咪唑-2-甲胺类衍生物及其医药用途

1.本发明属于生物医药领域，具体涉及一种咪唑-2-甲胺类衍生物及其医药用途。


背景技术：

2.转化生长因子β(transforming growth factorβ,tgf-β)是一种多功能细胞因子，以自分泌、旁分泌和内分泌的方式通过细胞表面复杂的受体信号传导途径参与细胞增殖、分化和凋亡的调节。除tgf-β外，活化素(activins)、抑制素(inhibins)、骨形态发生蛋白(bonemorphogenetic proteins)和谬氏抑制物质(mullerian-inhibiting substance)等多种相关蛋白均属于转化生长因子β超家族(tgf-βsuperfamily,tgf-ps)。
3.tgf-β有3种主要的细胞受体：i型(tgf-βr i，又称alk5，即activin-like kinase5)、ii型(tgf-βr ii)和iii型受体(tgf-βr iii)。i型和ii型受体是跨膜丝氨酸/苏氨酸激酶，二者均直接传导信号，而iii型受体不直接传导信号，其功能主要是将tgf-β呈递给ii型受体，通过为受体ii提供配体而间接地影响信号传导。tgf-β主要介导tgf-β-smad信号通路，smad蛋白家族是近年来发现的细胞内信号转导蛋白，已知人体内有8种smad蛋白分子。以蛋白复合物形式存在的非活性tgf-β经过激活后，在细胞表面与ii型受体和i型受体结合并形成一个双二聚体受体复合物，ii型受体进而磷酸化激活i型受体，i型受体紧接着磷酸化所连接的smad2/3，促使smad2/3释放到胞浆中，与smad4蛋白形成复合体转移到细胞核内，从而结合不同的转录因子和转录共激活剂或共抑制剂，调节tgf-β靶基因的转录，产生生物效应。
4.tgf-β-smad信号通路对细胞的增殖、分化、凋亡、附着、迀移、细胞外基质的合成、创伤的修复、免疫功能等都有重要的调节作用(nature 2003,425,577)。研究表明，异常的tgf-β信号和许多种疾病相关，比如癌症、肾纤维化、肝纤维化、肺纤维化、病毒感染、慢性肾炎、急性肾炎、糖尿病肾病、骨质疏松症、关节炎、伤口愈合、溃疡、角膜创伤、心脏瓣膜狭窄、充血性心脏坏死、神经功能损伤、阿尔兹海默综合征、腹膜或皮下粘连、动脉硬化症和肿瘤转移生长等。作为tgf-β信号通路中的重要节点，alk5是治疗这些疾病的潜在靶点。通过抑制alk5对其下游蛋白smad2或smad3的磷酸化，可以阻断或部分阻断tgf-β信号向细胞内的传递，从而纠正异常的tgf-β信号，有望治疗和预防各种alk5介导的疾病(nat.rev.drug discov.2012,11,790-811；pharmacol.therapeut.2015,147,22-31)。现有技术文件，例如：w02012002680，w02009022171，w02009133070,w02004048383,w02004013135,w02002094833等，已公开了一些作为alk5抑制剂的化合物。现存抑制剂对于具有一定的alk5的抑制活性，但是通过alk5这一靶点用于治疗纤维化疾病的专利或者临床在研药物较少。同时，现有化合物与ew7197相比，并不能达到与之相当的ic50，且缺乏良好的生物利用度。


