用于调节前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/Kexin9型(PCSK9)的化合物的制作方法

用于调节前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin 9型(pcsk9)的化合物
1.相关申请的交叉引用
2.本技术根据35u.s.c.
§
119(e)要求于2019年6月14日提交的美国临时申请62/861,902号的权益，其全部内容通过引用并入本文。
发明领域
3.本公开涉及能够结合前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin 9型(pcsk9)以调节pcsk9的生物活性的化合物、其组合物及方法。
4.发明背景
5.升高的低密度脂蛋白胆固醇(ldl-c)血浆水平代表了冠心病发展的重要风险因素。从血浆中清除ldl-c主要由肝脏通过低密度脂蛋白受体(ldlr)的作用发生，低密度脂蛋白受体是以高亲和力与ldl颗粒上的载脂蛋白b100(apob100)结合并介导它们的内吞摄取的细胞表面糖蛋白。goldstein等，annu.rev.cell biol.1:1
–
39(1985)。常染色体显性高胆固醇血症(adh)与降低血浆ldl清除率的突变有关，这些突变存在于编码ldlr(家族性高胆固醇血症(fh))或apob100(家族性缺陷apob100)的基因中。分别hobbs等，annu.rev.genet.24,133
–
170(1990)；和innerarity等，j.lipid res.31:1337
–
1349(1990)。
6.低密度脂蛋白受体(ldlr)介导极低密度脂蛋白(vldl)、vldl残余物和ldl的有效内吞。作为内吞过程的一部分，ldlr将脂蛋白释放到肝核内体中。
7.前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin 9型(pcsk9)是一种由人类pcsk9基因编码的酶。pcsk9被认为在胆固醇内稳态中发挥调节作用。例如，pcsk9可以与低密度脂蛋白受体(ldlr)的表皮生长因子样重复序列a(egf-a)结构域结合，导致ldlr内化和降解。
8.可调节pcsk9活性的药物可用于控制ldl-胆固醇水平。因此，仍然需要有效治疗和预防与pcsk9相关的病症和失调的化合物，包括高胆固醇血症和低胆固醇血症。本文提供的化合物与pcsk9结合，从而调节pcsk9前蛋白转化酶活性，并可用于治疗和预防pcsk9相关病症和失调。
9.发明概述
10.本文提供了用于结合和调节pcsk9酶活性的化合物。本公开还提供了组合物(包括药物组合物)、包含所述化合物的试剂盒以及使用(或施用)和制备所述化合物的方法。本公开还提供了用于治疗由pcsk9介导的疾病、失调或病症的方法的化合物或其组合物。此外，本公开提供了化合物或其组合物在制备用于治疗至少部分地由pcsk9介导的疾病、失调或病症的药物中的用途。
11.因此，在一个实施方式中，提供了式i的化合物：
[0012][0013]
或其药学上可接受的盐、前药、氘代类似物、立体异构体或立体异构体的混合物，
[0014]
其中
[0015]
环a为六元芳族环；x1、x4和x5独立地为n、ch或cr1，x2为n、ch或cr2，和x3为n、ch或cr3，条件是x1、x2、x3、x4和x5中不超过两个为n，并且x2和x3中的至少一个不是n或ch；
[0016]
环b为六元非芳族环；z1是ch2、chr9、cr9r9、nh、nr9、o或s，z2是ch、cr
10
或n；和z3是chr7、cr7r9、nr7、o或s；条件是当z2为n时，z3为chr7或cr7r9；
[0017]
r1、r9或r
10
各自独立地为c
1-c6烷基、杂环基、杂芳基、卤代、oh、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷基、c
1-c6羟烷基、cn或nh2；
[0018]
m为0、1、2、3或4；
[0019]
r2和r3之一为c
3-c6环烷基、苯基、杂芳基或杂环基，r2和r3中的另一个为h、c
1-c6烷基、卤代、oh、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷基、c
1-c6羟烷基、cn、nh2、c
3-c6环烷基、苯基、杂芳基或杂环基，其中c
3-c6环烷基、苯基、杂芳基或杂环基任选地被一至五个r4取代；
[0020]
每一个r4独立地选自c
1-c6烷基、卤代、oh、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷基、c
1-c6羟烷基、nh2和cn；
[0021]
r6为h、卤代、c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、oh、cn或nh2；
[0022]
r7是h、卤代、c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、oh、cn或nh2；
[0023]
r8是c
1-c6烷基、c
1-c6杂烷基、c
3-c6环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、c
3-c6环烷基-c
1-c6烷基、芳基-c
1-c6烷基、杂芳基-c
1-c6烷基或杂环基-c
1-c6烷基；其中每一个任选地被一至四个独立地选自c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、卤代、氧代、＝nr
11
、cn、nh2和oh的取代基取代；或者
[0024]
r8和r7与它们所连接的原子一起形成环c，其是与环b稠合的c
3-c6环烷基或杂环基环，其中环c任选地被一至四个r
12
取代；
[0025]r11
为h或c
1-c6烷基；
[0026]
每一个r
12
独立地选自c
1-c6烷基、卤代、oh、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、nh2和cn；或两个r
12
与它们所连接的原子一起形成环d，其是与环c稠合的c
3-c6环烷基或杂环基；或同一碳原子上的两个r
12
形成＝o或＝nr
11
。
[0027]
在一个实施方式中，提供了式i的化合物：
[0028][0029]
或其药学上可接受的盐、前药、氘代类似物、立体异构体或立体异构体的混合物，
[0030]
其中
[0031]
环a为六元芳族环；x1、x4和x5独立地为n、ch或cr1，x2为n、ch或cr2，和x3为n、ch或cr3，条件是x1、x2、x3、x4和x5中不超过三个为n，并且x2和x3中的至少一个不是n或ch；
[0032]
环b为六元非芳族环；z1是ch2、chr9、cr9r9、nh、nr9、o或s，z2是ch、cr
10
或n；和z3是chr7、cr7r9、nr7、o或s；条件是当z2为n时，z3为chr7或cr7r9；
[0033]
r1、r9和r
10
各自独立地为c
1-c6烷基、杂环基、杂芳基、卤代、oh、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷基、c
1-c6羟烷基、cn或nh2；
[0034]
m为0、1、2、3或4，且不包含z1或z3处的r9基团；
[0035]
r2和r3之一为c
3-c6环烷基、苯基、杂芳基或杂环基，r2和r3中的另一个为h、c
1-c6烷基、卤代、oh、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷基、c
1-c6羟烷基、cn、nh2、c
3-c6环烷基、苯基、杂芳基或杂环基，其中c
3-c6环烷基、苯基、杂芳基或杂环基任选地被一至五个r4取代；
[0036]
每一个r4独立地选自c
1-c6烷基、卤代、oh、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷基、c
1-c6羟烷基、nh2和cn；
[0037]
r6为h、卤代、c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、oh、cn或nh2；
[0038]
r7是h、卤代、c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、oh、cn或nh2；
[0039]
r8是c
1-c6烷基、c
1-c6杂烷基、c
3-c6环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、c
3-c6环烷基-c
1-c6烷基、芳基-c
1-c6烷基、杂芳基-c
1-c6烷基或杂环基-c
1-c6烷基；其中每一个任选地被一至四个独立地选自c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、卤代、氧代、＝nr
11
、cn、nh2和oh的取代基取代；或者
[0040]
r8和r7与它们所连接的原子一起形成环c，其是与环b稠合的c
3-c6环烷基或杂环基环，其中环c任选地被一至四个r
12
取代；
[0041]r11
为h或c
1-c6烷基；
[0042]
每一个r
12
独立地选自c
1-c6烷基、卤代、oh、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、nh2和cn；或两个r
12
与它们所连接的原子一起形成环d，其是与环c稠合的c
3-c6环烷基或杂环基；或同一碳原子上的两个r
12
形成＝o或＝nr
11
。
[0043]
在某些实施方式中，提供了选自表1、表2或表3中的化合物的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、氘代类似物、立体异构体或立体异构体的混合物。在某些实施方式中，提供了选自表1、表2、表3或表4中的化合物的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、氘代类似物、立体异构体或立体异构体的混合物。在一些实施方式中，该化合物是
[0044][0045][0046]
或其药学上可接受的盐、前药、氘代类似物、立体异构体或立体异构体的混合物。
[0047]
在一些实施方式中，提供的是选自以下的化合物：
[0048]
或其药学上可接受的盐、前药、氘代类似物、立体异构体或立体异构体的混合物。
[0049]
在一些实施方式中，该化合物是或其药学上可接受的盐、前药、氘代类似物、立体异构体或立体异构体的混合物。在一些实施方式中，化合物是或其药学上可接受的盐、前药、氘代类似物、立体异构体或立体异构体的混合物。在一些实施方式中，化合物是或其药学上可接受的盐、前药、氘代类似物、立体异构体或立体异构体的混合物。在一些实施方式中，化合物是或其药学上可接受的盐、前药、氘代类似物、立体异构体或立体异构体的混合物。在一些实施方式中，化合物是或其药学上可接受的盐、前药、氘代类似物、立体异构体或立体异构体的混合物。在一些实施方式中，化合物是或其药学上可接受的盐、前药、氘代类似物、立体异构体或立体异构体的混合物。
[0050]
在某些实施方式中，本文提供了使用本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、前药、氘代类似物、立体异构体或立体异构体的混合物治疗哺乳动物中至少部分地由pcsk9介导的疾病或病症的方法。此类疾病或病症包括心血管疾病(例如，冠心病、高血压、高胆固
醇血症或动脉粥样硬化)、代谢疾病(例如，糖尿病)、低胆固醇血症、其中哺乳动物的低密度脂蛋白胆固醇血浆水平升高的疾病或病症以及其中哺乳动物的低密度脂蛋白胆固醇血浆水平被抑制的疾病或病症。因此，在某些实施方式中，本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、前药、氘代类似物、异构体或异构体的混合物可用作治疗上述疾病或病症的药物。
[0051]
在某些实施方式中，本文提供了使用本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、前药、氘代类似物、立体异构体或立体异构体的混合物来结合和调节pcsk9蛋白的生物活性的方法。在某些实施方式中，本文提供了一种使用本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、前药、氘代类似物、立体异构体或立体异构体的混合物来结合和抑制pcsk9蛋白的生物活性的方法。在某些实施方式中，本文提供的是本文描述的化合物，其用于抑制pcsk9。在某些实施方式中，本文提供的是本文描述的化合物，其用于减少pcsk9诱导的ldlr降解。在某些实施方式中，本文提供的是本文描述的化合物，其用于治疗高胆固醇血症。在某些实施方式中，本文提供的是本文描述的化合物，其用于治疗pcsk9相关的失调。在某些实施方式中，本文提供的是本文所述的化合物，其用于降低pcsk9活性。
[0052]
发明详述
[0053]
在描述本组合物和方法之前，应理解本公开不限于所描述的特定化合物、组合物、方法、方案、细胞系、分析和试剂，因为这些可以变化。还应理解，本文中使用的术语旨在描述本公开的特定实施方式，而决不旨在限制如所附权利要求中所示的本公开的范围。
[0054]
1.定义
[0055]
以下描述阐述了本技术的示例性实施方式。然而，应当认识到，这样的描述并非旨在限制本公开的范围，而是作为示例性实施方法的说明提供。
[0056]
如在本说明书中使用的，以下词语、短语和符号通常旨在具有如下所示的含义，除非它们被使用的上下文另有指示。
[0057]
不在两个字母或符号之间的破折号(
“‑”
)用于指示取代基的连接点。例如，-c(o)nh2通过碳原子连接。化学基团前面或末尾的破折号是为了方便；化学基团可以用或不用一个或多个破折号来描述，而不会失去它们的一般含义。通过结构中的线绘制的波浪线或虚线表示基团的指定连接点。除非在化学上或结构上有要求，否则方向性或立体化学不通过化学基团的书写或命名顺序指明或暗示。
[0058]
前缀“c
u-v”表示以下基团具有u至v个碳原子。例如，“c
1-6
烷基”表示该烷基具有1至6个碳原子。
[0059]
本文中提及“约”一个值或参数包含(并描述)涉及该值或参数本身的实施方式。在某些实施方式中，术语“约”包含指示的量
±
10％。在其他实施方式中，术语“约”包含指示的量
±
5％。在某些其他实施方式中，术语“约”包含指示的量
±
1％。此外，术语“约x”包含对“x”的描述。此外，单数形式“一”和“该”包含复数指代，除非上下文另有明确规定。因此，例如，提及“该化合物”包含多种这样的化合物并且提及“该测定法”包含指本领域技术人员已知的一种或多种测定法及其等同。
[0060]“烷基”是指直链或支链的饱和烃链。如本文所用，烷基具有1至20个碳原子(即，c
1-20
烷基)、1至8个碳原子(即，c
1-8
烷基)、1至6个碳原子(即，c
1-6
烷基)或1至4个碳原子(即c
1-4
烷基)。烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、戊基、2-戊基、异戊基、新戊基、己基、2-己基、3-己基和3-甲基戊基。当具有特定碳数
的烷基残基以化学名称命名或以分子式标识时，可包含所有具有该碳数的位置异构体；因此，例如，“丁基”包括正丁基(即-(ch2)3ch3)、仲丁基(即-ch(ch3)ch2ch3)、异丁基(即-ch2ch(ch3)2)和叔丁基(即-c(ch3)3)；和“丙基”包括正丙基(即-(ch2)2ch3)和异丙基(即-ch(ch3)2)。如本文所用，“低级烷基”是指具有1至6个碳原子的烷基链。
[0061]
可以使用某些常用的可选化学名称。例如，二价基团，如二价“烷基”基团、二价“芳基”基团等，也可分别称为“亚烷基”基团、“亚芳基”基团。此外，除非另有明确说明，在将基团的组合称为一个部分，例如芳基烷基的情况中，最后提到的基团包含该部分连接到分子其余部分的原子。例如，“杂环基烷基”是指作为取代基通过烷基链连接的杂环基，其中烷基链连接到分子的其余部分。
[0062]“烯基”是指含有至少一个碳-碳双键并具有2至20个碳原子(即，c
2-20
烯基)、2至8个碳原子(即，c
2-8
烯基)、2至6个碳原子(即，c
2-6
烯基)或者2至4个碳原子(即，c
2-4
烯基)的烷基。烯基的实例包括但不限于乙烯基、丙烯基、丁二烯基(包括1,2-丁二烯基和1,3-丁二烯基)。
[0063]“炔基”是指包含至少一个碳-碳三键并具有2至20个碳原子(即，c
2-20
炔基)、2至8个碳原子(即，c
2-8
炔基)、2至6个碳原子(即，c
2-6
炔基)或者2至4个碳原子(即，c
2-4
炔基)的烷基。术语“炔基”还包括具有一个三键和一个双键的那些基团。
[0064]“烷氧基”是指基团“烷基-o
‑”
。烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、仲丁氧基、正戊氧基、正己氧基和1,2-二甲基丁氧基。
[0065]“烷硫基”是指基团“烷基-s
‑”
。
[0066]“酰基”是指-c(o)r基团，其中r是氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂烷基或杂芳基；如本文所定义，它们中的每一个可以任选地被取代。酰基的实例包括但不限于甲酰基、乙酰基、环己基羰基、环己基甲基-羰基和苯甲酰基。
[0067]“酰胺基”是指“c-酰胺基”(其指基团-c(o)nr
yrz
)和“n-酰胺基”基团(其指基团-nryc(o)rz)，其中ry和rz独立地为氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂烷基或杂芳基；如本文所定义，它们中的每一个可以任选地被取代。
[0068]“氨基”是指基团-nr
yrz
，其中ry和rz独立地为氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂烷基或杂芳基；如本文所定义，它们中的每一个可以任选地被取代。
[0069]“芳族的”描述了包含完全离域的(在环或环系统的至少一个环的整体中)π和/或n电子的环或环系统。
[0070]“非芳族的”描述了不包含具有完全离域的π和/或n电子的环的环或环系统。
[0071]“芳基”是指具有单一环(例如单环)或多个环(例如双环或三环)的芳族碳环基团，包括稠合系统。如本文所用，芳基具有6至20个环碳原子(即，c
6-20
芳基)、6至12个碳环原子(即，c
6-12
芳基)或6至10个碳环原子(即，c
6-10
芳基)。芳基的实例包括苯基、萘基、芴基和蒽基。然而，芳基不包含或以任何方式与以下定义的杂芳基重叠。如果一个或多个芳基与杂芳基稠合，则所得环系统为杂芳基。如果一个或多个芳基与杂环基稠合，则所得环系统为杂环基。
[0072]“氨基甲酰基”是指“o-氨基甲酰基”基团(其指基团-o-c(o)nr
yrz
和“n-氨基甲酰基”基团(其指基团-nryc(o)orz)，其中ry和rz独立地为氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂烷基或杂芳基；如本文所定义，它们中的每一个可以任选地被取代。
[0073]“羧基”是指-c(o)oh。
[0074]“羧基酯”是指-oc(o)r和-c(o)or两者，其中r是烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂烷基或杂芳基；如本文所定义，它们中的每一个可以任选地被取代。
