一种表达Tim-3阻断物的多能干细胞或其衍生物及应用的制作方法

技术特征：
1.一种多能干细胞或其衍生物，包含tim-3阻断物的表达序列，所述tim-3阻断物为tim-3抗体；所述tim-3阻断物的表达序列优选插入于所述多能干细胞或其衍生物的基因组中。2.一种多能干细胞或其衍生物，包含tim-3阻断物的表达序列，所述tim-3阻断物为tim-3抗体；所述tim-3阻断物的表达序列优选插入于所述多能干细胞或其衍生物的基因组中；所述多能干细胞或其衍生物基因组的b2m基因和/或ciita基因被敲除。3.一种多能干细胞或其衍生物，包含tim-3阻断物的表达序列，所述tim-3阻断物为tim-3抗体；所述tim-3阻断物的表达序列优选插入于所述多能干细胞或其衍生物的基因组中；所述多能干细胞或其衍生物中还包含免疫兼容分子表达序列，所述免疫兼容分子用于调控多能干细胞细胞或其衍生物中与免疫应答相关的基因的表达；所述免疫兼容分子表达序列优选插入于所述多能干细胞或其衍生物基因组中。4.一种多能干细胞或其衍生物，包含tim-3阻断物的表达序列，所述tim-3阻断物为tim-3抗体；所述tim-3阻断物的表达序列优选插入于所述多能干细胞或其衍生物的基因组中；所述多能干细胞或其衍生物中还包含免疫兼容分子表达序列，所述免疫兼容分子用于调控多能干细胞细胞或其衍生物中与免疫应答相关的基因的表达；所述免疫兼容分子表达序列优选插入于所述多能干细胞或其衍生物基因组中；所述多能干细胞或其衍生物中还包含诱导型基因表达系统；所述诱导型基因表达系统优选插入于所述多能干细胞或其衍生物的基因组中。5.根据权利要求4所述的多能干细胞或其衍生物，其特征在于，所述诱导型基因表达系统为tet-off系统、二聚体诱导表达系统中的至少一种。6.根据权利要求3或4所述的多能干细胞或其衍生物，其特征在于，所述免疫兼容分子包括以下的一种或多种：(ⅰ)免疫耐受相关基因，包括cd47或hla-g；(ⅱ)hla-c类分子，包括人群中比例合计超过90％的hla-c复等位基因，或者超过90％的hla-c复等位基因与b2m构成的融合蛋白基因；(ⅲ)靶向所述与免疫应答相关的基因的shrna和/或shrna-mir。7.根据权利要求3或4所述的多能干细胞或其衍生物，其特征在于，所述与免疫应答相关的基因包括：(ⅰ)主要组织相容性复合体基因，包括hla-a、hla-b、hla-c、hla-dra、hla-drb1、hla-drb3、hla-drb4、hla-drb5、hla-dqa1、hla-dqb1、hla-dpa1和hla-dpb1中的至少一种；(ⅱ)主要组织相容性复合体相关基因，包括b2m和ciita中的至少一种。8.根据权利要求6所述的多能干细胞或其衍生物，其特征在于，靶向b2m的shrna和/或shrna-mir的靶序列选自seq id no.3～seq id no.5中的一种；靶向ciita的shrna和/或shrna-mir的靶序列选自seq id no.6～seq id no.15中的一种；靶向hla-a的shrna和/或shrna-mir的靶序列选自seq id no.16～seq id no.18中的
一种；靶向hla-b的shrna和/或shrna-mir的靶序列选自seq id no.19～seq id no.24中的一种；靶向hla-c的shrna和/或shrna-mir的靶序列选自seq id no.25～seq id no.30中的一种；靶向hla-dra的shrna和/或shrna-mir的靶序列选自seq id no.31～seq id no.40中的一种；靶向hla-drb1的shrna和/或shrna-mir的靶序列选自seq id no.41～seq id no.45中的一种；靶向hla-drb3的shrna和/或shrna-mir的靶序列选自seq id no.46～seq id no.47中的一种；靶向hla-drb4的shrna和/或shrna-mir的靶序列选自seq id no.48～seq id no.57中的一种；靶向hla-drb5的shrna和/或shrna-mir的靶序列选自seq id no.58～seq id no.66中的一种；靶向hla-dqa1的shrna和/或shrna-mir的靶序列选自seq id no.67～seq id no.73中的一种；靶向hla-dqb1的shrna和/或shrna-mir的靶序列选自seq id no.74～seq id no.83中的一种；靶向hla-dpa1的shrna和/或shrna-mir的靶序列选自seq id no.84～seq id no.93中的一种；靶向hla-dpb1的shrna和/或shrna-mir的靶序列选自seq id no.94～seq id no.103中的一种。