一株腐质霉菌KC0924g及其生产的菌剂和应用的制作方法

一株腐质霉菌kc0924g及其生产的菌剂和应用
技术领域
1.本发明属于微生物介导的污染环境修复领域，具体涉及一株以可降解恩诺沙星和孔雀石绿腐残留的腐质霉菌kc0924g及其生产的菌剂和应用


背景技术：

2.兽用抗生素在集约化的养殖业中作用显著，能够预防、治疗动物疾病并促进动物生长。兽用抗生素仅有20％～30％被饲喂对象吸收利用，其余以原药形式随排泄物或养殖废水直接排出，经渗透进入土壤和水环境。抗生素超量使用及残留污染加剧了食品和生态安全隐患。
3.恩诺沙星，其结构如图1，又称恩氟喹啉羧酸、乙基环丙沙星，属于第三代氟喹诺酮类抗生素，具有价格低、抗菌谱广、药效快、时效长、毒副作用小等特点，因此其不仅能预防和治疗动物感染性疾病，还可作为饲料添加剂促进养殖动物生长。恩诺沙星的应用保障了养殖业的发展，有效促进了农民增收及农村经济的发展。然而，由于科学作业知识的缺乏及受经济利益的驱使，养殖业中滥用恩诺沙星的现象普遍存在，导致其残留在食品、环境样品中甚至人体内均屡被检出。更为严重的问题是，恩诺沙星会随食物链进入人体，威胁人类健康。环境中残留的抗生素直接影响微生物群落结构及种群数量，抑制微生物群落的生态功能，例如物质循环。长期和反复暴露于亚致死浓度的抗生素会促进细菌群落发生生理变化，导致耐药基因(antibiotic resistance genes，args)的出现。args全球性的传播和扩散会诱导“超级细菌”的形成，造成抗生素逐渐失去治疗效果。此外，越来越多的证据表明接触恩诺沙星的不良影响从常见的副作用扩展到与人类微生物组相关的免疫和代谢疾病，例如儿童肥胖症。目前，环境中恩诺沙星残留的去除主要经由物理化学方法，如光催化降解、电化学氧化还原技术、零价双金属纳米颗粒吸附法、臭氧氧化法、微波辐射法等，这些方法往往能耗大，成本高。相比之下，微生物修复方法具有无二次污染、成本较低等特点，是比较理想的消除环境中恩诺沙星污染的方法。
4.目前，关于恩诺沙星降解菌株筛选的国内外报道较少，代表性降解菌株为gloeophyllum striatum以及在人工湿地或者滩涂植物根际土样中富集的混合菌群。由于报道的恩诺沙星降解菌株很少，制约了恩诺沙星污染环境微生物修复技术的进一步发展和应用。因此，驯化筛选恩诺沙星高效降解菌株，研究其降解特性，并应用于恩诺沙星污染环境的生物修复，具有重要的生态学意义。
5.孔雀石绿是人工合成的三苯甲烷类染料，由于价格低廉且具有较好的驱虫和杀菌效果，曾在水产养殖中被广泛用于环境消毒和治疗水霉病、腮霉病等。孔雀石绿容易代谢转化为化学性质更稳定、毒性更强的隐性孔雀石绿，在生物体和环境中代谢缓慢、残留时间长。研究表明，孔雀石绿及其代谢物隐性孔雀石绿均致癌、致畸和致突变。目前，包括中国在内的很多国家都将孔雀石绿列为禁用药物。由于孔雀石绿曾被广泛使用，造成部分养殖环境被污染，经常有养殖户反映，在养殖过程中并未使用孔雀石绿类药物，却在产品中被检出，推测可能由环境中的历史残留引起。因此，亟待利用高效、经济及绿色的微生物修复技
术修复养殖环境中残留的孔雀石绿及隐性孔雀石绿。


技术实现要素：

6.发明目的：针对现有技术存在的问题，本发明提供一株腐质霉菌(humicola sp.)kc0924g，该菌株可以有效降解恩诺沙星、氟喹诺酮类抗生素，同时可以处理孔雀石绿和隐性孔雀石绿残留污染。本发明的另一目的是提供基于该降解菌株kc0924g生产降解菌剂及应用其修复受恩诺沙星和孔雀石绿残留污染的养殖池塘底泥的应用。该菌株制备的降解菌剂可在短时间内使养殖池溏底泥中残留的恩诺沙星降解。
7.技术方案：为了实现上述目的，本发明所述一株腐质霉菌(humicola sp.)kc0924g，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉，保藏时间为2020年11月16日，保藏编号为cctcc no:m 2020752。
