烟草NtEXB1基因在植株分枝发育调控中应用的制作方法

技术特征：
1.烟草ntexb1基因在植株分枝发育调控中应用，其特征在于，烟草ntexb1基因与腋芽处分枝发育相关，具有增加或者减少植物分枝的作用，用于植物株型调控；所述烟草ntexb1基因，其编码碱基序列长度为927bp，序列如seq id no.1所示。2.如权利要求1所述烟草ntexb1基因在植株分枝发育调控中应用，其特征在于，所述植物，具体为烟草；具体应用时，通过基因工程技术手段，通过将ntexb1基因沉默进而抑制ntexb1基因表达翻译为ntexb1蛋白后，基因沉默植株中，腋芽生长缓慢。3.烟草ntexb1基因pcr扩增用引物序列，其特征在于，所述烟草ntexb1基因，序列如seq id no.1所示，pcr扩增时，具体引物序列设计如下：ntexb1-f: 5'-atgtctgataataaccctttttatc-3'ntexb1-r: 5'-gataaaaagggttattatcagacat-3'。4.用于敲低烟草ntexb1基因表达的重组载体pbwa(v)ks-rnai-ntexb1，其特征在于，具体通过如下步骤构建获得：（一）设计引物，并进行pcr扩增基于基因沉默目的序列，设计pcr扩增用引物序列如下：ntexb1-f( )：5
’‑
cagtggtctcacaacacacaaacccctcatcagga-3’，ntexb1-f(-)：5
’‑
cgatggtctcacaggtttgcttgcaaatctttctt-3’；ntexb1-r( )：5
’‑
cagtggtctcagggctttgcttgcaaatctttctt-3’；ntexb1-r(-)：5
’‑
cagtggtctcatacaacacaaacccctcatcagga-3’；随后，分别利用上述引物进行pcr扩增，并对扩增产物进行提取、纯化备用，获得干扰载体的目标序列片段；（二）酶切、连接将步骤（一）中所得pcr扩增产物与pbwa(v)ks-rnai载体分别进行bsai/eco31i双酶切，并利用t4_ligase对酶切产物进行连接；（三）转化和筛选将步骤（二）中连接产物转化大肠杆菌感受态细胞，进行筛选、鉴定获得重组构建正确的重组质粒表达载体pbwa(v)ks-rnai-ntexb1 。5.权利要求4所述重组载体pbwa(v)ks-rnai-ntexb1在植物中应用，其特征在于，将该重组载体转化植物后，能够降低ntexb1基因翻译表达水平，进而抑制植物腋芽分枝发育，从而实现株型调控效果。6.一种调控植物株型的植物新品种培育方法，其特征在于，利用农杆菌介导的基因转化方法，将重组载体pbwa(v)ks-rnai-ntexb1转化植物后，进一步筛选、鉴定获得ntexb1基因表达降低新品种，该新品种腋芽生长缓慢。

技术总结
本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及一个烟草NtEXB1基因在植株分枝发育调控中应用专利申请事宜。烟草NtEXB1基因与腋芽处分枝发育相关，具有增加或者减少植物分枝的作用，用于植物株型调控；烟草NtEXB1基因序列如SEQ ID No.1所示。本申请中，通过对该基因组织表达特点研究，发明人发现：烟草NtEXB1基因在雌蕊处表达量最高，同时在腋芽中有相对较高的表达量，而在顶芽中表达量最低。进一步对该基因沉默后植株表型研究后发现，通过降低NtEXB1基因表达量后，烟草腋芽发育速度明显变缓。基于这些结果，可为针对性培育合适植株株型新品种奠定一定理论基础和技术基础。种奠定一定理论基础和技术基础。


技术研发人员：权利要求书1页说明书7页序列表2页附图1页
受保护的技术使用者：中国烟草总公司郑州烟草研究院
技术研发日：2022.03.04
技术公布日：2022/6/28