技术实现要素：

5.发明目的：为解决目前临床上缺乏强效且药代动力学性质良好的pparα/δ双重激动剂这一问题，本发明提供一种新型alk5抑制剂咪唑-2-甲胺类衍生物，其对于alk5具
有非常好的抑制活性，同时体外活性显示出本发明的化合物对于纤维化疾病的治疗具有良好的前景。
6.本发明提供一类新型alk5抑制剂及其在治疗或预防由alk5介导的多种疾病的用途。
7.技术方案：为了实现上述目的，本发明提供一种如式i所示的咪唑-2-甲胺衍生物、其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物、氘代物或前药：
[0008][0009]
r1选自取代或未取代的芳基、烷基、环烷基；
[0010]
r2选自取代或未取代的芳基；
[0011]
r3选自cn、conh2、conhnh2、c(nh)nhoh、取代或未取代的酰氨基、n-取代氨甲酰基、烷氧羰基、取代或未取代的烷基；
[0012]
w是ch或者n。
[0013]
作为优选，所述咪唑-2-甲胺衍生物、其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物、氘代物或前药中r1选自取代或未取代的苯基、萘基、环戊基、环己基、四氢吡喃甲基；r2选自取代或未取代的苯基、吡啶基；r3选自cn、conh2、conhnh2、c(nh)nhoh、取代或未取代的酰氨基、n-取代氨甲酰基、烷氧羰基、取代或未取代的氨甲基、杂芳基；w是ch或者n。
[0014]
作为优选，所述咪唑-2-甲胺衍生物、其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物、氘代物或前药选自如下化合物中的任意一种：
[0015]
[0016]
[0017]
[0018]
[0019]
[0020]
[0021]
[0022]
[0023]
[0024][0025]
其中，所述咪唑-2-甲胺衍生物的盐包括所述衍生物与金属离子或药学上可接受的胺或铵离子形成的盐。本发明式i化合物可与酸形成药学上可接受的盐，所述的酸包括但不限于半乳糖二酸、d-葡糖醛酸、甘油磷酸、马尿酸、羟乙磺酸、乳糖酸、马来酸、1,5-萘二磺酸、萘-2-磺酸、新戊酸、对苯二甲酸、硫氰酸、胆酸、正十二烷基硫酸、苯磺酸、柠檬酸、d-葡萄糖，乙醇酸、乳酸、苹果酸、丙二酸、扁桃酸、磷酸、丙酸、盐酸、硫酸、酒石酸、琥珀酸、甲酸、氢碘酸、氢溴酸、甲烷磺酸、烟酸、硝酸、乳清酸、草酸、苦味酸、l-焦谷氨酸、糖精酸、水杨酸、
龙胆酸、对甲苯磺酸、戊酸、棕榈酸、葵二酸、硬脂酸、月桂酸、乙酸、己二酸、碳酸、苯磺酸、乙烷二磺酸、乙基琥珀酸、富马酸、3-羟基萘-2-甲酸、1-羟基萘-2-甲酸、油酸、十一碳烯酸、抗坏血酸、樟脑酸、樟脑磺酸、二氯乙酸、乙烷磺酸；式i化合物也可与无机碱形成药学上可接受的金属(包括但不限于钠、钾、钙)离子盐或铵离子盐，或与有机碱(包括但不限于乙二胺、氨丁三醇、胆碱)形成药学上可接受的盐。
[0026]
本发明所述的咪唑-2-甲胺衍生物、其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物、氘代物或前药在制备alk5抑制剂中的应用。
[0027]
本发明所述的咪唑-2-甲胺衍生物、其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物、氘代物或前药在制备预防或治疗alk5介导的疾病的药物中的用途。
[0028]
其中，所述alk5介导的疾病包括但不限于癌症、器官纤维化、病毒感染、慢性肾炎、急性肾炎、糖尿病肾病、骨质疏松症、关节炎、伤口愈合、溃疡、角膜创伤、心脏瓣膜狭窄、充血性心脏坏死、神经功能损伤、阿尔兹海默综合征、腹膜或皮下粘连、动脉硬化症和肿瘤转移生长中的一种或多种，优选癌症或器官纤维化。所述的癌症包括但不限于结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、脑癌、卵巢癌、子宫颈癌、睾丸癌、肾癌、头或颈癌、骨癌、皮肤癌、直肠癌、肝癌、结肠癌、食道癌、胃癌、胰腺癌、甲状腺癌、膀胱癌、淋巴瘤、白血病和黑色素瘤。所述的器官纤维化包括但不限于肾纤维化、肝纤维化和肺纤维化。
[0029]
本发明所述的预防或治疗alk5介导的疾病的药物组合物，所述的咪唑-2-甲胺衍生物、其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物、氘代物或前药作为活性成分和药学上可接受的辅料。
[0030]
其中，所述药物组合物为胶囊剂、散剂、片剂、颗粒剂、丸剂、注射剂、糖浆剂、口服液、吸入剂、软膏剂、栓剂或贴剂。
[0031]
本发明的咪唑-2-甲胺类衍生物均为未见报道的新化合物，并具有强效的alk5抑制活性，代表了一类新结构类型alk5抑制剂，可用于制备治疗或预防alk5介导的疾病的药物。
[0032]
本发明通过特定的药物设计发现，本发明化合物对于alk5蛋白具有良好的相互作用。本发明化合物利用discover studio和薛定谔软件进行对接，发现其对于his283，lys232，tyr249，lys337等关键部位具有氢键作用。同时体外活性测试也证明了化合物的确实具有良好的抑制活性。与ew7197相比，本化合物存在的氰基和初级酰胺基团可以提高水溶性和良好的代谢稳定性。
[0033]
有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下优点：
[0034]
(1)本发明提供咪唑-2-甲胺类化合物衍生物，在酶活性测试中，表现出对alk5具有显著的酶抑制活性；
[0035]
(2)在人肝癌hepg2细胞中对tgf-β/smad信号通路的抑制活性表现优异，且部分化合物的活性显著优于vactosertib(ew-7197)；
[0036]
(3)在lx-2细胞中对于col1a1基因表达的抑制具有显著效果，且部分化合物的活性显著优于vactosertib(ew-7197)。
[0037]
(4)本发明的咪唑-2-甲胺类化合物衍生物对alk5抑制活性与ew7197相当，并且在lx-2细胞活性上显示出优于ew7197的良好活性，对于肺纤维化的治疗具有良好的前景，可以弥补这一市场空白，具有非常良好的成药潜力。
[0038]
(5)本发明的咪唑-2-甲胺类化合物衍生物设计巧妙，结构简单，原料便宜易得，合成工艺安全、环保，易于规模化生产。
附图说明
[0039]
图1为化合物对tgf-β诱导下lx-2细胞中col1a1基因表达的影响。
具体实施方式
[0040]