[0075]“碳环”是指具有单一环或多个环的饱和、部分不饱和或芳族环状基团，包括稠合、桥连和螺环系统，其中所有环原子是碳。
[0076]“环烷基”是指具有单一环或多个环的饱和或部分不饱和的环状烷基，包括稠合、桥连和螺环系统。术语“环烷基”包括环烯基(即具有至少一个双键的环状基团)。如本文所用，环烷基具有3至20个环碳原子(即c
3-20
环烷基)、3至12个环碳原子(即c
3-12
环烷基)、3至10个环碳原子(即c
3-10
环烷基))、3至8个环碳原子(即c
3-8
环烷基)或3至6个环碳原子(即c
3-6
环烷基)。环烷基的实例包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基。术语环烷基还意在包含可与芳基环稠合的任何非芳族环，而无论与分子其余部分的连接如何。此外，术语“环烷基烷基”是指通过烷基与分子的其余部分连接的环烷基。
[0077]“亚氨基”是指基团-c(nr)r，其中每一个r独立地为氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂烷基或杂芳基；如本文所定义，它们中的每一个可以任选地被取代。
[0078]“卤素”或“卤代”包含氟代、氯代、溴代和碘代。“卤代烷基”是指如上定义的直链或支链烷基，其中一个或多个氢原子被卤素替代。例如，当残基被一个以上的卤素，例如1至5个卤素取代时，可以通过使用对应于所连接的卤素部分的数量的前缀来指称。二卤代烷基和三卤代烷基是指被两个(“二”)或三个(“三”)卤基取代的烷基，它们可以是但不一定是相同的卤素。卤代烷基的实例包括二氟甲基(-chf2)和三氟甲基(-cf3)。
[0079]“卤代烷氧基”是指如上定义的烷氧基，其中一个或多个氢原子被卤素替代。
[0080]“羟基烷基”是指如上定义的烷基，其中一个或多个氢原子被羟基替代。
[0081]“杂烷基”是指其中一个或多个碳原子(和任何相关的氢原子)各自独立地被相同或不同的杂原子基团替代的烷基。术语“杂烷基”包含具有碳和杂原子的直链或支链饱和链。例如，1、2或3个碳原子可以独立地被相同或不同的杂原子基团替代。杂原子基团包括但不限于，-nr-、-o-、-s-、-s(o)-、-s(o)
2-等，其中r是氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂烷基或杂芳基；如本文所定义，它们中的每一个都可以任选地被取代。杂烷基的实例包括但不限于，-och3、-ch2och3、-sch3、-ch2sch3、-nrch3和-ch2nrch3，其中r是氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂烷基或杂芳基；如本文所定义，它们中的每一个都可以任选地被取代。如本文所用，杂烷基包含1至10个碳原子、1至8个碳原子或1至4个碳原子；和1至3个杂原子、1至2个杂原子或1个杂原子。
[0082]“杂芳基”是指具有单个环、多个环或多个稠合环的芳族基团，其具有一个或多个独立地选自氮、氧和硫的环杂原子。如本文所用，杂芳基包含1至20个环碳原子(即，c
1-20
杂芳基)、3至12个环碳原子(即，c
3-12
杂芳基)或3至8个碳环原子(即，c
3-8
杂芳基)；和1至5个杂原子、1至4个杂原子、1至3个环杂原子、1至2个环杂原子或1个环杂原子，其中所述环杂原子独立地选自氮、氧和硫。杂芳基的实例包括但不限于，嘧啶基、嘌呤基、吡啶基、哒嗪基、苯并噻唑基和吡唑基。稠合杂芳基环的实例包括但不限于，苯并[d]噻唑基、喹啉基、异喹啉基、苯并[d]噻吩基、吲唑基、苯并[d]咪唑基、吡唑并[1,5-a]吡啶基和咪唑并[1,5-a]吡啶基，其中杂芳基可以通过稠合系统的任一环结合。任何具有单个或多个稠合环且包含至少一个杂原子的芳环都被认为是杂芳基，而无论与分子其余部分的连接如何(即，通过任何一个稠
合环)。“杂芳基”基团可被称为“杂芳族的”。杂芳基不包含或与如上定义的芳基重叠。
[0083]“杂环基”是指饱和或不饱和的非芳族环状烷基，具有一个或多个独立地选自氮、氧、硫以及氮和硫的氧化形式的环杂原子。术语“杂环基”包含杂环烯基(即具有至少一个双键的杂环基)、桥连杂环基、稠合杂环基和螺杂环基。杂环基可以是单个环或多个环，其中多个环可以是稠合的、桥连的或螺环的，并且可以包含一个或多个(例如，1至3个)内酰胺(-nhco)部分。任何包含至少一个杂原子的非芳族环都被认为是杂环基，无论连接如何(即，可以通过碳原子或杂原子结合)。此外，术语杂环基旨在包含任何含有至少一个杂原子的非芳族环，该环可以稠合至芳基或杂芳基环，而无论与分子其余部分的连接如何。如本文所用，杂环基具有2至20个环碳原子(即，c
2-20
杂环基)、2至12个环碳原子(即，c
2-12
杂环基)、2至10个环碳原子(即，c
2-10
杂环基)，2至8个环碳原子(即c
2-8
杂环基)、3至12个环碳原子(即c
3-12
杂环基)、3至8个环碳原子(即c
3-8
杂环基)或3至6个环碳原子(即c
3-6
杂环基)；具有1至5个环杂原子、1至4个环杂原子、1至3个环杂原子、1至2个环杂原子或1个环杂原子，其中所述环杂原子独立地选自氮、硫或氧。杂环基的实例包括但不限于吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、氧杂环丁烷基、二氧戊环基、氮杂环丁烷基和吗啉基。
[0084]“磺酰基”是指基团-s(o)2r，其中r是氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂烷基或杂芳基；如本文所定义，它们中的每一个都可以任选地被取代。磺酰基的实例包括但不限于，甲磺酰基、乙磺酰基、苯磺酰基和甲苯磺酰基。
[0085]“亚磺酰基”是指基团-s(o)r，其中r是氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂烷基或杂芳基；如本文所定义，它们中的每一个都可以任选地被取代。亚磺酰基的实例包括但不限于，甲基亚磺酰基、乙基亚磺酰基、苯基亚磺酰基和甲苯亚磺酰基。
[0086]“烷基磺酰基”是指基团-s(o)2r，其中r是烷基。
[0087]“烷基亚磺酰基”是指基团-s(o)r，其中r是烷基。
[0088]
术语“任选的”或“任选地”是指随后描述的事件或情况可能发生或可能不发生，并且该描述包含其中所述事件或情况发生的情况和不发生的情况。此外，术语“任选取代的”是指指定原子或基团上的任何一个或多个氢原子可以被或不被除氢以外的部分替代。
[0089]
术语“取代的”是指指定原子或基团上的任何一个或多个氢原子被一个或多个除氢以外的取代基替代，条件是不超过指定原子的正常价数。该一个或多个取代基包括但不限于，烷基、烯基、炔基、烷氧基、酰基、氨基、酰胺基、脒基、芳基、叠氮基、氨基甲酰基、羧基、羧基酯、氰基、胍基、卤代、卤代烷基、卤代烷氧基、杂烷基、杂芳基、杂环基、羟基、肼基、亚氨基、氧代、硝基、烷基亚磺酰基、磺酸、烷基磺酰基、硫氰酸酯、硫醇、硫酮或其组合。
[0090]
通过用无限附加的进一步取代基定义取代基而得到的聚合物或类似的不定结构(例如，具有本身被取代的芳基取代的取代烷基的取代芳基，该取代的芳基进一步被取代的杂烷基取代等)不打算包含在本文中。除非另有说明，本文所述化合物中连续取代的最大数目为三个。例如，取代芳基用两个其他取代芳基的连续取代限于((取代芳基)取代芳基)取代芳基。类似地，上述定义不旨在包含不允许的取代模式(例如，甲基被5个氟或具有两个相邻氧环原子的杂芳基取代)。这种不允许的取代模式是本领域技术人员众所周知的。
[0091]
本文给出的任何式或结构也旨在代表化合物的未标记形式以及同位素标记形式。除了一个或多个原子被具有选定原子质量或质量数的原子替代之外，同位素标记的化合物具有由本文给出的式描述的结构。可并入本公开的化合物中的同位素的实例包含氢、碳、
氮、氧、磷、氟和氯的同位素，例如但不限于，2h(氘，d)、3h(氚)、
11
c、
13
c、
14
c、
15
n、
18
f、
31
p、
32
p、
35
s、
36
cl和
125
i。本公开的各种同位素标记的化合物，例如，掺入放射性同位素如3h和
14
c的那些化合物，可用于代谢研究、反应动力学研究、检测或成像技术，如正电子发射断层扫描(pet)或单光子发射计算机断层扫描(spect)，包括药物或底物组织分布分析或患者的放射性治疗。
[0092]
本公开还包含本文描述的化合物的“氘代类似物”，其中连接到碳原子的1至x个氢被氘取代，其中x是分子中的氢数目。此类化合物可表现出增加的代谢抗性，因此当施用于哺乳动物，特别是人时，可用于增加本文所述的任何化合物的半衰期。参见例如，foster，“deuterium isotope effects in studies of drug metabolism,”trends pharmacol.sci.5(12):524-527(1984)。此类化合物通过本领域公知的方式合成，例如通过使用其中一个或多个氢已被氘替代的起始材料。
[0093]
本公开的氘标记的或取代的治疗化合物可具有改善的dmpk(药物代谢和药代动力学)特性，涉及分布、代谢和排泄(adme)。用更重的同位素(例如氘)取代可以提供某些由于更大的代谢稳定性而产生的治疗优势，例如增加体内半衰期、减少剂量需求和/或改善治疗指数。
18
f、3h或
11
c标记的化合物可用于pet或spect或其他成像研究。通常可以通过方案中或实施例中公开的程序以及下面描述的制备通过用容易获得的同位素标记试剂代替非同位素标记试剂来制备本公开的同位素标记的化合物及其前药。
[0094]
可以由同位素富集因子定义这种较重同位素，特别是氘的浓度。在本公开的化合物中，未具体指定为特定同位素的任何原子意在代表该原子的任何稳定的同位素。除非另有说明，当一个位置被具体指定为“h”或“氢”时，该位置被理解为具有处于其天然丰度同位素组成的氢。在本公开的化合物中，任何具体指定为氘(d)的原子均意在代表氘。
[0095]
在许多情况下，本公开的化合物由于存在氨基和/或羧基或与其类似的基团而能够形成酸式盐和/或碱式盐。
[0096]
还提供了本文所述化合物的药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、互变异构形式、立体异构体和前药。“药学上可接受的”或“生理学上可接受的”是指化合物、盐、组合物、剂型和其他材料，其可用于制备适用于兽医或人类药物用途的药物组合物。
[0097]
术语给定化合物的“药学上可接受的盐”是指保留给定化合物的生物学效力和特性并且在生物学上或其他方面不是不合需要的盐。“药学上可接受的盐”或“生理学上可接受的盐”包含例如，化合物(或前药、氘代类似物、立体异构体或其立体异构体的混合物)与无机酸或有机酸的盐。此外，如果以酸加成盐的形式获得本文所述的化合物，则可通过将酸式盐的溶液碱化而获得游离碱。相反，如果产物是游离碱，则可以根据从碱化合物制备酸加成盐的常规程序，通过将游离碱溶解在合适的有机溶剂中并用酸处理该溶液产生加成盐，特别是药学上可接受的加成盐。本领域技术人员将认识到可用于制备无毒的药学上可接受的加成盐的各种合成方法。可由无机酸和有机酸制备药学上可接受的酸加成盐。衍生自无机酸的盐包含盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。衍生自有机酸的盐包含乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等。同样，可以由无机碱和有机碱制备药学上可接受的碱加成盐。源自无机碱的盐包含，仅作为举例，钠盐、钾盐、锂盐、铵盐、钙盐和镁盐。衍生自有机碱的盐包括但不限于伯胺、仲胺和叔胺的盐，例如烷基胺(即，nh2(烷基))、
二烷基胺(即，hn(烷基)2)、三烷基胺(即，n(烷基)3)、取代的烷基胺(即，nh2(取代的烷基))、二(取代的烷基)胺(即，hn(取代的烷基)2)、三(取代的烷基)胺(即，n(取代烷基)3)、烯基胺(即nh2(烯基))、二烯基胺(即hn(烯基)2)、三烯基胺(即n(烯基)3)、取代的烯基胺(即nh2(取代烯基))、二(取代烯基)胺(即hn(取代烯基)2)、三(取代烯基)胺(即n(取代烯基)3、单-、二-或三-环烷基胺(即，nh2(环烷基)、hn(环烷基)2、n(环烷基)3)、单-、二-或三-芳基胺(即nh2(芳基)、hn(芳基)2、n(芳基)3)，或混合的胺，等。合适的胺的具体实例包含，仅作为举例，异丙胺、三甲胺、二乙胺、三(异丙基)胺、三(正丙基)胺、乙醇胺、2-二甲氨基乙醇、哌嗪、哌啶、吗啉、n-乙基哌啶等。
[0098]
术语“水合物”是指通过将本文所述的化合物与水组合形成的络合物。
[0099]“溶剂合物”是指一个或多个溶剂分子与本公开的化合物的缔合或络合物。形成溶剂合物的溶剂的实例包括但不限于，水、异丙醇、乙醇、甲醇、二甲亚砜、乙酸乙酯、乙酸和乙醇胺。
[0100]
一些化合物作为互变异构体存在。互变异构体彼此处于平衡状态。例如，含酰胺化合物可以与亚胺酸互变异构体平衡地存在。不管显示了哪种互变异构体，也不管互变异构体之间的平衡性质如何，本领域普通技术人员理解化合物包含化合物的所有互变异构体或每一个互变异构体。因此，含酰胺化合物应理解为包含它们的亚胺酸互变异构体。同样，含亚胺酸的化合物应理解为包含它们的酰胺互变异构体。
[0101]“立体异构体”是仅在原子空间排列方式上不同的异构体，且包含对映异构体和非对映异构体。
[0102]“对映异构体”是一对立体异构体，它们是彼此不可重叠的镜像。一对对映异构体的1:1混合物是“外消旋”混合物。
[0103]“非对映异构体”是具有至少两个不对称原子但彼此不是镜像的立体异构体。
[0104]“前药”是指当将这种前药施用于哺乳动物受试者时在体内释放根据本文所述的活性母体药物的任何化合物。通过以使得修饰可以在体内裂解以释放母体化合物的方式修饰本文描述的化合物中存在的官能团而制备本文描述的化合物的前药。可以通过以使得修饰在常规操作中或在体内裂解成母体化合物的方式修饰存在于化合物中的官能团来制备前药。前药包含本文所述的化合物，其中本文所述化合物中的羟基、氨基、羧基或巯基与可在体内裂解以分别再生游离羟基、氨基或巯基的任何基团键合。前药的实例包括但不限于，本文所述化合物中羟基官能团的酯(例如，乙酸酯、甲酸酯和苯甲酸酯衍生物)、酰胺、胍、氨基甲酸酯(例如，n,n-二甲基氨基羰基)等。前药的制备、选择和使用于t.higuchi和v.stella,“pro-drugs as novel delivery systems,”vol.14of the a.c.s.symposium series；“design of prodrugs,”编辑h.bundgaard,elsevier,1985；和bioreversible carriers in drug design,编辑edward b.roche,american pharmaceutical association and pergamon press,1987中讨论，在此通过引用将其全部内容并入。
[0105]
如本文所用，“药学上可接受的载体”或“药学上可接受的赋形剂”或“赋形剂”包含任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。此类介质和试剂用作药物活性物质的用途是本领域公知的。除非任何常规介质或试剂与活性成分不相容，否则考虑其在治疗组合物中的用途。也可将补充活性成分掺入组合物中。
[0106]
2.缩写词和首字母缩略词列表
[0107]
[0108][0109]
3.化合物
[0110]
本文提供了可用于结合pcsk9的化合物。在一个实施方式中，提供了式i的化合物：
[0111][0112]
或其药学上可接受的盐、前药、氘代类似物、立体异构体或立体异构体的混合物，
[0113]
其中
[0114]
环a为六元芳族环；x1、x4和x5独立地为n、ch或cr1，x2为n、ch或cr2，和x3为n、ch或cr3，条件是x1、x2、x3、x4和x5中不超过两个为n，并且x2和x3中的至少一个不是n或ch；
[0115]
环b为六元非芳族环；z1是ch2、chr9、cr9r9、nh、nr9、o或s，z2是ch、cr
10
或n；和z3是chr7、cr7r9、nr7、o或s；条件是当z2为n时，z3为chr7或cr7r9；
[0116]
每一个r1、r9和r
10
独立地为c
1-c6烷基、杂环基、杂芳基、卤代、oh、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷基、c
1-c6羟烷基、cn或nh2；
[0117]
m为0、1、2、3或4；
[0118]
r2和r3之一为c
3-c6环烷基、苯基、杂芳基或杂环基，r2和r3中的另一个为h、c
1-c6烷基、卤代、oh、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、cn、nh2、c
3-c6环烷基、苯基、杂芳基或杂环基，其中c
3-c6环烷基、苯基、杂芳基或杂环基任选地被一至五个r4取代；
[0119]
每一个r4独立地选自c
1-c6烷基、卤代、oh、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷基、c
1-c6羟烷基、nh2和cn；
[0120]
r6为h、卤代、c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷基、c
1-c6羟烷基、oh、cn或nh2；
[0121]
r7是h、卤代、c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷基、c
1-c6羟烷基、oh、cn或nh2；
[0122]
r8是c
1-c6烷基、c
1-c6杂烷基、c
3-c6环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、c
3-c6环烷基-c
1-c6烷基、芳基-c
1-c6烷基、杂芳基-c
1-c6烷基或杂环基-c
1-c6烷基；其中每一个任选地被一至四个独立地选自c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、卤代、氧代、＝nr
11
、cn、nh2和oh的取代基取代；或者
[0123]
r8和r7与它们所连接的原子一起形成环c，其是与环b稠合的c
3-c6环烷基或杂环基环，其中环c任选地被一至四个r
12
取代；
[0124]r11
为h或c
1-c6烷基；
[0125]
每一个r
12
独立地选自c
1-c6烷基、卤代、oh、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、nh2和cn；或两个r
12
与它们所连接的原子一起形成环d，其是与环c稠合的c
3-c6环烷基或杂环基；或同一碳原子上的两个r
12
形成＝o或＝nr
11
。
[0126]
在一些实施方式中，x1、x2、x3、x4和x5中不超过三个是n。
[0127]
在一些实施方式中，m不包含z1或z3处的r9基团。在一些实施方式中，m是0、1、2、3或4，并且不包含z1或z3处的r9基团。在一些实施方式中，z1是ch2、chr
9a
、cr
9ar9a
、nh、nr
9a
、o或s，z2是ch、cr
10
或n；和z3是chr7、cr7r
9a
、nr7、o或s；条件是当z2为n时，z3为chr7或cr7r
9a
，其中r
9a
独立地为c
1-c6烷基、杂环基、杂芳基、卤代、oh、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷基、c
1-c6羟烷基、cn或nh2，条件是r
9a
在与n键合时不是卤素。在一些实施方式中，r
9a
是r9。
[0128]
在一些实施方式中，每一个r1、r9或r
