奥贝胆酸和对氨基苯甲酸的共晶及其制备方法与流程

1.本发明涉及化学医药领域，特别是涉及一种奥贝胆酸和对氨基苯甲酸的共晶及其制备方法。


背景技术：

2.奥贝胆酸(obeticholicacid)又名6-乙基鹅去氧胆酸，属于法尼醇x受体激动剂，通过活化法尼醇x受体，可以抑制胆酸合成。其由美国intercept制药公司研发，是二十年来首个研发用于治疗胆汁淤积性肝病的药物，于2016年5月27日获美国fda批准上市，于2016年12月12日获欧盟批准上市，用于治疗原发性胆汁性肝硬化(pbc)。目前intercept还在开展奥贝胆酸用于由非酒精性脂肪性肝炎(nash)引起的纤维化相关研究，nash领域市场空间巨大。intercept公司1项iii期临床数据显示，与安慰剂相比，在18个月的随访后，在10mg和25mg剂量水平下，奥贝胆酸obeticholic acid能够改善肝纤维化，但是较高剂量的obeticholic acid引起超过半数患者的严重瘙痒，并导致9％停止治疗，另外还有肝/胆囊副作用和ldl胆固醇水平升高等副作用。在pbc的治疗过程中，每日5mg-10mg的剂量最常见的副作用同样是皮肤瘙痒。因此如何在确保疗效的同时使其副作用和安全性可控成为了一个亟待解决的技术难以。一个方面，科学家们寄希望于探索奥贝胆酸的新固体形式，例如结晶形式和共结晶形式，以期从杂质总量及分布、降低毒性、降低剂量、改善生物利用度等方面改进目前的治疗方案。


技术实现要素：

3.针对上述现状和需求，本发明的发明人通过大量的实验研究，开发了一种溶解性和稳定性好的奥贝胆酸-对氨基苯甲酸共晶。
4.因此，本发明的第一目的在于提供一种奥贝胆酸和对氨基苯甲酸的共晶。
5.进一步的，本发明所述的共晶中奥贝胆酸和对氨基苯甲酸的比率为2:1。
6.进一步的，本发明所述共晶属于单斜晶系，空间群p21，晶胞参数为：进一步的，本发明所述共晶属于单斜晶系，空间群p21，晶胞参数为：α＝90
°
，β＝106.5
±
0.2
°
，γ＝90；在一些优选的实施例中，所述晶胞参数为：α＝90
°
，β＝106.546(5)
°
，γ＝90。
7.进一步的，所述共晶以cukα射线测得的x射线粉末衍射图在2theta值为8.2
±
0.2
°
、9.6
±
0.2
°
、9.8
±
0.2
°
、12.1
±
0.2
°
、13.4
±
0.2
°
处具有特征峰；在一些优选的实施例中，所述共晶以cukα射线测得的x射线粉末衍射图还在2theta值为15.2
±
0.2
°
、15.7
±
0.2
°
、20.1
±
0.2
°
处具有特征峰；在另一些优选的实施例中，所述共晶以cukα射线测得的x射线粉末衍射图还在2theta值为6.7
±
0.2
°
、13.8
±
0.2
°
、17.5
±
0.2
°
处具有特征峰；在另一些优选的实施例中，所述共晶以cukα射线测得的x射线粉末衍射图如图1。
8.本发明的第二目的在于提供一种奥贝胆酸和对氨基苯甲酸共晶的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
9.1)称取奥贝胆酸和对氨基苯甲酸在溶剂中进行溶解；
10.2)加热反应；
11.3)趁热过滤，滤液冷却后搅拌，析晶；
12.4)过滤后固体常温干燥。
13.进一步的，步骤3)还可以为：趁热过滤，向趁热过滤后的滤液中加入不良溶剂，通过液相扩散法结晶。所述不良溶剂为烷烃类溶剂，优选环己烷、正己烷或正庚烷，最优选环己烷。
14.进一步的，在步骤1)中，奥贝胆酸和对氨基苯甲酸的摩尔比为3:1-1:2，优选2:1-1:1，更优选1:1。
15.进一步的，在步骤1)中，溶剂为乙腈。
16.进一步的，步骤2)反应温度为50-80℃，示例性地，反应温度如50℃、60℃、70℃、80℃。
17.进一步的，步骤2)反应时间为2-6h，示例性地，反应温度如2h、3h、4h、5h、6h。
