰分配，例如本文报道的那些，可以正负约0.2
°
(2θ)变化，并且本文xrpd上下文中使用的术语“基本上”意在涵盖上述变化。
[0044]
同样，与dsc、tga或其他热实验相关的温度读数可变化约
±
3℃，这取决于仪器、特定设置、样品制备等。因此，本文报道的具有“基本上”如任何图中所示的dsc热分析图的结晶形式被理解为容许这种变化。
[0045]
如本领域已知的，可以通过多种方法获得物质的结晶形式。此类方法包括但不限于熔体重结晶，熔体冷却，溶剂重结晶，在受限空间中重结晶，例如在纳米孔或毛细管中，在表面或模板上重结晶，例如在聚合物上，在存在添加剂例如共晶反分子的情况下重结晶，去溶剂化，脱水，快速蒸发，快速冷却，缓慢冷却，蒸汽扩散，升华，暴露于湿气，研磨和溶剂滴研磨。
[0046]
如本文所用，术语“无定形”或“无定形形式”旨在表示所讨论的物质、组分或产品不是结晶的，如通过例如xrpd确定的，或者所讨论的物质、组分或产品例如在显微镜下观察时不是双折射的。例如，无定形是指基本上没有规律地重复排列的分子或缺乏晶体的长程有序性，即无定形形式是非结晶的。无定形形式不显示具有尖锐最大值的限定x射线衍射图案。在某些实施方案中，包含物质的无定形形式的样品可以基本上不含其他无定形形式和/或结晶形式。例如，无定形物质可以通过没有反射的xrpd光谱来识别。
[0047]
如本文所用，术语“基本上无定形的”是指化合物1的样品或制备物的大部分重量是无定形的并且样品的其余部分是相同化合物的结晶形式。在一些实施方案中，基本上无定形的样品具有小于约5％的结晶度(例如，约95％的相同化合物的非结晶形式)、小于约4％的结晶度(例如，约96％的相同化合物的非结晶形式)、小于约3％的结晶度(例如，约97％的相同化合物的非结晶形式)、小于约2％的结晶度(例如，约98％的相同化合物的非结晶形式)、小于约1％的结晶度(例如，约99％的相同化合物的非结晶形式)、或约0％的结晶度(例如，约100％的相同化合物的非结晶形式)。在一些实施方案中，术语“完全无定形”是指小于约99％的或约0％的结晶度。
[0048]
化合物1可以分批制备，称为批次、样品或制备物。批次、样品或制备物可以包括本文所述的任何结晶或非结晶形式的化合物1，包括水合和非水合形式及其混合物。
[0049]
本文提供的化合物(例如，化合物1)还可以包括出现在中间体或最终化合物中的所有原子同位素。同位素包括原子序数相同但质量数不同的原子。例如，氢的同位素包括氚和氘。本文提供的化合物的一个或多个组成原子可以用天然或非天然丰度的原子同位素代替或取代。在一些实施方案中，该化合物包括至少一个氘原子。例如，本公开的化合物中的一个或多个氢原子可以被氘代替或取代。在一些实施方案中，该化合物包括两个或更多个氘原子。在一些实施方案中，该化合物包括1、2、3、4、5、6、7或8个氘原子。将同位素包括在有机化合物中的合成方法是本领域已知的。
[0050]
在一些实施方案中，化合物1基本上是分离的。术语“基本上分离”是指化合物至少部分或基本上与其形成或检测的环境分离。部分分离可包括例如富含本文提供的化合物、
盐、水合物、溶剂化物或固体形式的组合物。基本上分离可包括组合物含有按重量计至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％的本文提供的化合物、盐、水合物、溶剂化物或固体形式。
[0051]
如本文所用，术语“水合物”或“水合的”意指包括水的化合物1的固体形式。水合物中的水可以相对于固体中盐的量以化学计量的量存在，或者可以以不同的量存在，例如可以在与通道水合物相关的情况下存在。示例水合物包括半水合物、一水合物和二水合物。类似地，术语“溶剂化物”或“溶剂化的”是指包括溶剂的化合物1的固体形式。溶剂可以是非水溶剂。
[0052]
如本文所用，术语“基本上”在提及晶体形式的特征图，例如xrpd图、dsc热分析图、tga热分析图等时，是指所述图可能与本文描绘的参考不同，但它落入实验误差的范围内，并且因此如本领域普通技术人员判断的，可认为源自与本文公开的相同晶体形式。
[0053]
如本文所用，术语“结晶”或“基本上结晶”是指化合物1的样品或制备物的大部分重量是结晶的并且样品的其余部分是同一种化合物的非结晶形式(例如，无定形形式)。在一些实施方案中，基本上结晶的样品具有至少约50％、约60％、约70％、约80％或约90％的结晶度。在一些实施方案中，基本上结晶的样品具有至少约95％的结晶度(例如，约5％的相同化合物的非结晶形式)、至少约96％的结晶度(例如，约4％的相同化合物的非结晶形式)、至少约97％的结晶度(例如，约3％的相同化合物的非结晶形式)、至少约98％的结晶度(例如，约2％的相同化合物的非结晶形式)、至少约99％的结晶度(例如，约1％的相同化合物的非结晶形式)、或约100％的结晶度(例如，约0％的相同化合物的非结晶形式)。在一些实施方案中，术语“完全结晶”是指至少约99％或约100％的结晶度。
[0054]
如本文所用，术语“％结晶度”或“结晶纯度”是指制备物或样品中结晶形式的百分比，该制备物或样品可包含其他形式，例如相同化合物的无定形形式，或该化合物的至少一种其他结晶形式，或其混合物。在一些实施方案中，可以以至少约80％、约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％的结晶纯度分离结晶形式。在一些实施方案中，可以以大于约99％的纯度分离结晶形式。
[0055]
如本文所用，术语“反应”如本领域已知的那样使用并且通常指将化学试剂以允许它们在分子水平上相互作用以实现化学或物理转化的方式结合在一起。在一些实施方案中，反应涉及至少两种试剂，其中相对于第一试剂使用一个或多个摩尔当量的第二试剂。在一些实施方案中，合成方法的反应步骤除了诸如溶剂和/或催化剂之类的试剂之外还可以涉及一种或多种物质。本文所述方法的反应步骤可以在适合制备所鉴定产物的条件下进行一段时间。
[0056]
如本文所用，关于改变化学反应中的中间体或起始试剂或材料的术语“转化”是指使中间体或起始试剂或材料经受合适的试剂和条件(例如，温度、时间、溶剂等)以实现某些变化(例如，化学键的断裂或形成)以产生期望的产品。
[0057]
化合物1可以制备成各种结晶形式，包括例如形式a、形式b、形式c、形式d和形式e。在一些实施方案中，化合物1的固体形式是无定形的。
[0058]
化合物1形式a
[0059]
本文提供了化合物1的固体形式，其是结晶的，称为形式a，其在下文的实施例中进行了描述。表征形式a的数据与无水结晶形式一致。
[0060]
在一些实施方案中，形式a具有至少一个选自约4.7、约9.3、约13.9、约15.8、约18.6、约19.0、约21.5和约27.4度2θ的特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式a具有至少两个选自约4.7、约9.3、约13.9、约15.8、约18.6、约19.0、约21.5和约27.4度2θ的特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式a具有至少三个选自约4.7、约9.3、约13.9、约15.8、约18.6、约19.0、约21.5和约27.4度2θ的特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式a具有至少四个选自约4.7、约9.3、约13.9、约15.8、约18.6、约19.0、约21.5和约27.4度2θ的特征xrpd峰。
[0061]
在一些实施方案中，形式a在约4.7度2θ处具有特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式a在约9.3度2θ处具有特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式a在约13.9度2θ处具有特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式a在约15.8度2θ处具有特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式a在约18.6度2θ处具有特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式a在约19.0度2θ处具有特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式a在约21.5度2θ处具有特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式a在约27.4度2θ处具有特征xrpd峰。
[0062]
在一些实施方案中，形式a的xrpd图案具有基本上如图1中所示的特征峰。
[0063]
在一些实施方案中，形式a的xrpd图案具有基本上如图14中所示的特征峰。
[0064]
在一些实施方案中，形式a显示在约120℃和约252℃的温度下具有吸热峰的dsc热分析图。在一些实施方案中，形式a显示出在约120℃的温度下具有吸热峰的dsc热分析图。在一些实施方案中，形式a显示出在约252℃的温度下具有吸热峰的dsc热分析图。在一些实施方案中，形式a具有基本上如图2所示的dsc热分析图。在一些实施方案中，形式a具有基本上如图15所示的dsc热分析图。在一些实施方案中，形式a具有基本上如图3所示的tga热分析图。在一些实施方案中，形式a具有基本上如图16所示的tga热分析图。
[0065]
本文还提供了制备化合物1的形式a的方法，包括在溶剂中重结晶化合物1。在一些实施方案中，溶剂包括dmso。在一些实施方案中，溶剂是dmso。在一些实施方案中，dmso基本上不含水。在一些实施方案中，重结晶包括将溶剂中的化合物1加热至升高的温度以形成化合物1的溶液。在一些实施方案中，该方法进一步包括用化合物1形式a晶种对加热的溶液接种，以形成接种的溶液。在一些实施方案中，该方法进一步包括将接种的溶液冷却至约室温(例如，从接种的溶液重结晶)。在一些实施方案中，重结晶进一步包括向重结晶混合物(例如，化合物1和溶剂的混合物)中加入反溶剂。在一些实施方案中，反溶剂基本上不含水。在一些实施方案中，反溶剂是乙醇。在一些实施方案中，反溶剂是乙腈。在一些实施方案中，重结晶包括将化合物1在溶剂中的溶液(例如，接种的溶液)加热至升高的温度一段时间。在一些实施方案中，升高的温度是≥60℃、≥70℃、≥80℃、≥90℃或≥95℃。在某些实施方案中，该时间段在1秒和96小时之间。在某些实施方案中，该时间段在1分钟和96小时之间。在某些实施方案中，该时间段在2分钟和96小时之间。在某些实施方案中，该时间段在5分钟和96小时之间。在某些实施方案中，时间段在10分钟和96小时之间。在某些实施方案中，该时间段在24和96小时之间。在某些实施方案中，该时间段在48和96小时之间。在一些实施方案中，该时间段大于24小时。在一些实施方案中，该时间段大于48小时。在一些实施方案中，该时间段大于72小时。在一些实施方案中，该时间段为约72小时。
