技术特征：
1.一种多肽，所述多肽包含抗原结合片段(af1)，其中所述af1包含轻链互补决定区(cdr-l)、重链互补决定区(cdr-h)、轻链框架区(fr-l)和重链框架区(fr-h)，并且其中所述af1：a.特异性地结合表皮生长因子受体(egfr)；并且b.包含fr-h1、fr-h2、fr-h3和fr-h4，其中fr-h1具有seq id no:14-16中的任一个的氨基酸序列，fr-h2具有seq id no:18或seq id no:19的氨基酸序列，fr-h3具有seq id no:20或seq id no:21的氨基酸序列，fr-h4具有seq id no:22-24中的任一个的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的多肽，其中所述af1还包含cdr-h3，其中所述cdr-h3具有seq id no:6的氨基酸序列。3.根据权利要求1或权利要求2所述的多肽，其中所述af1还包含分别具有seq id no:4、5和6的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3。4.根据权利要求1-3中任一项所述的多肽，其中所述af1相对于由seq id no:52中所示的序列组成的抗原结合片段具有更高的等电点(pi)。5.根据权利要求1-4中任一项所述的多肽，其中所述af1掺入所述多肽中以形成抗egfr双特异性抗体，所述多肽相对于对照双特异性抗体表现出更高的pi，其中所述多肽包含所述af1和结合t细胞受体分化簇3(cd3)的参考抗原结合片段，并且其中除所述af1被seq id no:52替代之外，所述对照双特异性抗原结合片段与所述多肽相同。6.根据权利要求4或权利要求5所述的多肽，其中所述af1表现出比由seq id no:52中所示序列组成的抗原结合片段的pi高至少0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1.0ph单位的pi。7.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述af1还包含fr-l1、fr-l2、fr-l3和fr-l4，其中a.fr-l1表现出与seq id no:7的氨基酸序列至少90％、或至少95％的序列同一性或与其相同；b.fr-l2表现出与seq id no:8的氨基酸序列至少90％、或至少95％的序列同一性或与其相同；c.fr-l3表现出与seq id no:9-11的氨基酸序列至少90％、或至少95％的序列同一性或与其相同；并且d.fr-l4表现出与seq id no:13的氨基酸序列至少90％、或至少95％的序列同一性或与其相同。8.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述af1 cdr-l包含分别包含seq id no:1、2和3的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。9.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述fr-l包含：a.具有seq id no:7的氨基酸序列的fr-l1，b.具有seq id no:8的氨基酸序列的fr-l2，c.具有seq id no:9的氨基酸序列的fr-l3，d.具有seq id no:13的氨基酸序列的fr-l4。10.根据权利要求1-8中任一项所述的多肽，其中所述fr-l包含：a.具有seq id no:7的氨基酸序列的fr-l1，
b.具有seq id no:8的氨基酸序列的fr-l2，c.具有seq id no:10的氨基酸序列的fr-l3，d.具有seq id no:13的氨基酸序列的fr-l4。11.根据权利要求1-8的多肽，其中所述fr-l包含：a.具有seq id no:7的氨基酸序列的fr-l1，b.具有seq id no:8的氨基酸序列的fr-l2，c.具有seq id no:11的氨基酸序列的fr-l3，和d.具有seq id no:13的氨基酸序列的fr-l4。12.根据权利要求1-11中任一项所述的多肽，其中所述fr-h包含：a.具有seq id no:14的氨基酸序列的fr-h1，b.具有seq id no:18的氨基酸序列的fr-h2，c.具有seq id no:20的氨基酸序列的fr-h3，d.具有seq id no:22或23的氨基酸序列的fr-h4。13.根据权利要求1-11中任一项所述的多肽，其中所述fr-h包含：a.具有seq id no:15的氨基酸序列的fr-h1，b.具有seq id no:19的氨基酸序列的fr-h2，c.具有seq id no:21的氨基酸序列的fr-h3，d.具有seq id no:24的氨基酸序列的fr-h4。14.根据权利要求1-11中任一项所述的多肽，其中所述fr-h包含：a.具有seq id no:16的氨基酸序列的fr-h1，b.具有seq id no:19的氨基酸序列的fr-h2，c.具有seq id no:20的氨基酸序列的fr-h3，d.具有seq id no:22或23的氨基酸序列的fr-h4。15.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述af1包含与seq id no:28-32的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的序列同一性或与其相同的可变重链(vh)氨基酸序列。16.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述af1包含与seq id no:25-27的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的序列同一性或与其相同的可变轻链(vl)氨基酸序列。17.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述af1包含与seq id no:37-51中的任一个的氨基酸序列具有至少95％、96％、97％、98％、99％的序列同一性或与其相同的氨基酸序列。18.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述af1特异性地结合人或食蟹猴(cyno)egfr。19.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述af1特异性地结合人和食蟹猴(cyno)egfr。20.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述af1表现出的pi为约5.4至约5.6、或约5.5至约5.7、或约5.6至约5.8、或约5.7至约5.9、或约5.8至约6.0、或约5.9至约6.1、或约6.0至约6.2、或约6.1至约6.3、或约6.2至约6.4、或约6.3至约6.5、或约6.4至约