下面通过实施例具体地说明本发明的内容。在本发明中，以下所述的实施例是为了更好的阐述本发明，并不是用来限制本发明的范围。在不背离本发明的精神和范围的前提下，可以对本发明进行各种变化和修饰。
[0041]
实施例1
[0042]
6-(2-((2-氟苯基)氨基)甲基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲腈(化合物1)
[0043][0044]
将2-氨基-5-溴吡啶(10g，57.8mmol)和n,n-二甲基甲酰胺二甲基缩醛(8.26g，63.96mmol)溶于异丙醇(30ml)，升温至80℃，搅拌3h，tlc指示反应结束后，减压蒸除溶剂，加入正己烷(20ml)打浆过夜，抽滤得中间体1-1的白色固体粗品(10.11g，粗品收率76％)。
[0045]
取中间体1-1的粗品(2g，8.77mmol)、溴乙腈(1.58g，13.15mmol)、碳酸氢钠(1.47g，17.54mmol)和碘化钾(145mg，0.877mmol)置于dmf(20ml)中，升温至50℃，搅拌过夜。tlc检测反应结束后，向反应液加水(20ml)，搅拌过夜，抽滤收集固体，红外烘干，得中间
体1-2的浅棕色固体粗品(1.45g，粗品收率75％)。
[0046]
取中间体1-2的粗品(3.2g，14.41mmol)、三甲基乙炔基硅(1.7g，17.29mmol)、碘化亚铜(274mg，1.441mmol)和双三苯基膦二氯化钯(500mg，0.432mmol)置于无水四氢呋喃(20ml)中。缓慢加入二异丙基胺(2.19g，21.6mmol)，15分钟加完。室温搅拌过夜，tlc检测反应结束后，经硅藻土抽滤，滤饼以乙酸乙酯(10ml
×
3)洗涤三次，收集滤液，以饱和食盐水洗涤三次(15ml
×
3)。分出有机相，以无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10:1)，得中间体1-3的棕褐色固体(2g，收率62％)。
[0047]
将中间体1-3(100mg，0.418mmol)溶于四氢呋喃(5ml)，缓慢加入四丁基氟化铵(120mg，0.46mmol)，室温搅拌30分钟。tlc检测反应结束后，加水稀释反应液，以乙酸乙酯(15ml
×
3)萃取三次，分出有机相，以无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂得中间体1-4的浅棕色固体粗品(85mg，粗品收率100％)。
[0048]
取中间体1-4的粗品(1.04g，6.23mmol)、2-溴-6-甲基吡啶(2.14g，12.45mmol)、碘化亚铜(119mg，0.623mmol)和双三苯基膦二氯化钯(216mg，0.187mmol)置于无水四氢呋喃(20ml)中，缓慢加入二异丙基胺(1.26g，12.46mmol)，15分钟加完。升温至65℃，搅拌2小时。tlc检测反应结束后，反应液经硅藻土抽滤，滤饼经乙酸乙酯(10ml
×
3)洗涤三次，收集母液，以饱和食盐水洗涤三次(15ml
×
3)，分出有机相，以无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝5:1)，得中间体1-5的淡黄色固体(610mg，收率40％)。
[0049]
取中间体1-5(50mg，0.194mmol)溶于无水dmso(10ml)，加入二氯化钯(4mg，0.0194mmol)，升温至140℃，在ar气氛围下回流搅拌过夜。tlc检测反应结束后，反应液加水稀释(15ml)，以乙酸乙酯(15ml
×
3)萃取三次。合并有机相，以饱和食盐水洗涤三次(15ml
×
3)，经无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝5:1)，得中间体1-6的淡黄色固体(30mg，53％)。
[0050]
取中间体1-6(120mg，0.413mmol)、乙酸铵(96mg，0.620mmol)和乙二醛-1,1-二甲基乙缩醛(65mg，0.620mmol)溶于四氢呋喃(5ml)和甲醇(5ml)的混合溶液中，常温搅拌3小时。tlc检测反应结束后，反应液以乙酸乙酯稀释(20ml)，经饱和食盐水洗涤三次(15ml
×
3)。分出有机相，经无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1:1)，得中间体1-7的淡黄色固体(120mg，收率77％)。
[0051]
取中间体1-7(120mg，0.317mmol)置于1n hcl水溶液(5ml)中，升温至70℃，搅拌30分钟，tlc检测反应结束后，以饱和碳酸氢钠(5ml)调ph至弱碱性，以乙酸乙酯萃取三次(15ml
×
3)，合并有机相，以无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝15:1)，得中间体1-8的白色固体(100mg，收率90％)。
[0052]
将中间体1-8(50mg，0.152mmol)和邻氟苯胺(34mg，0.305mmol)溶于1,2-二氯乙烷，加入冰醋酸20ul，升温至70℃，回流8小时，tlc检测反应结束后，减压蒸除溶剂。残留物用乙酸乙酯(10ml)溶解，以饱和碳酸氢钠水溶液洗涤(5ml
×
3)三次，用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，得中间体1-9的浅棕色固体粗品(52mg)。
[0053]
取中间体1-9的粗品(52mg，0.122mmol)溶于四氢呋喃(3ml)和甲醇(3ml)的混合溶液中，在冰浴条件下分批加入硼氢化钠(20mg，0.488mmol)，搅拌2小时，tlc检测反应结束后，加入乙酸乙酯(15ml)稀释反应液，有机相经饱和食盐水洗涤三次(10ml
×
3)，用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝15:1)，得化合物1的白色固体
(33mg，两步收率65％)。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ8.99(s,1h),8.28(s,1h),7.73(dt,j＝10.8,9.2hz,3h),7.40(s,1h),7.21(d,j＝7.8hz,1h),6.98(dd,j＝13.6,7.1hz,2h),6.84(t,j＝7.7hz,1h),6.65(dd,j＝12.6,6.4hz,1h),4.57(s,2h),2.54(s,3h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
24h18
fn7[m h]