[0066]
在一些实施方案中，重结晶包括在溶剂中加热化合物1以形成化合物1的溶液，然后冷却该溶液。在一些实施方案中，溶剂基本上不含水。在一些实施方案中，溶剂包含基本上不含水的dmso。在一些实施方案中，用于形成化合物1溶液的化合物1基本上不含水。在一
些实施方案中，加热在增加的压力(相对于环境压力)下进行。
[0067]
在一些实施方案中，可以以至少约80％、约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％的结晶纯度分离形式a。在一些实施方案中，可以以大于约99％的结晶纯度分离形式a。
[0068]
化合物1形式b
[0069]
本文提供了化合物1的固体形式，其是结晶的，称为形式b，其在下文的实施例中进行了描述。表征形式b的数据与水合结晶形式一致。在一些实施方案中，形式b是一水合物。
[0070]
在一些实施方案中，形式b具有至少一个选自约8.5、约15.1、约23.5和约25.5度2θ的特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式b具有至少两个选自约8.5、约15.1、约23.5和约25.5度2θ的特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式b具有至少三个选自约8.5、约15.1、约23.5和约25.5度2θ的特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式b在约8.5度2θ处具有特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式b在约15.1度2θ处具有特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式b在约23.5度2θ处具有特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式b在约25.5度2θ处具有特征xrpd峰。
[0071]
在一些实施方案中，形式b具有至少一个选自约8.5、约15.1、约16.5、约21.5、约23.5、约24.6和约25.5度2θ的特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式b具有至少两个选自约8.5、约15.1、约16.5、约21.5、约23.5、约24.6和约25.5度2θ的特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式b具有至少三个选自约8.5、约15.1、约16.5、约21.5、约23.5、约24.6和约25.5度2θ的特征xrpd峰。
[0072]
在一些实施方案中，形式b具有至少一个选自约8.5、约15.1、约16.1、约16.5、约17.0、约18.6、约21.3、约21.5、约23.5、约24.6、约25.2和约25.5度2θ的特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式b具有至少两个选自约8.5、约15.1、约16.1、约16.5、约17.0、约18.6、约21.3、约21.5、约23.5、约24.6、约25.2和约25.5度2θ的特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式b具有至少三个选自约8.5、约15.1、约16.1、约16.5、约17.0、约18.6、约21.3、约21.5、约23.5、约24.6、约25.2和约25.5度2θ的特征xrpd峰。
[0073]
在一些实施方案中，形式b的xrpd图案具有基本上如图4中所示的特征峰。
[0074]
在一些实施方案中，形式b显示出在约246℃的温度下具有吸热峰的dsc热分析图。在一些实施方案中，形式b具有基本上如图5所示的dsc热分析图。在一些实施方案中，形式b具有基本上如图6所示的tga热分析图。在一些实施方案中，形式b具有基本上如图7所示的dvs等温线图。
[0075]
在一些实施方案中，形式b具有至少一个选自约8.5、约15.1、约23.5和约25.5度2θ的特征xrpd峰；和形式b的dsc热分析图在约246℃的温度下具有吸热峰。
[0076]
本文还提供了制备化合物1的形式b的方法，包括在溶剂中重结晶化合物1。在一些实施方案中，溶剂包括水。在一些实施方案中，溶剂包括乙酸。在一些实施方案中，溶剂包括乙腈。在一些实施方案中，溶剂包括dmso。在一些实施方案中，溶剂包括水和乙酸。在一些实施方案中，溶剂包括乙腈和乙酸。在一些实施方案中，溶剂包含dmso和水。在一些实施方案中，溶剂是水和乙酸的混合物。在一些实施方案中，溶剂是乙酸和乙腈的混合物。在一些实施方案中，溶剂是dmso和水的混合物。
[0077]
在一些实施方案中，重结晶包括a)将化合物1在第一溶剂中的混合物加热至升高
的温度以形成第一溶液；b)在升高的温度下向第一溶液中加入第二溶剂以形成第二溶液；和c)将第二溶液冷却至降低的温度。在一些实施方案中，升高的温度是≥55℃、≥60℃、≥65℃、≥70℃或≥75℃。在一些实施方案中，降低的温度是环境温度。在一些实施方案中，降低的温度为约25℃。在一些实施方案中，第一溶剂是dmso。在一些实施方案中，第二溶剂是水。在一些实施方案中，第二溶剂是乙腈。
[0078]
在一些实施方案中，重结晶包括a)将化合物1在第一溶剂中的溶液加热至升高的温度；b)在升高的温度下在第一时间段内添加第二溶剂；和c)在第二时间段内冷却至降低的温度。在一些实施方案中，升高的温度是≥55℃、≥60℃、≥65℃、≥70℃或≥75℃。在某些实施方案中，第一时间段在1到5小时之间。在一些实施方案中，第一时间段为约2小时。在一些实施方案中，降低的温度是环境温度。在一些实施方案中，降低的温度为约25℃。在一些实施方案中，第二时间段在6和18小时之间。在一些实施方案中，第二时间段为约12小时。在一些实施方案中，第一溶剂是乙酸。在一些实施方案中，第一溶剂是dmso。在一些实施方案中，第二溶剂是水。在一些实施方案中，第二溶剂是乙腈。
[0079]
在一些实施方案中，可以以至少约80％、约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％的结晶纯度分离形式b。在一些实施方案中，可以以大于约99％的结晶纯度分离形式b。
[0080]
化合物1形式c
[0081]
本文提供了化合物1的固体形式，其是结晶的，称为形式c，其在下文的实施例中进行了描述。表征形式c的数据与无水结晶形式一致。
[0082]
在一些实施方案中，形式c具有至少一个选自约7.4、约22.2、约25.0、约25.4和约28.2度2θ的特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式c具有至少两个选自约7.4、约22.2、约25.0、约25.4和约28.2度2θ的特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式c具有至少三个选自约7.4、约22.2、约25.0、约25.4和约28.2度2θ的特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式c在约7.4度2θ处具有特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式c在约22.2度2θ处具有特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式c在约25.0度2θ处具有特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式c在约25.4度2θ处具有特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式c在约28.2度2θ处具有特征xrpd峰。
[0083]
在一些实施方案中，形式c具有至少一个选自约7.4、约11.0、约22.2、约25.0、约25.4、约28.2和约29.8度2θ的特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式c具有至少两个选自约7.4、约11.0、约22.2、约25.0、约25.4、约28.2和约29.8度2θ的特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式c具有至少三个选自约7.4、约11.0、约22.2、约25.0、约25.4、约28.2和约29.8度2θ的特征xrpd峰。
[0084]
在一些实施方案中，形式c具有至少一个选自约7.4、约11.0、约15.6、约16.5、约17.3、约18.5、约22.2、约25.0、约25.4、约28.2和约29.8度2θ的特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式c具有至少两个选自约7.4、约11.0、约15.6、约16.5、约17.3、约18.5、约22.2、约25.0、约25.4、约28.2和约29.8度2θ的特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式c具有至少三个选自约7.4、约11.0、约15.6、约16.5、约17.3、约18.5、约22.2、约25.0、约25.4、约28.2和约29.8度2θ的特征xrpd峰。
[0085]
在一些实施方案中，形式c的xrpd图案具有基本上如图8中所示的特征峰。
[0086]
在一些实施方案中，形式c显示的dsc热分析图具有在约242℃的温度下的放热峰
和在约253℃的温度下的吸热峰。在一些实施方案中，形式c显示出在约242℃的温度下具有放热峰的dsc热分析图。在一些实施方案中，形式c显示出在约253℃的温度下具有吸热峰的dsc热分析图。在一些实施方案中，形式c具有基本上如图9所示的dsc热分析图。在一些实施方案中，形式c具有基本上如图10所示的tga热分析图。
[0087]