18.本发明的第三目在于提供一种药物组合物，所述组合物包含本发明第一目的所述的共晶和药学上可接受的载体。“药学上可接受的载体”指可用于制备药物组合物的载体，所述药物组合物通常是安全的、无毒的并且既不是生物学上也不是其他方面不希望的并且对于兽医用途以及人类制药用途是可接受的。药学上可接受的载体，诸如液体或固体填充剂、赋形剂、溶剂、缓冲剂、稳定剂、表面活性剂、湿润剂、润滑剂、乳化剂、悬浮剂、防腐剂、抗氧化剂、不透明剂、助流剂、加工助剂、着色剂、增甜剂、芳香剂、调味剂、包材、和其它已知的添加剂中的一种或多种。
19.本发明的第四目的在于提供本发明第一目的所述的共晶在制备用于治疗受试者中fxr介导的疾病或障碍的药物中的用途。在一些实施例中，fxr介导的疾病或障碍为的慢性肝脏疾病，慢性肝脏疾病选自原发性胆汁性肝硬化(也称为原发性胆汁性胆管炎或pbc)、脑腱黄瘤病(ctx)、原发性硬化性胆管炎(psc)、药物诱导的胆汁淤积、妊娠期肝内胆汁淤积、胃肠外营养相关性胆汁淤积(pnac)、细菌过度生长或败血症相关性胆汁淤积、自身免疫性肝炎、慢性病毒性肝炎、酒精性肝病、非酒精性脂肪性肝病(nafld)、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、肝移植相关移植物抗宿主病、活供体移植肝再生(living donortransplant liver regeneration)、先天性肝纤维化、胆总管结石、肉芽肿性肝病、肝内或肝外恶性肿瘤、干燥综合征、结节病、威尔森氏病、戈谢病、血色素沉着症、和α1-抗胰蛋白酶缺乏症。在另一些实施例中，fxr介导的疾病或障碍为胆汁淤积或胆汁淤积并发症。在另一些实施例中，fxr介导的疾病或障碍为肝脏再生。在另一些实施例中，fxr介导的疾病或障碍为纤维化，包括但不限于肝纤维化、肾纤维化、肺纤维化、和肠纤维化。“创伤性纤维化”包括但不限于继发于手术(手术瘢痕)、意外物理创伤、烧伤、和增生性瘢痕的纤维化。在一些优选的实施例中，本发明所述fxr介导的疾病或障碍选自原发性胆汁性肝硬化(pbc)和非酒精性脂肪肝炎(nash)。
20.因此，本发明所述的奥贝胆酸和对氨基苯甲酸共晶为制备一种稳定性好、溶解性高的奥贝胆酸药物制剂提供了一种新的选择。
附图说明
21.图1奥贝胆酸-对氨基苯甲酸共晶形貌照片(a)及偏光显微镜照片(b)；
22.图2奥贝胆酸-对氨基苯甲酸共晶样品分子不对称单元示意图(包括4个主体分子和2个对氨基苯甲酸分子)；
23.图3奥贝胆酸-对氨基苯甲酸共晶主体分子1的结构式示意图；
24.图4奥贝胆酸-对氨基苯甲酸共晶主体分子2的结构式示意图；
25.图5奥贝胆酸-对氨基苯甲酸共晶主体分子3的结构式示意图；
26.图6奥贝胆酸-对氨基苯甲酸共晶主体分子4的结构式示意图；
27.图7奥贝胆酸-对氨基苯甲酸共晶中对氨基苯甲酸分子结构式示意图；
28.图8奥贝胆酸-对氨基苯甲酸共晶的x射线粉末衍射pxrd图；
29.图9奥贝胆酸-对氨基苯甲酸共晶的tg-dsc图；
30.图10奥贝胆酸-对氨基苯甲酸共晶在高温(60℃)条件下储存5、10、30天的pxrd图谱；
31.图11奥贝胆酸-对氨基苯甲酸共晶在高湿(92.5％rh)条件下储存5、10、30天的pxrd图谱；
32.图12奥贝胆酸-对氨基苯甲酸共晶在光照条件下储存5、10、30天的pxrd图谱。
具体实施方式
33.下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
34.实施例1
35.称取0.210g奥贝胆酸(oca)、0.069g对氨基苯甲酸(aba)(摩尔比1:1)于结晶容器中，加入14ml乙腈，60℃搅拌反应4小时(500rpm)，趁热过滤，向滤液中加入3ml正己烷，膜封口后液相扩散法结晶，约一周后获得奥贝胆酸-对氨基苯甲酸共晶无色片状晶体，通过肉眼及偏光显微镜观察(放大100倍)，形貌如图1所示。
36.实施例2晶型表征