10
独立地为c
1-c6烷基、杂环基、杂芳基、卤代、oh、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷基、c
1-c6羟烷基、cn或nh2，条件是r1、r9和r
10
与n键合时不是卤素。
[0129]
在一些实施方式中，z3是chr7。在一些实施方式中，z3是cr7r9。在一些实施方式中，z3是nr7。在一些实施方式中，r7是h。在一些实施方式中，z3是o。在一些实施方式中，z3是s。
[0130]
在一些实施方式中，r7是h。
[0131]
在一些实施方式中，r8是c
1-c6烷基、c
1-c6杂烷基、c
3-c6环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、c
3-c6环烷基-c
1-c6烷基、芳基-c
1-c6烷基、杂芳基-c
1-c6烷基或杂环基-c
1-c6烷基；其中每一个任选地被一个或两个独立地选自c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷基、卤代、氧代、＝nr
11
、cn、nh2和oh的取代基取代。
[0132]
在一些实施方式中，r8是未取代的c
1-c6烷基。在一些实施方式中，r8是未取代的c
1-c6杂烷基。在一些实施方式中，r8是未取代的c
3-c6环烷基。在一些实施方式中，r8是未取代的杂环基。在一些实施方式中，r8是未取代的芳基。在一些实施方式中，r8是未取代的杂芳基。在一些实施方式中，r8是未取代的c
3-c6环烷基-c
1-c6烷基。在一些实施方式中，r8是未取代的芳基-c
1-c6烷基。在一些实施方式中，r8是未取代的杂芳基-c
1-c6烷基。在一些实施方式中，r8是未取代的杂环基-c
1-c6烷基。
[0133]
在一些实施方式中，r8是被一个选自c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、卤代、氧代、＝nr
11
、cn、nh2和oh的取代基取代的c
1-c6烷基。在一些实施方式中，r8是被一个选自c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷基、卤代、氧代、＝nr
11
、cn、nh2和oh的取代
基取代的c
1-c6杂烷基。在一些实施方式中，r8是被一个选自c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、卤代、氧代、＝nr
11
、cn、nh2和oh的取代基取代的c
3-c6环烷基。在一些实施方式中，r8是被一个选自c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、卤代、氧代、＝nr
11
、cn、nh2和oh的取代基取代的杂环基。在一些实施方式中，r8是被一个选自c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、卤代、cn、nh2和oh的取代基取代的芳基。在一些实施方式中，r8是被一个选自c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、卤代、cn、nh2和oh的取代基取代的杂芳基。在一些实施方式中，r8是被一个选自c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、卤代、氧代、＝nr
11
、cn、nh2和oh的取代基取代的c
3-c6环烷基-c
1-c6烷基。在一些实施方式中，r8是被一个选自c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、卤代、氧代、＝nr
11
、cn、nh2和oh的取代基取代的芳基-c
1-c6烷基。在一些实施方式中，r8是被一个选自c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、卤代、氧代、＝nr
11
、cn、nh2和oh的取代基取代的杂芳基-c
1-c6烷基。在一些实施方式中，r8是被一个选自c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、卤代、氧代、＝nr
11
、cn、nh2和oh的取代基取代的杂环基-c
1-c6烷基。
[0134]
在一些实施方式中，r8和r7与它们所连接的原子一起形成环c，其是与环b稠合的c
3-c6环烷基或3-至6-元杂环基环，其中环c任选地被一至四个r
12
取代。
[0135]
在一些实施方式中，环c未被取代。
[0136]
在一些实施方式中，环c被一个r
12
取代。
[0137]
在一些实施方式中，环c被两个r
12
取代。
[0138]
在一些实施方式中，每一个r
12
独立地选自c
1-c6烷基、卤代、oh、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、nh2和cn。
[0139]
在一些实施方式中，两个r
12
与它们所连接的原子一起形成环d，其是与环c稠合的c
3-c6环烷基或3-至6-元杂环基。
[0140]
在一些实施方式中，同一碳原子上的两个r
12
形成＝o或＝nr
11
。
[0141]
在一些实施方式中，提供了式ii或iii的化合物：
[0142][0143]
或其药学上可接受的盐、前药、氘代类似物、立体异构体或立体异构体的混合物，
[0144]
其中
[0145]
r3为c
3-c6环烷基、苯基、5-或6-元杂芳基或者5-或6-元杂环基，其中c
3-c6环烷基、苯基、5-或6-元杂芳基或者3-至6-元杂环基任选地被一至五个r4取代，
[0146]
每一个r4独立地选自c
1-c6烷基、卤代、oh、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、nh2和cn；和
[0147]
环a、环b、m、x1、x2、x4、x5、r6、r7、r8、r9和z1如本文所定义。
[0148]
在一些实施方式中，提供了式iv或v的化合物:
[0149][0150]
或其药学上可接受的盐、前药、氘代类似物、立体异构体或立体异构体的混合物，
[0151]
其中
[0152]
r3为c
3-c6环烷基、苯基、5-或6-元杂芳基或者3-至6-元杂环基，其中c
3-c6环烷基、苯基、5-或6-元杂芳基或者3-至6-元杂环基任选地被一至五个r4取代，
[0153]
每一个r4独立地选自c
1-c6烷基、卤代、oh、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、nh2和cn；
[0154]
n为0、1或2；
[0155]
r7是h、卤代、c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷基、oh、cn或nh2；
[0156]r13
为c
3-c6环烷基、苯基、5-或6-元杂芳基或者3-至6-元杂环基，其中c
3-c6环烷基、苯基、5-或6-元杂芳基或者3-至6-元杂环基任选地被一个或两个独立地选自c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、卤代、氧代、＝nr
11
、cn、nh2和oh的取代基取代；和
[0157]
环a、环b、m、x1、x2、x4、x5、r6、r9和z1如本文所定义。
[0158]
在一些实施方式中，r7是h。
[0159]
在一些实施方式中，n为0。在一些实施方式中，n为1。
[0160]
在一些实施方式中，r
13
是未取代的c
3-c6环烷基。在一些实施方式中，r
13
是未取代的杂环基。在一些实施方式中，r
13
是未取代的芳基。在一些实施方式中，r
13
是未取代的杂芳基。
[0161]
在一些实施方式中，r
13
是被一个选自c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、卤代、氧代、＝nr
11
、cn、nh2和oh的取代基取代的c
3-c6环烷基。在一些实施方式中，r
13
是被一个选自c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、卤代、氧代、＝nr
11
、cn、nh2和oh的取代基取代的杂环基。在一些实施方式中，r
13
是被一个选自c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、卤代、cn、nh2和oh的取代基取代的芳基。在一些实施方式中，r
13
是被一个选自c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、卤代、cn、nh2和oh的取代基取代的杂芳基。
[0162]
在一些实施方式中，r
13
是被两个独立地选自c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、卤代、氧代、＝nr
11
、cn、nh2和oh的取代基取代的c
3-c6环烷基。在一些实施方式中，r
13
是被两个独立地选自c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、卤代、氧代、＝nr
11
、cn、nh2和oh的取代基取代的杂环基。在一些实施方式中，r
13
是被两个独立地选自c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、卤代、cn、nh2和oh的取代基取代的芳基。在一些实施方式中，r
13
是被两个独立地选自c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、卤代、cn、nh2和oh的取代基取代的杂芳基。
或6-元杂环基；或者
[0184]r14
和r
15
与它们所连接的原子一起形成5-或6-元杂芳基或者5-或6-元杂环基，其任选地被一至四个r
16
取代；或者
[0185]
r7和r
14
与它们所连接的原子一起，以及r
14
和r
15
与它们所连接的原子一起形成稠合双环杂环基，其任选地被一个或两个r
16
取代；
[0186]
每一个r
16
独立地选自c
1-c6烷基、卤代、oh、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、nh2和cn；和
[0187]
环a、环b、m、x1、x2、x4、x5、r6、z1、r9和r
12
如本文所定义。
[0188]
在一些实施方式中，提供了式ix的化合物：
[0189][0190]
或其药学上可接受的盐、前药、 氘代类似物、立体异构体或立体异构体的混合物，
[0191]
其中
[0192]
r3是c
3-c6环烷基、苯基、5-或6-元杂芳基或者5-或6-元杂环基，其中c
3-c6环烷基、苯基、5-或6-元杂芳基或者5-或6-元杂环基任选地被一至五个r4取代，
[0193]
每一个r4独立地选自c
1-c6烷基、卤代、oh、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷基、nh2和cn；
[0194]
r7是h、卤代、c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、oh、cn或nh2；
[0195]r14
是h、c
1-c5烷基、c
1-c5杂烷基、c
3-c6环烷基、杂环基、芳基或杂芳基；其中每一个任选地被一个或两个独立地选自c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷基、卤代、氧代、＝nr
11
、cn、nh2和oh的取代基取代；
[0196]r15
为h或c
1-c6烷基；或者
[0197]
r7和r
14
与它们所连接的原子一起形成任选被一个或两个r
12
取代的5-或6-元杂环基；或者
[0198]r14
是h，r7和r
15
与它们所连接的原子一起形成任选地被一至四个r
12
取代的5-或6-元杂环基；或者
[0199]r14
和r
15
与它们所连接的原子一起形成5-或6-元杂芳基或者5-或6-元杂环基，其任选地被一至四个r
16
取代；或者
[0200]
r7和r
14
与它们所连接的原子一起，以及r
14
和r
15
与它们所连接的原子一起形成稠合双环杂环基，其任选地被一个或两个r
16
取代；
[0201]
每一个r
16
独立地选自c
1-c6烷基、卤代、oh、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、nh2和cn；和
[0202]
环a、环b、m、x1、x2、x4、x5、r6、z1、r9和r
12
如本文所定义。
[0203]
在一些实施方式中，x1、x4和x5是ch或cr1，并且x2是ch或cr2。在一些实施方式中，x1、x4和x5是ch或cr1，并且x2是n。在一些实施方式中，x1是n，x4和x5是ch或cr1，并且x2是ch或
cr2。在一些实施方式中，x4是n，x1和x5是ch或cr1，并且x2是ch或cr2。在一些实施方式中，x5是n，x1和x4是ch或cr1，并且x2是ch或cr2。在一些实施方式中，r1是ch3、cf3、f或cl。在一些实施方式中，r2是ch3、cf3、f、cl、苯基或任选地被一至五个r4取代的5-或6-元杂芳基。
[0204]
在一些实施方式中，x2是n、ch或cr2，r2是ch3、cf3、f、cl、苯基或任选被一至五个r4取代的5-或6-元杂芳基，x3是cr3，并且r3是苯基或任选地被一至五个r4取代的5-或6-元杂芳基。在一些实施方式中，x2是cr2，r2是苯基或任选被一至五个r4取代的5-或6-元杂芳基，x3是n、ch或cr3，并且r3是ch3、cf3、f、cl、任选地被一至五个r4取代的苯基或者任选被一至四个r4取代的5-或6-元杂芳基。
[0205]
在一些实施方式中，r2和r3之一是c
3-c6环烷基、苯基、5-或6-元杂芳基或者3-至6-元杂环基，r2和r3中的另一个是h、c
1-c6烷基、卤代、oh、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷基、cn、nh2、c
3-c6环烷基、苯基、5-或6-元杂芳基或者3-至6-元杂环基，其中c
3-c6环烷基、苯基、5-或6-元杂芳基或者3-至6-元杂环基任选地被一至五个r4取代。
[0206]
在一些实施方式中，r3是任选地被一至五个r4取代的苯基或者任选地被一至五个r4取代的5-或6-元杂芳基。在一些实施方式中，r3是任选地被一个r4取代的苯基。在一些实施方式中，r3是任选地被一个r4取代的5-或6-元杂芳基。
[0207]
在一些实施方式中，每一个r4独立地是ch3、cf3、oh、f或cl。
[0208]
在一些实施方式中，提供了式ia的化合物：
[0209][0210]
或其药学上可接受的盐、前药、氘代类似物、立体异构体或立体异构体的混合物，其中s为0、1、2或3，t为0、1、2、3、4或5，以及其他变量如本文所定义。
[0211]
在一些实施方式中，提供了式iia的化合物：
[0212][0213]
或其药学上可接受的盐、前药、氘代类似物、立体异构体或立体异构体的混合物，其中s为0、1、2或3，t为0、1、2、3、4或5，以及其他变量如本文所定义。
[0214]
在一些实施方式中，提供了式iiia的化合物：
[0215][0216]
或其药学上可接受的盐、前药、氘代类似物、立体异构体或立体异构体的混合物，其中s为0、1、2或3，t为0、1、2、3、4或5，以及其他变量如本文所定义。
[0217]
在一些实施方式中，提供了式iva的化合物：
[0218][0219]
或其药学上可接受的盐、前药、氘代类似物、立体异构体或立体异构体的混合物，
[0220]
其中
[0221]
s是0、1、2或3，
[0222]
t是0、1、2、3、4或5；
[0223]
r7是h、卤代、c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷基、oh、cn或nh2；
[0224]r13
为c
3-c6环烷基、苯基、5-或6-元杂芳基或者3-至6-元杂环基，其中c
3-c6环烷基、苯基、5-或6-元杂芳基或者3-至6-元杂环基任选地被一个或两个独立地选自c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、卤代、氧代、＝nr
11
、cn、nh2和oh的取代基取代；和
[0225]
其他变量如本文所定义。
[0226]
在一些实施方式中，提供了式va的化合物：
[0227][0228]
或其药学上可接受的盐、前药、氘代类似物、立体异构体或立体异构体的混合物，
[0229]
其中
[0230]
s是0、1、2或3，
[0231]
t是0、1、2、3、4或5；
[0232]
r7是h、卤代、c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷基、oh、cn或nh2；
[0233]r13
为c
3-c6环烷基、苯基、5-或6-元杂芳基或者3-至6-元杂环基，其中c
3-c6环烷基、苯基、5-或6-元杂芳基或者3-至6-元杂环基任选地被一个或两个独立地选自c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、卤代、氧代、＝nr
11
、cn、nh2和oh的取代基取代；和
[0234]
其他变量如本文所定义。
[0235]
在一些实施方式中，提供了式via化合物：
[0236][0237]
或其药学上可接受的盐、前药、氘代类似物、立体异构体或立体异构体的混合物，
[0238]
其中
[0239]
s是0、1、2或3，
[0240]
t是0、1、2、3、4或5，
[0241]
y1为o、s、so、so2、ch2、chr
12
、cr
12r12
、nh或nr
12
；
[0242]
p是0、1、2、3或4；条件是r
12
的总数不超过4个；
[0243]
q是0、1或2；和
[0244]
其他变量如本文所定义。
[0245]
在一些实施方式中，提供了式viia化合物：
[0246][0247]
或其药学上可接受的盐、前药、氘代类似物、立体异构体或立体异构体的混合物，
[0248]
其中
[0249]
s是0、1、2或3，
[0250]
t是0、1、2、3、4或5，
[0251]
y1为o、s、so、so2、ch2、chr
12
、cr
12r12
、nh或nr
12
；
[0252]
p是0、1、2、3或4；条件是r
12
的总数不超过4个；
[0253]
q是0、1或2；和
[0254]
其他变量如本文所定义。
[0255]
在一些实施方式中，提供了式viiia的化合物：
[0256][0257]
或其药学上可接受的盐、前药、氘代类似物、立体异构体或立体异构体的混合物，
[0258]
其中
[0259]
s是0、1、2或3，
[0260]
t是0、1、2、3、4或5；
[0261]
r7是h、卤代、c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷基、oh、cn或nh2；
[0262]r14
是h、c
1-c6烷基、c
1-c6杂烷基、c
3-c6环烷基、杂环基、芳基或杂芳基；其中每一个任选地被一个或两个独立地选自c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷基、卤代、氧代、＝nr
11
、cn、nh2和oh的取代基取代；
[0263]r15
为h或c
1-c6烷基；或者
[0264]
r7和r
14
与它们所连接的原子一起形成c