在一些实施方案中，形式c具有至少一个选自约7.4、约22.2、约25.0、约25.4和约28.2度2θ的特征xrpd峰；并且形式c的dsc热分析图在约246℃的温度下具有吸热峰。在一些实施方案中，形式c具有至少一个选自约7.4、约22.2、约25.0、约25.4和约28.2度2θ的特征xrpd峰；并且形式c的dsc热分析图在约242℃的温度下具有放热峰。
[0088]
本文还提供了制备化合物1的形式c的方法，包括在溶剂中重结晶化合物1。在一些实施方案中，溶剂包括水。在一些实施方案中，溶剂包括dmso。在一些实施方案中，溶剂包含dmso和水。在一些实施方案中，溶剂是dmso。在一些实施方案中，溶剂是dmso和水的混合物。
[0089]
在一些实施方案中，重结晶包括a)将化合物1在第一溶剂中的混合物加热至升高的温度以形成第一溶液；b)向第一溶液中加入第二溶剂以形成第二溶液；和c)将第二溶液冷却至降低的温度。在一些实施方案中，第一溶剂是dmso。在一些实施方案中，第二溶剂是水。在一些实施方案中，升高的温度是≥65℃、≥70℃、≥75℃、≥80℃或≥85℃。在一些实施方案中，降低的温度是环境温度。在一些实施方案中，降低的温度为约25℃。
[0090]
在一些实施方案中，重结晶包括a)将化合物1在第一溶剂中的溶液加热至升高的温度；b)向溶液中加入第二种溶剂；和c)冷却至降低的温度一段时间。在一些实施方案中，第一溶剂是dmso。在一些实施方案中，第二溶剂是水。在一些实施方案中，升高的温度是≥65℃、≥70℃、≥75℃、≥80℃或≥85℃。在某些实施方案中，该时间段在2至12小时之间。在一些实施方案中，第一时间段为约8小时。在一些实施方案中，第一时间段大于约6小时。在一些实施方案中，降低的温度是环境温度。在一些实施方案中，降低的温度为约25℃。
[0091]
在一些实施方案中，可以以至少约80％、约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％的结晶纯度分离形式c。在一些实施方案中，可以以大于约99％的结晶纯度分离形式c。
[0092]
化合物1形式d
[0093]
本文提供了化合物1的固体形式，其是结晶的，称为形式d，其在下文的实施例中进行了描述。表征形式d的数据与二甲基乙酰胺溶剂化结晶形式一致。
[0094]
在一些实施方案中，形式d的xrpd图案具有基本上如图11中所示的特征峰。
[0095]
本文还提供了制备化合物1的形式d的方法，包括在溶剂中重结晶化合物1。在一些实施方案中，溶剂包括二甲基乙酰胺。在一些实施方案中，溶剂是二甲基乙酰胺。在一些实施方案中，重结晶包括a)将化合物1在二甲基乙酰胺中的溶液加热至升高的温度和b)冷却至降低的温度。在一些实施方案中，升高的温度为≥30℃、≥40℃、≥50℃、≥60℃、≥70℃、≥80℃或≥90℃。在一些实施方案中，降低的温度是环境温度。在一些实施方案中，降低的温度为约25℃。
[0096]
在一些实施方案中，可以以至少约80％、约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％的结晶纯度分离形式d。在一些实施方案中，可以以大于约99％的结晶纯度分离形式d。
[0097]
化合物1形式e
[0098]
本文提供了化合物1的固体形式，其是结晶的，称为形式e，其在下文的实施例中进行了描述。表征形式e的数据与无水结晶形式一致。
[0099]
在一些实施方案中，形式e具有至少一个选自约8.7、约15.3、约16.2、约23.2和约25.5度2θ的特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式e具有至少两个选自约8.7、约15.3、约16.2、约23.2和约25.5度2θ的特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式e具有至少三个选自约8.7、约15.3、约16.2、约23.2和约25.5度2θ的特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式e在约8.7度2θ处具有特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式e在约15.3度2θ处具有特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式e在约16.2度2θ处具有特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式e在约23.2度2θ处具有特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式e在约25.5度2θ处具有特征xrpd峰。
[0100]
在一些实施方案中，形式e具有选自约8.7、约15.3、约16.2、约18.3、约23.2、约25.5和约28.2度2θ的至少一个特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式e具有至少两个选自约8.7、约15.3、约16.2、约18.3、约23.2、约25.5和约28.2度2θ的特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式e具有至少三个选自约8.7、约15.3、约16.2、约18.3、约23.2、约25.5和约28.2度2θ的特征xrpd峰。
[0101]
在一些实施方案中，形式e具有至少一个选自约8.7、约10.8、约15.3、约16.2、约16.9、约18.3、约21.9、约23.2、约25.5和约28.2度2θ的特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式e具有至少两个选自约8.7、约10.8、约15.3、约16.2、约16.9、约18.3、约21.9、约23.2、约25.5和约28.2度2θ的特征xrpd峰。在一些实施方案中，形式e具有至少三个选自约8.7、约10.8、约15.3、约16.2、约16.9、约18.3、约21.9、约23.2、约25.5和约28.2度2θ的特征xrpd峰。
[0102]
在一些实施方案中，形式e的xrpd图案具有基本上如图12中所示的特征峰。
[0103]
本文还提供了制备化合物1的形式e的方法，包括将化合物1形式b加热至升高的温度。在一些实施方案中，升高的温度是≥100℃、≥125℃、≥145℃、≥150℃或≥155℃。在一些实施方案中，升高的温度为约150℃。
[0104]
在一些实施方案中，可以以至少约80％、约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％的结晶纯度分离形式e。在一些实施方案中，可以以大于约99％的结晶纯度分离形式e。
[0105]
使用方法
[0106]
化合物1及其固体形式表现出对sip受体的亲和力。特别地，本发明的化合物对s1p5受体显示出相对于s1p1和/或s1p3受体的选择性亲和力。
[0107]
化合物1及其固体形式是sip受体的调节剂，特别是s1p5受体的调节剂。更具体地说，本发明的化合物和固体形式是s1p5受体激动剂。本发明的化合物和固体形式可用于治疗、减轻和预防与s1p受体(例如s1p5)相关的疾病或其中涉及通过任何sip受体调节内源性sip信号传导系统的疾病。特别地，本发明的化合物和固体形式可用于治疗、减轻或预防cns(中枢神经系统)疾病，例如神经退行性疾病，特别是但不限于认知障碍(特别是与年龄相关的认知衰退)和相关病症，例如阿尔茨海默病、(血管性)痴呆、尼曼匹克病和精神分裂症中的认知缺陷、强迫行为、重度抑郁症、自闭症、多发性硬化和疼痛。优选地，本发明的化合物和固体形式可用于治疗、减轻或预防认知障碍(特别是与年龄相关的认知衰退)和相关病症。
[0108]
如本文所用，术语“接触”是指将指定部分在体外系统或体内系统中结合在一起，使得它们在物理上足够接近以相互作用。
[0109]
可互换使用的术语“个体”或“患者”是指任何动物，包括哺乳动物，例如人、小鼠、大鼠、其他啮齿动物、兔、狗、猫、猪、牛、羊、马和灵长类动物。在一些实施方案中，个体或患者是人。
[0110]
短语“治疗有效量”是指研究人员、兽医、医生或其他临床医生正在寻找的在组织、系统、动物、个体或人中引起生物学或医学反应的活性化合物或药剂的量。
[0111]
如本文所用，术语“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”是指以下的一项或多项：(1)抑制疾病；例如，抑制正在经历或表现出疾病、病况或病症的病理或症状的个体中的疾病、病况或病症(即，阻止病理和/或症状的进一步发展)；和(2)改善疾病；例如，改善正在经历或表现出疾病、病况或病症的病理或症状的个体的疾病、病况或病症(即，逆转病理和/或症状)，例如降低疾病的严重性。
[0112]
在一些实施方案中，本发明的化合物可用于预防或降低发生本文提及的任何疾病的风险；例如，预防或降低可能易患疾病、病况或病症但尚未经历或表现出疾病的病理或症状的个体中发生疾病、病况或病症的风险。
[0113]
如本文所用，术语“细胞”是指体外、离体或体内的细胞。在一些实施方案中，离体细胞可以是从诸如哺乳动物的生物体切除的组织样品的一部分。在一些实施方案中，体外细胞可以是细胞培养物中的细胞。在一些实施方案中，体内细胞是生在诸如哺乳动物的有机体中的细胞。
[0114]
本文使用的短语“药学上可接受的”是指在合理的医学判断范围内，适合用于与人类和动物的组织接触而没有过量毒性、刺激性、过敏反应、免疫原性或其他问题或并发症，与合理的收益/风险比相称的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。
[0115]
如本文所用，短语“药学上可接受的载体或赋形剂”是指药学上可接受的材料、组合物或载体，例如液体或固体填充剂、稀释剂、溶剂或包封材料。赋形剂或载体通常是安全的、无毒的并且在生物学上或其他方面都不是不期望的，并且包括兽医使用和人类药物使用可接受的赋形剂或载体。在一个实施方案中，每种组分是如本文定义的“药学上可接受的”。参见例如remington:the science and practice of pharmacy,21st ed.；lippincott williams&wilkins:philadelphia,pa.,2005；handbook of pharmaceutical excipients,6th ed.；rowe et al.,eds.；the pharmaceutical press和the american pharmaceutical association:2009；handbook of pharmaceutical additives,3rd ed.；ash and ash eds.；gower publishing company:2007；pharmaceutical preformulation and formulation,2nd ed.；gibson ed.；crc press llc；boca raton,fla.,2009。