8.本发明所述的腐质霉菌(humicola sp.)kc0924g在降解恩诺沙星中的应用。
9.其中，所述kc0924g在降解养殖池溏底泥中恩诺沙星中的应用。
10.本发明所述的腐质霉菌(humicola sp.)kc0924g在降解氟喹诺酮类抗生素中的应用。
11.本发明所述的腐质霉菌(humicola sp.)kc0924g在降解孔雀石绿和隐性孔雀石绿中的应用。
12.其中，所述kc0924g在降解养殖池溏底泥中孔雀石绿中的应用。
13.本发明所述的腐质霉菌(humicola sp.)kc0924g生产的降解菌剂。
14.本发明所述的降解菌剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
15.(1)将菌株kc0924g接种至pda培养基上，培养至孢子成熟，洗脱孢子，获得一级种子液；
16.(2)将上述一级种子液接种至含有pd培养基的种子罐中，在种子罐中培养，获得二级种子液；
17.(3)将上述二级种子液接种至固态发酵培养基，发酵成熟的固体料经低温干燥粉碎即为降解菌剂。
18.其中，步骤(1)中所述的一级种子液中孢子的浓度为9.0
×
106～1.2
×
107cfu ml-1
；步骤(2)中所述接种为按发酵培养基体积的0.8～1.2％进行接种，培养温度为25-28℃，发酵时间为24～36h。其中，步骤(3)中固态发酵温度为26～28℃，环境湿度为50～85％，发酵时间为3～5d；发酵成熟的固体料用低温干燥器进行干燥，直至含水量达到5～12％，再利用粉碎机粉碎至40～60目，包装成成品。
19.作为优选，步骤(1)中所述的一级种子液中孢子的浓度为107cfu ml-1
；步骤(2)中所述接种为按发酵培养基体积的1％进行接种，培养温度为28℃，发酵时间为24h；步骤(3)中所述的固态发酵培养基，固态发酵培养基包括固体发酵基质和营养液，含水量为65％～75wt％，
20.作为优选，所述的固体发酵基质包括稻壳粉(20目)和麦麸(40目)；其中，稻壳粉(20目)和麦麸(40目)的质量比为2:3；
21.所述的营养液包括蜜糖、蛋白胨、硫酸镁和氯化钙；按质量百分比计，蜜糖1％、蛋白胨0.5％、硫酸镁0.2％、氯化钙0.05％，其余分量为去离子水。
22.步骤(3)中所述的固态发酵温度为26～28℃，环境湿度为50～85％，发酵时间为3～5d；每间隔24h补加一次营养液，其添加量按1％重量比进行均匀喷雾添加；发酵成熟的固体料用低温干燥器进行干燥，直至含水量达到5～12％，再利用粉碎机粉碎至40～60目，检验后分级计量包装成成品。
23.有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下优点：
24.本发明分离筛选获得恩诺沙星降解菌株kc0924g，对无机盐培养液中浓度为1mg l-1
的恩诺沙星，处理72h降解率达91.2％。该菌株对其他常见氟喹诺酮类抗生素(环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星)均有较好的降解效果。此外，菌株kc0924g还可降解渔业禁用药孔雀石绿及隐性孔雀石绿，在48h内对无机盐培养基中孔雀石绿和隐性孔雀石绿的降解率分别为99.9％和87.5％。由上述菌株制备的降解菌剂能在短时间内降解养殖池溏底泥中的恩诺沙星和孔雀石绿残留，降解率均达80％以上，相比于对照组处理组底泥中的急性生物毒性有明显的降低。上述结果表明该菌株在修复受恩诺沙星及孔雀石绿残留污染的养殖池溏底泥环境方面具有很好的应用价值。
25.本发明的降解菌剂可以用固态发酵工业通用发酵设备进行生产，具有生产成本低，使用方便，去除效果好的优点，适用于水产养殖厂及周围受恩诺沙星污染的底泥修复；本发明对于保护生态环境，保护人体健康具有重要的意义。
附图说明
26.图1为恩诺沙星的分子结构式；