6.6。21.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述af1表现出的pi为约5.4、或约5.5、或约5.6、或约5.7、或约5.8、或约5.9、或约6.0、或约6.1、或约6.2、或约6.3、或约6.4、或约6.5、或约6.6。22.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述af1表现出在5.4和6.6之间、包括端点的pi。23.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述af1以在约0.1nm和约100nm之间的k
d
特异性地结合egfr，如在包含egfr或其表位的体外抗原结合测定中所确定的。24.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中相对于seq id no:52的氨基酸序列，所述af1在框架区中具有对疏水性氨基酸的至少一个氨基酸取代，其中所述疏水性氨基酸选自异亮氨酸、亮氨酸或甲硫氨酸，并且取代氨基酸选自精氨酸、苏氨酸或谷氨酰胺。25.根据权利要求24所述的多肽，其中相对于seq id no:52的氨基酸序列，所述af1在一个或更多个框架区中具有对疏水性氨基酸的至少两个氨基酸取代，其中所述疏水性氨基酸选自异亮氨酸、亮氨酸或甲硫氨酸，并且所述取代氨基酸选自精氨酸、苏氨酸或谷氨酰胺。26.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，所述多肽还包含第一释放区段肽(rs1)，其中所述rs1是用于被哺乳动物蛋白酶切割的底物。27.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述rs1是选自由豆荚蛋白、mmp-2、mmp-7、mmp-9、mmp-11、mmp-14、upa和间质蛋白酶组成的组的蛋白酶的底物。28.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述rs1包含与选自seq id no:53-671中任一个的序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。29.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述rs1包含选自rsr-2089、rsr-2295、rsr-2298、rsr-2488、rsr-2599、rsr-2485、rsr-2486、rsr-2728、rsn-2089、rsn-2295、rsn-2298、rsn-2488、rsn-2599、rsn-2485、rsn-2486、rsn-2728、rsc-2089、rsc-2295、rsc-2298、rsc-2488、rsc-2599、rsc-2485、rsc-2486和rsc-2728的序列的氨基酸序列，其中每个在表5中示出。30.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，所述多肽还包含第一延长重组多肽(xten1)，其中所述xten1的特征在于a.它具有至少约36个氨基酸；b.所述xten1序列的至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸残基选自甘氨酸(g)、丙氨酸(a)、丝氨酸(s)、苏氨酸(t)、谷氨酸(e)和脯氨酸(p)；和c.它具有至少4-6种不同的选自g、a、s、t、e和p的氨基酸。31.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述xten1包含含有seq id no:672-675的氨基酸序列中的至少三个的氨基酸序列。32.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述xten1包含与选自seq id no:676-734中的任一个的序列具有至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。
33.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述xten1包含与选自以下序列的序列具有至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列：ae144_1a、ae144_2a、ae144_2b、ae144_3a、ae144_3b、ae144_4a、ae144_4b、ae144_5a、ae144_6b、ae144_7a、ae284、ae288_1、ae288_2、ae288_3、ae292、ae293、ae300、ae576、ae584、ae864、ae864_2、ae865、ae866、ae867和ae868，其中每个在表7中示出。34.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述af1是嵌合或人源化抗原结合片段。35.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述af1选自由fv、fab、fab'、fab'-sh、线性抗体和单链可变片段(scfv)组成的组。36.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，所述多肽表达为融合蛋白，其中处于未切割状态的所述融合蛋白具有af1-rs1-xten1或xten1-rs1-af1的从n-端至c-端的结构排列。