[0116]
应当理解，为了清楚起见，在分开的实施方案的上下文中描述的本发明的某些特征也可以在单个实施方案中组合地提供(而该实施方案旨在组合，就好像以多重依赖的形式撰写一样)。相反，为了简洁起见，在单个实施方案的上下文中描述的本发明的各种特征也可以分开提供或以任何合适的子组合提供。
[0117]
联合疗法
[0118]
一种或多种另外的药剂或治疗方法可以与化合物1或其固体形式联合用于治疗s1p受体相关疾病、病症或病况，或如本文所述的疾病或病况。这些药剂可以与本发明化合
物组合在单一剂型中，或者这些药剂可以作为单独的剂型同时或依次施用。在一些实施方案中，另外的药剂是抗阿尔茨海默病药物。在一些实施方案中，另外的药剂是抗血管性痴呆药物。在一些实施方案中，另外的药剂是胆碱酯酶抑制剂(例如多奈哌齐、加兰他敏和卡巴拉汀)、n-甲基-d-天冬氨酸受体拮抗剂、美金刚、尼莫地平、海德金、麦角林、cdp-胆碱或叶酸。
[0119]
在一些实施方案中，另外的药剂是抗精神病药。在一些实施方案中，另外的药剂是氯丙嗪、氟奋乃静、氟哌啶醇、奋乃静、阿立哌唑、阿塞那平、依匹唑派(brexpiprazole)、卡利拉嗪、氯氮平、洛哌啶酮、鲁拉西酮、奥氮平、帕利哌酮、喹硫平、利培酮或齐拉西酮。
[0120]
药物制剂和剂型
[0121]
当用作药物时，本公开的化合物和固体形式可以药物组合物的形式施用。因此，本公开提供了一种组合物，其包含如本文所述的化合物或固体形式、如权利要求中任一项和本文所述的化合物或固体形式或其任何实施方案，以及至少一种药学上可接受的载体。这些组合物可以以制药领域众所周知的方式制备，并且可以通过多种途径施用，这取决于是否需要局部或全身治疗以及待治疗的区域。施用可以是局部的(包括经皮、表皮、眼部和粘膜，包括鼻内、阴道和直肠递送)、肺部(例如，通过吸入或吹入粉末或气雾剂，包括通过喷雾器；气管内或鼻内)、口服或肠胃外。肠胃外施用包括静脉内、动脉内、皮下、腹膜内、肌内或注射或输注；或颅内，例如鞘内或心室内施用。肠胃外施用可以是单次推注的形式，或者可以是，例如，通过连续输注泵。用于局部施用的药物组合物和制剂可以包括透皮贴剂、软膏、洗剂、乳膏、凝胶、滴剂、栓剂、喷雾剂、液体和粉末。常规药物载体、水性、粉末或油性基质、增稠剂等可能是必要的或期望的。
[0122]
本发明还包括药物组合物，其含有作为活性成分的本公开的化合物或固体形式或其药学上可接受的盐，以及一种或多种药学上可接受的载体。在一些实施方案中，该组合物适用于局部施用。在制备本发明的组合物时，活性成分通常与赋形剂混合，通过赋形剂稀释或封装在例如胶囊、香囊、纸或其他容器形式的这种载体中。当赋形剂用作稀释剂时，它可以是固体、半固体或液体材料，充当活性成分的载体、承载体或介质。因此，组合物可以是片剂、丸剂、粉剂、锭剂、小袋、扁囊剂、酏剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、糖浆剂、气雾剂(作为固体或液体介质)、软膏剂的形式，其例如包含至多按重量计10％的活性化合物，软明胶和硬明胶胶囊、栓剂、无菌注射溶液和无菌包装粉末。
[0123]
在一些实施方案中，所述组合物是包含至少一种本文所述的化合物或固体形式或其药学上可接受的盐和至少一种药学上可接受的载体或赋形剂的持续释放组合物。
[0124]
可以将组合物配制成单位剂型，每剂含有约5至约1,000mg(1g)。术语“单位剂型”是指物理上离散的单位，适合作为人受试者和其他哺乳动物的单位剂量，每个单位含有预定量的经计算产生所需治疗效果的活性物质以及合适的药用赋形剂。
[0125]
活性化合物可以在很宽的剂量范围内有效并且通常以治疗有效量施用。然而，应当理解，实际施用的化合物或固体形式的量通常由医生根据相关情况确定，包括要治疗的病症，选择的施用途径，施用的实际化合物或固体形式，个体患者的年龄、体重和反应，患者症状的严重程度等。
[0126]
本发明的化合物或固体形式的治疗剂量可以根据例如进行治疗的具体用途、化合物或固体形式的施用方式、患者的健康和状况以及处方医师的判断而变化。本发明的化合
物或固体形式在药物组合物中的比例或浓度可以根据包括剂量、化学特性(例如疏水性)和施用途径在内的许多因素而变化。剂量可能取决于诸如疾病或病症的类型和进展程度、特定患者的整体健康状况、所选化合物或固体形式的相对生物学功效、赋形剂的配方及其施用途径此类变量。有效剂量可以从来自体外或动物模型测试系统的剂量反应曲线外推。
[0127]
本发明的化合物、固体形式和组合物可掺入其中用于口服或注射施用的液体形式包括水溶液、适当调味的糖浆、水性或油性混悬剂、以及用食用油如棉籽油、芝麻油、椰子油或花生油的调味乳剂，以及酏剂和类似的药物载体。
[0128]
用于吸入或吹入的组合物包括在药学上可接受的水性或有机溶剂或其混合物中的溶液和悬浮液，以及粉末。液体或固体组合物可包含如上文所述的合适的药学上可接受的赋形剂。在一些实施方案中，组合物通过经口或经鼻呼吸途径施用以产生局部或全身作用。组合物可以通过使用惰性气体进行雾化。雾化溶液可以直接从雾化装置呼吸，或者雾化装置可以连接到面罩、塞条或间歇正压呼吸机。溶液、悬浮液或粉末组合物可以从以适当方式递送制剂的装置经口或经鼻施用。
[0129]
局部制剂可以包含一种或多种常规载体。在一些实施方案中，软膏可以包含水和一种或多种疏水载体。
[0130]
还应当理解，为了清楚起见，在分开的实施方案的上下文中描述的本发明的某些特征也可以在单个实施方案中组合地提供(而该实施方案旨在组合，就好像以多重依赖的形式撰写一样)。相反，为了简洁起见，在单个实施方案的上下文中描述的本发明的各种特征也可以分开提供或以任何合适的子组合提供。
[0131]
实施例
[0132]
实施例1a.实验方法
[0133]
在实施例1-17中使用了以下实验方法。
[0134]
1.1 xrpd
[0135]
在以下实施例中，xrpd衍射图是在bruker d8衍射仪或panalytical empyrean衍射仪上收集的。条件描述如下：
[0136]
bruker axs d8 advance
[0137]
xrpd衍射图是在bruker d8衍射仪上使用cu kα辐射(40kv,40ma)和配有ge单色仪的θ-2θ测角仪收集的。入射光束通过2.0mm的发散狭缝，然后是0.2mm的防散射狭缝和刀刃。衍射光束通过带有2.5
°
soller狭缝的8.0mm接收狭缝，然后是lynxeye检测器。用于数据收集和分析的软件分别是diffrac plus xrd commander和diffrac plus eva。
[0138]
使用收到的粉末在环境条件下作为平板样品运行样品。通过轻轻压在平坦表面上或填充到切割腔中，在抛光的零背景(510)硅晶片上制备样品。将样品在其自己的平面中旋转。
[0139]
数据收集方法的详细信息如下：
[0140]
·
角度范围：2至42
°
2θ
[0141]
·
步长：0.05
°
2θ
[0142]
·
采集时间：0.5秒/步(总采集时间：6.40分钟)
[0143]
panalytical empyrean
[0144]
xrpd衍射图是在panalytical empyrean衍射仪上收集的，在透射几何形状中使用
cu kα辐射(45kv,40ma)。在入射光束上使用0.5
°
狭缝、4mm掩模和0.04rad soller狭缝和聚焦镜。放置在衍射光束上的pixcel
3d
检测器配有接收狭缝和0.04rad soller狭缝。用于数据收集的软件是使用x’pert operator interface的x'pert data collector。使用diffrac plus eva或highscore plus分析和呈现数据。
[0145]
制备样品并在金属或millipore 96孔板中以透射模式分析。在金属孔板上的金属片之间使用x射线透明薄膜，粉末(约1-2mg)按原样使用。millipore板用于从悬浮液中分离和分析固体，方法是将少量悬浮液直接添加到板中，然后在轻真空下过滤。
[0146]
金属板的扫描模式使用gonio扫描轴，而millipore板使用2θ扫描。
[0147]
标准筛选数据收集方法的详细信息如下：
[0148]
·
角度范围：2.5至32.0
°
2θ
[0149]
·
步长：0.0130
°
2θ
[0150]
·
采集时间：12.75秒/步(总采集时间2.07分钟)
[0151]
需要时，使用具有数据收集的高分辨率方法：
[0152]
·
角度范围：2.5至42.0
°
2θ
[0153]
·
步长：0.0130
°
2θ
[0154]
·
采集时间：36.72秒/步(总采集时间8.32分钟)
[0155]
非环境条件
[0156]
xrpd衍射图是在panalytical empyrean衍射仪上收集的，在反射几何形状中使用cu kα辐射(45kv,40ma)。该仪器配备anton paar chc plus 载物台，其配备石墨/kapton窗，并配备空气冷却装置，联接了proumid mhg32模块化湿度发生器或使用edwards rv3泵的低真空泵系统。在入射光束上使用带有10mm固定入射光束掩模、ni滤光片和0.04rad soller狭缝的可编程发散狭缝(在自动模式下)。放置在衍射光束上的pixcel
3d
检测器配有可编程抗散射狭缝(在自动模式下)和0.04rad soller狭缝。
[0157]
用于数据收集的软件是x'pert data collector，使用diffrac plus eva或highscore plus分析和呈现数据。
[0158]
对于变温(vt-xrpd)实验，样品在带有硅晶片插件的anton paar镀铬样品架中制备和分析。在测量开始之前，使用10℃/min的加热/冷却速率和2分钟的等温保持。测量参数按照标准筛选数据收集方法(详见上文)。在以下温度下进行测量：25℃、150℃和25℃。
[0159]
对于低真空实验，样品在带有硅晶片插件的anton paar镀铬样品架中制备和分析，应用的真空度为3
×
103pa。使用10℃/min的加热/冷却速率并将样品加热至40℃。每小时测量一次，持续63小时。测量参数按照标准筛选数据收集方法(详见上文)。
[0160]
1.2核磁共振
[0161]