27.图2为菌株kc0924g降解恩诺沙星的hplc图谱(a、恩诺沙星ck；b、恩诺沙星 菌株kc0924g)；
28.图3为本发明的菌株kc0924g的照片(a、菌落正面照片；b、菌落背面照片；c、经乳酸酚棉蓝染色后菌丝的显微照片；d、经乳酸酚棉蓝染色后菌丝及厚垣孢子的显微照片)；
29.图4为菌株kc0924g中rdna-its序列的系统进化树；
30.图5为在基础盐培养基中，恩诺沙星随时间变化的降解曲线图；
31.图6为菌株kc0924g对其它氟喹诺酮类抗生素及孔雀石绿，隐性孔雀石绿的降解率；
32.图7为菌株kc0924g降解孔雀石绿的颜色变化(a、孔雀石绿ck；b、孔雀石绿 灭活的菌株kc0924g；c、孔雀石绿 菌株kc0924g)。
33.图8为不同时间点底泥样品浸提液对发光细菌(费式弧菌)发光度影响的趋势图。
具体实施方式
34.以下结合附图和实施例对本发明作进一步说明。
35.本发明实施例中使用的孔雀石绿和隐性孔雀石绿购买于国药集团化学试剂有限公司；氘代孔雀石绿和氘代隐性孔雀石绿购买于德国dr.ehrenstorfer gmbh公司。
36.恩诺沙星，环丙沙星，诺氟沙星和氧氟沙星购买于阿拉丁。
37.实施例1
38.菌株kc0924g的分离和鉴定：
39.采集种有沉水植物苦草(vallisneria spiralis)的养殖池塘底泥(底泥样品有恩
诺沙星检出)，取10g底泥样品置于100ml添加1mg l-1
恩诺沙星的无机盐液体培养基(nh4no
3 1.0g，k2hpo
4 1.5g，kh2po
4 0.5g，mgso
4 0.2g，nacl 1.0g，水1l，ph 7.0-7.2)中，28℃、160rpm培养7d，以体积比5％的接种量转接到添加2mg l-1
恩诺沙星的无机盐液体培养基，每次转接恩诺沙星的浓度递增1mg l-1
，直至连续转接4次。通过高效液相色谱法测定富集液对恩诺沙星的降解效果，获得有降解效果的富集液。将有降解效果的富集液按体积比以10-1
、10-2
、10-3
、10-4
、10-5
、10-6
梯度稀释，取每个稀释梯度的富集液200μl分别涂布在含有5mg l-1
恩诺沙星的营养琼脂培养基平板(蛋白胨10g，牛肉粉3g，氯化钠5g，琼脂15g，ph 7.3
±
0.2)和含有5mg l-1
恩诺沙星的pda培养基平板(去皮马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15-20g，蒸馏水1l，ph自然)上28℃培养7d。分别挑取平板上长出来的细菌或真菌单菌落(通过肉眼直接判断形态)，将细菌菌落接种于含有5mg l-1
恩诺沙星的肉汤培养基(蛋白胨10g，牛肉粉3g，氯化钠5g，ph 7.3
±
0.2)，真菌菌落接种于含有5mg l-1
恩诺沙星的pd培养基(去皮马铃薯200g，葡萄糖20g，蒸馏水1l，ph自然)中，将菌株培养至对数期，以体积比1％的接种量接种至加有1mg l-1
恩诺沙星的无机盐培养基中，28℃、160r/min培养3d，通过高效液相色谱检测降解效果。对恩诺沙星有降解效果的菌株即为降解菌株。
40.样品前处理方法：吸取1ml样品置于1.5ml离心管中，12000rpm离心5min。取上清过0.22μm的细菌滤器过滤杂质，装进样瓶准备上机检测。
41.样品检测方法：
42.hplc-荧光检测器检测法
43.高效液相色谱仪型号为agilent 1100/1200hplc，色谱柱为agilent eclipseplus c18，其规格为250mm
×
4.6mm
×
5μm，柱温40℃；流动相：0.05m磷酸-三乙胺水溶液/乙腈(18:82，v/v)；流速为1.0ml min-1
，进样量为20μl；对于恩诺沙星、环丙沙星和诺氟沙星而言，其荧光检测器激发波长为280nm，发射波长为450nm；对于氧氟沙星而言，其荧光检测器激发波长为283nm，发射波长为490nm。