37.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，所述多肽还包含特异性地结合分化簇3t细胞受体(cd3)的第二抗原结合片段(af2)。38.根据权利要求37的多肽，其中所述af2结合选自cd3ε、cd3δ、cd3γ、cd3δ、cd3α和cd3βε中任一种的cd3复合物亚基。39.根据权利要求37或权利要求38所述的多肽，其中所述af2特异性地结合人或食蟹猴(cyno)cd3。40.根据权利要求37或权利要求38所述的多肽，其中所述af2特异性地结合人和食蟹猴(cyno)cd3。41.根据权利要求37-40中任一项所述的多肽，其中所述af2包含轻链互补决定区(cdr-l)和重链互补决定区(cdr-h)，并且其中所述af2包含分别具有seq id no:742、743和744的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3。42.根据权利要求41所述的多肽，其中所述cdr-l包含：a.具有seq id no:735或736的氨基酸序列的cdr-l1，b.具有seq id no:738或739的氨基酸序列的cdr-l2，和c.具有seq id no:740的氨基酸序列的cdr-l3。43.根据权利要求41或权利要求42的多肽，其中所述af2还包含轻链框架区(fr-l)和重链框架区(fr-h)，其中af2包含：a.具有seq id no:746的氨基酸序列的fr-l1；b.具有seq id no:747的氨基酸序列的fr-l2；c.具有seq id no:748-751中的任一个的氨基酸序列的fr-l3；d.具有seq id no:754的氨基酸序列的fr-l4；e.具有seq id no:755或seq id no:756的氨基酸序列的fr-h1；f.具有seq id no:759的氨基酸序列的fr-h2；g.具有seq id no:760的氨基酸序列的fr-h3；以及h.具有seq id no:764的氨基酸序列的fr-h4。44.根据权利要求41-43中任一项所述的多肽，其中所述af2还包含轻链框架区(fr-l)和重链框架区(fr-h)，并且其中所述抗原结合片段包含：a.具有seq id no:746的氨基酸序列的fr-l1；
b.具有seq id no:747的氨基酸序列的fr-l2；c.具有seq id no:748的氨基酸序列的fr-l3；d.具有seq id no:754的氨基酸序列的fr-l4；e.具有seq id no:755的氨基酸序列的fr-h1；f.具有seq id no:759的氨基酸序列的fr-h2；g.具有seq id no:760的氨基酸序列的fr-h3；以及h.具有seq id no:764的氨基酸序列的fr-h4。45.根据权利要求41-43中任一项所述的多肽，其中所述af2还包含轻链框架区(fr-l)和重链框架区(fr-h)，并且其中所述抗原结合片段包含：a.具有seq id no:746的氨基酸序列的fr-l1；b.具有seq id no:747的氨基酸序列的fr-l2；c.具有seq id no:749的氨基酸序列的fr-l3；d.具有seq id no:754的氨基酸序列的fr-l4；e.具有seq id no:756的氨基酸序列的fr-h1；f.具有seq id no:759的氨基酸序列的fr-h2；g.具有seq id no:760的氨基酸序列的fr-h3；以及h.具有seq id no:764的氨基酸序列的fr-h4。46.根据权利要求41-43中任一项所述的多肽，其中所述af2还包含轻链框架区(fr-l)和重链框架区(fr-h)，并且其中所述抗原结合片段包含：a.具有seq id no:746的氨基酸序列的fr-l1；b.具有seq id no:747的氨基酸序列的fr-l2；c.具有seq id no:750的氨基酸序列的fr-l3；d.具有seq id no:754的氨基酸序列的fr-l4；e.具有seq id no:756的氨基酸序列的fr-h1；f.具有seq id no:759的氨基酸序列的fr-h2；g.具有seq id no:760的氨基酸序列的fr-h3；以及h.具有seq id no:764的氨基酸序列的fr-h4。47.根据权利要求41-43中任一项所述的多肽，其中所述af2还包含轻链框架区(fr-l)和重链框架区(fr-h)，并且其中所述抗原结合片段包含：a.具有seq id no:746的氨基酸序列的fr-l1；b.具有seq id no:747的氨基酸序列的fr-l2；c.具有seq id no:751的氨基酸序列的fr-l3；d.具有seq id no:754的氨基酸序列的fr-l4；e.具有seq id no:756的氨基酸序列的fr-h1；f.具有seq id no:759的氨基酸序列的fr-h2；g.具有seq id no:760的氨基酸序列的fr-h3；以及h.具有seq id no:764的氨基酸序列的fr-h4。48.根据权利要求37-47所述的多肽，其中所述af2包含与seq id no:766或seq id no:769的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的序
列同一性或与其相同的可变重链(vh)氨基酸序列。49.根据权利要求37-48中任一项所述的多肽，其中所述af2包含与seq id no:765、767、768、770或771中的任一个的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的序列同一性或与其相同的可变轻链(vl)氨基酸序列。50.根据权利要求37-49中任一项所述的多肽，其中所述af2包含与seq id no:776-780中的任一个的氨基酸序列具有至少95％、96％、97％、98％、99％的序列同一性或与其相同的氨基酸序列。51.根据权利要求37-50中任一项所述的多肽，其中所述af2的t
m
比由seq id:781的序列组成的抗原结合片段的t
m