37.对本发明实施例1获得的奥贝胆酸-对氨基苯甲酸共晶样品，通过x射线单晶衍射、x射线粉末衍射(pxrd)、热重-差示扫描量热分析(tg-dsc)表征。
38.x射线单晶衍射表征
39.共晶晶体结构信息通过单晶x射线衍射测得，单晶数据利用ccd xcalibur nova型x射线仪在室温(293.15k)下进行采集，利用石墨单色仪mo kα射线(λ＝0.71073)进行多层扫描。olex2软件用于晶胞精修和数据处理，shelxt用于晶体结构解析与精修。
40.奥贝胆酸-对氨基苯甲酸共晶(m＝978.35g/mol)的晶体学参数为：单斜晶系，p21空间群，α＝90
°
，β＝106.546(5)
°
，γ＝90，晶胞体积晶胞内分子数z＝4，晶胞密度ρcalc＝1.131g/cm3。
41.如图2所示，一个不对称单元结构中包含4个主体分子(奥贝胆酸)及2个配体分子(对氨基苯甲酸)，即奥贝胆酸-对氨基苯甲酸共晶中的化学计量比为2：1。4个主体分子结构式分别见图3-6，对氨基苯甲酸分子结构式见图7。
42.x射线粉末衍射(pxrd)表征
43.检测条件：pxrd由empyrean x射线衍射仪在室温下测定，采用的是铜靶cukα射线
(i
kα1
:i
kα2
＝0.5，λ1＝1.540598，λ2＝1.544426)，电压45kv，电流40ma，扫描范围(2θ)3-30
°
，扫描步长0.01313
°
，每步扫描时间30s，60
°
，测试温度为室温。其分析结果见附图8，x射线粉末衍射数据如表1所示。
44.表1奥贝胆酸-对氨基苯甲酸共晶的x射线粉末衍射结果
[0045][0046][0047]
热重-差示扫描量热(tg-dsc)同步分析表征
[0048]
检测条件：温度范围：40℃-350℃，升温速率：10℃/min，铝坩埚，气体氛围：n2，气体流速：50ml/min。
[0049]
检测结果：结果如图9所示，共晶熔点为115.76℃。
[0050]
实施例3
[0051]
称取0.210g奥贝胆酸(oca)、0.069g对氨基苯甲酸(aba)(摩尔比1:1)于结晶容器中，加入3ml乙腈，60℃搅拌反应2.5小时(500rpm)，搅拌过程中析出沙状晶粒，取出结晶器于室温静置析晶，过夜后将晶体过滤并自然挥干，获得奥贝胆酸-对氨基苯甲酸共晶样品，其x射线粉末衍射结果同实施例2。
[0052]
实施例4
[0053]
称取0.210g奥贝胆酸(oca)、0.069g对氨基苯甲酸(aba)(摩尔比1:1)于结晶器中，加入4ml乙腈，60℃搅拌反应2.5小时(500rpm)，取出结晶器于室温继续搅拌，快速浑浊析晶，搅拌过夜后过滤固体并自然晾干，获得奥贝胆酸-对氨基苯甲酸共晶样品，其x射线粉末衍射结果同实施例2。
[0054]
实施例5
[0055]
称取0.210g奥贝胆酸(oca)、0.069g对氨基苯甲酸(aba)(摩尔比1:1)于结晶器中，加入5ml乙腈，60℃搅拌反应2.5小时(500rpm)，取出结晶器于室温继续搅拌，20min开始浑浊析晶，搅拌过夜后过滤固体并自然晾干，获得奥贝胆酸-对氨基苯甲酸共晶样品，其x射线粉末衍射结果同实施例2。
[0056]
实施例6
[0057]
称取0.021g奥贝胆酸(oca)、0.069g对氨基苯甲酸(aba)(摩尔比1:1)于结晶容器中，加入6ml乙腈，超声加热(约60℃)反应4小时后取出结晶器于室温搅拌析晶，过滤固体并自然晾干，获得奥贝胆酸-对氨基苯甲酸共晶样品，其x射线粉末衍射结果同实施例2。
[0058]
实施例7
[0059]
称取0.841g奥贝胆酸(oca)、0.152g对氨基苯甲酸(aba)(摩尔比2:1.1)于结晶器中，加入16m l乙腈，60℃搅拌(500rpm)反应4小时，0.45μm的微孔滤膜过滤后于室温搅拌析晶，1小时后析出大量晶粒贴壁与底部，过夜后过滤固体并自然晾干，获得奥贝胆酸-对氨基苯甲酸共晶样品，其x射线粉末衍射结果同实施例2。
[0060]
实施例8
[0061]