424.1608,found424.1684。
[0054]
实施例2
[0055]
6-(2-((3-氟苯基)氨基)甲基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲腈(化合物2)
[0056][0057]
参照化合物1的合成，将邻氟苯胺替换为间氟苯胺，制得化合物2。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ9.00(s,1h),8.28(s,1h),7.74(dd,j＝21.6,10.2hz,3h),7.41(s,1h),7.22(d,j＝7.7hz,1h),7.10(dd,j＝15.0,7.9hz,1h),6.53(d,j＝8.1hz,1h),6.46(d,j＝11.8hz,1h),6.36(t,j＝8.3hz,1h),4.50(s,2h),2.55(s,3h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
24h18
fn7[m h]

424.1608,found 424.1684。
[0058]
实施例3
[0059]
6-(2-((4-氯苯基)氨基)甲基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲腈(化合物3)
[0060][0061]
参照化合物1的合成，将邻氟苯胺替换为对氯苯胺，制得化合物3。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ9.00(s,1h),8.28(s,1h),7.96
–
7.63(m,3h),7.42(s,1h),7.22(d,j＝7.4hz,1h),7.10(d,j＝8.3hz,2h),6.71(d,j＝8.2hz,2h),4.49(s,2h),2.54(s,3h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
24h18
cln7[m h]

440.1312,found 440.1388。
[0062]
实施例4
[0063]
6-(2-((3-氯苯基)氨基)甲基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲腈(化合物4)
[0064][0065]
参照化合物1的合成，将邻氟苯胺替换为对氯苯胺，制得化合物4。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ9.00(s,1h),8.28(s,1h),7.79(s,1h),7.76
–
7.59(m,2h),7.41(s,1h),7.21(d,j
＝7.7hz,1h),7.09(t,j＝8.0hz,1h),6.75(s,1h),6.65(t,j＝5.2hz,2h),4.49(s,2h),2.54(s,3h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
24h18
cln7[m h]

440.1312,found 440.1389。
[0066]
实施例5
[0067]
6-(2-((3-氰基苯基)氨基)甲基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲腈(化合物5)
[0068][0069]
参照化合物1的合成，将邻氟苯胺替换为间氨基苯甲腈，制得化合物5。1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ12.79(s,1h),9.28(s,1h),8.47(s,1h),7.97(s,1h),7.86(d,j＝11.9hz,1h),7.78(d,j＝14.0hz,1h),7.43(d,j＝7.6hz,1h),7.30(d,j＝7.8hz,1h),7.27
–
7.17(m,1h),7.09(s,1h),7.05(d,j＝8.3hz,1h),6.97(d,j＝7.2hz,1h),6.74(s,1h),4.42(s,2h),2.57(s,3h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
25h18
n8[m h]

431.1654,found 431.1734。
[0070]
实施例6
[0071]
6-(2-((2-氟苯基)氨基)甲基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(化合物6)
[0072][0073]
取化合物5(30mg，0.071mmol)溶于dmso(5ml)，加入碳酸钾(5mg，0.036mmol)，冰浴条件下加入30％过氧化氢(8ul，0.078mmol)，缓慢升至室温，搅拌过夜。tlc检测反应结束，加入饱和食盐水(5ml)，黄色固体析出。抽滤得化合物18的粗品，粗品经过进一步柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝15:1)得化合物6(15mg，淡黄色固体)。1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ12.57(s,1h),9.87(s,1h),8.34(s,1h),7.95(s,1h),7.76
–
7.55(m,3h),7.27(d,j＝7.9hz,1h),7.14(d,j＝7.5hz,1h),7.06(d,j＝8.7hz,1h),6.99(d,j＝9.5hz,1h),6.95
–
6.82(m,1h),6.60(s,1h),5.94(s,1h),4.45(s,2h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
24h20
fn7o[m h]

