一种可光剪切载体辅助均相合成蓝铜三肽的方法

技术特征：
1.一种7-二苯基膦酰氧基香豆素-4-甲醇类化合物dpcm，其特征在于，分子结构通式为：2.权利要求1所述7-二苯基膦酰氧基香豆素-4-甲醇类化合物dpcm的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)以7-羟基香豆素-4-甲基卤素为原料与(r)2pocl反应，在a溶剂中加碱催化进行反应，反应完毕后，旋蒸回收溶剂，残留溶液用乙酸乙酯萃取并与水相分离，合并有机相并用去离子水洗涤多次，分离纯化得到7-二苯基膦酰氧基香豆素-4-甲基卤素类化合物；2)将7-二苯基膦酰氧基香豆素-4-甲基卤素类化合物经水解反应，转化为相应的7-二苯基膦酰氧基香豆素-4-甲醇类化合物。3.一种可光剪切载体辅助均相合成蓝铜三肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)辅助基团的偶联辅助基团采用权利要求1所述的7-二苯基膦酰氧基香豆素-4-甲醇类化合物dpcm；氨基酸采用其氨基均被保护的赖氨酸pg
1-lys(n
ε-pg2)-oh；以所述辅助基团替代固相多肽合成中的树脂，在脱水偶联剂的作用下与所述氨基酸进行搅拌反应，使得氨基均被保护的赖氨酸pg
1-lys(n
ε-pg2)-oh的c-端与所述辅助基团连接，生成化合物a，pg
1-lys(n
ε-pg2)-dpcm；2)分离纯化向步骤1)得到的化合物a中加入极性小的烷烃或醚类溶剂，将化合物a与杂质分离，随后对分离后的化合物a进行纯化；3)脱除n-端pg1采用脱pg1试剂处理步骤2)纯化后的化合物a，搅拌反应得到化合物b，h-lys(n
ε-pg2)-dpcm；向化合物b加入极性小的烷烃或醚类溶剂，将化合物b与杂质分离；随后对分离后的化合物b进行纯化；4)多肽偶联将步骤3)纯化后的化合物b作为原料，与pg1保护的组氨酸pg
1-his(n
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pg3)-oh进行偶联反应，制备得到化合物c，pg
1-his(n
’‑
pg3)-lys(n
ε-pg2)-dpcm；对化合物c进行分离纯化和脱除n-端pg1后，得到化合物d，h-his(n
’‑
pg3)-lys(n
ε-pg2)-dpcm；将化合物d作为原料，与pg1保护的甘氨酸pg
1-gly-oh进行偶联反应，制备得到化合物e，pg
1-gly-his(n
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pg3)-lys(n
ε-pg2)-dpcm；对化合物e进行分离纯化和脱除n-端pg1后，得到化合物f，h-gly-his(n
’‑
pg3)-lys(n
ε-pg2)-dpcm；5)dpcm辅助基团的光照剪除与侧链脱保护5.1)采用360nm紫外灯照射步骤4)得到的化合物f的溶液，脱除载体dpcm，经分离纯化，
得到蓝铜三肽的前体化合物以及载体dpcm；其中，前体化合物为h-gly-his(n
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pg3)-lys(n
ε-pg2)-oh，所述载体dpcm可回收再利用；5.2)分别以二乙胺的甲醇溶液和三氟乙酸的鸡尾酒溶液脱除赖氨酸侧链上的保护基团pg2和组氨酸侧链上的保护基团pg3，经分离纯化得到蓝铜三肽的三氟乙酸盐，tfa*h-gly-his-lys-oh；或者，5.1)依次采用二乙胺的甲醇溶液和三氟乙酸的鸡尾酒溶液脱除步骤4)得到的化合物f赖氨酸侧链上的保护基团pg2和组氨酸侧链上的保护基团pg3，依次得到化合物g和化合物h；5.2)采用360nm紫外灯照射得到的化合物h的溶液，脱除载体dpcm，经分离纯化，得到经分离纯化得到蓝铜三肽的三氟乙酸盐，tfa*h-gly-his-lys-oh以及载体dpcm；其中，所述载体dpcm可回收再利用；6)蓝铜三肽的分离纯化通过旋蒸步骤5)得到的蓝铜三肽的三氟乙酸盐回收三氟乙酸，残留溶液采用碳酸氢钠中和，调节ph为8～9，用乙酸乙酯萃取，沉淀析出，经过滤、乙酸乙酯洗涤、干燥得到纯化的蓝铜三肽(ghk)，h-gly-his-lys-oh。4.根据权利要求3所述可光剪切载体辅助均相合成蓝铜三肽的方法，其特征在于：步骤1)中，在0～50℃下搅拌反应1～3小时；所述氨基酸与辅助基团的摩尔比为1～3∶1；所述脱水偶联剂为1︰1摩尔比的脱水偶联活化剂和碱性物质；其中，脱水偶联活化剂如dcc、dic、edci等，碱性物质如dbu、diea、dmap、nmp等；步骤2)中，烷烃类如正己烷、环己烷和石油醚等，醚类如乙醚，甲基叔丁基醚等；步骤3)中，在10～50℃下搅拌反应0.5～2小时；步骤5)中，侧链脱保护的反应条件为5～30℃下，搅拌1～3小时；所述二乙胺的甲醇溶液中二乙胺的质量分数为20％；所述三氟乙酸的鸡尾酒溶液中的组分比例为：tfa∶tips∶h2o＝95∶2.5∶2.5。5.一种权利要求3所述方法制备过程中得到的n-端pg1保护赖氨酰-dpcm化合物，其特征在于：pg
1-lys(n
ε-pg2)-dpcm的分子结构通式为：6.一种权利要求3所述方法制备过程中得到的脱保护基pg1的赖氨酰-dpcm化合物，其特征在于：h-lys(n
ε-pg2)-dpcm的分子结构通式为：
7.一种权利要求3所述方法制备过程中得到的n-端pg1保护组氨酰-赖氨酰-dpcm化合物，其特征在于：pg
1-his(n
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pg3)-lys(n
ε-pg2)-dpcm的分子结构通式为：8.一种权利要求3所述方法制备过程中得到的脱保护基pg1的组氨酰-赖氨酰-dpcm化合物，其特征在于：h-his(n
’‑
pg3)-lys(n
ε-pg2)-dpcm的分子结构通式为：9.一种权利要求3所述方法制备过程中得到的n-端pg1保护甘氨酰-组氨酰-赖氨酰-dpcm化合物，其特征在于：pg
1-gly-his(n
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pg3)-lys(n
ε-pg2)-dpcm的分子结构通式为：10.一种权利要求3所述方法制备过程中得到的依次脱保护基pg1、pg2和pg3的甘氨酰-组氨酰-赖氨酰-dpcm化合物f、g、h，其特殊之处在于：f、g、h分子结构通式为：

技术总结
本发明提供了一种可光剪切载体辅助均相合成蓝铜三肽的方法，以7-二苯基膦酰氧基香豆素-4-甲醇为保护基兼辅助载体合成了较高纯度的蓝铜肽，最后将蓝铜三肽与醋酸铜反应制备出了蓝铜三肽-Cu，解决目前蓝铜三肽化学合成方法的均相反应比较复杂，分离步骤多、耗时周期长、纯化规模小、生产成本高，而固相反应的生产规模小，原料价格贵、浪费大，树脂类废弃物多和环境污染严重的问题。环境污染严重的问题。环境污染严重的问题。


技术研发人员：钦传光 张子鑫 王娟 杨露 石梦楠 张辰扬
受保护的技术使用者：西北工业大学
技术研发日：2022.03.03
技术公布日：2022/6/28