高至少2℃、或高至少3℃、或高至少4℃、或高至少5℃、或高至少6℃、或高至少7℃、或高至少8℃、或高至少9℃、或高至少10℃，如通过在体外测定中解链温度的增加所确定的。52.根据权利要求37至51中任一项所述的多肽，其中所述af2以约10nm和约400nm之间的解离常数(k
d
)特异性地结合人或食蟹猴cd3，如在体外抗原结合测定中所确定的。53.根据权利要求37至52中任一项所述的多肽，其中所述af2以约10nm和约400nm之间，或约50nm和约350nm之间，或约100nm和300nm之间的解离常数(k
d
)特异性地结合人或食蟹猴cd3，如在体外抗原结合测定中所确定的。54.根据权利要求37-52中任一项所述的多肽，其中所述af2以小于约3nm、或约10nm、或约50nm、或约100nm、或约150nm、或约200nm、或约250nm、或约300nm、或约400nm的解离常数(k
d
)特异性地结合人或食蟹猴cd3，如在体外抗原结合测定中所确定的。55.根据权利要求37-54中任一项所述的多肽，其中所述af2以比由seq id no:781的氨基酸序列组成的抗原结合片段低至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或至少10倍的结合亲和力特异性地结合人或食蟹猴cd3，如通过体外抗原结合测定中的各自解离常数(k
d
)所确定的。56.根据权利要求37-55中任一项所述的多肽，其中所述af2通过柔性肽接头与所述af1融合。57.根据权利要求56的所述多肽，其中所述柔性接头包含2或3类选自由甘氨酸、丝氨酸和脯氨酸组成的组的氨基酸。58.根据权利要求37-57中任一项所述的多肽，其中(1)所述af2片段选自由fv、fab、fab'、fab'-sh、线性抗体、单结构域抗体和单链可变片段(scfv)组成的组，或(2)所述af1和所述af2被构造成(fab')2或单链双体。59.根据权利要求37-58中任一项所述的多肽，其中所述af2表现出小于或等于6.6的等电点(pi)。60.根据权利要求37-59中任一项所述的多肽，其中所述af2表现出在5.5和6.6之间、包括端点的pi。61.根据权利要求37-60中任一项所述的多肽，其中所述af2表现出在约5.5和6.6之间、或约5.6和约6.4之间、或约5.8和约6.2之间、或约6.0和约6.2之间的pi。62.根据权利要求37-61中任一项所述的多肽，其中所述af2表现出比由seq id no:781中所示的序列组成的参考抗原结合片段的pi低至少0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1.0ph单位的pi。
63.根据权利要求37-62中任一项所述的多肽，其中所述af2表现出在所述af1的pi的至少约0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4或约1.5ph单位内的pi。64.根据权利要求37-63中任一项所述的多肽，其中所述af2表现出在所述af1的pi的至少约0.1至约1.5，或至少约0.3至约1.2，或至少约0.5至约1.0，或至少约0.7至约0.9ph单位内的pi。65.根据权利要求37-64中任一项所述的多肽，所述多肽还包含第二释放区段(rs2)，其中所述rs2是用于被哺乳动物蛋白酶切割的底物。66.根据权利要求65所述的多肽，其中所述rs2是选自豆荚蛋白、mmp-2、mmp-7、mmp-9、mmp-11、mmp-14、upa和间质蛋白酶的底物。67.根据权利要求65或权利要求66所述的多肽，其中所述rs2包含与选自seq id no:53-671的序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性的氨基酸序列。68.根据权利要求65-67中任一项所述的多肽，其中所述rs1和所述rs2的序列是相同的。69.根据权利要求65-67中任一项所述的多肽，其中所述rs1和所述rs2的序列是不同的。70.根据权利要求65-69中任一项所述的多肽，其中所述rs1和所述rs2各自是用于被多于一种蛋白酶在每个释放区段序列内的一个、二个或三个切割位点处切割的底物。71.根据权利要求65-70中任一项所述的多肽，所述多肽还包含第二延长重组多肽(xten2)，其中所述xten2的特征在于a.它具有至少约36个氨基酸；b.所述xten1序列的至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸残基选自甘氨酸(g)、丙氨酸(a)、丝氨酸(s)、苏氨酸(t)、谷氨酸(e)和脯氨酸(p)；和c.它具有至少4-6种不同的选自g、a、s、t、e和p的氨基酸。72.根据权利要求71所述的多肽，其中所述xten2包含含有seq id no:672-675的氨基酸序列中的至少三个的氨基酸序列。73.根据权利要求71或权利要求72所述的多肽，其中所述xten2包含与选自seqseq id no:676-734的序列具有至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。74.根据权利要求71-73中任一项所述的多肽，其中所述xten2包含与选自以下序列的序列具有至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列：ae144_1a、ae144_2a、ae144_2b、ae144_3a、ae144_3b、ae144_4a、ae144_4b、ae144_5a、ae144_6b、ae144_7a、ae284、ae288_1、ae288_2、ae288_3、ae292、ae293、ae300、ae576、ae584、ae864、ae864_2、ae865、ae866、ae867和ae868，其中每个在表7中示出。75.根据权利要求71-74中任一项所述的多肽，其中所述多肽具有如下从n-端到c-端的结构排列：xten1-rs1-af1-af2-rs2-xten2、xten1-rs1-af2-af1-rs2-xten2、xten2-rs2-af2-af1-rs1-xten1、xten2-rs2-af1-af2-rs1-xten1、xten2-rs2-双体-rs1-xten1或
