一种水解酶和一种(R)-(-)-3-(氨甲酰甲基)-5-甲基己酸的合成方法与流程

技术特征：
1.一种水解酶，其特征在于，所述水解酶的氨基酸序列如seq id no.1所示。2.一种(r)-(-)-3-(氨甲酰甲基)-5-甲基己酸的合成方法，其特征在于，以3-异丁基戊二酰亚胺为底物，在水解酶的催化下合成产物(r)-(-)-3-(氨甲酰甲基)-5-甲基己酸；其中，所述水解酶的氨基酸序列如seq id no.1所示。3.根据权利要求2所述的(r)-(-)-3-(氨甲酰甲基)-5-甲基己酸的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：s1：向反应容器中加入3-异丁基戊二酰亚胺和水解酶制剂，控制反应体系的ph在7.0-9.0之间，在一定温度条件下进行反应；s2：s1步骤反应完成后，将反应液进行加热冷却处理，之后加入助滤剂，经过滤，浓缩，再过滤，干燥后得(r)-(-)-3-(氨甲酰甲基)-5-甲基己酸。4.根据权利要求3所述的(r)-(-)-3-(氨甲酰甲基)-5-甲基己酸的合成方法，其特征在于，所述步骤s1中3-异丁基戊二酰亚胺的浓度为10-300g/l。5.根据权利要求3所述的(r)-(-)-3-(氨甲酰甲基)-5-甲基己酸的不对称合成方法，其特征在于，所述步骤s1中水解酶制剂包括酶液、酶粉、湿菌体、固定化酶。6.根据权利要求5所述的(r)-(-)-3-(氨甲酰甲基)-5-甲基己酸的合成方法，其特征在于，所述水解酶酶液占反应体系总体积的5~20%。7.根据权利要求3所述的(r)-(-)-3-(氨甲酰甲基)-5-甲基己酸的合成方法，其特征在于，所述步骤s1中还包括pb缓冲液，所述pb缓冲液的浓度为0.05m，且所述pb缓冲液的ph=7-8；反应过程中用氨水、氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠控制反应体系的ph；所述反应温度为25-50℃；优选地，反应过程中用氨水控制反应体系的ph在7.9-8.0之间；优选地，所述反应温度为40℃。8.根据权利要求3所述的(r)-(-)-3-(氨甲酰甲基)-5-甲基己酸的合成方法，其特征在于，所述步骤s2后处理操作进行浓缩时，加入盐酸或硫酸调解浓缩液的ph为2.5-4之间。9.根据权利要求5所述的(r)-(-)-3-(氨甲酰甲基)-5-甲基己酸的合成方法，其特征在于，所述水解酶制剂的制备方法包括以下步骤：p1：将表达所述水解酶的重组大肠杆菌湿菌体与缓冲液混合；p2：在一定压力下进行均质破碎，得到酶液粗品；p3：将酶液粗品离心，取上清液，即得所述水解酶酶液。p4：将水解酶酶液冷冻干燥，即得所述水解酶酶粉。p5：将水解酶酶粉与固定化载体使用共价键进行连接，即得重组大肠杆菌固定化酶。10.根据权利要求9所述的(r)-(-)-3-(氨甲酰甲基)-5-甲基己酸的合成方法，其特征在于，在步骤p1中，所述水解酶的重组大肠杆菌湿菌体与所述缓冲液的混合比例为1g：6ml。

技术总结
本发明公开了一种水解酶，所述水解酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，同时提供了一种使用该水解酶合成(R)-(-)-3-(氨甲酰甲基)-5-甲基己酸的方法，以3-异丁基戊二酰亚胺为底物，在水解酶的催化下合成产物(R)-(-)-3-(氨甲酰甲基)-5-甲基己酸。本发明提供的(R)-(-)-3-(氨甲酰甲基)-5-甲基己酸酶催化合成方法，整体工艺简单，反应条件温和，转化率高，具有极高的手性选择性，且绿色环保，适合大规模工业化生产，应用前景广阔。应用前景广阔。


技术研发人员：张城孝 俞吉 王吉勇 赵苏安 应宇航 孙磊 纪摇摇 黄勇开
受保护的技术使用者：宁波酶赛生物工程有限公司
技术研发日：2022.03.28
技术公布日：2022/7/1