一种检测miRNA的CDA探针引物组、试剂盒及其应用

技术特征：
1.一种非疾病诊断目的的检测mirna的cda探针引物组，该探针引物组包括：探针1、探针2、引物mf、引物mr；探针1从3’到5’端分别由r1c区和t1区组成，探针2从3’到5’端分别由t2区、m区和f1区组成，引物mf由f1区和m1c区组成，引物mr由r1区和m2区组成；其中t1区与待测mirna的部分序列互补，t2区与待测mirna的另一部分序列互补，t1和t2两部分与完整的待测mirna序列互补；所述m区包括m1区和m2区，m1区与m1c区互补，m2区与m2c区互补，r1区与r1c区互补，f1区与f1c区互补；所述探针1的5’端被磷酸化修饰。2.一种检测mirna的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括权利要求1所述的cda探针引物组。3.如权利要求2所述的检测mirna的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括核酸链连接反应液和cda扩增反应液，其中核酸链连接反应液包括核酸链连接酶、反应缓冲液、探针1、探针2；所述cda扩增反应液包括引物mf和引物mr、bst聚合酶、cda反应缓冲液、超纯水。4.如权利要求3所述的检测mirna的试剂盒，其特征在于，所述核酸链连接反应液的组成为：3-7u t4 rna连接酶21x t4 rna连接酶2反应缓冲液100-2000nm探针1100-2000nm探针2。5.如权利要求3所述的检测mirna的试剂盒，其特征在于：所述cda反应缓冲液包括tris-hcl、kcl、(nh4)2so4、mgso4和triton x-100。6.如权利要求3所述的检测mirna的试剂盒，其特征在于：所述cda扩增反应液还包括显色剂，所述显色剂选自sybr green i、eva green、羟基萘酚蓝、铬黑t中的一种。7.如权利要求3所述的检测mirna的试剂盒，其特征在于，所述cda扩增反应液的组成为：2-50mm tris-hcl ph8.82-20mm kcl2-20mm(nh4)2so42～20mm mgso40.1～0.5％tritonx-1000.2～1m甜菜碱1～1.6mm dntp5～10u bst dna聚合酶100～150μmol/l显色剂1～2μm引物mf1～2μm引物mr；反应溶剂为超纯水。8.权利要求3所述试剂盒非疾病诊断目的的检测mirna的方法，包括以下步骤：步骤1，将核酸链连接酶和反应缓冲液、探针1、探针2混合，制得核酸链连接反应液；制得的核酸链连接反应液于35-38℃反应50-70min。步骤2，将步骤1反应完毕的核酸链连接反应液与cda扩增反应液混合，于60～65℃反应
20～80min，根据扩增结果判断样品中是否含有mirna。9.权利要求1所述的cda探针引物组在非疾病诊断目的的mirna检测中的应用。10.权利要求2-7任一项所述的试剂盒在非疾病诊断目的的mirna检测中的应用。

技术总结
本发明公开了一种检测miRNA的CDA探针引物组、试剂盒及其应用。所述CDA探针引物组包括：探针1、探针2、引物MF、引物MR；探针1从3’到5’端分别由R1c区和T1区组成，探针2从3’到5’端分别由T2区、M区和F1区组成，引物MF由F1区和M1c区组成，引物MR由R1区和M2区组成；其中T1区与待测miRNA的部分序列互补，T2区与待测miRNA的另一部分序列互补，T1和T2两部分与完整的待测miRNA序列互补；所述M区包括M1区和M2区，M1区与M1c区互补，M2区与M2c区互补，R1区与R1c区互补，F1区与F1c区互补；所述探针1的5’端被磷酸化修饰。本发明提供的方法或试剂盒无需昂贵的仪器、也无需复杂的操作即可完成对miRNA的快速准确检测。快速准确检测。快速准确检测。


技术研发人员：毛瑞 蔡挺
受保护的技术使用者：中国科学院大学宁波华美医院
技术研发日：2022.01.27
技术公布日：2022/4/29