在配备自动进样器并由drx400控制台控制的bruker 400mhz仪器上收集1h nmr光谱。除非另有说明，否则样品在dmso-d6溶剂中制备。使用topspin软件中的icon-nmr配置，使用标准的bruker加载实验(1h,
13
c{1h},dept135)，获得自动化实验。使用acd spectrus处理器进行离线分析。
[0162]
1.3差示扫描量热法(dsc)
[0163]
ta instruments q2000
[0164]
dsc数据是在配备50位自动进样器的ta instruments q2000上收集的。通常，每个
样品0.5-3mg，在针孔铝盘中，以10℃/min从25℃加热到300℃。在样品上保持50ml/min的干燥氮气吹扫。
[0165]
仪器控制软件是advantage for q series和thermal advantage，数据使用universal analysis或trios进行分析。
[0166]
ta instruments discovery dsc
[0167]
dsc数据是在配备50位自动进样器的ta instruments discovery dsc上收集的。通常，每个样品0.5-3mg，在针孔铝盘中，以10℃/min从25℃加热到300℃。在样品上保持50ml/min的干燥氮气吹扫。
[0168]
仪器控制软件为trios，数据使用trios或universal analysis进行分析。
[0169]
1.4热重分析(tga)
[0170]
ta instruments q500
[0171]
tga数据是在配备16位自动进样器的ta instruments q500 tga,上收集的。通常，将5-10mg的每个样品加载到预先称过皮重的铝制dsc盘上，并以10℃/min从环境温度加热到350℃。在样品上保持60ml/min的氮气吹扫。
[0172]
仪器控制软件是advantage for q series和thermal advantage，数据使用universal analysis或trios进行分析。
[0173]
ta instruments discovery tga
[0174]
tga数据是在配备25位自动进样器的ta instruments discovery tga上收集的。通常，将5-10mg的每个样品加载到预先称过皮重的铝制dsc盘上，并以10℃/min从环境温度加热到350℃。在样品上保持25ml/min的氮气吹扫。
[0175]
仪器控制软件为trios，数据使用trios或universal analysis进行分析。
[0176]
1.5偏光显微镜
[0177]
leica lm/dm偏光显微镜
[0178]
样品在leica lm/dm偏振光显微镜上进行分析，该显微镜带有用于图像捕获的数码摄像机。将少量的每个样品放在载玻片上，用或不用浸油，并用玻璃片覆盖。用适当的放大倍率和部分偏振光观察样品，该部分偏振光耦合到λ假彩色滤光片。使用studiocapture或image proplus软件捕获图像。
[0179]
nikon lm/dm偏光显微镜
[0180]
在nikon smz1500偏光显微镜上研究样品，该显微镜带有连接到ds camera控制单元ds-l2用于图像捕获的数码摄像机。用适当的放大倍率和部分偏振光观察样品，该部分偏振光耦合到λ假彩色滤光片。
[0181]
1.6重量蒸气吸附(gvs)
[0182]
使用由dvs intrinsic control软件控制的sms dvs intrinsic水分吸附分析仪获得吸附等温线。通过仪器控件将样品温度保持在25℃。通过混合干湿氮气流控制湿度，总流速为200ml/min。相对湿度由位于样品附近的经过校准的rotronic探头(动态范围为1.0
–
100％rh)测量。通过微量天平(精度
±
0.005mg)不断监测作为％rh的函数的样品重量变化(质量松弛)。
[0183]
通常，在环境条件下将5-30mg样品置于称过皮重的网状不锈钢篮中。在40％rh和25℃(典型的室温条件)下装载和卸载样品。如下所述进行水分吸附等温线(每个完整循环2
次扫描)。标准等温线在25℃下以10％rh的间隔在0
–
90％rh范围内进行。通常，进行双循环(4次扫描)。使用dvs分析套件在microsoft excel中进行数据分析。
[0184]
sms dvs内在实验方法
[0185]
参数值吸附
–
扫描140
–
90解吸、吸附
–
扫描290
–
0,0
–
40间隔(％rh)10扫描次数4流速(ml/min)200温度(℃)25稳定性(℃/min)0.2吸附时间(小时)6小时时间到循环次数2
[0186]
1.7 hplc测定化学纯度
[0187]
在配备二极管阵列检测器并使用化学工作站软件的agilent hp1100系列系统上进行纯度分析。完整的方法细节如下提供：
[0188][0189]
1.8卡尔费休滴定法(kf)测定水分
[0190]
使用hydranal coulomat ag烘箱试剂和氮气吹扫，在metrohm 874oven sample processor上使用851titrano coulometer在150℃下测量每个样品的水含量。将称重的固体样品引入密封的样品瓶中。每次滴定使用大约10mg样品并进行两次测定。除非另有说明，否则将呈现这些结果的平均值。使用tiamo软件进行数据收集和分析。
[0191]
1.9离子色谱(ic)
[0192]
使用ic magicnet软件在配备858professional自动进样器和800dosino剂量单位监视器的metrohm 930compact ic flex上收集数据。将准确称重的样品制备为在合适溶剂中的储备溶液。通过与已知浓度的待分析离子的标准溶液进行比较来实现量化。分析一式两份进行，并给出平均值，除非另有说明。
[0193]
阳离子色谱法
[0194][0195]
阴离子色谱法
[0196][0197]
1.10单晶x射线衍射(scxrd)
[0198]
数据是在配备有oxford cryosystems cobra冷却装置的rigaku oxford diffraction supernova dual source,cu at zero,atlas ccd衍射仪上收集的。如实验表中所述，使用cu kα或mo kα辐射收集数据。使用bruker axs shelxtl套件或olex2晶体学软件对结构进行解析和细化。除非另有说明，否则连接到碳上的氢原子以几何方式放置，并允许使用骑乘各向同性位移参数进行细化。连接到杂原子的氢原子位于差异傅里叶合成中，并允许使用各向同性位移参数自由精细化。使用mercury(1)生成晶体结构的参考衍射图。
[0199]
1.11 crystal 16
[0200]
crystal 16结晶系统(technobis,nl)用于确定材料的溶解度和亚稳区随温度的变化。通过将已知量的固体添加到已知量的冷冻溶剂(0.5至1.5ml)中并使用磁棒以350rpm搅拌来制备不同总浓度的api浆液。饱和温度是通过以0.5℃/min从20到90℃的加热和冷却循环来测量的。
[0201]
升高温度后，固体完全溶解，悬浮液变成澄清溶液，使透光率达到最大值。该温度被指定为透明点，假设其与饱和温度一致。然后，通过以0.5℃/min的速率冷却溶液，通过光透射率的降低来检测粒子最初形成的温度。这被指定为浊点。这些点由van'thoff方程拟合，浊点和澄清点之间的差异定义了系统的亚稳区宽度(mszw)。仪器控制软件是
crystallization systems，使用crystal clear和microsoft excel分析数据。
[0202]
实施例1b.其他仪器方法
[0203]
以下仪器方法用于实施例18-20中描述的实验。
[0204]
2.1 x射线粉末衍射仪(xrpd)
[0205][0206]
2.2差示扫描量热法(dsc)
[0207][0208]
2.3热重分析(tga)
[0209][0210]
2.4形式a的动态蒸气吸附(dvs)
[0211][0212]
2.5形式b的动态蒸气吸附(dvs)
[0213][0214]
2.6偏光显微镜(plm)
[0215][0216]
2.7核磁共振(nmr)
[0217][0218]
2.8高效液相色谱仪(hplc)
[0219][0220]
实施例2：化合物1的合成
[0221]
实施例2中描述的反应在玻璃或搪玻璃钢设备中进行。在搅拌的过滤器/干燥器(hastelloy)中分离和干燥产物。此外，可以在任何固定板过滤器(例如nutsche或aurora)或离心机中进行分离，并在盘式干燥器中进行干燥。
[0222]
步骤1.2-(4-((4-氯苄基)氧基)苯基)-6,7-二氢噁唑并[4,5-c]吡啶-5(4h)-羧酸叔丁酯
[0223]
将乙腈(15.6kg)加入惰性容器中，然后加入2-(4-羟基苯基)-6,7-二氢噁唑并[4,5-c]吡啶-5(4h)-羧酸叔丁酯(1.0kg,限速试剂；参见美国专利8,796,262第44栏)、对氯苄基溴(740g，1.14当量)和粉状碳酸钾(880g，1.06mol-当量)。将混合物加热至50
±
5℃并在该温度下搅拌直至起始材料耗尽，如通过hplc判断的。将混合物冷却至25
±
5℃，然后加入水(usp纯化，40kg)。搅拌1小时后，过滤产物并用水洗涤(usp纯化，4kg)。
[0224]
将湿产物在环境温度下在水(usp纯化，15kg)中再浆化至少1小时，过滤，并用水洗涤(usp纯化，5kg)。将产品在50
±
5℃下，在≥26in-hg下干燥，直到kf为≤1％，至少24小时。产物的产率为约1.18kg(85％)。
[0225]
步骤2.2-(4-((4-氯苄基)氧基)苯基)-4,5,6,7-四氢噁唑并[4,5-c]吡啶
[0226]
将2-(4-((4-氯苄基)氧基)苯基)-6,7-二氢噁唑并[4,5-c]吡啶-5(4h)-羧酸叔丁酯(1.0kg，限速试剂)装入惰性容器，然后是二氯甲烷(13.3kg)和三氟乙酸(2.64kg,约10当量)。将混合物在25
±
5℃下搅拌，直到起始材料被消耗，如通过hplc判断的，这至少16小时。将反应在真空下浓缩至最小可搅拌体积(msv)，然后加入乙酸乙酯(4kg)。继续蒸馏至msv，并再次加入乙酸乙酯(4kg)。最后一次将反应浓缩至msv，之后再次加入乙酸乙酯(7.2kg)。形成悬浮液。搅拌15分钟后，加入碳酸氢钠(1.03kg)的水溶液(usp纯化，10.45kg)，直到水层的ph为7.0-8.5。将悬浮液再搅拌15分钟，之后确认ph为7.0-8.5。将产物过滤并用水洗涤
(usp纯化，4.0kg)。
[0227]