xten1-rs1-双体-rs2-xten2，其中所述双体包含所述af1和所述af2的vl和vh，其中所述af2特异性地结合cd3并且所述af1特异性地结合egfr，并且其中xten1和xten2具有相同或不同的氨基酸长度或序列。76.根据权利要求71-75中任一项所述的多肽，其中所述af1对所述egfr的结合亲和力比所述af2对cd3的结合亲和力大至少10倍、或大至少100倍、或大至少1000倍，如在体外抗原结合测定中所测量的。77.一种药物组合物，其包含根据前述权利要求中任一项所述的多肽和一种或更多种药学上合适的赋形剂。78.根据权利要求77所述的药物组合物，其中所述药物组合物被配制为用于真皮内、皮下、静脉内、动脉内、腹内、腹膜内、鞘内或肌肉内施用。79.根据权利要求78所述的药物组合物，其中所述药物组合物呈液体形式。80.根据权利要求77-79中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物是在用于单次注射的预填充注射器中。81.根据权利要求77所述的药物组合物，其中所述药物组合物被配制为要在施用前重构的冻干粉末。82.根据权利要求1-76中任一项所述的多肽在制备用于治疗受试者的疾病的药物中的用途。83.根据权利要求82的用途，其中所述疾病选自由以下组成的癌症的组：未分化甲状腺癌和髓样甲状腺癌、阑尾癌、卵巢睾丸母细胞瘤、胆道癌、膀胱癌、乳腺癌、胆管的癌症、类癌瘤、宫颈癌、胆管癌、结肠癌、结肠直肠癌、颅咽管瘤、子宫内膜癌、伴有恶性腹水的腹膜内上皮恶性肿瘤、食管癌、尤文氏肉瘤、输卵管癌、滤泡癌、胆囊癌、胃癌、胃肠道间质瘤(gist)、ge-连接癌、生殖泌尿道癌、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤、头颈癌、肝母细胞瘤、肝癌、hr 和her2 乳腺癌、hurthle细胞癌、炎性乳腺癌、卡波西肉瘤、肾癌、喉癌、脂肪肉瘤、肝癌、肺癌、髓母细胞瘤、黑素瘤、梅克尔细胞癌、成神经细胞瘤、神经内分泌癌、非小细胞肺癌、骨肉瘤(骨癌)、卵巢癌、卵巢癌伴恶性腹水、胰腺癌、胰腺神经内分泌肿瘤、乳头状癌、甲状旁腺癌、腹膜癌扩散、腹膜间皮瘤、原始性神经外胚层瘤、前列腺癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、肉瘤、皮肤癌、小细胞肺癌、小肠癌、胃部癌、睾丸癌、甲状腺癌、三阴性乳腺癌、尿路上皮癌、子宫癌、子宫浆液性癌、阴道癌、外阴癌、肾母细胞瘤。84.一种治疗受试者的疾病的方法，所述方法包括向有相应需要的受试者施用一个或更多个治疗有效剂量的权利要求77-81中任一项所述的药物组合物。85.根据权利要求84的方法，所述疾病选自由以下组成的癌症的组：未分化甲状腺癌和髓样甲状腺癌、阑尾癌、卵巢睾丸母细胞瘤、胆道癌、膀胱癌、乳腺癌、胆管的癌症、类癌瘤、宫颈癌、胆管癌、结肠癌、结肠直肠癌、颅咽管瘤、子宫内膜癌、伴有恶性腹水的腹膜内上皮恶性肿瘤、食管癌、尤文氏肉瘤、输卵管癌、滤泡癌、胆囊癌、胃癌、胃肠道间质瘤(gist)、ge-连接癌、生殖泌尿道癌、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤、头颈癌、肝母细胞瘤、肝癌、hr 和her2 乳腺癌、hurthle细胞癌、炎性乳腺癌、卡波西肉瘤、肾癌、喉癌、脂肪肉瘤、肝癌、肺癌、髓母细胞瘤、黑素瘤、梅克尔细胞癌、成神经细胞瘤、神经内分泌癌、非小细胞肺癌、骨肉瘤(骨癌)、卵巢癌、卵巢癌伴恶性腹水、胰腺癌、胰腺神经内分泌肿瘤、乳头状癌、甲状旁腺癌、腹膜癌扩散、腹膜间皮瘤、原始性神经外胚层瘤、前列腺癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾
液腺癌、肉瘤、皮肤癌、小细胞肺癌、小肠癌、胃部癌、睾丸癌、甲状腺癌、三阴性乳腺癌、尿路上皮癌、子宫癌、子宫浆液性癌、阴道癌、外阴癌、肾母细胞瘤。86.根据权利要求84或权利要求85所述的方法，其中将所述药物组合物以每周两次、每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次或每月一次施用的一个或更多个治疗有效剂量施用至所述受试者。87.根据权利要求84-86中任一项所述的方法，其中将所述药物组合物在至少两周、或至少一个月、或至少两个月、或至少三个月、或至少四个月、或至少五个月、或至少六个月的时间段中以一个或更多个治疗有效剂量施用至所述受试者。88.根据权利要求84-87中任一项所述的方法，其中所述剂量被真皮内、皮下、静脉内、动脉内、腹内、腹膜内、鞘内或肌肉内施用。89.根据权利要求84-88中任一项所述的方法，其中所述受试者选自由小鼠、大鼠、猴和人组成的组。90.一种分离的核酸，所述核酸包含(a)编码权利要求1-76中任一项所述的多肽的多核苷酸；或(b)(a)的多核苷酸的互补序列。91.一种表达载体，其包含权利要求90所述的多核苷酸序列和可操作地连接至所述多核苷酸序列的重组调节序列。92.一种分离的宿主细胞，其包含权利要求91所述的表达载体。93.根据权利要求92所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是原核生物。94.根据权利要求92或权利要求93所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是大肠杆菌(e.coli)。95.一种双特异性抗原结合单元，其包含：a.第一抗原结合片段(af1)，其中所述af1特异性地结合egfr；以及b.第二抗原结合片段(af2)，其中所述af2特异性地结合t细胞受体分化簇3(cd3)；其中所述第二抗原结合片段的等电点(pi)与所述第一抗原结合片段的pi之间的差异为0至约0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4或1.5ph单位，如通过体外测定所确定的。96.根据权利要求95所述的双特异性抗原结合单元，其中所述af1包含轻链互补决定区(cdr-l)、重链互补决定区(cdr-h)、轻链框架区(fr-l)和重链框架区(fr-h)，并且其中所述af1包含fr-h1、fr-h2、fr-h3和fr-h4，其中fr-h1具有seq id no:14-16中的任一个的氨基酸序列，fr-h2具有seq id no:18或seq id no:19的氨基酸序列，fr-h3具有seq id no:20或seq id no:21的氨基酸序列，并且fr-h4具有seq id no:22-24中的任一个的氨基酸序列。97.根据权利要求96所述的双特异性抗原结合单元，其中所述af1还包含cdr-h3，其中所述cdr-h3具有seq id no:6的氨基酸序列。98.根据权利要求96或权利要求97所述的双特异性抗原结合单元，其中所述af1还包含分别具有seq id no:4、5和6的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3。99.根据权利要求95-98中任一项所述的双特异性抗原结合单元，其中所述af1还包含fr-l1、fr-l2、fr-l3和fr-l4，其中a.其中fr-l1表现出与seq id no:7的氨基酸序列至少90％、或至少95％的序列同一性
