一种快速制备重组胶原蛋白海绵的方法及其特征

技术特征：
1.一种制备重组胶原蛋白海绵的方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：(1)将表达核苷酸序列如seq id no.1所示的编码类人胶原蛋白基因的基因工程菌接种于培养基中经诱导表达后，离心获得发酵上清液；(2)向发酵上清液中加入硫酸铵i，冰浴，离心取上清；(3)向上清液中加入硫酸铵ii，冰浴，离心收集沉淀；(4)用透析液溶解沉淀置于透析袋中，在透析液中进行透析，离心获得纯化的胶原蛋白；(5)将纯化的胶原蛋白置于冰上静置；(6)将静置后的胶原蛋白冷冻干燥获得重组胶原蛋白海绵。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述的基因工程菌以毕赤酵母为宿主。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述硫酸铵i的终浓度为15～25％。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述硫酸铵ii的终浓度为55～65％。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中所述透析液为超纯水。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中所述透析在冰浴中进行，每4-6h更换一次超纯水，共换4-6次。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中所述透析袋的分子量采用8-10kda。8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(5)中所述静置的时间为10～24h。9.一种胶原蛋白海绵，其特征在于，所述胶原蛋白海绵为采用权利要求1～8任一所述方法制备得到。10.权利要求1～8任一所述方法或权利要求9所述的胶原蛋白海绵在化工、材料和医药领域中的应用。

技术总结
本发明公开了一种快速制备重组胶原蛋白海绵的方法及其特征，属于生物医用材料技术领域。本发明制备重组胶原蛋白海绵的方法包括以下步骤：S1利用产重组胶原蛋白的重组毕赤酵母菌株发酵培养获得胞外分泌的胶原蛋白发酵液。S2对发酵液上清进行硫酸铵沉淀和透析获得胶原蛋白溶液。S3将透析好的胶原蛋白溶液置于冰上静置10-24h，使其形成凝胶。将凝胶状的胶原蛋白置于-80℃冰箱冷冻，并采用冻干机进行冷冻干燥，获得重组胶原蛋白海绵。本发明提供的方法，步骤简单，蛋白原料稳定，制备得率高，纯度高，可以有效降低生产成本。冻干后的胶原蛋白海绵外形规整光滑，热稳定性好。本发明的重组胶原蛋白海绵对细胞生长毒性作用小，有较为宽广的应用前景。宽广的应用前景。宽广的应用前景。


技术研发人员：周景文 马玲玲 曾伟主 徐沙 余世琴 陈坚
受保护的技术使用者：江南大学
技术研发日：2022.02.17
技术公布日：2022/6/1