将湿产物在环境温度下在水(usp纯化，10kg)中再浆化至少1小时，过滤，并用水洗涤(usp纯化，10kg)。将产品在50
±
5℃下，在≥26in-hg下干燥，直到kf为≤1％，至少24小时。产率为约0.696kg(90％)。
[0228]
步骤3.(1s,3s)-3-(2-(4-((4-氯苄基)氧基)苯基)-6,7-二氢噁唑并[4,5-c]吡啶-5(4h)-基)环丁烷-1-羧酸
[0229]
将2-(4-((4-氯苄基)氧基)苯基)-4,5,6,7-四氢噁唑并[4,5-c]吡啶(1.0kg，限速试剂)加入惰性容器中，然后加入甲醇(12.7kg)和3-氧代-环丁烷-1-羧酸(0.413kg,1.24当量)。将所得混合物在25
±
5℃搅拌至少2小时。然后以保持温度低于35℃的速率加入氰基硼氢化钠(0.399kg,2.17mol-当量)的甲醇(2.50kg)溶液。用甲醇(0.74kg)冲洗加料容器并将冲洗液加入反应中。在不加热的情况下(20-35℃)继续搅拌，直到ipt显示起始材料和亚胺的浓度总和被消耗，如通过hplc判断的。将已沉淀的产物过滤并用甲醇(4.75kg)和水(usp纯化，6.03kg)洗涤。将产品在50
±
5℃下，在≥26in-hg下干燥，直到kf为≤1％，至少24小时。粗产物的产率为约1.09kg(85％)。
[0230]
步骤4.从dmso重结晶
[0231]
将步骤3的粗产物(1.0kg)装入惰性容器中，然后装入dmso(26.8kg)。将混合物加热至70
±
5℃，此时获得溶液。将混合物冷却至尽可能接近20℃。过滤结晶产物并用三份甲醇(每份3.2kg)洗涤。将产品在50
±
5℃下，在≥26in-hg下干燥。
[0232]
步骤5.从乙酸/水中重结晶
[0233]
将步骤4的产物(1.0kg)装入惰性容器中，然后装入乙酸(6.29kg)。将混合物加热至70-75℃，此时获得溶液。将溶液通过0.2微米的筒式过滤器过滤并在必要时将滤液的温度重新调节至70-75℃。加入水(usp纯化，0.85kg)，然后加入2wt％的化合物1晶种。将混合物在70-75℃下搅拌约30分钟。然后在大约2小时内加入额外的水(usp纯化，0.85kg)，同时将温度保持在70-75℃。接下来，将批料以约0.6℃/min冷却至20
±
3℃，其中搅拌至少12小时。将产物过滤，用水(usp纯化，2.0kg)洗涤并在35
±
5℃用氮气吹扫干燥，直到残留乙酸的水平《5000ppm。然后将固体产物重新平衡以形成一水合物，即化合物1形式b，其在实施例13中被表征。
[0234]
或者，来自步骤3的粗产物可以以乙酸/水的重结晶形式直接使用，以提供化合物1形式b。
[0235]
实施例3：多晶型物的初始制备和分析
[0236]
将化合物1(100mg)分配到4ml小瓶中。向其中加入dmso(25vol)并将悬浮液加热至80℃，伴随500rpm磁力搅拌，得到澄清溶液。向一个样品中加入h2o(10vol)(样品01)，观察到白色沉淀物的形成。向第二个样品不添加反溶剂(样品02)。以0.1℃/min将样品冷却至25℃，然后在25℃等温下保持8小时。通过过滤分离固体并在正压下干燥，然后在真空烘箱中在40℃下干燥过夜。
[0237]
另外，将化合物1(100mg)分配到4ml小瓶中。向其中加入乙酸(10vol)并将悬浮液加热至80℃，伴随500rpm磁力搅拌，得到澄清悬浮液。向一个样品中加入h2o(10vol)(样品03)，观察到白色沉淀物的形成。以0.1℃/min将样品冷却至25℃，然后在25℃等温下保持8小时。观察到第二个样品(样品04)是透明的。向其中滴加乙腈(30vol)直到观察到浑浊，随
后将该样品再搅拌一小时，然后通过离心分离。通过过滤分离样品03并在抽吸下干燥。将两个样品均在40℃的真空烘箱中干燥过夜。
[0238]
为清楚起见，每个样品所经历的不同实验参数详述于表1。
[0239]
表1.形式a和b的尝试制备的实验参数和观察结果
[0240]
样品编号溶剂反溶剂观察结果添加的反溶剂01dmsoh2o白色悬浮液n/a02dmson/a白色悬浮液n/a03乙酸h2o白色悬浮液n/a04乙酸n/a透明溶液乙腈
[0241]
在每个实验中，成功分离出白色固体，固体的分析详述于表2。没有实验中成功分离出形式a，相反，在使用dmso作为溶剂的实验中，观察到了(样品01和样品02)形式c。形式c的1h-nmr光谱与化合物1一致，并且在275℃开始热降解之前，在tga热分析图中没有发现质量损失。材料的dsc分析显示在242.4℃开始小放热，然后在252.8℃出现急剧吸热。
[0242]
在使用乙酸作为溶剂的每个实验中，分离出具有对应于形式b的xrpd图的材料。该材料的1h-nmr分析与所提供材料的结构一致，具有对应于0.04摩尔当量乙酸的附加峰。该材料的tga热分析图在40至140℃之间显示出3.5％的质量损失，这与0.88摩尔当量的水一致。相应的dsc热分析图包含40和140℃之间的宽吸热，然后是244.8℃开始的急剧吸热。
[0243]
表2.形式a和b的尝试制备物的材料分析
[0244][0245]
这些数据综合起来证明了形式b的成功制备和形式c的分离。当重叠时，形式c和形式b材料的xrpd图与由实施例2得到的固体产品的xrpd一致。
[0246]
实施例4.化合物1的溶解度
[0247]
研究了化合物1的溶解度。为此，使用crystal 16获得了亚稳态区宽度曲线。由于化合物的溶解度非常高，未进行使用纯乙酸的实验。
[0248]
在crystal 16上分析了化合物1(各种质量)在dmac和dmso(1ml)中的溶解度(dmso时25-90℃，dmac时0-90℃)。所有样品均使用0.5℃/min的加热/冷却速率和300rpm的搅拌速率。分析所得浊度/温度图以获得溶解度曲线并确定亚稳区宽度。通过过滤分离任何沉淀的固体并通过xrpd分析。
[0249]
化合物1在dmso中的溶解度随温度升高而增加。在冷却时观察到材料沉淀，导致亚
稳区宽度约为30℃。分离的材料的xrpd衍射分析表明它在所有情况下都对应于形式c。
[0250]
化合物1在dmac中的溶解度随温度升高而增加。在冷却时观察到材料沉淀，导致亚稳区宽度约为30℃。分离的材料的xrpd衍射分析表明，除一种情况外，在所有情况下，分离的材料都是形式c。在其余情况下，在仍潮湿的情况下对分离的材料进行分析，并显示其具有对应于形式d的xrpd图案。干燥后，形式d材料转化为形式c。因此形式d被指定为亚稳态dmac溶剂化物，它在干燥时很容易去溶剂化为形式c。
[0251]
实施例5.形式b和形式c的相对热力学稳定性
[0252]
对形式b和形式c的相对稳定性进行了测定，以确定哪种材料在工艺相关溶剂中的热力学稳定性更高。由于从使用dmac作为溶剂的实验中分离出可疑的溶剂化物，因此确定只有dmso和乙酸是合适的工艺溶剂。因此选择这些溶剂与相关反溶剂的组合用于竞争性浆料实验。由于实施例2得到的化合物1显示为由形式b和形式c组成，因此将该材料用作起始材料。
[0253]
将化合物1(来自实施例2)分配到hplc小瓶中。随后向其中加入1ml选定的溶剂以得到悬浮液。在90℃、50℃或25℃下以500rpm搅拌将材料浆化72小时。随后通过离心分离材料并通过xrpd分析。
[0254]
竞争浆料的结果显示在表3中。在所有情况下，材料在整个实验过程中都保持为浆液。分离的材料的xrpd分析表明，在其中乙酸是溶剂混合物的组分的所有六个实验中，在72小时制浆后，形式b是唯一可检测的多晶型物。该结果表明，在所研究的相应乙酸混合物和温度下，形式b比形式c在热力学上更稳定。
[0255]
在其余的实验中，发现形式b是浆化72小时后唯一可检测的多晶型物，除了在高温下使用dmso作为溶剂的实验。从实验中分离出的材料，其中化合物1在90℃在dmso中浆化72小时，其xrpd图案与结晶性差的形式a一致。这表明形式a是90℃在dmso中热力学最稳定的多晶型物。从化合物1在50℃下在dmso中浆化72小时的实验中分离的材料通过xrpd显示结晶度差，并且不可能指定形式。
[0256]
总之，这些结果表明，在评估的大多数实验条件下，形式b比形式c更热力学稳定，并且形式a是90℃在dmso中热力学最稳定的多晶型物。
[0257]
表3.形式b和形式c竞争浆料在工艺相关溶剂中的观察和结果
[0258]
溶剂温度浆化后的观察结果xrpd分析dmso90℃橙色溶液中的白色固体结晶性差的形式admso:h2o(1:1)90℃橙色溶液中的白色固体结晶性差的形式b乙酸：h2o(1:1)90℃浑浊白色悬浮液形式b乙酸:mecn(1:3)90℃浑浊白色悬浮液形式bdmso50℃浑浊白色悬浮液结晶差dmso:h2o(1:1)50℃浑浊白色悬浮液结晶性差的形式b乙酸：h2o(1:1)50℃浑浊白色悬浮液形式b乙酸:mecn(1:3)50℃浑浊白色悬浮液形式bdmso25℃浑浊白色悬浮液结晶性差的形式bdmso:h2o(1:1)25℃浑浊白色悬浮液结晶性差的形式b乙酸：h2o(1:1)25℃浑浊白色悬浮液形式b
乙酸:mecn(1:3)25℃浑浊白色悬浮液形式b
[0259]
实施例6.形式b的固态表征
[0260]
将化合物1(1g)分配到20ml小瓶中。向其中加入乙酸(6vol,6ml)并将悬浮液加热至55℃，伴随500rpm的磁力搅拌，得到澄清的浅黄色溶液。加入h2o(1vol,1ml)，观察到白色沉淀物的形成。以1ml等分试样加入另外的9vol h2o(9ml)。以0.3℃/min将样品冷却至25℃，然后在25℃等温下保持1小时。通过过滤分离白色沉淀，抽吸干燥30分钟，然后在真空烘箱中在40℃干燥过夜。
[0261]
使用乙酸作为溶剂和水作为反溶剂，从反溶剂结晶中成功地分离出形式b。形式b的固态表征结果显示在表4中。单晶x射线衍射实验(参见实施例11)证明形式b是一水合物。在该规模下的分离的材料的xrpd分析表明，该材料的峰比在100mg规模下(实施例3)获得的峰少。在较低规模下观察到的额外峰是由于形式b材料在干燥过程中脱水和部分转化为图案e所致。制备的形式b材料的tga分析证实了这一发现，因为在tga热分析图中在40和150℃之间观察到3.9％的质量损失，相当于0.99当量的水。卡尔费休分析进一步支持了这一结果，该分析显示该材料为3.95质量％的水(1.0摩尔当量的水)。
[0262]
分离的形式b材料通过hplc测量具有相对高的纯度(97.9％)并且具有与所提供材料的分子结构一致的1h-nmr谱，没有对应于反式异构体的峰。获得的颗粒plm图像显示它们是典型的不受控制的反溶剂结晶的板条和较大聚集体的混合物。对应于0.16摩尔当量乙酸的峰出现在1h-nmr谱中。材料的tga热分析图显示在210和260℃之间的第二次质量损失为1.9％，这可能对应于0.14摩尔当量的乙酸。从相应的dsc热分析图中可以明显看出，这种质量损失与材料的熔化相吻合(在237.7℃下吸热)。材料在40℃/75％rh和25℃/97％rh的条件下储存一周不会导致如通过xrpd测量的材料变化。