3-c6环烷基或5-或6-元杂环基，其任选被一个或两个r
12
取代；或者
[0265]r14
是h，并且r7和r
15
与它们所连接的原子一起形成任选地被一至四个r
12
取代的5-或6-元杂环基；或者
[0266]r14
和r
15
与它们所连接的原子一起形成5-或6-元杂芳基或者5-或6-元杂环基，其任选地被一至四个r
16
取代；或者
[0267]
r7和r
14
与它们所连接的原子一起，并且r
14
和r
15
与它们所连接的原子一起形成稠合双环杂环基，其任选地被一个或两个r
16
取代；
[0268]
每一个r
16
独立地选自c
1-c6烷基、卤代、oh、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、nh2和cn；和
[0269]
其他变量如本文所定义。
[0270]
在一些实施方式中，提供了式ixa的化合物:
[0271][0272]
或其药学上可接受的盐、前药、氘代类似物、立体异构体或立体异构体的混合物，
[0273]
其中
[0274]
s是0、1、2或3，
[0275]
t是0、1、2、3、4或5；
[0276]
r7是h、卤代、c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷基、oh、cn或nh2；
[0277]r14
是h、c
1-c5烷基、c
1-c5杂烷基、c
3-c6环烷基、杂环基、芳基或杂芳基；其中每一个任选地被一个或两个独立地选自c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷基、卤代、氧代、＝nr
11
、cn、nh2和oh的取代基取代；
[0278]r15
为h或c
1-c6烷基；或者
[0279]
r7和r
14
与它们所连接的原子一起形成任选被一个或两个r
12
取代的5-或6-元杂环基；或者
[0280]r14
是h，并且r7和r
15
与它们所连接的原子一起形成任选地被一至四个r
12
取代的5-或6-元杂环基；或者
[0281]r14
和r
15
与它们所连接的原子一起形成5-或6-元杂芳基或者5-或6-元杂环基，其任选地被一至四个r
16
取代；或者
[0282]
r7和r
14
与它们所连接的原子一起，并且r
14
和r
15
与它们所连接的原子一起形成稠合双环杂环基，其任选地被一个或两个r
16
取代；
[0283]
每一个r
16
独立地选自c
1-c6烷基、卤代、oh、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、nh2和cn；和
[0284]
其他变量如本文所定义。
[0285]
在一些实施方式中，提供了式x的化合物：
[0286][0287]
或其药学上可接受的盐、前药、氘代类似物、立体异构体或立体异构体的混合物，
[0288]
其中
[0289]
s是0、1、2或3，
[0290]
t是0、1、2、3、4或5；
[0291]
r7是h、卤代、c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷基、oh、cn或nh2；
[0292]
r8是c
1-c6烷基、c
1-c6杂烷基、c
3-c6环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、c
3-c6环烷基-c
1-c6烷基、芳基-c
1-c6烷基、杂芳基-c
1-c6烷基或杂环基-c
1-c6烷基；其中每一个任选地被一至四个独立地选自c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷基、卤代、氧代、＝nr
11
、cn、nh2和oh的取代基取代；和
[0293]
其他变量如本文所定义。
[0294]
在一些实施方式中，提供了式xi的化合物：
[0295][0296]
或其药学上可接受的盐、前药、氘代类似物、立体异构体或立体异构体的混合物，
[0297]
其中
[0298]
t是0、1、2、3、4或5；
[0299]
其他变量如本文所定义。
[0300]
在一些实施方式中，s为0或1。在一些实施方式中，t为0或1。
[0301]
在一些实施方式中，z
l
是o。
[0302]
在一些实施方式中，r7是h。
[0303]
在一些实施方式中，r8是任选地被一个或两个独立地选自c
1-c6烷氧基、c
1-c6卤代烷基、卤代、氧代、＝nr
11
、cn、nh2和oh的取代基取代的c
1-c6烷基。
[0304]
在一些实施方式中，r8是任选地被一个或两个独立地选自c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、卤代、氧代、＝nr
11
、cn、nh2和oh的取代基取代的c
1-c6杂烷基。
[0305]
在一些实施方式中，r8是任选地被一个或两个独立地选自c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、卤代、氧代、＝nr
11
、cn、nh2和oh的取代基取代的c
3-c6环烷基。
[0306]
在一些实施方式中，r8是任选地被一个或两个独立地选自c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、卤代、氧代、＝nr
11
、cn、nh2和oh的取代基取代的3-至6-元杂环基。
[0307]
在一些实施方式中，r8是任选地被一个或两个独立地选自c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、卤代、cn、nh2和oh的取代基取代的芳基。
[0308]
在一些实施方式中，r8是任选地被一个或两个独立地选自c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、卤代、cn、nh2和oh的取代基取代的5-或6-杂芳基。
[0309]
在一些实施方式中，r8是任选地被一个或两个独立地选自c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、卤代、氧代、＝nr
11
、cn、nh2和oh的取代基取代的c
3-c6环烷基-ch
2-。
[0310]
在一些实施方式中，r8是任选地被一个或两个独立地选自c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、卤代、氧代、＝nr
11
、cn、nh2和oh的取代基取代的3-至6-元杂环基-ch
2-。
[0311]
在一些实施方式中，r8是任选地被一个或两个独立地选自c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、卤代、氧代、＝nr
11
、cn、nh2和oh的取代基取代的芳基-ch
2-。
[0312]
在一些实施方式中，r8是任选地被一个或两个独立地选自c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6羟烷基、c
1-c6卤代烷基、卤代、氧代、＝nr
11
、cn、nh2和oh的取代基取代的5-或6-杂芳基-ch
2-。
[0313]
在一些实施方式中，r2是h。
[0314]
在一些实施方式中，r2是任选地被一至五个r4取代的苯基或任选地被一至五个r4取代的5-或6-元杂芳基。在一些实施方式中，r2是任选地被一个r4取代的苯基。在一些实施方式中，r2是任选地被一个r4取代的5-或6-元杂芳基。
[0315]
在一些实施方式中，每一个r4独立地是ch3、cf3、oh、f或cl。
[0316]
在一些实施方式中，m为0。在一些实施方式中，m为1。
[0317]
在一些实施方式中，化合物可以选自表1中的那些化合物或其药学上可接受的盐、前药、氘代类似物、立体异构体或立体异构体的混合物。
[0318]
[0319]
[0320]
[0321]
[0322]
[0323]
[0324]
[0325]
[0326]
[0327][0328]
在一个实施方式中，化合物可以选自表2中的那些化合物或其药学上可接受的盐、前药、氘代类似物、立体异构体或立体异构体的混合物。
[0329]
[0330]
[0331][0332]
在一个实施方式中，化合物可以选自表3中的那些化合物或其药学上可接受的盐、前药、氘代类似物、立体异构体或立体异构体的混合物。
[0333]
[0334][0335]
在一个实施方式中，化合物可以选自表4中的那些化合物或其药学上可接受的盐、前药、氘代类似物、立体异构体或立体异构体的混合物。
[0336]
表4
[0337]
[0338]
[0339]
[0340]
[0341]
[0342]
[0343]
[0344]
[0345][0346]
4.治疗方法和用途
[0347]“治疗”或“处理”是用于获得有益或期望结果(包括临床结果)的方法。有益的或期望的临床结果可以包含以下一项或多项：a)抑制疾病或病症(例如，减少由疾病或病症引起的一种或多种症状，和/或减少疾病或病症的程度)；b)减缓或阻止与疾病或病症相关的一种或多种临床症状的发展(例如，稳定疾病或病症，预防或延迟疾病或病症的恶化或进展，和/或预防或延迟传播，疾病或病症的(例如，转移))；和/或c)缓解疾病，即引起临床症状的消退(例如，改善疾病状态、提供疾病或病症的部分或全部缓解、增强另一种药物的作用、延缓疾病的进展、提高生活质量和/或延长生存期)。
[0348]“预防”或“阻止”是指对疾病或病症的任何治疗，其导致疾病或病症的临床症状不发生。在一些实施方式中，可以将化合物施用于处于疾病或病症的风险中或具有疾病或病症家族史的受试者(包含人)。
[0349]“受试者”或“患者”是指已经成为或将成为治疗、观察或实验的对象的动物，例如哺乳动物(包含人)。本文所述的方法可用于人类治疗和/或兽医应用。在一些实施方式中，受试者是哺乳动物。在一个实施方式中，受试者是人。
[0350]
术语本文所述化合物或其药学上可接受的盐、互变异构体、立体异构体、立体异构体的混合物、前药或氘代类似物的“治疗有效量”或“有效量”是指当施用于受试者时，足以实现治疗以提供治疗益处，例如改善症状或减缓疾病进展的量。例如，治疗有效量可以是足以减轻如本文所述的疾病或病症的症状的量。治疗有效量可根据受试者、所治疗的疾病或病症、受试者的体重和年龄、疾病或病症的严重程度以及施用方式而变化，这可由本领域技术人员或普通技术人员容易地确定。
[0351]
本文描述的方法可以应用于体内或离体的细胞群体。“体内”是指在活的个体内，如在动物或人体内。在这种情况下，本文所述的方法可治疗性地用于个体。“离体”是指在活的个体之外。离体细胞群体的实例包含体外细胞培养物和生物样品，包括从个体获得的流体或组织样品。可通过本领域公知的方法获得此类样品。示例性的生物流体样品包括血液、脑脊液、尿液和唾液。在这种情况中，本文所述的化合物和组合物可用于多种目的，包括治疗和实验目的。例如，本文所述的化合物和组合物可以离体使用以测定针对给定适应症、细胞类型、个体和其他参数的本公开化合物的最佳施用时间表和/或施用剂量。从此类使用中收集的信息可用于实验目的或在临床中用于制定体内治疗的方案。本文所述的化合物和组合物可能适合的其他离体用途在下文中描述或对本领域技术人员而言将变得显而易见。可以进一步表征所选化合物以检查人类或非人类受试者的安全性或耐受剂量。可以使用本领域技术人员公知的方法检查这些特性。
[0352]
预期通篇描述的化合物可用于治疗至少部分由pcsk9介导的疾病或病症。前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin 9型，也称为pcsk9，是一种在人类中由pcsk9基因编码的酶。
seidah等，“the secretory proprotein convertase neural apoptosis-regulated convertase 1(narc-1):liver regeneration and neuronal differentiation,”proc.natl.acad.sci.u.s.a.100(3):928
–
933(2003)。在许多物种中发现了类似的基因(直系同源物)。许多酶，包括pcsk9，在第一次合成时是无活性的，因为它们有一段肽链阻止了它们的活性；前蛋白转化酶去除该段肽链以激活酶。
[0353]
pcsk9基因编码属于分泌型枯草杆菌酶家族的蛋白酶k亚家族的前蛋白转化酶。编码的蛋白质被合成为可溶性酶原，其在内质网中进行自催化分子内加工。该蛋白质可用作前蛋白转化酶。例如，人类pcsk9氨基酸序列可以具有refseq(蛋白质)np_777596。
[0354]
pcsk9被认为在胆固醇稳态中起调节作用。例如，pcsk9可以与低密度脂蛋白受体(ldlr)的表皮生长因子样重复序列a(egf-a)结构域结合，导致ldlr内化和降解。显然，预期ldlr水平降低会导致ldl-c代谢降低，其可导致高胆固醇血症。
[0355]
据估计，大约九百万美国人具有可受益于pcsk9抑制剂(尤其是与他汀类药物组合时)的心脏相关问题的高风险或非常高风险。pcsk9抑制剂可能会导致如此广泛的使用，其有可能在某些情况下取代他汀类药物。pcsk9具有医学意义，因为它在胆固醇稳态中起作用。阻断pcsk9生物作用的药物被认为降低循环低密度脂蛋白胆固醇(ldl-c)水平(例如，通过增加ldlr的可用性，从而增加ldl-c的清除率)。一些此类药物，例如evolocumab(amgen,inc.的商品名repatha
tm
)和alirocumab(来自sanofi u.s.,llc和regeneron pharmaceuticals,inc.的商品名praluent
tm
)已获得fda批准，但仍在临床试验中以测定是否它们可以改善心脏病的预后。
[0356]
pcsk9的变体可以降低或增加循环胆固醇。abifadel等，“mutations in pcsk9 cause autosomal dominant hypercholesterolemia”nat.genet.34(2):154
–
156(2003)。通常当ldl-c与肝细胞表面的ldlr结合时从血液中去除，并作为受体-配体复合物内化在肝细胞内。当pcsk9与ldlr结合时，ldlr与复合的ldl颗粒一起降解。然而，如果pcsk9未与ldlr结合，则ldlr在内化后会回收，从而返回细胞表面以去除更多的胆固醇。
[0357]
本文公开了预期对pcsk9形成ldlr/pcsk9复合物的能力具有调节作用的化合物。在一些实施方式中，化合物可结合pcsk9蛋白并调节该蛋白的生物活性。在一些实施方式中，化合物减少ldlr/pcsk9复合物的形成，从而可用于治疗涉及脂质失调的各种疾病。在一些实施方式中，化合物增加ldlr/pcsk9复合物的形成，从而可用于与ldl失调相关的疗法的研究和开发。
[0358]
不受任何特定理论的束缚，据信“功能获得”(gof)pcsk9突变体可导致包括但不限于高胆固醇血症的病症。例如，与pcsk9结合并增加pcsk9的低密度脂蛋白受体对细胞(例如肝细胞)表面上的低密度脂蛋白受体的亲和力的化合物预期通过增加低密度脂蛋白受体内化和降解而增加高胆固醇血症的症状。
[0359]
此外，不受任何特定理论的约束，据信“功能丧失”(lof)pcsk9突变体可导致包含减少的低密度脂蛋白的病症，并且预期会导致低胆固醇血症，从而减少心血管疾病(包括但不限于冠心病)的风险。例如，降低pcsk9的低密度脂蛋白受体结合位点对细胞(例如肝细胞)表面的低密度脂蛋白受体的亲和力的与pcsk9结合的化合物预期通过由于低密度脂蛋白受体的伴随循环来促进低密度脂蛋白内化和清除而减轻高胆固醇血症的症状。
[0360]
因此，本公开的化合物可用于治疗至少部分由pcsk9介导的疾病和病症，包括但不
限于心血管疾病(例如，冠心病)和代谢疾病。例如，本公开的化合物可用于治疗疾病和病症，包括但不限于，高胆固醇血症、动脉粥样硬化和高血压。此外，本公开的化合物可用于减轻症状，包括但不限于，升高的低密度脂蛋白受体密度、降低的低密度脂蛋白受体密度、肝病或肝功能障碍的症状。本公开的化合物还预期用于减轻肝脏应激、肝功能障碍或肝脏疾病的症状，包括诸如非酒精性脂肪性肝病(nafld)的病症，以及用于降低升高的alt(》55u/l)和/或ast(》48u/l)肝酶水平。本公开的化合物还可用于降低膳食脂肪摄入量增加的患者(例如，高于健康水平，例如，高于美国usda设定的推荐每日值)中升高的alt和/或ast酶。在一些实施方式中，由超过每日总卡路里摄入量的10％的饱和脂肪摄入量指示升高的膳食脂肪摄入量。
[0361]
不受任何特定理论的束缚，据信本公开的化合物的施用诱导pcsk9蛋白的构象转变，使得低密度脂蛋白结合位点对低密度脂蛋白受体的亲和力降低，其中pcsk9/ldlr复合物形成减少。pcsk9/ldlr复合物形成的减少导致ldlr受体对于与循环ldl结合的生物利用度增加，从而增加通过ldlr的ldl的内化和清除。进一步认为化合物的施用可导致肝细胞ldlr的生物利用度增加。
[0362]
此外，并且不受任何特定理论的束缚，据信本公开的化合物的施用诱导pcsk9蛋白的构象转变，使得低密度脂蛋白结合位点对低密度脂蛋白受体的亲和力增加，其中pcsk9/ldlr复合物形成增加或稳定。pcsk9/ldlr复合物形成的增加或稳定导致ldlr受体用于与循环ldl结合的生物利用度降低，从而降低通过ldlr的ldl的内化和清除。进一步认为pcsk9变构激活剂化合物可能导致肝细胞ldlr的生物利用度降低。
[0363]
在某些实施方式中，本文提供了治疗至少部分由pcsk9介导的疾病或病症的方法，该方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的本文公开的化合物。
[0364]
在某些实施方式中，本文提供了治疗至少部分地由pcsk9介导的疾病或病症的方法，该方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的选自表1、2或3的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、异构体或异构体的混合物。
[0365]
在某些实施方式中，提供了如本文所定义的化合物，用于治疗至少部分地由pcsk9介导的疾病或病症。
[0366]
在某些实施方式中，提供了如本文定义的化合物用于治疗至少部分地由pcsk9介导的疾病或病症的用途。
[0367]
在某些实施方式中，提供了如本文所定义的化合物在制备用于治疗至少部分地由pcsk9介导的疾病或病症的药物中的用途。
[0368]
在某些实施方式中，提供了一种抑制pcsk9活性的方法，其中该方法包括将如本文定义的化合物与pcsk9结合，从而抑制pcsk9的活性。
[0369]
在某些实施方式中，提供了一种抑制pcsk9活性的方法，其中该方法包括将如表1、2或3中所述的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、异构体或异构体的混合物与pcsk9结合，从而抑制pcsk9的活性。
[0370]
在某些实施方式中，本文提供了使用本文所述的化合物在治疗哺乳动物中至少部分地由pcsk9介导的疾病或病症的方法。此类疾病或病症包含心血管疾病(例如，冠心病、高血压、高胆固醇血症或动脉粥样硬化)、代谢疾病(例如糖尿病)、低胆固醇血症、其中哺乳动物具有升高的低密度脂蛋白胆固醇血浆水平的疾病或病症以及其中哺乳动物具有抑制的
professionals from the aha task force on risk reduction.american heart association”circulation 97(18):1876
–
1887。