或与其相同；b.其中fr-l2表现出与seq id no:8的氨基酸序列至少90％、或至少95％的序列同一性或与其相同；c.其中fr-l3表现出与seq id no:9-11的氨基酸序列至少90％、或至少95％的序列同一性或与其相同；并且d.其中fr-l4表现出与seq id no:13的氨基酸序列至少90％、或至少95％的序列同一性或与其相同。100.根据权利要求95-99中任一项所述的双特异性抗原结合单元，其中所述af1 cdr-l包含分别包含seq id no:1、2和3的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。101.根据权利要求95-100中任一项所述的双特异性抗原结合单元，其中所述fr-l包含：a.具有seq id no:7的氨基酸序列的fr-l1，b.具有seq id no:8的氨基酸序列的fr-l2，c.具有seq id no:9的氨基酸序列的fr-l3，d.具有seq id no:13的氨基酸序列的fr-l4。102.根据权利要求95-100中任一项所述的双特异性抗原结合单元，其中所述fr-l包含：a.具有seq id no:7的氨基酸序列的fr-l1，b.具有seq id no:8的氨基酸序列的fr-l2，c.具有seq id no:10的氨基酸序列的fr-l3，d.具有seq id no:13的氨基酸序列的fr-l4。103.根据权利要求95-100所述的双特异性抗原结合单元，其中所述fr-l包含：a.具有seq id no:7的氨基酸序列的fr-l1，b.具有seq id no:8的氨基酸序列的fr-l2，c.具有seq id no:11的氨基酸序列的fr-l3，和d.具有seq id no:13的氨基酸序列的fr-l4。104.根据权利要求95-100中任一项所述的双特异性抗原结合单元，其中所述fr-h包含：a.具有seq id no:14的氨基酸序列的fr-h1，b.具有seq id no:18的氨基酸序列的fr-h2，c.具有seq id no:20的氨基酸序列的fr-h3，d.具有seq id no:22或23的氨基酸序列的fr-h4。105.根据权利要求95-100中任一项所述的双特异性抗原结合单元，其中所述fr-h包含：a.具有seq id no:15的氨基酸序列的fr-h1，b.具有seq id no:19的氨基酸序列的fr-h2，c.具有seq id no:21的氨基酸序列的fr-h3，d.具有seq id no:24的氨基酸序列的fr-h4。106.根据权利要求95-100中任一项所述的双特异性抗原结合单元，其中所述fr-h包
含：a.具有seq id no:16的氨基酸序列的fr-h1，b.具有seq id no:19的氨基酸序列的fr-h2，c.具有seq id no:20的氨基酸序列的fr-h3，d.具有seq id no:22或23的氨基酸序列的fr-h4。107.根据权利要求95-106中任一所述的双特异性抗原结合单元，其中所述af1包含与seq id no:28-32的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的序列同一性或与其相同的可变重链(vh)氨基酸序列。108.根据权利要求95-107中任一所述的双特异性抗原结合单元，其中所述af1包含与seq id no:25-27的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的序列同一性或与其相同的可变轻链(vl)氨基酸序列。109.根据权利要求95-108中任一所述的双特异性抗原结合单元，其中所述af1包含与seq id no:37-51中的任一个的氨基酸序列具有至少95％、96％、97％、98％、99％的序列同一性或与其相同的氨基酸序列。110.根据权利要求95-109中任一所述的双特异性抗原结合单元，其中所述af1特异性地结合人或食蟹猴(cyno)egfr。111.根据权利要求95-109中任一所述的双特异性抗原结合单元，其中所述af1特异性地结合人和食蟹猴(cyno)egfr。112.根据权利要求95-111中任一项所述的双特异性抗原结合单元，其中所述af2结合选自cd3ε、cd3δ、cd3γ、cd3δ、cd3α和cd3βε中任一种的cd3复合物亚基。113.根据权利要求95-112中任一项所述的双特异性抗原结合单元，其中所述af2特异性地结合人或食蟹猴(cyno)cd3。114.根据权利要求95-112中任一项所述的双特异性抗原结合单元，其中所述af2特异性地结合人和食蟹猴(cyno)cd3。115.根据权利要求95-114中任一项所述的双特异性抗原结合单元，其中所述af2包含轻链互补决定区(cdr-l)和重链互补决定区(cdr-h)，并且其中所述抗原结合单元包含分别具有seq id no:742、743和744的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3。116.根据权利要求115项所述的双特异性抗原结合单元，其中所述af2的cdr-l包含：a.具有seq id no:735或736的氨基酸序列的cdr-l1，b.具有seq id no:738或739的氨基酸序列的cdr-l2，和c.具有seq id no:740的氨基酸序列的cdr-l3。117.根据权利要求115或权利要求116所述的双特异性抗原结合单元，其中所述af2还包含轻链框架区(fr-l)和重链框架区(fr-h)，其中af2包含：a.具有seq id no:746的氨基酸序列的fr-l1；b.具有seq id no:747的氨基酸序列的fr-l2；c.具有seq id no:748-751中的任一个的氨基酸序列的fr-l3；d.具有seq id no:754的氨基酸序列的fr-l4；e.具有seq id no:755或seq id no:756的氨基酸序列的fr-h1；f.具有seq id no:759的氨基酸序列的fr-h2；