[0263]
材料的gvs分析表明，在20至0％rh的解吸循环中质量损失为2.1％，对应于0.51摩尔当量的水。该质量在随后的吸附循环中重新获得，尽管观察到滞后现象，这表明水合物的形成。
[0264]
gvs动力学图的检查表明材料在解吸过程中没有完全平衡，表明脱水不完全。
[0265]
通过单晶x射线粉末衍射数据，该数据集表明形式b可能是一水合物，在》20％rh的条件下是稳定的，并且在失水后容易再水化。
[0266]
表4.形式b的表征
[0267][0268]
*材料在空气中再水合24小时后进行的热重分析。tga是在从真空烘箱中取出材料后进行的，其中材料显示含有2.2％的水。
[0269]
实施例7.溶解度曲线的构建和乙酸/水混合物中形式b的亚稳区的识别
[0270]
为了确定乙酸/水是否代表了一种用于形式b结晶的可行溶剂体系，建立了形式b在各种乙酸/水混合物中的溶解度曲线和随后的在dynochem中对溶解度行为的建模。
[0271]
在25和90℃之间以0.5
°
/min的加热/冷却速率和350rpm的搅拌速度在crystal 16上分析乙酸/水(9:1、3:1、3:2、1:1体积比，0.5ml)中的形式b。分析所得浊度/温度图以获得溶解度曲线并确定亚稳区宽度。通过xrpd分析分离的固体。随后将溶解度曲线输入dynochem结晶工具箱，以模拟形式b的溶解度作为溶剂组成和温度的函数。
[0272]
将化合物1(1g)分配到20ml小瓶中。向其中加入5vol乙酸(5ml)并将悬浮液加热至60℃，伴随500rpm的磁力搅拌，得到澄清溶液。通过注射泵在90秒内滴加h2o(0.48vol,0.48ml)，并且溶液保持澄清。加入形式b晶种(20mg)并观察到维持。将溶液搅拌30分钟，然后通过注射泵在一小时内滴加水4.36vol(4.36ml)。将得到的白色悬浮液以0.1℃/min的速度冷却至25℃，然后等温保持9小时，然后通过过滤分离。用h2o(2vol)洗涤所得白色固体并抽吸干燥30分钟。
[0273]
使用crystal 16测定形式b在四种不同乙酸:h2o混合物(体积比9:1、3:1、3:2和1:1)中的溶解度曲线。在不同的温度下观察到形式b的溶解，仅在冷却斜坡内在乙酸:h2o 9:1中观察到材料的沉淀。在所有情况下，分离的材料通过xrpd显示为形式b。实验时间范围内的材料沉淀表明，尽管系统表现出相对较大的亚稳区，但成核动力学还不够慢，无法在没有晶种的情况下阻止结晶。将对应于van't hoff方程的曲线拟合到为每种溶剂混合物获得的溶解度数据集。很明显，形式b的溶解度随溶剂组成而变化。
[0274]
获得溶解度曲线后，插入曲线中的值进入dynochem结晶工具箱，以模拟形式b的溶
解度作为溶剂组成的函数。从dynochem模型中获得了预测的溶解度值和测量的溶解度值之间的良好一致性(r2＝0.999，误差4.8％)。从模型中可以看出，溶液组成与形式b溶解度之间的关系是非线性的，溶解度随着乙酸含量的增加而增加。
[0275]
一旦溶解度作为溶剂组成的函数被成功建模，在dynochem中进行模拟以尝试定位冷却或反溶剂结晶，这将获得令人满意的产率。
[0276]
确定了一种反溶剂结晶，其中将化合物1溶解在乙酸中后，可以进行初始加水以在60℃的起始温度下得到1.1的过饱和比，从而在反溶剂(h2o)加入并冷却至25℃后得到90％的预期产率。材料的固态分析示于表5中。
[0277]
表5.从dynochem模型中确定的结晶结果
[0278][0279]
形式b材料的分离产率为84％，低于dynochem溶解度模型预测的产率(90％)。这种差异被认为是由形式b材料的缓慢结晶动力学引起的，如在crystal 16实验中观察到的大亚稳区宽度所示。在进行的实验中，添加晶种后未观察到溶解，表明系统是亚稳态的，对dynochem模型进行了验证，表明系统是过饱和的(过饱和比1.1)。
[0280]
该材料的固态分析表明它是一水合物(tga和卡尔费休分析为0.96摩尔当量的水)。hplc分析显示该物质以高纯度(98.8％)形成，在1h-nmr谱中没有明显的反式异构体。plm显示该材料由板条和一些聚集体组成，并且在1h-nmr谱中对应于乙酸的峰降低，表明受控结晶过程。该样品的gvs数据与之前分析的样品的gvs数据存在差异，动力学gvs图并未表明样品在解吸循环期间已完全平衡，因此，质量损失不被认为代表样品的含水量。
[0281]
作为温度和溶剂组成的函数，成功建模了形式b在乙酸/h2o中的溶解度。所得模型用于鉴定用于分离形式b的反溶剂结晶，预计产率为90％。这种结晶因形式b是唯一分离的多晶型而增强。该物质以84％的产率被分离，具有低残留溶剂含量和高纯度。因此，所得结晶被认为适合作为实验设计研究的基础，用于以优化的产率和纯度分离形式b材料。
[0282]
实施例8.通过实验设计方法优化形式b在乙酸/h2o溶剂混合物中的反溶剂结晶
[0283]
初步筛选溶解度测定工作表明，乙酸/h2o溶剂体系最适合进一步开发。随后通过实验设计方法对形式b的结晶进行优化，以评估是否可能提高产率和纯度。
[0284]
根据初步实验的观察结果，进行了实验设计(“doe”)研究，以研究影响结晶过程的主要因素。选择两个水平的因子设计作为最适合此筛选目的的设计类型。执行的doe研究是2
4-8
的部分因子设计。
[0285]
确定的doe变量是粗体带下划线。为清楚起见，将这些值和样品id列在表6中。将化合物1(1g)装入装有十字搅拌棒的20ml沸腾管中。向其中加入乙酸(5ml，5vol)并将悬浮液加热至℃，伴随500rpm的悬浮磁力搅拌，以在hel polybock上得到澄清溶液。然后逐滴添加h2o(不同体积)以得到初始过饱和比。然后加入晶种(20mg)()并搅拌30分钟，然后在小时内加入h2o(ml)。然后将悬浮液以0.2/1.0℃/min的速度冷却至15/25℃，然后等温保持0.5/16小时，然后通过过滤分离。
[0286]
将样品用h2o冲洗，然后抽吸干燥30分钟，然后在40℃的真空烘箱中干燥。通过xrpd、卡尔费休法、1h-nmr和hplc分析样品以确定形式、残留溶剂含量、纯度和反式异构体的存在。为获得所需的过饱和比而添加的水量显示在表6中。
[0287]
表6.doe条件
[0288][0289][0290]
将提供的化合物1(1g)装入装有十字搅拌棒的20ml沸腾管中。向其中加入乙酸(5ml，5vol)并将悬浮液加热至℃，伴随500rpm的悬浮磁力搅拌，以在hel polybock上得到澄清溶液。然后逐滴添加水(不同体积)以得到初始过饱和比1.2。然后加入晶种(20mg)并搅拌30分钟，然后在两小时内加入水(vol,3.35/6.0ml)。然后将悬浮液以0.6℃/min的速度冷却至15/25℃，然后等温保持16小时，然后通过过滤分离。将样品用h2o冲
洗，然后抽吸干燥30分钟，然后在40℃的真空烘箱中干燥。
[0291]
通过xrpd、卡尔费休法、1h-nmr和hplc分析样品以确定形式、残留溶剂含量、纯度和反式异构体的存在。doe变量以这些值粗体带下划线识别，以及添加水量以使溶液的过饱和比为1.2，详细见表7中。
[0292]
表7.实验变量并用于实验增强程序的设计
[0293]
初始温度添加h2o以提供过饱和添加的反溶剂分离温度(℃)500.293.3515700.853.3525700.85625
[0294]
实验参数，以及为实验研究设计选择的高值和低值显示在表8中。选择的响应是产率、反式异构体含量、纯度、残留乙酸含量、形式和残留水含量。
[0295]
表8.实验研究设计中使用的实验参数和变量
[0296]
doe因素doe因素高doe因素低初始温度(℃)7050接种后过饱和度1.11.3接种是否反溶剂添加量2.54.2反溶剂添加时间13冷却速度(℃/min)0.21分离温度(℃)1525保留时间(小时)0.516
[0297]
使用实验设计方法研究了形式b在乙酸/水体系中的反溶剂结晶。在所有情况下，形式b是唯一分离的多晶型物，通过hplc测定为高纯度，不存在反式异构体，如1h-nmr所证明。实验模型的设计表明，高初始温度和高分离温度导致提高的产率和低残留乙酸含量。这一结果在随后的增强实验中得到了验证。此外，增加的反溶剂含量显示出进一步增加产率，而不存在纯度降低或残留乙酸含量增加。
[0298]
实施例9.结晶放大至10g规模
[0299]
将化合物1(10g)装入140ml hel封闭小瓶中。向其中加入乙酸(5vol,50ml)，并在悬浮磁力搅拌(500rpm)下将样品加热至70℃，得到澄清溶液。进行热过滤以清除样品中的任何碎屑，并将滤液在140ml hel小瓶中加热至70℃，伴随悬浮磁力搅拌。将h2o(0.85vol,8.5ml)通过注射泵在一分钟内加入。将晶种添加到样品(200mg，形式b)中。将样品搅拌30分钟，然后通过注射泵在两小时内滴加6vol h2o(6vol,60ml)。然后将样品以0.6℃/min的速度冷却至25℃，然后将样品等温保持16小时。通过过滤分离得到的白色固体，用h2o(2vol,20ml)冲洗，然后抽吸干燥30分钟。然后将样品在40℃的真空烘箱中干燥过夜。
[0300]
结晶成功地放大到10g规模。形式b是分离的唯一多晶型物，该材料的分析显示在表9中。将该材料以83％的产率分离，通过1h-nmr发现没有明显的反式异构体含量。hplc分析表明该材料具有高纯度(98.7％)，残留乙酸含量为0.04摩尔当量。从1g规模实验(88％)和10g规模实验中分离出的产率之间的差异被认为是由于在结晶前进行的热过滤过程中的损失造成的。
[0301]
表9.来自10g放大的材料分析结果。
[0302][0303]
因此，该实验证明了该结晶过程在分离多晶型纯形式b材料方面的可放大性。为了清楚起见和将来使用，该过程显示在表10中。应该注意的是，对所用乙酸进行了卡尔费休分析，发现其含有0.4重量％的水。
[0304]
表10.化合物1形式b结晶的工艺汇总
[0305]
步骤动作体积1.装入化合物1(1.00wt,1.00当量)1.02.加入冰醋酸(5.0vol)并开始搅拌6.03.将浆料加热至70℃，得到澄清溶液(此时可包括澄清步骤)6.04.1分钟内加入h2o(0.85vol)6.855.装入晶种(0.02wt)6.876.在70℃下老化至少30分钟6.877.在2小时内加入h2o(6.0vol)12.878.以0.6℃/min冷却至25℃12.879.在25℃下至少老化12小时12.8710.过滤浆液并用水(2.0vol)洗涤1.011.转移到真空烘箱继续干燥≤40℃1.0