[0382]
低胆固醇血症
[0383]
低胆固醇血症是血液(血流环境(-emia))中存在异常低的胆固醇水平(低-(hypo-))。虽然高总胆固醇的存在(高胆固醇血症)与心血管疾病有关，但身体的胆固醇产生缺陷也可导致不良后果。胆固醇是哺乳动物细胞膜的必要组成部分，是建立适当的膜渗透性和流动性所必需的。尚不清楚低于平均胆固醇水平是否直接有害；它经常出现在特定的病态中。
[0384]
低胆固醇的可能原因包括但不限于，他汀类药物、甲状腺功能亢进或甲状腺过度活跃、肾上腺功能不全、肝病、吸收不良(从肠道吸收营养不足)，例如乳糜泻、营养不良、无β脂蛋白血症(一种导致胆固醇读数低于50mg/dl的遗传疾病)、低β脂蛋白血症(一种导致胆固醇读数低于50mg/dl的遗传疾病、锰缺乏症、smith-lemli-opitz综合征、marfan综合征、白血病和其他血液病。
[0385]
人口统计学研究表明，低胆固醇与死亡率增加有关，主要是由于抑郁症、癌症、出血性中风、主动脉夹层和呼吸系统疾病。jacobs等，(1992)“report of the conference on low blood cholesterol:mortality associations”circulation 86(3):1046
–
1060；和suareze.c.，(1999)“relations of trait depression and anxiety to low lipid and lipoprotein concentrations in healthy young adult women”psychosom med 61(3):273
–
279。也有可能导致低胆固醇水平的任何原因也会导致死亡，而低胆固醇只是健康状况不佳的标志。
[0386]
在一些实施方式中，高胆固醇血症由升高的总胆固醇值和/或升高的ldl胆固醇值指示，例如，总胆固醇(tc)》200mg/dl、200-239mg/dl或》240mg/dl，和/或ldl》70mg/dl、70-100mg/dl、》100或》160mg/dl。也可以考虑年龄，例如，》160mg/dl的ldl可被认为升高到足以使40岁以下的成年人有必要降低血脂，而ldl介于70和190mg/dl之间的40-75岁的成年人可能根据患者的个体风险状况提示进行降脂治疗。在一些实施方式中，高胆固醇血症可由医师确定，例如，遵循美国心脏协会(american heart association)指南。
[0387]
糖尿病
[0388]
糖尿病影响超过2000万美国人。超过4000万美国人患有前驱糖尿病(通常发生在2型糖尿病之前)。糖尿病通常是一种终生(慢性)疾病，其中存在血液中的高糖水平。胰岛素是胰腺产生的一种激素，用于控制血糖。糖尿病可能是由胰岛素过少、胰岛素抵抗或两者引起的。为了解糖尿病，首先了解食物分解并被身体用作能量的正常过程是重要的。
[0389]
当食物被消化时，会发生一些事情。一种叫做葡萄糖的糖进入血流。葡萄糖是身体的燃料来源。一个叫做胰腺的器官产生胰岛素。胰岛素的作用是将血流中的葡萄糖转移到肌肉、脂肪和肝细胞中，在那里它可以用作燃料。
[0390]
患有糖尿病的人有高血糖，因为他们的身体不能将糖转移到脂肪、肝脏和肌肉细胞中以储存用于能量。这是因为他们的胰腺不能制造足够的胰岛素，或者他们的细胞对胰岛素没有正常反应。
[0391]
有两种主要类型的糖尿病。每一种类型的原因和风险因素都不同。1型糖尿病可发生在任何年龄，但最常在儿童、青少年或年轻成人中被诊断出来。在这种疾病中，身体产生
很少或不产生胰岛素。需要每天注射胰岛素。确切原因尚不清楚。2型糖尿病构成了大多数糖尿病病例。它最常发生在成年期。但由于肥胖率高，青少年和年轻成人现在被诊断出患有此症。许多患有2型糖尿病的人并不知道他们患有糖尿病。
[0392]
妊娠糖尿病是在没有糖尿病的妇女怀孕期间的任何时间发生的高血糖。
[0393]
糖尿病症状可由高血糖水平引起并包括但不限于，视力模糊、口渴过度、疲劳、饥饿、尿频和体重减轻。
[0394]
在一些实施方式中，前驱糖尿病可由以下的一项或多项指示：5.7％-6.4％的a1c、100-125mg/dl的空腹血糖和/或在75g口服葡萄糖激发后2小时的140-199mg/dl的血浆葡萄糖。
[0395]
在一些实施方式中，患者在一个疗程后表现出降低的alt和/或ast水平。在一些实施方式中，alt和/或ast的降低为相对于治疗前水平的至少5％、至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％或至少70％，或任何两个列出的值之间的范围。
[0396]
在一些实施方式中，患者在一个疗程后表现出降低的ldl水平。在一些实施方式中，ldl水平降低为相对于治疗前水平的至少5％、至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％或至少70％，或任何两个列出的值之间的范围。
[0397]
联合疗法
[0398]
通过施用本公开的化合物来治疗的患者通常表现出受益于其他治疗剂治疗的疾病或病症。这些疾病或病症可以是心血管性质的或者可以与肺障碍、代谢障碍、胃肠障碍等有关。
[0399]
心血管药物联合治疗
[0400]
可受益于本公开的化合物与其他治疗剂的联合治疗的心血管相关疾病或病症包括但不限于，心绞痛(包括稳定型心绞痛、不稳定型心绞痛(ua)、运动诱发的心绞痛、变异型心绞痛)、心律失常、间歇性跛行、心肌梗塞(包括非ste心肌梗塞(nstemi))、肺动脉高压(包括肺动脉高血压)、心力衰竭(包括充血性(或慢性)心力衰竭和舒张性心力衰竭，以及射血分数保留的心力衰竭(舒张功能障碍)、急性心力衰竭)或复发性缺血。
[0401]
适用于治疗心血管相关疾病或病症的治疗剂包括抗心绞痛剂、心力衰竭剂、抗血栓剂、抗心律失常剂、抗高血压剂和降脂剂。
[0402]
本公开的化合物与适用于治疗心血管相关病症的治疗剂的共同施用允许增强患者当前接受的标准治疗。在一些实施方式中，本公开的化合物与雷诺嗪共同施用。
[0403]
抗心绞痛剂
[0404]
抗心绞痛剂包括β-受体阻滞剂、钙通道阻滞剂和硝酸盐。β受体阻滞剂通过减少心脏的工作负荷来减少心脏对氧气的需求，从而导致降低的心率和较不有力的心脏收缩。β-受体阻滞剂的实例包含醋丁洛尔阿替洛尔倍他洛尔比索洛尔/氢氯噻嗪比索洛尔卡替洛尔艾司洛尔拉贝洛尔美托洛尔纳多洛尔普萘洛尔
索他洛尔和噻吗洛尔
[0405]
硝酸盐扩张动脉和静脉，从而增加冠状动脉血流量并降低血压。硝酸盐的实例包括硝酸甘油、硝酸盐贴剂、硝酸异山梨醇酯和5-单硝酸异山梨醇酯。
[0406]
钙通道阻滞剂阻止钙正常流入心脏和血管的细胞，导致血管松弛，从而增加心脏的血液和氧气供应。钙通道阻滞剂的实例包括氨氯地平贝普地尔地尔硫地尔硫非洛地平硝苯地平尼莫地平尼索地平维拉帕米拉帕米和尼卡地平。
[0407]
心力衰竭剂
[0408]
用于治疗心力衰竭的药剂包括利尿剂、ace抑制剂、血管扩张剂和强心苷。利尿剂可消除组织和循环中多余的液体，从而缓解心力衰竭的许多症状。利尿剂的实例包括氢氯噻嗪、美托拉宗呋塞米布美他尼螺内酯和依普利酮
[0409]
血管紧张素转化酶(ace)抑制剂通过扩张血管和降低对血流的阻力来减少心脏的工作负荷。ace抑制剂的实例包括贝那普利卡托普利依那普利福辛普利赖诺普利莫昔普利培哚普利喹那普利雷米普利和群多普利
[0410]
血管扩张剂通过使血管松弛和扩张来降低血管上的压力。血管扩张剂的实例包括肼苯哒嗪、二氮嗪、哌唑嗪、可乐定和甲基多巴。ace抑制剂、硝酸盐、钾通道激活剂和钙通道阻滞剂也用作血管扩张剂。
[0411]
强心苷是增加心脏收缩力的化合物。这些化合物增强心脏的泵血能力并改善不规则的心跳活动。强心苷的实例包括洋地黄、地高辛和洋地黄毒苷。
[0412]
抗血栓剂
[0413]
抗血栓剂抑制血液的凝固能力。存在三种主要类型的抗血栓剂-血小板抑制剂、抗凝剂和溶栓剂。
[0414]
血小板抑制剂抑制血小板的凝血活性，从而减少动脉中的凝结。血小板抑制剂的实例包括乙酰水杨酸(阿司匹林)、噻氯匹定、氯吡格雷普拉格雷双嘧达莫、西洛他唑、潘生丁磺吡酮、潘生丁、吲哚美辛和糖蛋白llb/llla抑制剂，例如，阿昔单抗、替罗非班和依替巴肽β受体阻滞剂和钙通道阻滞剂也具有血小板抑制作用。
[0415]
抗凝剂防止血凝块长大并防止形成新的凝块。抗凝剂的实例包括比伐卢定华法林普通肝素、低分子量肝素、达那肝素、来匹卢定和阿加曲班。
[0416]
溶栓剂起到分解现有血凝块的作用。溶栓剂的实例包括链激酶、尿激酶和替奈普
酶(tnk)，以及组织纤溶酶原激活剂(t-pa)。
[0417]
抗心律失常剂
[0418]
抗心律失常剂用于治疗心率和节律紊乱。抗心律失常剂的实例包括胺碘酮、决奈达隆、奎尼丁、普鲁卡因胺、利多卡因和普罗帕酮。强心苷和β受体阻滞剂也用作抗心律失常剂。
[0419]
与胺碘酮和决奈达隆的组合特别令人感兴趣(参见美国专利申请公开号2010/0056536和美国专利申请公开号2011/0183990，其全部内容并入本文)。
[0420]
抗高血压剂
[0421]
抗高血压剂用于治疗高血压，这是一种血压始终高于正常的病症。高血压与心血管疾病的许多方面有关，包括充血性心力衰竭、动脉粥样硬化和血凝块形成。抗高血压剂的实例包含α-1-肾上腺素能拮抗剂，例如哌唑嗪甲磺酸多沙唑嗪盐酸哌唑嗪哌唑嗪、聚噻嗪和盐酸特拉唑嗪β-肾上腺素能拮抗剂，例如普萘洛尔纳多洛尔噻吗洛尔美托洛尔和吲哚洛尔中枢α-肾上腺素受体激动剂，例如盐酸可乐定盐酸可乐定和氯噻酮醋酸氯压胍盐酸胍法辛甲基多巴甲基多巴和氯噻嗪甲基多巴和氢氯噻嗪组合的α/β-肾上腺素能拮抗剂，例如拉贝洛尔卡维地洛肾上腺素能神经元阻断剂，例如胍乙啶利血平中枢神经系统作用抗高血压药，例如可乐定甲基多巴胍那苯抗血管紧张素ii药物；ace抑制剂，例如培哚普利卡托普利依那普利赖诺普利血管紧张素-ii受体拮抗剂，例如坎地沙坦依普罗沙坦厄贝沙坦氯沙坦替米沙坦缬沙坦钙通道阻滞剂，例如维拉帕米米地尔硫硝苯地平利尿剂；直接血管扩张剂，例如硝普钠二氮嗪肼苯哒嗪米诺地尔维拉帕米；钾通道激活剂，例如阿里卡林、比卡林、克罗卡林、依马卡林、尼可地尔和吡那地尔。
[0422]
降脂剂
[0423]
降脂剂用于降低血液中存在的胆固醇或脂肪糖的量。降脂剂的实例包括依泽替米贝苯哌多酸苯扎贝特环丙贝特和他汀类药物，例如阿托伐他汀氟伐他汀洛伐他汀美伐他汀、匹伐他汀普伐他汀
瑞舒伐他汀和辛伐他汀
[0424]
pcsk9抑制剂
[0425]
据认为阻断pcsk9生物作用的药物降低循环低密度脂蛋白胆固醇(ldl-c)水平(例如，通过增加ldlr的可用性并因此增加ldl-c清除率)。实例包括fda批准的埃沃洛库单抗(evolocumab)(商品名repatha
tm
，来自amgen,inc.)和fda批准的阿利罗库单抗(alirocumab)(商品名praluent
tm
，来自sanofi u.s.,llc和regeneron pharmaceuticals,inc.)。
[0426]
另外的联合疗法
[0427]
表现出急性冠状动脉疾病事件的患者通常患有继发性医学病症，例如代谢障碍、肺部障碍或外周血管障碍中的一种或多种。此类患者可受益于包括向患者施用本公开的化合物与至少一种治疗剂的组合的组合疗法的治疗。
[0428]
肺部障碍联合治疗
[0429]
肺部障碍是指与肺有关的任何疾病或病症。肺部障碍的实例包括但不限于，哮喘、慢性阻塞性肺病(copd)、支气管炎和肺气肿。
[0430]
用于治疗肺部障碍的治疗剂的实例包括支气管扩张剂，其中包含β2激动剂和抗胆碱能药、皮质类固醇和电解质补充剂。用于治疗肺部障碍的治疗剂的具体实例包括肾上腺素、特布他林布他林沙丁胺醇沙美特罗(serevent)、茶碱、异丙托溴铵噻托溴铵甲基强的松龙镁和钾。
[0431]
代谢障碍联合治疗
[0432]
代谢障碍的实例包括但不限于，糖尿病(包括i型和ii型糖尿病)、代谢综合征、血脂异常、肥胖症、葡萄糖耐受不良、高血压、升高的血清胆固醇和升高的甘油三酯。
[0433]
用于治疗代谢障碍的治疗剂的实例包括抗高血压剂和降脂剂，如上文“心血管药物联合疗法”部分所述。用于治疗代谢障碍的其他治疗剂包括胰岛素、磺酰脲类、双胍类、α-葡萄糖苷酶抑制剂和肠促胰岛素模拟物。
[0434]
外周血管障碍联合治疗
[0435]
外周血管障碍是与位于心脏和大脑外的血管(动脉和静脉)相关的障碍，包括例如，外周动脉疾病(pad)，一种在为内脏器官、手臂和腿部供血的动脉因动脉粥样硬化而完全或部分阻塞时出现的病症。
[0436]
因此，本公开的一个方面提供了包含本公开的化合物和至少一种治疗剂的组合物。在可选的实施方式中，组合物包含本公开的化合物和至少两种治疗剂。在进一步的可选的实施方式中，组合物包含本公开的化合物和至少三种治疗剂、本公开的化合物和至少四种治疗剂或者本公开的化合物和至少五种治疗剂。
[0437]
联合治疗的方法包括共同施用含有本公开的化合物和一种或多种治疗剂的单一制剂，基本上同时施用多于一种含有本公开的化合物和一种或多种治疗剂的制剂，以及以任何顺序连续施用本公开的化合物和一种或多种治疗剂，其中优选地存在其中本公开的化合物和一种或多种治疗剂同时发挥其治疗作用的时间段。
[0438]
考虑到本文的公开，本领域的普通技术人员将容易想到并具体考虑本公开的这些
和其他实施方式。
[0439]
5.试剂盒
[0440]
本文还提供了试剂盒，其包含本公开的化合物或其药学上可接受的盐、互变异构体、立体异构体、立体异构体的混合物、前药或氘代类似物，以及合适的包装。在一个实施方式中，试剂盒还包含使用说明。在一个方面，试剂盒包含本公开的化合物或其药学上可接受的盐、互变异构体、立体异构体、立体异构体的混合物、前药或氘代类似物，以及使用化合物治疗本文所述的适应症(包括疾病或病症)的标签和/或说明。
[0441]
本文还提供了制品，其包含在合适容器中的本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、互变异构体、立体异构体、立体异构体的混合物、前药或氘代类似物。容器可以是小瓶、广口瓶、瓶子、袋子、安瓿、预装注射器和静脉注射袋。
[0442]
6.药物组合物和施用方式
[0443]
通常以药物组合物的形式施用本文提供的化合物。因此，本文还提供了药物组合物，其包含一种或更多的本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、互变异构体、立体异构体、立体异构体的混合物、前药或氘代类似物(统称为“活性成分”)和一种或多种药学上可接受的媒介，其选自载体、辅剂和赋形剂。合适的药学上可接受的媒介可以包括例如，惰性固体稀释剂和填充剂、稀释剂(包括无菌水性溶液和各种有机溶剂)、渗透促进剂、增溶剂和辅剂。以制药领域公知的方式制备这种组合物。参见，例如，remington’s pharmaceutical sciences,mace publishing co.,philadelphia,pa.17th ed.(1985)；和modern pharmaceutics,marcel dekker,inc.3rd ed.(g.s.banker&c.t.rhodes,eds.)。药物组合物可包含约0.01％至约90％的本文所述的活性成分。
[0444]
可以单剂量或多剂量施用药物组合物。可以通过各种方法施用药物组合物，包括例如，直肠、口腔、鼻内和经皮途径。在某些实施方式中，可以通过动脉内注射、静脉内、腹膜内、肠胃外、肌肉内、皮下、口服、局部或作为吸入剂施用药物组合物。
[0445]
一种施用方式是肠胃外，例如通过注射。本文所述的药物组合物可以掺入其中以用于通过注射施用的形式包括，例如，水性或油性悬浮液，或乳液，与芝麻油、玉米油、棉籽油或花生油，以及酏剂、甘露醇、葡萄糖或无菌水溶液，以及类似的药物媒介。
[0446]
口服施用可以是本文所述化合物的另一种施用途径。可以通过例如，胶囊或肠溶包衣片剂施用。在制备包含至少一种本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、互变异构体、立体异构体、立体异构体的混合物、前药或氘代类似物的药物组合物时，活性成分通常被赋形剂稀释和/或被封闭在此类载体中使得其可以是胶囊、小袋、纸或其他容器的形式。当赋形剂用作稀释剂时，它可以是固体、半固体或液体材料的形式，其用作活性成分的媒介物、载体或介质。因此，组合物可以是片剂、丸剂、粉剂、锭剂、小袋、扁囊剂、酏剂、混悬剂、乳剂、溶液、糖浆、气雾剂(作为固体或在液体介质中)、软膏剂(其含有例如，最多10％的活性化合物)、软和硬明胶胶囊、无菌注射液和无菌包装粉剂的形式。
[0447]
合适的赋形剂的一些实例包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、藻酸盐、黄蓍胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、无菌水、糖浆和甲基纤维素。制剂可另外包含润滑剂，例如滑石、硬脂酸镁和矿物油；润湿剂；乳化剂和悬浮剂；防腐剂，例如羟基苯甲酸甲酯和丙酯；甜味剂；和调味剂。
[0448]
可以配制包含至少一种本文所述化合物或其药学上可接受的盐、互变异构体、立
体异构体、立体异构体的混合物、前药或氘代类似物的组合物，以通过采用本领域已知的方法对受试者施用后提供活性成分的快速、持续或延迟释放。用于口服施用的控释药物递送系统包括渗透泵系统和溶出系统，这些系统包含聚合物涂覆的储库或药物-聚合物基质制剂。美国专利第3,845,770；4,326,525；4,902,514；和5,616,345号中给出了控释系统的实例。用于本文公开的方法的另一种制剂采用经皮递送装置(“贴剂”)。此类透皮贴剂可用于提供受控量的本文所述化合物的连续或不连续输注。用于递送药剂的透皮贴剂的构造和使用是本领域公知的。参见例如，美国专利号5,023,252、4,992,445和5,001,139。此类贴片可构造用于连续、脉动或按需递送药剂。
[0449]
为了制备固体组合物，例如片剂，可以将主要活性成分与药物赋形剂混合以形成固体预制剂组合物，其含有本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、互变异构体、立体异构体、立体异构体的混合物、前药或氘代类似物的均质混合物。当将这些预制剂组合物称为均质时，活性成分可以均匀地分散在整个组合物中，使得组合物可以容易地细分为同样有效的单位剂型，例如片剂、丸剂和胶囊剂。
[0450]
本文描述的化合物的片剂或丸剂可以被包衣或以其他方式混合以提供足以提供延长作用的优点的剂型或保护免受胃的酸性条件影响。例如，片剂或丸剂可以包含内部剂量和外部剂量成分，后者是在前者之上的包膜形式。这两种成分可以被肠溶层隔开，肠溶层用于抵抗胃中的崩解并允许内部成分完整地进入十二指肠或延迟释放。多种材料可用于此类肠溶层或包衣，此类材料包含多种聚合酸以及聚合酸与诸如虫胶、鲸蜡醇和醋酸纤维素的材料的混合物。
[0451]
用于吸入或吹入的组合物可包含在药学上可接受的水性或有机溶剂或其混合物中的溶液和悬浮液以及粉末。液体或固体组合物可包含如本文所述的合适的药学上可接受的赋形剂。在一些实施方式中，组合物通过口腔或鼻呼吸途径施用以实现局部或全身作用。在其他实施方式中，可通过使用惰性气体雾化在药学上可接受的溶剂中的组合物。雾化溶液可以直接从雾化装置吸入，或者雾化装置可以连接到面罩帐篷或间歇性正压呼吸机。溶液、悬浮液或粉末组合物可以从以适当方式递送制剂的装置施用，优选口服或经鼻施用。
[0452]
7.给药
[0453]