44.从富集液中，通过hplc-荧光检测器检测法验证(图2)得到1株恩诺沙星降解菌株，命名为kc0924g。该菌株在72h内对1mg l-1
恩诺沙星的降解率高达91.2％。菌株kc0924g在pda培养基上形成发散状皱褶的菌落，正面菌丝呈白色，绒状，附于基质表面(图3a)；反面黄褐色至黑色，有色素沉积(图3b)；菌丝末端分支(图3c)，孢子呈圆球状(图3d)。
45.采用通用引物its1(5
’‑
tccgtaggtgaacctgcgg-3’)和its4(5
’‑
tcctccgcttattgatatgc-3’)，扩增菌株kc0924g的rdna-its片段，所得长度为613bp，基因序列如seq id no.1所示。将测序结果与ncbi中的genbank数据库进行blast比对，结果表明菌株kc0924g与腐质霉属(humicola sp.)菌株的相似性最高，与humicola sp.l-2的相似性为98.67％。根据菌株kc0924g形态特征及其rdna-its序列进化发育树分析(图4)，将其初步鉴定为腐质霉属(humicola sp.)，命名为腐质霉菌(humicola sp.)kc0924g。将该菌株kc09254g送交位于中国武汉，中国典型培养物保藏中心(简称cctcc)保藏，保藏时间为2020年11月16日，保藏编号为cctcc no:m 2020752。
46.实施例2
47.在无机盐培养基中菌株kc0924g对恩诺沙星的降解效果：
48.用无菌水反复冲洗生长在pda平板上的菌落，获得菌株kc0924g的孢子悬浊液(1.0
×
107cfu ml-1
)。以5
‰
体积比的接种量将孢子悬浊液接种于100ml pda培养基，28℃、
160rpm振荡培养2d，获得新鲜菌液，即为种子液。在无机盐培养基中加入终浓度为1mg l-1
的恩诺沙星，按5％体积比的接种量接入菌株kc0924g的种子液；同时在无机盐培养基中加入终浓度为1mg l-1
的恩诺沙星，按相同体积比的接种量接入灭活的菌株kc0924g种子液作为对照，置于28℃，160rpm的恒温摇床中培养，分别于6h，12h，24h(1d)，72h(3d)，120h(5d)，168h(7d)取一次样。采用实施例1中降解效果的验证方法通过高效液相色谱法检测菌株kc0924g对恩诺沙星的降解情况，并计算降解率，如图5所示，菌株kc0924g在72h(3d)内对1mg l-1
的恩诺沙星的降解率为91.2％且随着时间的推移降解率变化不大(168h，92.0％)。
49.实施例3
50.在无机盐培养基中菌株kc0924g对其它氟喹诺酮类抗生素(环丙沙星、诺氟沙星和氧氟沙星)的降解效果：
51.参照实施例2的方法获得菌株kc0924g的种子液。在无机盐培养基中分别加入终浓度为1mg l-1
的环丙沙星、诺氟沙星和氧氟沙星，按5％体积比的接种量接入菌株kc0924g的种子液；同时在无机盐培养基中分别加入终浓度为1mg l-1
的环丙沙星、诺氟沙星和氧氟沙星，按5％体积比的接种量接入灭活的菌株kc0924g种子液作为对照，置于28℃，160rpm的恒温摇床中培养72h(3d)。取第3d的降解样品，采用实施例1中降解效果的验证方法通过高效液相色谱法检测菌株kc0924g对环丙沙星、诺氟沙星和氧氟沙星的降解情况，并计算降解率，如图6所示，菌株kc0924g在72h内对浓度1mg l-1
环丙沙星、诺氟沙星和氧氟沙星的降解率分别为86.4％，70.2％和46.4％。
52.实施例4
53.在无机盐培养基中菌株kc0924g对孔雀石绿及隐性孔雀石绿的降解效果：
54.参照实施例2的方法获得菌株kc0924g的种子液。在无机盐培养基中分别加入终浓度为1mg l-1
的孔雀石绿和隐性孔雀石绿，按5％体积比的接种量分别接入菌株kc0924g的种子液；同时在无机盐培养基中分别加入终浓度为1mgl-1