442.1713,found 442.1789。
[0074]
实施例7
[0075]
6-(2-((3-氟苯基)氨基)甲基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(化合物7)
[0076][0077]
参照化合物6的合成，将邻氟苯胺替换为间氟苯胺，制得化合物7。1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ12.66(s,1h),9.88(s,1h),8.33(s,1h),7.93(s,1h),7.79
–
7.55(m,3h),7.52
–
7.23(m,1h),7.12(dd,j＝15.9,7.8hz,2h),6.52(dd,j＝11.6hz,3h),6.33(s,1h),4.36(s,2h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
24h20
fn7o[m h]

442.1713,found 442.1792。
[0078]
实施例8
[0079]
6-(2-((4-氯苯基)氨基)甲基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(化合物8)
[0080][0081]
参照化合物6的合成，将邻氟苯胺替换为对氯苯胺，制得化合物8。1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ12.73(s,1h),9.89(s,1h),8.36(s,1h),7.97(s,1h),7.83
–
7.51(m,2h),7.35(dd,1h),7.21
–
6.97(m,2h),6.77(d,2h),6.40(s,1h),4.36(s,2h)。hrms m/z(esi)calcd.for c
24h20
cln7o[m h]

458.1418,found 458.1496。
[0082]
实施例9
[0083]
6-(2-((3-氯苯基)氨基)甲基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(化合物9)
[0084][0085]
参照化合物6的合成，将邻氟苯胺替换为间氯苯胺，制得化合物9。1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ12.88(s,1h),9.91(s,1h),8.40(s,1h),8.00(s,1h),7.65(t,j＝7.8hz,3h),7.39(d,j＝7.9hz,2h),7.10(dd,j＝17.9,8.0hz,2h),6.78(s,1h),6.75
–
6.50(m,3h),4.38(s,2h)。hrms m/z(esi)calcd.for c
24h20
cln7o[m h]

458.1418,found 458.1498。
[0086]
实施例10
[0087]
6-(2-(((1r，2s)-2-羟基-2,3-二氢-1h-茚-1-基)氨基)甲基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲腈(化合物10)
[0088][0089]
参照化合物1的合成，将邻氟苯胺替换为(1r，2s)-1-氨基-2-茚醇，制得化合物10。1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ12.71(s,1h),9.31(s,1h),8.47(d,1h),7.98(d,1h),7.87(dd,1h),7.76(d,1h),7.58
–
7.36(m,1h),7.30
–
7.02(m,3h),5.11(s,1h),4.43(s,1h),4.05(s,2h),3.12
–
2.72(m,2h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
27h23
n7o[m h]