9.根据权利要求3或4所述的多能干细胞或其衍生物，其特征在于，所述多能干细胞或其衍生物的基因组中还导入shrna加工复合体相关基因、mirna加工复合体相关基因和抗干扰素效应分子中的至少一种。10.根据权利要求9所述的多能干细胞或其衍生物，其特征在于，所述shrna加工复合体相关基因、mirna加工复合体相关基因包括drosha、ago1、ago2、dicer1、exportin-5、trbp(tarbp2)、pact(prkra)、dgcr8中的至少一种；所述抗干扰素效应分子优选为靶向pkr、2-5as、irf-3和irf-7中至少一种的shrna和/或shrna-mir。11.根据权利要求10所述的多能干细胞或其衍生物，其特征在于，靶向pkr的shrna和/或shrna-mir的靶序列选自seq id no.104～seq id no.113中的一种；靶向2-5as的shrna和/或shrna-mir的靶序列选自seq id no.114～seq id no.143中的一种；靶向irf-3的shrna和/或shrna-mir的靶序列选自seq id no.144～seq id no.153中的一种；靶向irf-7的shrna和/或shrna-mir的靶序列选自seq id no.154～seq id no.163中的一种。
12.根据权利要求6或9所述的多能干细胞或其衍生物，其特征在于，所述shrna表达框架：自5’到3’依次包括shrna靶序列、茎环序列、shrna靶序列的反向互补序列、poly t；其中，所述shrna靶序、茎环序列与所述shrna靶序列的反向互补序列形成发夹结构；poly t为rna聚合酶iii的转录终止子；shrna-mir表达框架：使用shrna-mir靶序列替换microrna-30或microrna-155中的靶序列得到。13.根据权利要求12所述的多能干细胞或其衍生物，其特征在于，所述shrna表达框架中的茎环序列长度为3～9个碱基；所述poly t的长度为5～6个碱基。14.根据权利要求1至4任一所述的多能干细胞或其衍生物，其特征在于，所述tim-3阻断物的表达序列、所述免疫兼容分子表达序列或所述诱导型基因表达系统插入于所述多能干细胞或其衍生物基因组的安全位点。15.根据权利要求14中所述的多能干细胞或其衍生物，其特征在于，所述基因组安全位点包括aavs1安全位点、egsh安全位点、h11安全位点中的一种或多种。16.根据权利要求1至4任一所述的多能干细胞或其衍生物，其特征在于，所述多能干细胞包括胚胎干细胞、胚胎生殖细胞、胚胎癌细胞、或者诱导多能干细胞。17.根据权利要求1至4任一所述的多能干细胞或其衍生物，其特征在于，所述多能干细胞衍生物包括多能干细胞所分化的成体干细胞、各胚层细胞或组织；所述成体干细胞包括间充质干细胞或者神经干细胞。18.根据权利要求1至4任一所述的多能干细胞或其衍生物，其特征在于，所述tim-3抗体的重链序列如seq id no.1所示，轻链序列如seq id no.2所示。19.权利要求1～18任一所述的多能干细胞或其衍生物在制备tim-3高表达肿瘤治疗药物中的应用。20.一种制剂，包含权利要求1～18任一所述的多能干细胞或其衍生物。

技术总结
本发明公开了一种表达Tim-3阻断物的多能干细胞或其衍生物及应用，该多能干细胞或其衍生物，包括表达Tim-3阻断物的非免疫兼容的多能干细胞或其衍生物、表达Tim-3阻断物的免疫兼容的多能干细胞或其衍生物、表达Tim-3阻断物的免疫兼容可逆的多能干细胞或其衍生物中的至少一种。本发明提供的表达Tim-3阻断物的多能干细胞或其衍生物，可用于自体细胞诱导iPSCs或分化成MSCs这类低免疫源性细胞进行运用，其可在体内持续表达Tim-3阻断物，用于治疗Tim-3高表达肿瘤及相关疾病。3高表达肿瘤及相关疾病。


技术研发人员：王淋立 陈月花 莫健 杨建国
受保护的技术使用者：王淋立
技术研发日：2020.10.30
技术公布日：2022/5/25