本公开的化合物对任何特定受试者的具体剂量水平将取决于多种因素，包括所用特定化合物的活性、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、施用时间、施用途径、排泄率、药物组合和接受治疗的受试者中特定疾病的严重程度。例如，剂量可以表示为每千克受试者体重的本文所述化合物的毫克数(mg/kg)。约0.1至150mg/kg之间的剂量可能是合适的。在一些实施方式中，大约0.1和100mg/kg可能是合适的。在其他实施方式中，介于0.5和60mg/kg之间的剂量可能是合适的。当在体型差异很大的受试者之间调整剂量时，根据受试者的体重进行标准化特别有用，例如发生在儿童和成人中使用药物时，或当将非人类受试者(如狗)的有效剂量转换为适用于人类受试者的剂量时。
[0454]
日剂量也可以描述为每剂或每天施用的本文所述化合物的总量。本文所述化合物的日剂量可为约1mg至4,000mg、约2,000至4,000mg/天、约1至2,000mg/天、约1至1,000mg/天、约10至500mg/天、约20至500mg/天、约50至300mg/天、约75至200mg/天或约15至150mg/天。
[0455]
当口服施用时，人类受试者的总日剂量可以在1mg和1,000mg之间、在约1,000-2,
chemistry(blackwell publishing,4
th edition,2002),vogel's textbook of practical organic chemistry(prentice hall,5
th edition,1996)中描述的程序或其明显的修改来制备。
[0464]
术语“溶剂”是指在与其相关描述的反应条件下通常为液体并且在其中发生反应的有机介质(包括例如，苯、甲苯、乙腈、四氢呋喃(“thf”)、二甲基甲酰胺(“dmf”)、氯仿、甲叉二氯(或二氯甲烷)、乙醚、甲醇、吡啶等)。
[0465]
术语“惰性有机溶剂”和“惰性溶剂”是指在与其相关描述的反应条件下呈惰性的溶剂(包括例如，苯、甲苯、乙腈、四氢呋喃(“thf”)、二甲基甲酰胺(“dmf”)、氯仿、甲叉二氯(或二氯甲烷)、乙醚、甲醇、吡啶等)。
[0466]
可以通过nmr(核磁共振)(例如1h nmr)谱表征化合物。以下缩写用于报告nmr数据：δ(化学位移(ppm))、s(单峰)、d(双重峰)、t(三重峰)、m(多重峰)、br(宽峰)、dd(双重的双重峰),dt(三重的双重峰)。耦合常数(j)以赫兹(hz)表示。
[0467]
在以下示例性方案中，环a、环b、m、x
l
、x2、x3、x4、x5、r6、z
l
、z2、z3、r
l
、r2、r4、r7、r8和r9如本文所定义。
[0468]
方案i显示了用于制备如本文所述的式i化合物的合成路线的示例性实例。
[0469]
方案i
[0470][0471]
在方案i中，x是三氟甲磺酸盐、cl、br或i，y是bf2、硼酸或硼酸酯，并且在交叉偶联条件下，例如suzuki或suzuki-miyaura反应条件下，化合物i-1和i-2在催化剂如钯或镍催化剂的存在下反应，以形成式i的化合物。
[0472]
或者，在方案i中，x是三氟甲磺酸盐、cl、br或i，y是mgbr，并且在kumada偶联反应条件下，化合物i-1和i-2在催化剂例如钯或镍催化剂的存在下反应，以形成式i的化合物。
[0473]
方案ii显示了用于制备如本文所述的式x化合物的合成路线的示例性实例。
[0474]
方案ii
[0475][0476]
在方案ii中，化合物ii-3通过化合物ii-1和ii-2在交叉偶联条件下反应制备，例如在存在碱(例如，cs2co3)和催化剂(例如，pd(pph3)4)的条件下。可以在溶剂(例如二噁烷、水或其混合物)中进行该反应。可在约80℃或更高的温度下进行反应，例如约80℃至约120℃。
[0477]
在氢化条件下，例如在h2气压下，在催化剂(例如，碳载钯)的存在下，化合物ii-3转化为化合物ii-4。可在溶剂例如乙酸、甲醇、dcm或其组合中进行氢化，任选地加热，例如，在约40℃至约80℃的温度下。
[0478]
化合物ii-4与化合物r
8-lg反应以形成式x的化合物，其中lg是离去基团，例如，cl、br、甲苯磺酸酯(ots)、甲磺酸酯(oms)或三氟甲磺酸酯(otf)。
实施例
[0479]
实施例1：合成
[0480]
化合物1,006的制备：3-([1,1'-联苯基]-4-基)-1-(环戊基甲基)哌啶
[0481][0482]
步骤1:3-([1,1'-联苯基]-4-基)吡啶(3)的合成:
[0483]
向化合物1(500mg，3.18mmol)和化合物2(761mg，3.82mmol)在二噁烷:水(9:1)(10ml)中的混合物中加入cs2co3(2.08g，6.36mmol)和将所得混合物用n2脱气20分钟。添加pd(pph3)4(370mg，0.318mmol)并将反应混合物加热至100℃保持12小时。反应完成后，将反应混合物通过硅藻土垫过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法[用己烷中的20％的etoac梯度洗脱]纯化以提供化合物3(400mg，54％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ8.96(s,1h),8.60-8.58(dd,j＝1.6hz,1h),8.15-8.13(dd,j＝0.8hz,1h),7.86-7.80(m,4h),7.75-7.73(dd,j＝1.2hz,2h),7.52-7.50(m,3h),7.49-7.40(m,1h)。
[0484]
步骤2：3-([1,1'-联苯基]-4-基)哌啶(4)的合成：
[0485]
向化合物3(400mg，1.73mmol)在乙酸(7ml)中的搅拌溶液中加入10％的pd/c(50％湿)(200mg)。将反应混合物在氢气(40psi)和60℃下搅拌24小时。反应完成后，反应混合物通过硅藻土垫过滤，滤液用饱和的nahco3溶液碱化并用乙酸乙酯(50mlx3)萃取。合并的有机层经硫酸钠干燥并浓缩以提供化合物4(300mg，70％)。lc-ms(m/z):238.4[m h]

.1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ7.63-7.61(m,4h),7.57-7.55(d,j＝8hz,2h),7.46-7.42(d,j＝16hz,2h),7.35-7.30(m,3h),3.00-2.92(m,3h),2.63-2.48(m,3h),1.67-1.35(m,7h)。
[0486]
步骤3：3-([1,1'-联苯基]-4-基)-1-(环戊基甲基)哌啶.化合物1,006的合成
[0487]
向化合物4(200mg，0.83mmol)在丙酮(7ml)中的搅拌溶液中加入化合物5(270mg，1.67mmol)和k2co3(370mg，2.49mmol)。将所得反应混合物在密封管中加热至70℃保持12小时。反应完成后，过滤反应混合物并浓缩滤液。通过硅胶柱色谱法[用dcm中的5％的meoh梯度洗脱]纯化粗残余物以提供化合物1,006，3-([1,1'-联苯基]-4-基)-1-(环戊基甲基)哌啶(50mg，10％)。lc-ms(m/z)：320.2[m h]

。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ7.67-7.64(m,4h),7.48-7.44(t,j＝7.6hz,2h),7.39-7.36(m,3h),4.06-40.3(m,2h),3.56-3.06(m,5h),2.33-2.29(t,j＝8hz,1h),1.94-1.5(m,10h),1.27-1.22(m,2h)。
[0488]
根据关于化合物1,006所述的方法制备化合物1,002、1,004、1,007和1,008，其中用合适的亲电子试剂代替化合物5。
[0489]
化合物1,009的制备：1-(环戊基甲基)-3-(4'-氟-[1,1'-联苯基]-4-基)哌啶
[0490][0491][0492]
步骤1：3-(4'-氟-[1,1'-联苯基]-4-基)吡啶(7)的合成:
[0493]
向化合物1(1g，46.29mmol)、化合物6(1.09g，69.44mmol)在1,4-二噁烷和水(9:1)(10ml)中的搅拌溶液中加入na2co3(0.98g，92.59mmol)，并将所得混合物用n2脱气20分钟。加入pdcl2(dppf).ch2cl2络合物(169mg，2.08mmol)并将所得反应混合物加热至100℃保持12小时。反应完成后，将溶液通过硅藻土垫过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法[用己烷中的10％etoac梯度洗脱]纯化以提供化合物7(1g，61％)。lcms(m/z)：250.1[m h]

。
[0494]
步骤2：3-(4'-氟-[1,1'-联苯基]-4-基)哌啶(8)的合成：
[0495]
向化合物7(500mg，1.73mmol)在浓hcl(7ml)中的搅拌溶液中加入10％的pd/c(50％湿)(200mg)，并将所得悬浮液在氢气氛(50psi)下在60℃下搅拌24小时。反应完成后，将混合物通过硅藻土垫过滤并将滤液浓缩以提供化合物8(200mg，51％)。lcms(m/z):256.2[m h]

。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ9.06(s br,1h),7.69-7.28(m,4h),3.04-2.90(m,4h),3.21-2.82(m,4h),2.07
–
1.59(m,4h),1.42
–
1.03(m,1h)。
[0496]
步骤3：1-(环戊基甲基)-3-(4'-氟-[1,1'-联苯基]-4-基)哌啶化合物1,009的合成
[0497]
向化合物8(200mg，0.83mmol)在乙腈(7ml)中的搅拌溶液中加入k2co3(370mg，2.49mmol)和化合物5(270mg，1.67mmol)。将反应混合物在密封管中在70℃搅拌16小时。反应完成后，过滤反应混合物并将滤液浓缩至干。残余物通过硅胶柱色谱[用dcm中的5％的meoh梯度洗脱]进一步纯化以得到化合物1,009，1-(环戊基甲基)-3-(4'-氟-[1,1'-联苯
基]-4-基)哌啶(25mg，10％)。lcms(m/z):338.3[m h]

。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ7.53
–
7.46(m,4h),7.31(d,j＝8hz,2h),7.107((t,j＝8.8hz,2h),),3.03
–
2.84(m,3h),2.3(d,j＝7.2hz,2h),2.10
–
1.92(m,4h),1.77
–
1.71(m,4h),1.52-1.42(m,4h),1.29-1.23(m,3h)。
[0498]
化合物1,010的制备：3-(4'-氯-[1,1'-联苯基]-4-基)-1-(环戊基甲基)哌啶
[0499][0500]
步骤1：2-(4'-氯-[1,1'-联苯基]-4-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(10)的合成：
[0501]
向化合物9(2.0g，74.76mmol)和(pin)2b2(3.7g，149.53mmol)在二噁烷-水(9:1)(25ml)中的混合物中加入koac(1.46g，149.53mmol)，并将所得混合物用n2脱气20分钟。加入pdcl2(dppf).ch2cl2络合物(246mg，3.36mmol)并将反应混合物加热至100℃保持12小时。反应完成后，将溶液通过硅藻土垫过滤并将滤液浓缩以提供化合物10(2g，粗品)。
[0502]
步骤2：3-(4'-氯-[1,1'-联苯基]-4-基)吡啶(11)的合成:
[0503]
向化合物10(2.0g，63.69mmol)和化合物1(1.5g，95.54mmol)在二噁烷:水(9:1)(25ml)中的混合物中加入na2co3(1.35g，127.38mmol)和将所得混合物用n2脱气20分钟。加入pdcl2(dppf).ch2cl2络合物(209mg，2.86mmol)并将反应混合物加热至100℃保持12小时。反应完成后，将溶液通过硅藻土垫过滤并将滤液浓缩至干和通过硅胶柱色谱法[用己烷中的10％的etoac梯度洗脱]纯化以提供化合物11(800mg(50％))。lcms(m/z):266.3[m h]

。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ8.90(dd,j＝2.3,0.9hz,1h),8.61(dd,j＝4.8,1.6hz,1h),7.95-7.9(m,1h),7.67(s,4h),7.60
–
7.54(m,2h),7.45
–
7.39(m,3h)。
[0504]
步骤3：3-(4'-氯-[1,1'-联苯基]-4-基)哌啶(12)的合成：
[0505]
向化合物11(100mg，0.37mmol)在meoh(2ml)和浓hcl(0.5ml)中的搅拌溶液中加入
pto2(50％湿)(50mg)，并将所得悬浮液在氢气(50psi)中在45℃下搅拌12小时。反应完成后，混合物通过硅藻土垫过滤。滤液用饱和的nahco3溶液碱化并用乙酸乙酯(3x10ml)萃取。合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩以得到化合物12(60mg，60％)。lcms(m/z):272.1[m h]

。
[0506]
步骤4：3-(4'-氯-[1,1'-联苯基]-4-基)-1-(环戊基甲基)哌啶化合物1,010的合成：
[0507]
向化合物12(150mg，0.55mmol)在乙腈(2ml)中的搅拌溶液中加入k2co3(229mg，1.66mmol)和化合物5(180mg，1.10mmol)。将反应混合物在密封管中在70℃下搅拌12h。反应完成后，过滤混合物，将滤液浓缩至干。通过硅胶柱色谱纯化残余物以提供化合物1,010，3-(4'-氯-[1,1'-联苯基]-4-基)-1-(环戊基甲基)哌啶(25mg，10％)。lcms(m/z):354.3[m h]

.1h nmr(400mhz,cdcl3):δ7.51
–
7.47(m,4h),7.40
–
7.37(m,2h),7.31(d,j＝8.0hz,2h),3.03
–
2.82(m,3h),2.30(d,j＝1.2hz,2h),2.29
–
1.92(m,4h),1.77-1.73(m,4h),1.57
–
1.45(m,4h),1.25
–
1.17(m,3h)。
[0508]
化合物1,011的制备：1-(环戊基甲基)-3-(4'-(三氟甲基)-[1,1'-联苯基]-4-基)哌啶
[0509][0510]
[0511]
步骤1：4-溴-4'-(三氟甲基)-1,1'-联苯(15)的合成：
[0512]
向化合物13(200mg，0.84mmol)和化合物14(241mg，1.27mmol)在甲苯:水(9:1)(6ml)中的混合物中加入na2co3(180mg，1.69mmol)和所得混合物用n2脱气20分钟。加入pdcl2(dppf).ch2cl2络合物(59mg，0.08mmol)并将反应混合物进一步加热至100℃保持12小时。反应完成后，将混合物通过硅藻土垫过滤，并将滤液浓缩至干。通过硅胶柱色谱进一步纯化粗残余物以提供化合物15(95mg，54％)。1hnmr(400mhz,cdcl3):δ7.76
–
7.63(m,4h),7.62
–
7.58(m,2h),7.49
–
7.44(m,2h)。
[0513]
步骤2：4,4,5,5-四甲基-2-(4'-(三氟甲基)-[1,1'-联苯基]-4-基)-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(16)的合成：
[0514]
向化合物15(1.5g，5.00mmol)、(pin)2b2(2.53g，10.0mmol)在二噁烷-水(9:1)(20ml)中的混合物中加入koac(0.98g，10.0mmol)，所得混合物用n2脱气20分钟。添加pdcl2(dppf).ch2cl2络合物(164mg，0.22mmol)并将反应混合物加热至100℃保持12小时。反应完成后，将混合物通过硅藻土垫过滤并将滤液浓缩以提供化合物16(1.5g，粗品)。
[0515]
步骤3：3-(4'-(三氟甲基)-[1,1'-联苯基]-4-基)吡啶(17)的合成：
[0516]
向化合物16(1.5g，43.10mmol)和化合物1(1.02g，64.65mmol)在二噁烷:水(9:1)(25ml)中的混合物中加入na2co3(0.91g，86.2mmol)和所得混合物用n2脱气20分钟。加入pdcl2(dppf).ch2cl2络合物(136mg，0.19mmol)并将所得混合物加热至100℃保持12小时。反应完成后，溶液通过硅藻土垫过滤，滤液在减压下浓缩至干。通过硅胶柱色谱[用己烷中的10％etoac梯度洗脱]纯化粗产物，以得到化合物6(650mg，52％)。lcms(m/z):300.3[m h]

。
[0517]
步骤4：3-(4'-(三氟甲基)-1,1'-联苯基]-4-基)哌啶(18)的合成：
[0518]
向化合物17(500mg，1.67mmol)在meoh(2ml)和浓hcl(0.5ml)中的搅拌溶液加入pd/c(50％湿)(250mg)，并将所得悬浮液在氢气(50psi)和45℃下搅拌24小时。反应完成后，反应混合物通过硅藻土垫过滤，滤液用饱和的碳酸氢钠溶液碱化，随后用乙酸乙酯(50mlx3)萃取。合并的有机层经无水硫酸钠干燥并浓缩以提供化合物7(300mg，60％)。lcms(m/z):306.2[m h]
1
hnmr(400mhz,cdcl3):δ7.6(t,j＝1.5hz,4h),7.54(d,j＝7.7hz,2h),7.32(d,j＝8.0hz,2h),3.51-3.32(m,2h),2.97
–
2.93(m,1h),2.81-2.75(m,2h),2.12-2.16(m,5h)。
[0519]
步骤5：1-(环戊基甲基)-3-(4'-(三氟甲基)-[1,1'-联苯基]-4-基)哌啶.化合物1,011的合成
[0520]
向化合物18(220mg，0.72mmol)在乙腈(2.5ml)中的搅拌溶液中加入k2co3(298mg，2.16mmol)和化合物5(235mg，1.44mmol)。将反应混合物在密封管中在70℃下搅拌12小时。反应完成后，过滤混合物，将滤液浓缩至干。粗产物通过硅胶柱色谱纯化，并通过制备型-hplc进一步纯化，以得到1-(环戊基甲基)-3-(4'-(三氟甲基)-[1,1'-联苯基]-4-基)哌啶，化合物1,011(35mg，12％)。lcms(m/z):338.2[m h]

.1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ7.87(d,,j＝8.4hz,2h),7.79(d,,j＝8.4hz,2h),7.04(d,j＝8.4hz,1h),7.57(d,j＝8.4hz,2h),3.05-2.75(m,3h),2.21(d,j＝7.2hz,2h),2.12
–
1.82(m,4h),1.69-1.56(m,3h),1.54
–
1.44(m,6h),1.27
–
0.58(m,2h)。
[0521]
化合物1,012的制备：1-(环戊基甲基)-3-(4'-(三氟甲基)-[1,1'-联苯基]-4-基)哌啶：
[0522][0523][0524]
步骤1：4-溴-4'-甲氧基-1,1'-联苯(21)的合成：
[0525]