称取0.420g奥贝胆酸(oca)、0.076g对氨基苯甲酸(aba)(摩尔比2:1.1)于结晶容器中，加入8ml乙腈，60℃搅拌(500rpm)反应4小时后于室温搅拌析晶，约2小时后析晶，过夜后过滤固体并自然晾干，获得奥贝胆酸-对氨基苯甲酸共晶样品，其x射线粉末衍射结果同实施例2。
[0062]
实施例9
[0063]
称取0.841g奥贝胆酸(oca)、0.152g对氨基苯甲酸(aba)(摩尔比2:1.1)于结晶器中，加入14ml乙腈，60℃搅拌(500rpm)反应4小时后于室温搅拌析晶，约1小时后析晶，过夜后过滤固体并自然晾干，获得奥贝胆酸-对氨基苯甲酸共晶样品，其x射线粉末衍射结果同实施例2。
[0064]
实施例10
[0065]
称取0.841g奥贝胆酸(oca)、0.144g对氨基苯甲酸(aba)(摩尔比2:1.05)于结晶器中，加入4ml乙腈，80℃回流搅拌反应3小时后关闭加热降温，约1小时后析晶，过夜后过滤固体并自然晾干，获得奥贝胆酸-对氨基苯甲酸共晶样品，其x射线粉末衍射结果同实施例2。
[0066]
实施例11溶解度测试
[0067]
样品制备：取如实施例1制备的奥贝胆酸-对氨基苯甲酸共晶样品，和奥贝胆酸无定(如按照原研专利cn104781272a进行制备)样品过100目筛。分别称取3份过量的样品于3个玻璃仪器中，向容器中分别加入10ml介质(ph 6.8pbs缓冲液)并在37℃下搅拌72小时，离心或过滤后将滤液稀释适当倍数，然后按照有关物质的检测方法进行hplc检测，测定共晶样品及奥贝胆酸样品在3种介质中的平衡溶解度。照高效液相色谱法(中国药典2015年版通则0512)测定，用十八烷基硅烷键合硅胶(agilent poroshell 120sb-c18，2.7μm，150
×
4.6mm或效能相当的色谱柱)为填充剂，以0.1％甲酸溶液为a相，0.1％甲酸乙腈溶液为b相，流速为每分钟1.0ml，柱温为40℃，进样量为20μl；用电喷雾检测器(cad)检测，雾化器温度50℃，采集频率10hz，滤光片5s，按下表进行梯度洗脱：
[0068]
时间(分钟)流动相a(％)流动相b(％)06040296040512575595957559575.016040806040
[0069]
计算奥贝胆酸含量，结果表明，奥贝胆酸无定形及奥贝胆酸-对氨基苯甲酸共晶样品在ph6.8pbs缓冲液中的平衡溶解度相当，分别为236.53
±
2.93μg/ml、237.39
±
8.72μg/ml。
[0070]
实施例11稳定性测试
[0071]
晶型稳定性
[0072]
按照《中国药典2020年版》9001指导原则中影响因素试验方法考察了奥贝胆酸-对氨基苯甲酸共晶在高温(60℃)、高湿(92.5％rh)、光照条件下的晶型稳定性。通过pxrd测试晶型变化，hplc检测有关物质含量变化。
[0073]
结果显示，奥贝胆酸-对氨基苯甲酸共晶在高温(60℃)、高湿(92.5％rh)、光照条件下储存一个月，其晶型保持相对稳定(分别如图10-12)。
[0074]
奥贝胆酸-对氨基苯甲酸共晶在高温(60℃)、高湿(92.5％rh)、光照条件下储存一个月，其有关物质含量未发生明显变化(见表2和表3)，进一步证明奥贝胆酸-对氨基苯甲酸共晶相对稳定。
[0075]
表2
[0076]
[0077][0078]
表3
[0079]
实验样品杂质e(％)杂质c(％)杂质d(％)总杂(％)共晶样品-0天0.040.020.040.14高温60℃-5天0.060.030.040.12高温60℃-10天0.050.030.040.12高温60℃-30天0.050.030.040.11高湿92.5％rh-5天0.050.030.040.12高湿92.5％rh-10天0.050.030.040.12高湿92.5％rh-30天0.050.030.040.12光照-5天0.050.030.040.14光照-10天0.050.030.030.12光照-30天0.040.030.030.12