的孔雀石绿和隐性孔雀石绿，按5％体积比的接种量分别接入灭活的菌株kc0924g种子液作为对照，置于28℃，160rpm的恒温摇床中培养48h。由于孔雀石绿呈蓝绿色，可通过颜色变化初步判断降解情况。如图7所示，相比于对照组(图7a和b)，处理组中的孔雀石绿在48h内褪为了无色(图7c)。通过hplc-ms/ms法测定无机盐中孔雀石绿及隐性孔雀石绿残留并计算降解率，其具体方法如下：
55.样品前处理方法：
56.10ml样品，8000rpm离心5min，取100μl上清溶液，稀释到10ml水体中，加入300μl浓度为0.2μml-1
的氘代孔雀石绿和氘代隐性孔雀石绿混匀，取1ml样品过prs固相萃取柱，prs柱子经过活化(2ml乙腈、2ml水)、上样、淋洗(2ml水、2ml乙腈)，最后采用3ml乙腈：乙酸铵(v:v＝1:1)洗脱，取1ml洗脱液过滤，上机检测。
57.样品检测方法：
58.色谱柱：thermo c18色谱柱(100mm
×
2.1mm)；流速：0.25ml/min；进样量：10μl；流动相由乙腈和0.2％乙酸铵组成，梯度洗脱程序见表1。
59.表1 梯度洗脱条件
[0060][0061]
离子源：电喷雾离子源(esi)；离子化方式：正离子；扫描方式：多反应监测(mrm)；离子喷雾电压：5500v；离子传输管温度：500℃；鞘气流量：30ml/min；辅助气流量：9ml/min；碰撞气：氩气。
[0062]
在自然条件下，孔雀石绿易被还原形成毒性更强的隐性孔雀石绿。结果表明，菌株kc0924g在48h内对无机盐培养基中孔雀石绿的降解率为99.9％且降解体系中不积累隐性孔雀石绿；菌株kc0924g在48h内对无机盐培养基中隐性孔雀石绿的降解率为87.5％。
[0063]
实施例5
[0064]
菌株kc0924g的降解菌剂的制备：
[0065]
(1)将降解菌株kc0924g接种至pda培养基上，培养至孢子成熟，洗脱孢子，获得一级种子液，一级种子液中孢子的浓度为1.0
×
107cfu ml-1
；
[0066]
(2)将上述一级种子液按发酵培养基体积的1％接种至含有pd培养基的种子罐中，在种子罐中培养，培养温度为28℃，发酵时间为24h，获得二级种子液；
[0067]
(3)将上述二级种子液接种至固态发酵培养基，发酵成熟的固体料经低温干燥粉碎即为降解菌剂；步骤(3)中固态发酵培养基包括固体发酵基质和营养液(质量比为3:7)，含水量约为70wt％，固态发酵温度为28℃，环境湿度为70％，发酵时间为5d；每间隔24h补加一次营养液，其添加量按整个发酵体系的1％重量比进行均匀喷雾添加；发酵成熟的固体料用低温干燥器进行干燥，直至含水量达到8％，再利用粉碎机粉碎至60目，检验后分级计量包装成成品。
[0068]
其中固体发酵基质包括稻壳粉(20目)和麦麸(40目)；其中，稻壳粉(20目)和麦麸(40目)的质量比为2:3；营养液包括蜜糖、蛋白胨、硫酸镁和氯化钙；按质量百分比计，蜜糖1％、蛋白胨0.5％、硫酸镁0.2％、氯化钙0.05％，其余分量为水。
[0069]
实施例6
[0070]
菌株kc0924g的降解菌剂的制备：
[0071]
(1)将降解菌株kc0924g接种至pda培养基上，培养至孢子成熟，洗脱孢子，获得一级种子液，一级种子液中孢子的浓度为1.2
×
107cfu ml-1
；
[0072]
(2)将上述一级种子液按发酵培养基体积的1.2％接种至含有pd培养基的种子罐中，在种子罐中培养，培养温度为28℃，发酵时间为24h，获得二级种子液；
[0073]
(3)将上述二级种子液接种至固态发酵培养基，发酵成熟的固体料经低温干燥粉碎即为降解菌剂；步骤(3)中固态发酵培养基包括固体发酵基质和营养液(质量比为3:7)，含水量约为70wt％，固态发酵温度为26℃，环境湿度为85％，发酵时间为5d；每间隔24h补加
一次营养液，其添加量按整个发酵体系的1％重量比进行均匀喷雾添加；发酵成熟的固体料用低温干燥器进行干燥，直至含水量达到12％，再利用粉碎机粉碎至60目，检验后分级计量包装成成品。