g.具有seq id no:760的氨基酸序列的fr-h3；以及h.具有seq id no:764中任一的氨基酸序列的fr-h4。118.根据权利要求115-117中任一项所述的双特异性抗原结合单元，其中所述af2还包含轻链框架区(fr-l)和重链框架区(fr-h)，并且其中所述抗原结合单元包含：i.具有seq id no:746的氨基酸序列的fr-l1；j.具有seq id no:747的氨基酸序列的fr-l2；k.具有seq id no:748氨基酸序列的fr-l3；l.具有seq id no:754的氨基酸序列的fr-l4；m.具有seq id no:755的氨基酸序列的fr-h1；n.具有seq id no:759的氨基酸序列的fr-h2；o.具有seq id no:760的氨基酸序列的fr-h3；以及p.具有seq id no:764的氨基酸序列的fr-h4。119.根据权利要求115-117中任一项所述的双特异性抗原结合单元，其中所述af2还包含轻链框架区(fr-l)和重链框架区(fr-h)，并且其中所述抗原结合单元包含：i.具有seq id no:746的氨基酸序列的fr-l1；j.具有seq id no:747的氨基酸序列的fr-l2；k.具有seq id no:749的氨基酸序列的fr-l3；l.具有seq id no:754的氨基酸序列的fr-l4；m.具有seq id no:756的氨基酸序列的fr-h1；n.具有seq id no:759的氨基酸序列的fr-h2；o.具有seq id no:760的氨基酸序列的fr-h3；以及p.具有seq id no:764的氨基酸序列的fr-h4。120.根据权利要求115-117中任一项所述的双特异性抗原结合单元，其中所述af2还包含轻链框架区(fr-l)和重链框架区(fr-h)，并且其中所述抗原结合单元包含：i.具有seq id no:746的氨基酸序列的fr-l1；j.具有seq id no:747的氨基酸序列的fr-l2；k.具有seq id no:750的氨基酸序列的fr-l3；l.具有seq id no:754的氨基酸序列的fr-l4；m.具有seq id no:756的氨基酸序列的fr-h1；n.具有seq id no:759的氨基酸序列的fr-h2；o.具有seq id no:760的氨基酸序列的fr-h3；以及p.具有seq id no:764的氨基酸序列的fr-h4。121.根据权利要求115-117中任一项所述的双特异性抗原结合单元，其中所述af2还包含轻链框架区(fr-l)和重链框架区(fr-h)，并且其中所述抗原结合单元包含：i.具有seq id no:746的氨基酸序列的fr-l1；j.具有seq id no:747的氨基酸序列的fr-l2；k.具有seq id no:751的氨基酸序列的fr-l3；l.具有seq id no:754的氨基酸序列的fr-l4；m.具有seq id no:756的氨基酸序列的fr-h1；
n.具有seq id no:759的氨基酸序列的fr-h2；o.具有seq id no:760的氨基酸序列的fr-h3；以及p.具有seq id no:764的氨基酸序列的fr-h4。122.根据权利要求112-121所述的双特异性抗原结合单元，其中所述af2包含与seq id no:766或seq id no:769的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的序列同一性或与其相同的可变重链(vh)氨基酸序列。123.根据权利要求112-122中任一项所述的双特异性抗原结合单元，其中所述af2包含与seq id no:765、767、768、770或771中的任一个的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性或与其相同的可变轻链(vl)氨基酸序列。124.根据权利要求112-123中任一项所述的双特异性抗原结合单元，其中所述af2包含与seq id no:776-780中的任一个的氨基酸序列具有至少95％、96％、97％、98％、99％的序列同一性或与其相同的氨基酸序列。125.根据权利要求115-124中任一项所述的双特异性抗原结合单元，其中所述af1以在约0.1nm和约100nm之间的k
d
特异性地结合egfr，如在包含egfr或其表位的体外抗原结合测定中所确定的。126.根据权利要求112-125中任一项所述的双特异性抗原结合单元，其中所述af1以在约0.1nm和约100nm之间，或在约0.5nm和约50nm之间，或在约1.0nm和约20nm之间，或在约2.0nm和约10nm之间的解离常数(k
d
)特异性地结合egfr，如在体外抗原结合测定中所确定的。127.根据权利要求112-126中任一项所述的双特异性抗原结合单元，其中所述af2以在约10nm和约400nm之间的解离常数(k
d
)特异性地结合人或食蟹猴cd3，如在体外抗原结合测定中所确定的。128.根据权利要求112-127中任一项所述的双特异性抗原结合单元，其中所述af2以在约10nm和约400nm之间，或在约50nm和约350nm之间，或在约100nm和300nm之间的解离常数(k
d
)特异性地结合人或食蟹猴cd3，如在体外抗原结合测定中所确定的。129.根据权利要求112-128中任一项所述的双特异性抗原结合单元，其中所述af2以小于约3nm、或约10nm、或约50nm、或约100nm、或约150nm、或约200nm、或约250nm、或约300nm、或约400nm的解离常数(k
d
)特异性地结合人或食蟹猴cd3，如在体外抗原结合测定中所确定的。130.根据权利要求112-129中任一项所述的双特异性抗原结合单元，其中所述af2以比由seq id no:781的氨基酸序列组成的抗原结合片段低至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或至少10倍的结合亲和力特异性地结合人或食蟹猴cd3，如通过体外抗原结合测定中的各自解离常数(k