向化合物19(200mg，0.85mmol)和化合物20(257mg，1.28mmol)在甲苯-水(9:1)(35ml)中的混合物中加入na2co3(181mg，1.70mmol)和将反应混合物用n2脱气20分钟。加入pdcl2(dppf).ch2cl2络合物(60mg，0.08mmol)并将反应混合物加热至100℃保持12小时。反应完成后，将混合物通过硅藻土垫过滤，将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱[用etoac:己烷(10:90)梯度洗脱]纯化以提供化合物21(200mg，76％)。1h nmr(400mhz,cd2cl2):δ7.51(dd,j＝17.5,7.0,2.2hz,4h),7.41(dd,j＝8.7,2.1hz,2h),6.97(dd,j＝8.7,2.1hz,2h),3.85(s,3h)。
[0526]
步骤2：2-(4'-甲氧基-[1,1'-联苯基]-4-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(22)的合成：
[0527]
向化合物21(1.0g，3.81mmol)、pin2b2(1.93g，7.63mmol)在二噁烷-水(9:1)(10ml)中的混合物中加入koac(0.748g，7.63mmol)和将反应混合物用n2脱气20分钟。添加pdcl2(dppf).ch2cl2络合物(311mg，0.38mmol)并将反应混合物加热至100℃保持12小时。反应完
成后，将溶液通过硅藻土垫过滤并将滤液浓缩以提供化合物22(1.0g，粗品)。
[0528]
步骤3：3-(4'-甲氧基-[1,1'-联苯基]-4-基)吡啶(23)的合成：
[0529]
向化合物22(1.0g，32.25mmol)和化合物1(764g，48.38mmol)在二噁烷:水(9:1)(25ml)中的混合物中加入na2co3(0.68g，64.51mmol)和将反应混合物用n2脱气20分钟。添加pdcl2(dppf).ch2cl2络合物(262mg，3.22mmol)并将反应混合物加热至100℃保持12小时。反应完成后，将溶液通过硅藻土垫过滤并将滤液浓缩至干和通过硅胶柱色谱[用己烷中的10％etoac梯度洗脱]纯化以提供化合物23(500mg，62％)。lcms(m/z):262.1[m h]
1
h nmr(400mhz,cdcl3):δ8.91(s,1h),8.60(s,1h),7.95(dt,j＝7.9,1.9hz,1h),7.71
–
7.54(m,6h),7.41(dd,j＝7.9,4.8hz,1h),7.04
–
6.96(m,2h),3.87(s,3h)。
[0530]
步骤4：3-(4'-甲氧基-[1,1'-联苯基]-4-基)哌啶(24)的合成：
[0531]
向化合物23(300mg，1.14mmol)在meoh(7ml)和浓hcl(0.5ml)中的搅拌溶液加入pt/c(25％湿)(75mg)。将所得悬浮液在氢气(50psi)和45℃下搅拌24小时。反应完成后，混合物通过硅藻土垫过滤，将滤液用饱和nahco3溶液碱化并用乙酸乙酯(50mlx3)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥并浓缩以提供化合物24(200mg，66％)。lcms(m/z):268.2[m h]
1
hnmr(400mhz,dmso-d6):δ7.57-7.50(m,4h),7.31
–
7.24(m,2h),7.03
–
6.98(m,2h),3.79(s,3h),2.97(t,j＝13.9hz,2h),2.67
–
2.55(m,1h),2.11
–
1.95(m,1h),1.88(d,j＝12.4hz,1h),1.75
–
1.38(m,2h),1.07(s,3h)。
[0532]
步骤5：1-(环戊基甲基)-3-(4'-甲氧基-[1,1'-联苯基]-4-基)哌啶(25)的合成：
[0533]
向化合物24(200mg，0.74mmol)在乙腈(2.5ml)中的搅拌溶液中加入k2co3(205mg，1.14mmol)，然后加入化合物5(121mg，0.74mmol)。将反应混合物在密封管中在70℃下搅拌12h。反应完成后，过滤混合物并将滤液浓缩至干。通过硅胶柱色谱进一步纯化粗产物以提供化合物25(150mg，57％)。lcms(m/z):350[m h]

[0534]
步骤6：4'-(1-(环戊基甲基)哌啶-3-基)-[1,1'-联苯基]-4-醇化合物1,012的合成
[0535]
在-78℃下向化合物25(150mg，0.42mmol)在2ml的ch2cl2(2ml)中的溶液加入bbr3(0.5ml)，并将所得溶液在-78℃下搅拌42h。反应完成后，混合物用饱和nahco3溶液中和并用etoac(10mlx2)萃取。合并的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩至干。将粗产物通过硅胶柱色谱和prep hplc进一步纯化，以得到化合物1,012，4'-(1-(环戊基甲基)哌啶-3-基)-[1,1'-联苯基]-4-醇(35mg，15％)。lcms(m/z):336.3[m h]
1
h nmr(400mhz,dmso-d6):δ9.50(s,1h),7.50
–
7.40(m,4h),7.28(d,j＝8.1hz,2h),6.814
–
6.83(m,2h),2.87(d,j＝10.4hz,2h),2.76
–
2.67(m,1h),2.2(d,j＝7.6hz,2h),2.07-1.89(m,3h),1.82-1.80(m,1h),1.74
–
1.61(m,3h),1.62
–
1.35(m,6h),1.16-1.20(m,2h)。
[0536]
化合物1,001的制备：1-(环丙基甲基)-3-(4'-氟-[1,1'-联苯基]-4-基)哌啶
[0537]
[0538][0539]
步骤1：1-(环丙基甲基)-3-(4'-氟-[1,1'-联苯基]-4-基)哌啶化合物1,001的合成
[0540]
向化合物8(来自化合物1,009合成)(100mg，0.39mmol)在乙腈(2ml)中的搅拌溶液加入k2co3(162mg，1.17mmol)，然后加入(溴甲基)环丙烷(52mg，0.39mmol)。将反应混合物在密封管中在70℃下搅拌16小时。反应完成后，过滤混合物，和将滤液减压浓缩至干。将粗残余物通过硅胶柱色谱进一步纯化，用ch2cl2洗脱以得到1-(环丙基甲基)-3-(4'-氟-[1,1'-联苯基]-4-基)哌啶，化合物1,001(30毫克，25％)。lcms(m/z):310.1[m h]
1
h nmr(400mhz,cdcl3):δ7.54
–
7.46(m,4h),7.32
–
7.30(m,2h),7.10(t,j＝8.8hz,2h),3.20
–
3.13(m,2h),2.95-2.92-(m,1h),2.31
–
2.28(m,2h),2.06
–
1.95(m,2h),1.82
–
1.78(m,2h),1.53-1.46(m,1h),1.25(s,2h),0.92-0.88(m,1h),0.52
–
0.49(m,2h),0.1
–
0.08(m,1h)。
[0541]
化合物1,035的制备：1-苄基-3-(4'-氟-[1,1'-联苯基]-4-基)哌啶的合成：
[0542][0543][0544]
1-苄基-3-(4'-氟-[1,1'-联苯基]-4-基)哌啶，化合物1,035的合成：
[0545]
向化合物8(来自化合物1,009合成)(200mg，0.83mmol)在10ml乙腈中的搅拌溶液中加入k2co3(324mg，2.35mmol)，然后加入苄基溴(270mg，1.56mmol)。将反应混合物在密封管中在70℃下搅拌16小时。反应完成后，过滤混合物并将滤液浓缩至干。将粗残余物通过硅胶柱层析和制备型hplc纯化，以得到化合物1,035，1-苄基-3-(4'-氟-[1,1'-联苯基]-4-基)哌啶(36mg，12％)。lcms(m/z):346.2[m h]
1
h nmr(400mhz,cdcl3):δ7.32-7.43(m,4h),
7.38-7.21(m,7h),7.13-7.06(m,2h),3.55(s,2h),3.03
–
2.85(m,3h),2.09
–
1.93(m,3h),1.79
–
1.71(m,2h),1.5-1.45(m,1h)。
[0546]
化合物1,041的制备：1-环戊基-3-(4'-氟-3-甲基-[1,1'-联苯基]-4-基)哌啶
[0547][0548]
步骤1：4-溴-4'-氟-3-甲基-1,1'-联苯的合成：
[0549]
向1-溴-4-碘-2-甲基苯(2g，6.73mmol)、(4-氟苯基)硼酸(1.04g，7.43mmol)在甲苯:水(1:4)(10ml)中的搅拌溶液加入na2co3(2.4g，23.07mol)，然后加入pdcl2(dppf).dcm(238mg，0.290mmol)。反应混合物用n2脱气20分钟。然后将混合物加热至90℃保持12小时(反应进程通过tlc监测)，反应完成后，通过硅藻土垫过滤，浓缩滤液并使用60-120硅胶从柱色谱[用己烷中的10％etoac梯度洗脱]纯化以得到1.5g 4-溴-4'-氟-3-甲基-1,1'-联苯，为灰白色固体。1hnmr(400mhz,dmso-d6):δ7.54(d,j＝8.4hz,1h),7.49-7.44(m,2h),7.36(d,j＝2hz,1h),7.20(dd,j＝12.8,4.4hz,1h),7.17-7.06(m,2h),2.43(s,3h)。
[0550]
步骤2：3-(4'-氟-3-甲基-[1,1'-联苯基]-4-基)吡啶的合成：
[0551]
向4-溴-4'-氟-3-甲基-1,1'-联苯(1.5g，5.66mmol)和吡啶-3-基硼酸(730mg，5.94mmol)在甲苯:水(1:4)(10ml)中的搅拌溶液加入na2co3(2.09g，19.81mmol)，随后加入pdcl2(dppf).dcm络合物(230mg，0.281mmol)。反应混合物用n2脱气20分钟。然后将混合物加热至100℃保持12小时(反应进程由tlc监测)。反应完成后，将混合物通过硅藻土垫过滤，将滤液浓缩并从使用60-120硅胶的柱色谱[使用己烷中的10％etoac梯度洗脱]纯化，以得到1g的3-(4'-氟-3-甲基-[1,1'-联苯基]-4-基)吡啶，为灰白色固体。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ8.64-8.61(m,2h),7.70-7.67(m,1h),7.60-7.57(m,2h),7.48-7.44(m,2h),7.39-7.35(m,1h),7.30-7.28(m,1h),7.17-7.12(m,2h),2.34(s,3h)。
[0552]
步骤3：3-(4'-氯-2-甲基-[1,1'-联苯基]-4-基)哌啶的合成：
[0553]
向3-(4'-氟-3-甲基-[1,1'-联苯基]-4-基)吡啶(500mg，1.90mmol)在meoh(10ml)中的搅拌溶液加入10％的pd/c(干燥)(50mg)和acoh(2ml)。然后将混合物在h2气氛(60psi)和90℃下搅拌48小时(反应进程通过lcms监测)。反应完成后，混合物通过硅藻土垫过滤。减压蒸发滤液，以得到灰白色固体的3-(4'-氯-2-甲基-[1,1'-联苯基]-4-基)哌啶。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ7.67(t,j＝8hz,2h),7.50-7.42(m,2h),7.38-7.31(m,1h),7.26(t,j＝8.4hz,2h),3.41-3.11(m,3h),3.01-2.81(m,2h),2.39(s,3h),2.1-1.6(m,4h)。
[0554]
步骤4：1-环戊基-3-(4'-氟-3-甲基-[1,1'-联苯基]-4-基)哌啶的合成：
[0555]
向3-(4'-氯-2-甲基-1,1'-联苯基]-4-基)哌啶(160mg，0.594mmol)和溴环戊烷(211mg，0.842mmol)在ch3cn(10ml)中的搅拌溶液加入k2co3(163mg，1.18mmol)并将混合物在密封管中加热至70℃保持12小时。通过lcms监测反应进程，反应完成后，混合物用etoac和水稀释。两个层分离，且分离有机层并在减压下浓缩至干。从prep-hplc纯化获得的粗固
体以提供呈灰白色固体的化合物1041(tfa盐)(获得的固体用4n二噁烷.hcl进一步处理并冻干以产生作为hcl盐的化合物1,041)。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ10.45(brs,1h),7.72-7.64(m,2h),7.51-7.47(m,2h),7.35(d,j＝8.4hz,1h),7.31-7.25(m,2h),3.59-3.43(m,2h),3.41-3.35(m,1h),3.31-3.20(m,1h),3.11-2.93(m,2h),2.40(s,3h),2.11-1.95(m,4h),1.88-1.63(m,6h),1.59-1.48(m,2h)。
[0556]
以下方法用于分离两种对映异构体：
[0557]
柱：chiralcel oj-h(250*4.6mm*5.0μ)
[0558]
流动相：己烷中的0.1％dea:ipa(80:20)
[0559]
流量：1.0毫升/分钟
[0560]
化合物1,043的制备：2-(1-环戊基哌啶-3-基)-5-(4-氟苯基)-3-甲基吡啶
[0561][0562][0563]
步骤1：5-羟基-3-甲基-5',6'-二氢-[2,3'-联吡啶]-1'(4'h)-羧酸叔丁酯的合成：
[0564]
在25℃下向6-溴-5-甲基吡啶-3-醇(1)(3g，16mmol)在dmf(30ml)中的搅拌溶液中加入叔丁基5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-3,4-二氢吡啶-1(2h)-羧酸酯(8.5g，27mmol)，然后加入2m的na2co3溶液(24ml，48mmol)。所得反应混合物使用氮气脱
气15分钟。然后加入pd(dppf)cl2.dcm(395mg，0.48mmol)并将反应混合物加热以在80℃下搅拌16小时。tlc显示反应完成后，反应混合物通过硅藻土垫过滤，滤液减压浓缩至干。使用己烷中的40％乙酸乙酯作为洗脱剂，从硅胶柱色谱(100-200目)纯化所得残余物用，得到叔丁基5-羟基-3-甲基-5',6'-二氢-2,3'-联吡啶]-1'(4'h)-羧酸酯，为灰白色固体3.0g(65％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ9.64(s,1h),7.92-791.(d,j＝2.8hz 1h),7.01-7.00(d,j＝2.8hz 1h),6.97-6.84(m,1h),3.52(brs,2h),2.365-2.337(t,j＝5.2hz,2h),2.22(s,3h),1.86-1.80(m,2h),1.43(s,9h)。
[0565]
步骤2：3-甲基-5-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-5',6'-二氢-[2,3'-联吡啶]-1'(4'h)-羧酸叔丁酯的合成：
[0566]
在-10℃下向5-羟基-3-甲基-5',6'-二氢-[2,3'-联吡啶]-1'(4'h)-羧酸叔丁酯(3)(3g，10mmol)在ch2cl2(40ml)中的搅拌溶液加入三乙胺(2.08g，20mmol)，然后在15分钟内逐滴加入三氟甲磺酸酐(3.77g，13mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16小时。通过tlc确定反应完成后，将所得混合物冷却至0℃并用饱和的碳酸钠溶液(5ml)处理和用ch2cl2(3
×
20ml)萃取，用水(20ml)洗涤。合并的有机层用无水na2so4干燥，过滤并减压浓缩以得到3-甲基-5-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-5',6'-二氢-2,3'-联吡啶]-1'(4'h)-羧酸叔丁酯(粗品)，为浅棕色固体(4.8g)。将其用于下一步而无需任何进一步纯化。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ8.539-8.532(d j＝2.8hz,1h),7.889-7.883(d j＝2.4hz,1h),7.24-7.16(m,1h),3.5(brs,2h),3.06-3.05(m,2h),2.43(s 3h),1.90-1.84(m,2h),1.45(s,9h)。
[0567]
步骤3：5-(4-氟苯基)-3-甲基-5',6'-二氢-[2,3'-联吡啶]-1'(4'h)-羧酸叔丁酯的合成：
[0568]
向3-甲基-5-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-5',6'-二氢-[2,3'-联吡啶]-1'(4'h)羧酸叔丁酯(4.8g(粗)，11mmol)和(4-氟苯基)硼酸(2.39g，17mmol)在二噁烷(50ml)和水(2ml)中的混合物加入k3po4(9.68g，34mmol)和将反应混合物用氮气吹扫15分钟。然后加入pd(dppf)cl2.dcm(938mg，1.1mol)并将反应混合物加热以在80℃下搅拌16小时。通过tlc确定反应完成后，使混合物达到室温并通过硅藻土垫过滤。将收集的滤液在压力下浓缩至干。使用在己烷中的6％乙酸乙酯作为洗脱剂从硅胶柱色谱(100-200目)纯化获得的残余物，得到叔丁基5-(4-氟苯基)-3-甲基-5'，6'-二氢-[2,3'-联吡啶]-1'(4'h)-羧酸酯，为灰白色固体(2.8g，两步总产率为73.68％)。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ8.59(s,1h),7.63(s,1h),7.56-7.51(m,2h),7.17-7.10(m,3h),3.67-3.65(m,2h),2.53-2.43(m,2h),2.40(s 3h),2.04-2.00(m,2h),1.49(s,9h)。
[0569]
步骤4：3-(5-(4-氟苯基)-3-甲基吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成：
[0570]
向在30ml甲醇中的钯碳(50％湿)(1.4g，20％负载)的搅拌悬浮液中加入5-(4-氟苯基)-3-甲基-5',6'-二氢-[2,3'-联吡啶]-1'(4'h)-羧酸叔丁酯(2.8g，7mol)，并在氢气氛(60psi)和室温下搅拌反应混合物。搅拌72小时(通过tlc确定反应完成)后，混合物通过硅藻土垫过滤。将滤液减压浓缩至干。使用己烷中6％乙酸乙酯为洗脱剂，从硅胶柱色谱(100-200目)纯化所得残留物，以得到3-(5-(4-氟苯基)-3-甲基吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯，为灰白色固体(2.0g，71％)。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ8.57(s,1h),7.58(s,1h),7.57-7.49(m,2h),7.17-7.11(m,2h),4.19-4.09(brs,2h),3.01(brs,2h),2.79(m,1h),2.43(s 3h),1.98-1.93(m,2h),1.82-1.78(m,1h),1.64-1.60(m1h),1.48(s,9h)。
[0571]
步骤5：5-(4-氟苯基)-3-甲基-2-(哌啶-3-基)吡啶的合成：
[0572]