[0074]
其中固体发酵基质包括稻壳粉(20目)和麦麸(40目)；其中，稻壳粉(20目)和麦麸(40目)的质量比为2:3；营养液包括蜜糖、蛋白胨、硫酸镁和氯化钙；按质量百分比计，蜜糖1％、蛋白胨0.5％、硫酸镁0.2％、氯化钙0.05％，其余分量为水。
[0075]
实施例7
[0076]
菌株kc0924g的降解菌剂的制备：
[0077]
(1)将降解菌株kc0924g接种至pda培养基上，培养至孢子成熟，洗脱孢子，获得一级种子液，一级种子液中孢子的浓度为9.0
×
106cfu ml-1
；
[0078]
(2)将上述一级种子液按发酵培养基体积的0.8％接种至含有pd培养基的种子罐中，在种子罐中培养，培养温度为28℃，发酵时间为36h，获得二级种子液；
[0079]
(3)将上述二级种子液接种至固态发酵培养基，发酵成熟的固体料经低温干燥粉碎即为降解菌剂；步骤(3)中固态发酵培养基包括固体发酵基质和营养液(质量比为3:7)，含水量约为70wt％，固态发酵温度为28℃，环境湿度为50％，发酵时间为3d；每间隔24h补加一次营养液，其添加量按整个发酵体系的1％重量比进行均匀喷雾添加；发酵成熟的固体料用低温干燥器进行干燥，直至含水量达到5％，再利用粉碎机粉碎至40目，检验后分级计量包装成成品。
[0080]
其中固体发酵基质包括稻壳粉(20目)和麦麸(40目)；其中，稻壳粉(20目)和麦麸(40目)的质量比为2:3；营养液包括蜜糖、蛋白胨、硫酸镁和氯化钙；按质量百分比计，蜜糖1％、蛋白胨0.5％、硫酸镁0.2％、氯化钙0.05％，其余分量为水。
[0081]
实施例8
[0082]
菌株kc0924g降解菌剂对养殖池塘底泥中恩诺沙星和孔雀石绿的降解效果测定
[0083]
称取多份500g经风干过筛后的池塘底泥，加入恩诺沙星和孔雀石绿，使底泥中恩诺沙星和孔雀石绿的浓度皆为1mg kg-1
，以质量比1％的接种量加入实施例5制备的kc0924g降解菌剂混匀，处理组都设有相应不加kc0924g降解菌剂以及加入相同体积灭活的kc0924g降解菌剂的底泥为对照，置于28℃培养箱中恒温培养，期间保持含水量在60％，每组做平行实验3次，底泥样品均采用五点采样法采集。
[0084]
在第28d取样测定恩诺沙星和孔雀石绿在底泥中的残留量，利用高效液相色谱-质谱测定残留量，计算多次平均降解率，结果见表2。
[0085]
分别在第1d、第3d、第5d、第10d、第17d和第28d采集处理组和对照组中的底泥样品并制备浸提液，方法如下：称取2.5g的底泥样品与2.5ml的microtox稀释液均质超声20min，静置浸提24h，10000rpm离心5min，上清即为底泥浸提液。利用发光细菌(费式弧菌)毒性检测仪(fx分析仪，modernwater)测定各时间点底泥浸提液对发光细菌发光度影响的变化，量度被测底泥样品中药残所造成的急性生物毒性。图8为不同时间点底泥样品浸提液对发光细菌(费式弧菌)发光度影响的趋势图。
[0086]
表2 菌株kc0924g降解菌剂对底泥中恩诺沙星和孔雀石绿残留的降解效果
[0087][0088]
由表2可见，底泥中恩诺沙星和孔雀石绿的浓度为1mg kg-1
时，菌株kc0924g对恩诺沙星的降解率为80.5％，对孔雀石绿的降解率为86.8％且不会积累隐性孔雀石绿。由图8可见，对照组中底泥浸提液对发光细菌(费氏弧菌)发光度的影响随时间变化波动不大，第28d相对于第1d的底泥浸提液对发光细菌(费氏弧菌)发光度仅增加了5％；处理组中底泥浸提液对发光细菌(费氏弧菌)发光度随时间呈现上升趋势，第28d相对于第1d的底泥浸提液对发光细菌(费氏弧菌)发光度增加了21％。结果表明，相比于对照组处理组底泥中的急性生物毒性有明显的降低。综上所述，kc0924g降解菌剂可有效修复养殖池塘底泥中恩诺沙星和孔雀石绿污染残留。