462.1964,found 462.2032。
[0090]
实施例11
[0091]
6-(2-((3-氟苯基)氨基)甲基)-5-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲腈(化合物11)
[0092][0093]
将2-氨基-5-溴吡啶(10g，57.8mmol)、n,n-二甲基甲酰胺二甲基缩醛(8.26g，63.96mmol)溶于异丙醇(30ml)，升温至80℃。搅拌3小时，tlc指示反应结束后，减压蒸除溶剂，加入正己烷(20ml)打浆过夜，抽滤得中间体11-1的白色固体粗品(10.11g，粗品收率76％)。
[0094]
取中间体11-1的粗品(2g，8.77mmol)、溴乙腈(1.58g，13.15mmol)、碳酸氢钠(1.47g，17.54mmol)和碘化钾(145mg，0.877mmol)置于dmf(20ml)，升温至50℃，搅拌过夜。tlc检测反应结束后，向反应液加水(20ml)搅拌过夜。抽滤得收集固体。红外条件下烘干，得
中间体11-2的浅棕色固体粗品(1.45g，粗品收率75％)。
[0095]
取中间体11-2(3.2g，14.41mmol)、三甲基乙炔基硅(1.7g，17.29mmol)、碘化亚铜(274mg，1.44mmol)和双三苯基膦二氯化钯(500mg，0.43mmol)置于无水四氢呋喃(20ml)中。缓慢加入二异丙基胺(2.19g，21.60mmol)，15分钟加完。室温搅拌过夜，tlc检测反应结束后，经硅藻土抽滤，滤饼以乙酸乙酯(10ml
×
3)洗涤三次，收集滤液，以饱和食盐水洗涤三次(15ml
×
3)。分出有机相，以无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10:1)，得中间体11-3的棕褐色固体(2g，收率62％)。
[0096]
取中间体11-3(100mg，0.42mmol)溶于四氢呋喃(5ml)，缓慢加入四丁基氟化铵(120mg，0.46mmol)，室温搅拌30分钟。tlc检测反应结束后，加水稀释反应液，以乙酸乙酯(15ml
×
3)萃取三次，分出有机相，以无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂得中间体11-4的浅棕色粗品(85mg，粗品收率100％)。
[0097]
取中间体11-4的粗品(3.22g，19.28mmol)、2-溴-6-三氟甲基吡啶(6.54g，28.92mmol)、碘化亚铜(367.2mg，1.928mmol)、双三苯基膦二氯化钯(407mg，0.58mmol)置于无水四氢呋喃(30ml)，缓慢加入二异丙胺(3.9g，38.56mmol)，30分钟加完。混合物在氩气氛围下加热回流4小时。tlc检测反应结束后，反应液冷却至室温，经硅藻土抽滤，滤饼以乙酸乙酯(15ml
×
3)洗涤三次，收集母液，以饱和食盐水(20ml
×
3)洗涤三次，分出有机相，以无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10：1)得中间体11-5的淡黄色固体(2.66g，收率44％)。
[0098]
取中间体11-5(50mg，0.194mmol)溶于无水dmso(10ml)，加入二氯化钯(4mg，0.0194mmol)，升温至140℃，在ar气氛围下回流搅拌过夜。tlc检测反应结束后，反应液加水稀释(15ml)，以乙酸乙酯(15ml
×
3)萃取三次。合并有机相，以饱和食盐水洗涤三次(15ml
×
3)，经无水硫酸钠干燥有机相，浓缩，柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝5:1)，得中间体11-6的淡黄色固体(30mg，收率53％)。
[0099]
取中间体11-6(120mg，0.413mmol)、乙酸铵(96mg，0.620mmol)和乙二醛-1,1-二甲基乙缩醛(65mg，0.620mmol)溶于四氢呋喃(5ml)和甲醇(5ml)的混合溶液，常温搅拌3小时。tlc检测反应结束后，反应液以乙酸乙酯稀释(20ml)，经饱和食盐水洗涤三次(15ml
×
3)。分出有机相，经无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1:1)纯化，得中间体11-7的淡黄色固体(120mg，收率77％)。
[0100]
取中间体11-7(120mg，0.28mmol)置于1n hcl水溶液(5ml)中，升温至70℃，搅拌30分钟，tlc检测反应结束后，以饱和碳酸氢钠(5ml)调ph至弱碱性，以乙酸乙酯萃取三次(15ml
×
3)，合并有机相，以无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝15:1)，得中间体11-8的白色固体(100mg，收率90％)。
[0101]
取中间体11-8(100mg，0.262mmol)和间氟苯胺(58mg，0.523mmol)溶于二氯乙烷(5ml)，滴加乙酸(20ul)，升温至70℃，回流搅拌8小时，tlc检测反应结束后，减压蒸除溶剂。残留物加入乙酸乙酯(10ml)稀释，以饱和碳酸氢钠水溶液洗涤(5ml
×
3)三次，用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，得中间体11-8的浅棕色粗品(110mg)。
[0102]
取中间体11-9(110mg，0.23mmol)溶于四氢呋喃(3ml)和甲醇(3ml)的混合溶液中，在冰浴条件下分批加入硼氢化钠(40mg，1.048mmol)。搅拌2小时，tlc检测反应结束后，反应液加入乙酸乙酯稀释(10ml)，有机相饱和食盐水(10ml
×
3)洗涤三次，用无水硫酸钠干燥，
减压蒸除溶剂，柱层析(二氯甲烷/甲醇＝100:1)纯化产物，得化合物11的白色固体(97mg，两步收率65％)。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ8.85(s,1h),8.31(s,1h),8.03(dd,2h),7.79(dd,j＝23.4,9.3hz,2h),7.66(d,j＝4.5hz,1h),7.11(dd,j＝15.0,7.9hz,1h),6.54(d,j＝8.5hz,1h),6.47(dd,j＝11.9hz,1h),6.37(t,j＝8.3hz,1h),4.52(s,2h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
24h15
f4n7[m h]

478.1325,found 478.1393。
[0103]
实施例12
[0104]
6-(2-((3-氟苯基)氨基)甲基)-5-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(化合物12)
[0105][0106]
取化合物11(75mg，0.16mmol)和碳酸钾(11mg，0.08mmol)置于dmso(5ml)，在冰浴条件下缓慢加入30％过氧化氢水溶液(20ul，0.19mmol)。常温条件下搅拌过夜，tlc检测反应结束后，加水稀释(10ml)反应液，以乙酸乙酯(10ml
×
3)萃取三次，合并有机相，饱和食盐水(10ml
×
3)洗涤三次，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，柱层析纯化产物(二氯甲烷/甲醇＝10:1)得化合物12的淡黄色固体(50mg，收率63％)。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ9.72(s,1h),8.30(s,1h),7.95(d,j＝6.0hz,2h),7.70(q,j＝9.3hz,2h),7.59(d,j＝8.3hz,1h),7.11(dd,j＝15.0,8.0hz,1h),6.53(dd,j＝8.2hz,1h),6.47(dd,j＝11.8hz,1h),6.36(t,j＝8.4hz,1h),4.50(s,2h).hrms(esi)m/z calcd.for c
24h17
f4n7o[m h]

496.1431,found 496.1503。
[0107]
实施例13
[0108]
6-(2-((2-氟苯基)氨基)甲基)-5-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲腈(化合物13)
[0109][0110]
参照实施例11，将间氟苯胺替换为邻氟苯胺，制得化合物13。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ8.85(s,1h),8.31(s,1h),8.03(dd,2h),7.79(dd,j＝23.4,9.3hz,2h),7.66(d,j＝4.5hz,1h),7.11(dd,j＝15.0,7.9hz,1h),6.54(d,j＝8.5hz,1h),6.47(dd,j＝11.9hz,1h),6.37(t,j＝8.3hz,1h),4.52(s,2h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
24h15
f4n7[m h]