d
)所确定的。131.根据权利要求112-130中任一项所述的双特异性抗原结合单元，其中所述af2对cd3表现出的结合亲和力相对于所述af1的结合亲和力弱至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、50倍、100倍或至少1000倍，如通过体外抗原结合测定中的各自解离常数(k
d
)所确定的。132.根据权利要求112-131中任一项所述的双特异性抗原结合单元，其中所述af2通过
柔性肽接头与所述af1融合。133.根据权利要求132所述的双特异性抗原结合单元，其中所述柔性接头包含2或3类选由自甘氨酸、丝氨酸和脯氨酸组成的组的氨基酸。134.根据权利要求112-133中任一项所述的双特异性抗原结合单元，其中(1)所述af1和所述af2片段中的每一个选自由fv、fab、fab'、fab'-sh、线性抗体、单结构域抗体和单链可变片段(scfv)组成的组，或(2)所述af1和所述af2被构造成(fab')2或单链双体。135.根据权利要求112-134中任一项所述的双特异性抗原结合单元，所述双特异性抗原结合单元还包含第一释放区段肽(rs1)和第二释放区段肽(rs2)，其中所述rs1和所述rs2中的每一个为用于被哺乳动物蛋白酶切割的底物。136.根据权利要求135所述的双特异性抗原结合单元，其中所述rs1和所述rs2中的每一个是选自豆荚蛋白、mmp-2、mmp-7、mmp-9、mmp-11、mmp-14、upa和间质蛋白酶组成的组的蛋白酶的底物。137.根据权利要求135或权利要求136所述的双特异性抗原结合单元，其中所述rs1和所述rs2中的每一个包含与选自seq id no:53-671中的任一个的序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。138.根据权利要求135-137中任一项所述的双特异性抗原结合单元，其中所述rs1和所述rs2中的每一个包含选自以下序列的氨基酸序列：rsr-2089、rsr-2295、rsr-2298、rsr-2488、rsr-2599、rsr-2485、rsr-2486、rsr-2728、rsn-2089、rsn-2295、rsn-2298、rsn-2488、rsn-2599、rsn-2485、rsn-2486、rsn-2728、rsc-2089、rsc-2295、rsc-2298、rsc-2488、rsc-2599、rsc-2485、rsc-2486和rsc-2728，其中每个在表5中示出。139.根据权利要求135-138中任一项所述的双特异性抗原结合单元，其中所述rs1和所述rs2是相同的。140.根据权利要求135-138中任一项所述的双特异性抗原结合单元，其中所述rs1和所述rs2是不同的。141.根据权利要求135-140中任一项所述的双特异性抗原结合单元，所述双特异性抗原结合单元还包含第一延长重组多肽(xten1)和第二延长重组多肽，其中所述xten1和所述xten2中的每一个的特征在于a.它具有至少约36个氨基酸；b.所述xten1序列的至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸残基选自甘氨酸(g)、丙氨酸(a)、丝氨酸(s)、苏氨酸(t)、谷氨酸(e)和脯氨酸(p)；和c.它具有至少4-6种不同的选自g、a、s、t、e和p的氨基酸。142.根据权利要求141所述的双特异性抗原结合单元，其中所述xten1和所述xten2中的每一个包含含有seq id no:672-675的氨基酸序列中的至少三个的氨基酸序列。143.根据权利要求141或权利要求142所述的双特异性抗原结合单元，其中所述xten1和所述xten2中的每一个包含与选自seq id no:676-734中任一个的序列具有至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。144.根据权利要求141-143中任一项所述的双特异性抗原结合单元，其中所述xten1和所述xten2中的每一个包含与选自以下序列的序列具有至少约90％、91％、92％、93％、
94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列：ae144_1a、ae144_2a、ae144_2b、ae144_3a、ae144_3b、ae144_4a、ae144_4b、ae144_5a、ae144_6b、ae144_7a、ae284、ae288_1、ae288_2、ae288_3、ae292、ae293、ae300、ae576、ae584、ae864、ae864_2、ae865、ae866、ae867和ae868，其中每个在表7中示出。145.根据权利要求141-144中任一项所述的双特异性抗原结合单元，其中所述xten1和所述xten2是相同的。146.根据权利要求141-145中任一项所述的双特异性抗原结合单元，其中所述xten1和所述xten2是不同的。147.根据权利要求141-146中任一项所述的双特异性抗原结合单元，其中所述双特异性抗原结合单元具有如下从n-端到c-端的结构排列：xten1-rs1-af1-af2-rs2-xten2、xten1-rs1-af2-af1-rs2-xten2、xten2-rs2-af2-af1-rs1-xten1、xten2-rs2-af1-af2-rs1-xten1、xten2-rs2-双体-rs1-xten1或xten1-rs1-双体-rs2-xten2，其中所述双体包含所述af1和所述af2的vl和vh。
技术总结
本公开涉及特异性地结合EGFR或其表位的抗原结合单元。一些实施方案包括具有改善的表达和/或稳定性的双特异性抗EGFR/抗CD3构建体。还公开了相关的方法。体。还公开了相关的方法。体。还公开了相关的方法。
技术研发人员：谢尔恩伯杰 达拉格
受保护的技术使用者：阿穆尼克斯制药公司
技术研发日：2020.06.25
技术公布日：2022/7/9
再多了解一些
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