[0306]
实施例10.形式b的可变温度和湿度分析
[0307]
使用empyrean xrpd在25℃的温度下分析化合物1形式b。然后使用可变温度台以10℃/min的升温速率将样品原位加热至150℃，并保持等温2分钟，然后进行第二次xrpd测量。然后将样品以10℃/min的降温速率冷却至25℃，等温保持2分钟，然后进行第三次xrpd测量。
[0308]
使用empyrean xrpd在40℃下分析化合物1形式b。然后将样品置于40℃的低真空条件下，并通过xrpd测量。将样品从衍射仪中取出，然后在25℃、50％rh的条件下放置48小时。在8、24和48小时后进行xrpd测量。在高分辨率仪器上进行24和48小时后的测量，因此衍射图表现出较低的信噪比。
[0309]
在某些情况下，在40℃从真空烘箱中分离材料后，所获得的xrpd图案表现出比形式b的更多的峰。观察到样品在环境条件下储存48小时导致峰从衍射图中消失，证明材料向形式b转变。
[0310]
形式b材料的gvs分析表明，在低相对湿度下质量损失与材料脱水相对应，并且在相对湿度》20％rh下再水合。因此，在衍射图中观察到的额外峰被认为是由于在真空烘箱中储存期间形成的无水物。为了评估这一假设，在真空条件下以及高温条件下进行原位xrpd实验，因为在材料的tga热分析图中观察到质量损失伴随着1.0当量的水的损失。
[0311]
将样品加热到150℃导致xrpd发现形式发生变化，如由额外的峰证明的。这种新形式表示为形式e。冷却后，材料保持不变，峰值位置的变化归因于材料的热收缩。在加热时观察到的新峰与在真空烘箱中储存后的形式b样品中观察到的峰一致。值得注意的是，储存在真空烘箱中的材料的xrpd图没有显示完全转化为不稳定的无水物形式e，表明在真空干燥过程中发生了不完全的水去除。该结果与gvs分析相对应，其中在实验时间范围内仅去除了50％的结合水。
[0312]
单晶x射线衍射实验表明水和api之间的氢键长度较短，表明键合强。该信息解释了为什么在gvs实验和低真空条件下仅观察到形式b部分转化为形式e。
[0313]
实施例11.单晶实验
[0314]
通过从乙酸/水溶液中蒸发获得化合物1形式b的晶体。分离出尺寸和质量足以通过单晶x射线衍射进行分析的晶体，尺寸约为0.19x0.15x0.01mm。
[0315]
化合物1形式b的晶体结构在100k下测定，所有结构数据的汇总可见于表11中。化合物1形式b是三斜晶系的中心对称空间群p-1，最终r1[i》2σ(i)]＝3.89％。
[0316]
表11.形式b的结构数据
[0317][0318][0319]
实施例12.化合物1形式a的表征
[0320]
导致形成形式a的条件描述于例如实施例5中。
[0321]
形式a的xrpd图如图1所示。形式a显示出在约252℃的温度下具有吸热峰的dsc热分析图。图2显示化合物1形式a的dsc热分析图。图3显示化合物1形式a的tga热分析图。化合物1形式a的tga热分析图(图3)表明样品含有约43重量％的dmso。
[0322]
实施例13.化合物1形式b的表征
[0323]
形式b的制备描述于例如实施例2、3、9中。
[0324]
形式b的xrpd图如图4所示和峰值数据在下面的表12中给出。
[0325]
表12.形式b的xrpd峰数据
[0326]
2θ(
°
)强度(％)8.5100.015.131.616.112.116.523.217.011.617.99.818.615.820.913.621.319.6
21.520.221.98.123.551.124.623.725.226.725.571.326.510.627.419.728.220.429.210.1
[0327]
形式b显示出在约246℃的温度下具有吸热峰的dsc热分析图。图5显示化合物1形式b的dsc热分析图。图6显示化合物1形式b的tga热分析图。图7显示化合物1形式b的动态蒸气吸附(dvs)等温图。
[0328]
实施例14.化合物1形式c的表征
[0329]
形式c的制备描述于例如实施例3和4中。
[0330]
形式c的xrpd图如图8所示和峰值数据在下面的表13中给出。
[0331]
表13.形式c的xrpd峰数据
[0332]
2θ(
°
)强度(％)7.419.311.09.714.78.715.610.016.514.917.313.817.510.718.515.319.413.619.512.522.294.525.080.625.4100.028.286.329.832.9
[0333]
形式c显示的dsc热分析图具有在约242℃的温度下的放热峰和在约253℃的温度下的吸热峰。图9显示化合物1形式c的dsc热分析图。图10显示化合物1形式c的tga热分析图。
[0334]
实施例15.化合物1形式d的表征
[0335]
导致形成形式d的条件描述于例如实施例4中。
[0336]
形式d的xrpd图如图11所示。
[0337]
实施例16.化合物1形式e的表征
[0338]
形式e的制备描述于例如实施例10中。
[0339]
形式e的xrpd图如图12所示和峰值数据在下面的表14中给出。
[0340]
表14.形式e的xrpd峰数据
[0341]
2θ(
°
)强度(％)8.718.010.88.111.66.614.06.615.332.916.225.116.913.617.410.018.313.519.16.121.111.521.913.622.69.323.248.924.615.325.228.725.5100.028.228.929.115.529.99.7
[0342]
实施例17.在水介质中的溶解度
[0343]
如下表所示，测量了化合物1形式a和化合物1形式b在不同水性悬浮液中的室温平衡溶解度。如通过对来自离心样品的上清液的hplc分析所测量的，在所测试的不同水性系统中，与形式b相比，形式a表现出3-6倍提高的溶解度。
[0344][0345]
hp-b-cd＝羟丙基-β-环糊精；sls＝十二烷基硫酸钠；hpmc＝羟丙基甲基纤维素
[0346]
实施例18a.化合物1形式a晶种的制备
[0347]
通常，通过从化合物1形式b和dmso溶剂中除去尽可能多的水来制备化合物1形式a的晶种样品。将化合物1形式b在开口小瓶中加热至约180℃，以除去水合水。将样品在升高的温度下保持约30秒。将500μl量的干燥dmso(在分子筛上干燥)添加到60mg样品中，并盖住/密封小瓶。在压力下将盖住/密封的小瓶加热至约120℃以溶解固体(约1分钟)。将密封的小瓶在室温水浴中快速冷却，同时在声波浴中进行超声处理，直到如形成沉淀物证明的发生了成核。将仍然热的轻质悬浮液冷却至室温。在室温下静置1小时后，通过过滤分离固体并用几毫升无水丙酮洗涤，得到化合物1形式a晶种。
[0348]
实施例18b.形式a的替代性制备和表征
[0349]
在100℃搅拌下将约30mg化合物1加入到0.6ml dmso中，得到澄清溶液。在冷却至约70℃后，将化合物1形式a晶种(参见实施例18a)添加到所选实验的溶液中以控制多晶型物的形成。在约一分钟内沉淀出固体。接下来，加入约0.6ml acn或etoh以提高产率。结果汇总在表15和图13中。
[0350]
表15.
[0351][0352]
//＝未进行
[0353]
实施例19.化合物1形式a的放大制备
[0354]
在搅拌下将约18.8g化合物1形式b加入到300ml dmso中。加热至100℃后得到澄清溶液。然后以1℃/min的速率冷却澄清溶液。在约86℃，加入约20mg的化合物1形式a晶种(参见实施例18a)。约5分钟后，出现固体。以0.1℃/min的速率将悬浮液进一步冷却至25℃并在25℃下搅拌约18小时。通过抽滤回收固体。将获得的湿滤饼在真空下在60℃下干燥18小时。以约81％的产率获得约15.2g化合物1形式a，为灰白色固体。表征结果汇总在表16-17和图14-18中。
[0355]
表16.形式a的表征
[0356][0357][0358]
表17.化合物1形式a的xrpd峰
[0359]
[0360][0361]
实施例20.化合物1形式a和化合物1形式b的吸湿性评价
[0362]
通过dvs在25℃评估化合物1形式a和化合物1形式b的吸湿性根据dvs结果，化合物1形式a是非吸湿性的，而化合物1形式b是轻微吸湿性的。在dvs测试之后，化合物1形式a没有显示形式变化，但是结晶度降低并且峰变宽，表明化合物1形式a的潜在不稳定性。在dvs测试之后，化合物1形式b没有形式变化。在dvs图中观察到化合物1形式a和化合物1形式b之间没有形式转变，这表明化合物1形式a和化合物1形式b之间的形式转变动力学在本体状态下是缓慢的。吸湿性评价的dvs数据汇总在表18和图19中。
[0363]
表18.形式a和形式b在25℃下的吸湿性评价
[0364][0365]
//＝未进行
[0366]
sorp.＝吸附
[0367]
desorp.＝解吸
[0368]
实施例21.水活度研究
[0369]
将约15mg形式a和15mg形式b加入到不同水分活度的饱和溶液中，分别在25℃和50℃下平衡4天。过滤所得悬浮液，并通过xrpd研究固体部分(湿饼)以确定多晶型物。
[0370]
根据xrpd结果，在甲醇/水中获得形式b，在25℃下水活度(a.w.)范围为0.1至0.9，如图20a-20b所示。在50℃下在甲醇/水中获得形式b，a.w.≥0.2，而以a.w.0.1获得形式a和形式b的混合物，如图21a-21b所示。这些结果表明，形式a和形式b之间的临界水活度在25℃时小于0.1，但在50℃时介于0.1和0.2之间。形式b在环境条件下比形式a更稳定。水活度研究的结果如表19所示。二元溶剂体系的水活度是基于unifac方法(uniquac官能团活度系
数)计算的。
[0371]
表19. 25℃下的水活度研究
[0372][0373]
表20. 50℃下的水活度研究
[0374][0375]
实施例23.固态稳定性研究
[0376]
通过hplc、plm、xrpd、dsc、tga和kf对两批化合物1进行了表征。物理表征结果表明原料的结晶状态。根据在不同条件下的稳定性研究，这两种形式的化合物在不同湿度下实际上稳定了至少4周，xrpd图没有变化，也没有发现杂质生长。表21显示了4周、6周和8周测试时的代表性稳定性数据。
[0377]
表21.两种形式的化合物1的稳定性结果
[0378]
[0379][0380]
从前面的描述中，本领域技术人员将清楚除了这里描述的那些之外还有本发明的各种修改。这类修改也旨在落入所附权利要求的范围内。在本技术中引用的每个参考文献，包括所有专利、专利申请和出版物，都通过引用整体并入本文。