478.1325,found 478.1393。
[0111]
实施例14
[0112]
6-(2-((3-氰基苯基)氨基)甲基)-5-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲腈(化合物14)
[0113][0114]
参照实施例11，将间氟苯胺替换为间氨基苯甲腈，制得化合物14。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ8.84(s,1h),8.30(s,1h),8.02(dd,2h),7.83(d,j＝9.3hz,1h),7.75(d,j＝9.4hz,1h),7.66(t,1h),7.29(t,j＝8.1hz,1h),7.04(s,2h),7.02
–
6.92(m,1h),4.55(s,3h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
24h15
f4n7[m h]

485.1372,found 485.1444。
[0115]
实施例15
[0116]
6-(2-((2-氟苯基)氨基)甲基)-5-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(化合物15)
[0117][0118]
参照实施例12，将间氟苯胺替换为邻氟苯胺，制得化合物15。1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ12.80(s,1h),9.70(s,1h),8.34(s,1h),8.05(t,j＝7.3hz,2h),7.96
–
7.80(m,1h),7.63(q,j＝9.4hz,3h),7.35(s,1h),7.15
–
6.93(m,2h),6.87(t,j＝8.5hz,1h),6.59(q,j＝5.4hz,1h),5.99(t,1h),4.47(s,2h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
24h17
f4n7o[m h]

496.1431,found 496.1501。
[0119]
实施例16
[0120]
6-(2-((3-氯苯基)氨基)甲基)-5-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲腈(化合物16)
[0121][0122]
参照实施例11，将化合物间氟苯胺替换为间氯苯胺，制得化合物16。1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ12.96(s,1h),8.84(s,1h),8.48(d,j＝12.4hz,1h),8.26(d,j＝7.3hz,1h),8.18
–
8.03(m,1h),7.97
–
7.60(m,3h),7.11(t,1h),6.79(d,1h),6.69(d,1h),6.62
–
6.39(m,2h),4.41(s,2h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
24h15
clf3n7[m h]

494.1030,found 494.1097。
[0123]
实施例17
[0124]
6-(2-((4-氯苯基)氨基)甲基)-5-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲腈(化合物17)
[0125][0126]
参照实施例11，将化合物间氟苯胺替换为对氯苯胺，制得化合物17。1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ12.94(s,1h),8.86(s,1h),8.48(s,1h),8.23(s,1h),8.11(t,j＝7.5hz,1h),7.82(s,2h),7.74(s,1h),7.13(d,j＝8.7hz,2h),6.73(d,j＝8.7hz,2h),6.41(d,1h),4.39(s,2h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
24h15
clf3n7[m h]

494.1030,found 494.1101。
[0127]
实施例18
[0128]
6-(2-(((1s,2r)-2-羟基-2,3-二氢-1h-茚-1-基)氨基)甲基)-5-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲腈(化合物18)
[0129][0130]
参照实施例11，将化合物间氟苯胺替换为(1s,2r)-(-)-1-氨基-2-茚醇，制得化合物18。1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ12.87(s,1h),8.89(s,1h),8.49(s,1h),8.23(s,1h),8.11(t,1h),7.94
–
7.81(m,2h),7.73(t,1h),7.45(d,1h),7.33
–
7.10(m,3h),5.08(s,1h),4.45(s,1h),4.07(s,2h),3.08
–
2.74(m,2h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
27h20
f3n7o[m h]

516.1681,found 516.1756。
[0131]
实施例19
[0132]
6-(2-((2-氯苯基)氨基)甲基)-5-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(化合物19)
[0133][0134]
参照实施例12，将间氟苯胺替换为邻氯苯胺，制得化合物19。1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ12.88(s,1h),9.71(s,1h),8.34(s,1h),8.06(t,2h),7.89(s,1h),7.73
–
7.54(m,1h),7.36(s,1h),7.10(t,1h),6.77(s,1h),6.69(s,1h),6.61
–
6.44(m,1h),4.39(s,1h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
24h17
clf3n7o[m h]

512.1135,found 512.1209。
[0135]
实施例20
[0136]
6-(2-((4-氯苯基)氨基)甲基)-5-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(化合物20)
[0137][0138]
参照实施例12，将间氟苯胺替换为邻氯苯胺，制得化合物20。1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ12.88(s,1h),9.71(s,1h),8.34(s,1h),8.02(dd,j＝24.4,16.8hz,3h),7.63(q,j＝9.5hz,3h),7.35(s,1h),7.12(d,j＝8.6hz,2h),6.74(d,j＝8.7hz,2h),6.39(t,1h),4.37(d,j＝5.3hz,3h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
24h17
clf3n7o[m h]