在0℃下向3-(5-(4-氟苯基)-3-甲基吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(500mg，1.3mmol)在二噁烷(5ml)中的搅拌溶液加入二噁烷(5ml)中的4m hcl并将反应混合物在室温下搅拌4小时。通过tlc确定反应完成后，将混合物在压力下浓缩至干。所得残余物用乙醚和戊烷的混合物(1:1，10ml)研磨，过滤并干燥，以得到5-(4-氟苯基)-3-甲基-2-(哌啶-3-基)吡啶作为白色固体(300mg，83％)。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ9.41-9.38(m,2h),8.75(s,1h),8.25(s,1h),7.86-7.82(m,2h),7.39-7.34(t,j＝8.8hz,2h),3.65(m,1h),3.44-3.31(m,3h),2.92(brs,1h),2.51(s,3h),1.95-1.90(m,4h)。
[0573]
步骤6：2-(1-环戊基哌啶-3-基)-5-(4-氟苯基)-3-甲基吡啶的合成：
[0574]
向5-(4-氟苯基)-3-甲基-2-(哌啶-3-基)吡啶(300mg，1mmol)在15ml乙腈中的搅拌溶液加入k2co3(460mg，3mmol)，然后是溴环戊烷(500mg，3mmol)，并将反应混合物加热以在80℃下搅拌36h。通过tlc确定反应完成后，将反应混合物冷却至室温，加入水(5ml)。用乙酸乙酯(3
×
20ml)萃取并用水(20ml)洗涤。合并的有机层用无水na2so4干燥，过滤并减压浓缩至干。所得残余物用乙醚和戊烷的混合物(1:1，10ml)研磨，过滤并干燥，以得到2-(1-环戊基哌啶-3-基)-5-(4-氟苯基)-3-甲基吡啶，为灰白色固体(300mg，83％)。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ8.58(s,1h),7.57(s,1h),7.57-7.49(m,2h),7.16-7.12(m,2h),3.30(m,1h),3.12(m,2h),2.6(m,1h),2.41(s 3h),2.35(m,1h),2.0(m,1h),1.91-1.83(m,5h),1.83-1.67(m,5h),1.67-1.52(m,4h)。
[0575]
根据方案i或方案ii，或根据实施例的方法，或通过本领域已知的方法制备表1、表2、表3和表4中示出的其余化合物。
[0576]
实施例2：生物测定
[0577]
可以根据以下方案测试本公开的化合物与pcsk9的结合、pcsk9活性的抑制和/或调节。
[0578]
细胞培养
[0579]
可以按照常规程序培养细胞，例如hepg2、huh7、fl83b，或用短发夹pcsk9敲低序列转染的细胞系(例如hepg2/shpcsk9、huh7/shpcsk9)，例如，benjannet等“effects of the prosegment and ph on the activity of pcsk9:evidence for additional processing events”j biol chem.285(52):40965-40978(2010)描述的那些，其全文以引用方式并入本文。
[0580]
ldlr流式细胞术分析
[0581]
使用流式细胞术或荧光激活细胞分选(facs)，使用改编自benjannet等“effects of the prosegment and ph on the activity of pcsk9:evidence for additional processing events”j biol chem.285(52):40965-40978(2010)和“composition and methods of use of small molecules as binding ligands for the modulation of proprotein convertase subtilisin/kexin type 9(pcsk9)protein activity”(wo2016029037)(其全部内容通过引用并入本文)的方案测定ldlr水平。
[0582]
在补充青霉素-链霉素(life technologies)的由完全高葡萄糖dmem(invitrogen)与10％胎牛血清(life technologies)组成的培养基中培养细胞，例如hepg2、huh7、fl83b或用短发夹pcsk9敲低序列转染的细胞系，例如hepg2/shpcsk9、huh7/
shpcsk9或fl83b/shpcsk9。将细胞以125k细胞/孔接种于24孔板中，并在37℃下培养12-24小时。移除培养基并替换为新鲜培养基或培养基加预定量的重组pcsk9(例如，pcsk9最终浓度为5μg/ml；cayman chemical,ann arbor,mi,catalog#20631)。评估测试化合物的孔给予范围0nm到100μm的浓度。
[0583]
在37℃下孵育4-6小时后，除去培养基并通过添加0.5ml补充0.5％牛血清白蛋白(bsa，sigma)和1g/l葡萄糖(sigma)的完全d-pbs(即dulbecco磷酸盐缓冲盐水(d-pbs，lifetechnologies))冲洗细胞。小心地吸出洗涤培养基，并通过在37℃下孵育5-10分钟使用200μl的tryple express(life technologies)使细胞从板释放出来。通过加入100μl胎牛血清灭活tyrple-cell悬浮液，转移到v型底板，并以250x重力离心5分钟。离心后，吸出上清液，将细胞沉淀重新悬浮在100μl完全d-pbs中，并以250x重力离心5分钟。离心后，吸出上清液，将细胞沉淀重悬在100μl抗体染色溶液(600μl完全d-pbs中的抗ldlr-pe)中，并在冰上避光孵育30分钟。然后通过离心使细胞沉淀，重新悬浮在100μl的4',6-二脒基-2-苯基吲哚(dapi，cayman chemical)或7-氨基放线菌素d(7aad，life technologies)染色溶液中以测量细胞活力。
[0584]
根据制造商的操作手册，使用流式细胞仪分析细胞活力标志物(死细胞)和活细胞中的ldlr。与作为pcsk9抑制剂的小分子化合物一起孵育的细胞预期相对于对照(无化合物)样本显示出更多的ldlr，而与作为pcsk9激活剂的小分子化合物一起孵育的细胞预期相对于对照(无化合物)样本显示出降低量的ldlr。
[0585]
在10μm浓度下ldlr测定中的百分恢复率提供如下： ：》80％恢复率； ：40-80％恢复率； ：0-40％恢复率。所选化合物的结果列于表5中。
[0586][0587]
ldl-r ec50提供如下： ：《1μm； ：1μm-5μm； ：》5μm。
[0588]
所选化合物的ldl-r ec50显示在表6中。
[0589][0590][0591]
细胞dii-ldl摄取分析
[0592]
可以使用改编自benjannet等“effects of the prosegment and ph on the activity of pcsk9:evidence for additional processing events”jbiol chem.285(52):40965-40978(2010)和“composition and methods of use of small molecules as binding ligands for the modulation of proprotein convertase subtilisin/kexin type 9(pcsk9)protein activity”(wo2016029037)的方案测量细胞dii-ldl摄取，其全部内容通过引用并入本文。
[0593]
将细胞，例如hepg2、huh7、fl83b，或用短发夹pcsk9敲低序列转染的细胞系(例如hepg2/shpcsk9、huh7/shpcsk9或fl83b/shpcsk9)，在37℃下接种并培养12-24小时。去除培养基并更换为新鲜的补充5μg/ml的dii-ldl(kalenbiomedical)的脂蛋白耗尽的培养基或者补充5μg/ml的dii-ldl加预定浓度的重组pcsk9(例如最终浓度10nm的pcsk9)的脂蛋白耗尽的培养基。脂蛋白耗尽的培养基可以由含有10％脂蛋白耗尽的胎牛血清(kalen biomedical)并补充有青霉素-链霉素(life technologies)的dmem(invitrogen)组成。向细胞施用范围0nm到100μm剂量的小分子测试化合物。
[0594]
在指定长度的孵育期(例如，16小时)后，按照制造商的说明将hoechst 33342(anaspec)染色剂添加到细胞培养基中并孵育指定长度(例如30分钟)。将脂蛋白耗尽的培养基去除，用磷酸盐缓冲盐水冲洗细胞3次。将最终体积的磷酸盐缓冲盐水加回到孔中。使用酶标仪采用550nm的激发波长测量dii荧光，并测量在590nm处的所得发射。使用酶标仪采用355nm的激发波长测量hoechst染色荧光，并测量在460nm处的所得发射。
[0595]
通过hoechst染色(dna含量)和dii-ldl荧光分析细胞。相对于对照(无化合物)样本，与作为pcsk9抑制剂的小分子化合物一起孵育的细胞预期显示出增加量的dii-ldl荧光，而相对于对照(无化合物)样本，与作为pcsk9激活剂的小分子化合物一起孵育的细胞预期显示出降低量的dii-ldl荧光。
[0596]
ldl摄取的基于细胞的测定试剂盒
[0597]
还可使用商业试剂盒(cayman chemical，catalog#10011125)和制造商提供的随附方案在细胞(例如，hepg2或huh7细胞)中测量ldl摄取和ldlr表达。
[0598]
通过流式细胞分析进行荧光-ldl摄取分析
[0599]
将细胞，例如huh7、fl83b，或用短发夹pcsk9敲低序列转染的细胞系，例如huh7/shpcsk9或fl83b/shpcsk9，在37℃下接种并培养12-24小时。去除培养基并更换为新鲜的补充有5μg/ml的荧光标记的ldl的脂蛋白耗尽的培养基，或补充有5μg/ml的荧光标记的ldl加一定浓度的重组pcsk9(例如5μg/ml的重组pcsk9；cayman chemical，cat.#20631)的脂蛋白耗尽的培养基。荧光标记的ldl的实例包括：dii-ldl(kalen biomedical)，或与dylight缀合的ldl(例如，ldl-dylight 488，或ldl-dylight 550(caymanchemical，cat.#10011229))。脂蛋白耗尽的培养基由含有10％脂蛋白耗尽的胎牛血清(kalen biomedical)并补充有青霉素-链霉素(life technologies)的dmem(invitrogen)组成。根据benjannet等，“effects of the prosegment and ph on the activity of pcsk9:evidence for additional processing events”j biol chem.285(52):40965-40978(2010)(其全文以引用方式引入)改编的方案，向细胞施用小分子测试化合物，剂量范围为0nm至100μm。
[0600]
在指定长度的孵育期后，例如16小时，将脂蛋白耗尽的培养基移除并用冲洗溶液(dulbecco磷酸盐缓冲盐水(d-pbs，life technologies)，补充有0.5％的牛血清白蛋白(bsa，sigma)和1g/l葡萄糖(sigma))冲洗三次。然后移除流体，并使用tryple express(life technologies)按照制造商推荐的程序从平板中释放细胞，例如在37℃下孵育5-10分钟。然后将tyrple-cell悬浮液转移到15ml锥形管中，使用补充有0.5％的bsa和1g/ml的葡萄糖的d-pbs将体积增加至2ml，并将管以250x重力离心10分钟。离心后，吸出上清液，并将细胞沉淀重悬浮在300μl的pbs中，并用4',6-二脒基-2-苯基吲哚(dapi，cayman chemical)作为细胞活力标志物复染色，其他细胞活力标志物，如7-氨基放线菌素d(7aad，life technologies)也在本领域中有所描述。
[0601]
根据制造商的操作手册，使用流式细胞仪分析细胞的7aad(死细胞)和活细胞中的荧光ldl。相对于对照(无化合物)样本，与作为pcsk9抑制剂的小分子化合物一起孵育的细胞预期显示出增加量的ldl荧光，而相对于对照(无化合物)样本，与作为pcsk9激活剂的小分子化合物一起孵育的细胞预期显示出降低量的ldl荧光。
[0602]
ldl-摄取ec50提供如下： ：《0.5μm； ：0.5-1μm； ：》1μm。所选化合物的ldl摄取ec50列于表7中。
[0603][0604][0605]
biodesy直接结合测量
[0606]
可以使用可商购的biodesy delta系统(bds,http://www.biodesy.com/products/；august 1,2018得到)测量直接结合。bds是一种基于激光的方法，它利用标记蛋白质的二次谐波产生来检测配体结合，该方法由美国专利号9,395,358和8,932,822涵盖和描述，并已被biodesy inc.(south san francisco,ca)商业化。在该测定中，化合物1,001表现出δshg》10％。
[0607]
微粒体稳定性分析
[0608]
微粒体稳定性测定如下：
[0609]
在37℃下在96孔微量滴定板中进行该测定。反应混合物(25μl)含有终浓度为1μm的测试化合物、0.5mg/ml的肝微粒体蛋白和1mm的nadph和/或1mm udpga(含丙甲菌素)，在具有3mm的mgcl2的100mm磷酸钾，ph7.4的缓冲液中。在每一个时间点(例如0、15、30和60分钟)，将150μl淬灭溶液(100％乙腈与0.1％甲酸)与内标转移到每一个孔中。除了零分钟对照外，还可以制备含有除nadph以外的相同组分的混合物作为阴性对照。包含维拉帕米作为阳性对照以验证测定性能。将板密封、涡旋并在4℃下以4000rpm离心15分钟。将上清液转移到新板中进行lc/ms/ms分析。代谢的程度计算为测试化合物的消失，与0分钟温育时间相比。对于化合物浓度计算初始速率并用于测定t
1/2
值。
[0610]
测量的微粒体稳定性的总结呈现在表8中：
[0611]
[0612][0613]
实施例3：体内pk和功效
[0614]
这项工作的所有方面，包括饲养、实验和动物处置，总体一按照“guide for the care and use of laboratory animals:eighth edition”(national academies press,washington,d.c.,2011)进行。
[0615]
测试了代表性化合物(化合物1041)在小鼠中的口服生物利用度和功效。雄性c57bl/6小鼠购自taconic biosciences(rensselaer，new york)并在标准条件下饲养，除了提供高脂肪饮食(#td.90221,envigo,madison，wi)和随意饮水。在适应饮食4周后，动物给予化合物或给予载体作为对照样本。在10-15分钟的超声处理下，化合物容易地以1.5mg/ml溶解在1％的tween-80水性溶液中。该溶液以1.5mg/ml浓度用于口服(po)给药或进一步用无菌盐水稀释用于静脉(iv)给药。
[0616]
测试动物通过iv以3mg/kg或通过po以15mg/kg接受单剂量，而对照动物分别通过iv或po接受等体积的载体对照。在0.25、5、1、2、3、6、8、24和48小时收集血浆样品，而在8、24和48小时收集肝脏样本，并且按照标准方案通过lc-ms/ms测量药物浓度。
[0617]
简而言之，血液立即离心，将所得血浆冷冻并储存在-80℃下直至分析。收获来自每一只动物的肝脏，称重、冷冻并储存在-80℃下直至分析。根据标准方案按照常规方法(quintara discovery，hayward，ca)通过液相色谱-串联质谱(lc-ms/ms)测定化合物浓度。总而言之，肝脏样品在两体积的冰冷水中匀浆，然后使用100ul含有特非那定内标的乙腈提取20ul的每种血浆或肝脏匀浆样品。将混合物搅拌15分钟，然后以4000rpm离心15分钟。将上清液的50ul等分试样与100ul水混合用于注入lc-ms/ms，并使用正电喷雾电离测量提取物。使用phoenix
tm
软件(pharsight corporation,st.louis,mo)通过非房室分析生成化合物的药代动力学参数。比较3mg/kg iv和15mg/kg po，结果表明代表性化合物的口服生物利用度(f％)为44％。3mg/kg的iv施用在血浆中测得的化合物半衰期为4.8小时，po施用的15mg/kg测得的在血浆中的化合物半衰期为9.8小时。
[0618]
使用由idexx bioanalytics(north grafton，ma)提供的市售兽医健康测试服务测量血清脂质水平。从动物收集血液样本，将所得血清冷冻并储存在-80℃下直至分析。使用rodent lipid panel(测试代码#6290)的商业服务标准程序测量样品。脂质结果显示，如在给药48小时后测量的，相对于iv载体对照组，单一3mg/kg iv剂量导致ldl降低19％(t检验，p《0.05)，而给药后48小时测量的，相对于po载体对照组，15mg/kg po剂量导致ldl降低32％(t检验，p《0.05)。当通过po每天以15mg/kg施用化合物时，ldl在48小时显示32％的降低(在t＝0和t＝24小时再次给药)和ldl在72小时降低50％(在t＝0，t＝24，和t＝48小时给药)。这些数据一起提供了直接的实验实施例，表明代表性化合物是口服生物可利用的，并且在哺乳动物测试受试者体内降低ldl胆固醇水平方面是有效的。
[0619]
为了评估化合物暴露后的动物健康，通过idexx bioanalytics(north grafton，
ma)测试肝脏组(测试代码#60405)。与po载体对照动物相比，暴露于三个单独的每日15mg/kg po剂量的化合物的动物的肝脏组的结果显示在72小时在组中没有明显的毒性。同样值得注意的是，po载体中肝脏组中的ast和alt水平升高，这归因于研究中使用的高脂肪饮食(envigo，#td.90221)。与载体对照组相反，每天用15mg/kg po治疗的72小时组显示ast水平降低72.1％，和alt水平降低77.7％，并表明在用化合物重复治疗后肝功能得到改善。这些数据提供了直接的实验证据，表明化合物逆转高脂肪饮食引起的肝损伤，并因此可用于治疗肝病或肝功能障碍，包括如非酒精性脂肪肝病的病症。
[0620]
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[0621]
因此，应当理解，虽然已经通过示例性实施方式和任选特征具体公开了本发明，但是本领域技术人员可以实施对公开的实施方式的修改、改进和变化，并且这样的修改、改进和变化被认为在本公开和权利要求的范围内。这里提供的材料、方法和实施例是优选实施方式的代表，是示例性的，并不旨在限制本公开的范围，也不旨在限制所附权利要求的范围。
[0622]
在此提及的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献均通过引用明确地整体并入，其程度与每一个单独通过引用并入一样。如有冲突，以本说明书(包含定义)为准。
[0623]
应当理解，虽然已经结合上述实施方式描述了本公开，但前述描述和实施例旨在说明而不是限制本公开的范围。本公开范围内的其他方面、优点和修改对于本公开所属领域的技术人员将是显而易见的。