512.1135,found 512.1210。
[0139]
实施例21
[0140]
6-(2-(((四氢-2h-吡喃-4-基)甲基)氨基)甲基)-5-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲腈(化合物21)
[0141][0142]
参照实施例11，将间氟苯胺替换为4-氨甲基四氢吡喃，制得化合物21。1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ8.86(s,1h),8.49(s,1h),8.11(t,j＝6.8hz,2h),7.84(s,2h),7.73(d,j＝7.8hz,1h),3.83(t,j＝9.9hz,4h),3.27(t,j＝11.0hz,4h),1.65(d,j＝12.1hz,3h),1.27
–
1.02(m,2h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
24h22
f3n7o[m h]

482.1838,found 482.1915。
[0143]
实施例22
[0144]
6-(2-((环己基氨基)甲基)-5-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲腈(化合物22)
[0145][0146]
参照实施例11，将间氟苯胺替换为环己胺，制得化合物22。1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ8.88(s,1h),8.49(s,1h),8.12(t,2h),7.85(d,2h),7.75(d,j＝7.4hz,1h),4.06(s,2h),2.86
–
2.59(m,4h),1.95(q,j＝24.6hz,3h),1.72(t,2h),1.58(d,j＝8.7hz,1h),1.34
–
1.06(m,4h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
24h22
f3n7[m h]

466.1889,found 466.1964。
[0147]
实施例23
[0148]
6-(2-((萘-1-基甲基)氨基)甲基)-5-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲腈(化合物23)
[0149][0150]
参照实施例11，将间氟苯胺替换为1-萘甲基胺，制得化合物23。1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ12.81(s,1h),8.89(s,1h),8.49(s,1h),8.24(d,j＝7.7hz,2h),8.10(d,j＝7.7hz,1h),7.93(d,j＝7.6hz,2h),7.84(d,j＝7.6hz,3h),7.74(d,1h),7.53(dt,j＝15.3,7.2hz,4h),4.27(s,2h),3.97(s,2h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
29h20
f3n7[m h]

524.1732,found 524.1812。
[0151]
实施例24
[0152]
6-(2-((2-氟苯基)氨基)甲基)-5-(6-甲氧基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲腈(化合物24)
[0153][0154][0155]
将2-氨基-5-溴吡啶(10g，57.80mmol)和n,n-二甲基甲酰胺二甲基缩醛(8.26g，
63.96mmol)溶于异丙醇(30ml)，升温至80℃。搅拌3小时，tlc指示反应结束后，减压蒸除溶剂，加入正己烷(20ml)打浆过夜，抽滤得中间体24-1的白色固体粗品(10.11g，粗品收率76％)。
[0156]
取中间体24-1(2g，8.77mmol)、溴乙腈(1.58g，13.15mmol)、碳酸氢钠(1.47g，17.54mmol)和碘化钾(145mg，0.877mmol)置于dmf(20ml)中，升温至50℃，搅拌过夜。tlc检测反应结束后，向反应液加水(20ml)，搅拌过夜，抽滤收集固体，红外烘干，得中间体24-2的浅棕色固体粗品(1.45g，粗品收率75％)。
[0157]
取中间体24-2的粗品(3.2g，14.41mmol)、三甲基乙炔基硅(1.7g，17.29mmol)、碘化亚铜(274mg，1.441mmol)和双三苯基膦二氯化钯(500mg，0.432mmol)置于无水四氢呋喃(20ml)中。缓慢加入二异丙基胺(2.19g，21.6mmol)，15分钟加完。室温搅拌过夜，tlc检测反应结束后，经硅藻土抽滤，滤饼以乙酸乙酯(10ml
×
3)洗涤三次，收集滤液，以饱和食盐水洗涤三次(15ml
×
3)。分出有机相，以无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10:1)，得中间体24-3的棕褐色固体(2g，收率62％)。
[0158]
取中间体24-3(100mg，0.418mmol)溶于四氢呋喃(5ml)，缓慢加入四丁基氟化铵(120mg，0.46mmol)，室温搅拌30分钟。tlc检测反应结束后，加水稀释反应液，以乙酸乙酯(15ml
×
3)萃取三次，分出有机相，以无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂得中间体24-4的浅棕色固体粗品(85mg，粗品收率100％)。
[0159]
取中间体24-4(1g，5.99mmol)、2-甲氧基-6溴吡啶(2.03g，10.77mmol)、碘化亚铜(115mg，0.6mmol)和双三苯基膦二氯化钯(126mg，0.18mmol)置于无水四氢呋喃(20ml)，缓慢加入二异丙胺(1.22g，1.7ml)，15分钟加完。缓慢升温至65℃，搅拌4小时。tlc检测反应结束后，反应液经硅藻土抽滤，滤饼经乙酸乙酯(15ml
×
3)洗涤三次，合并有机相，以饱和氯化钠水洗(10ml
×
3)次，经无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝15:1)纯化产物，得中间体24-5的类白色固体(720mg，收率43％)。
[0160]
取中间体24-5(140mg，0.51mmol)、二氯化钯(14mg，0.051mmol)溶于无水dmso(10ml)，缓慢升温至140℃，在ar气氛围下回流搅拌过夜。tlc检测反应结束后，反应液经硅藻土抽滤，滤饼经乙酸乙酯(10ml
×
3)洗涤三次，收集母液。母液经饱和食盐水(15ml
×
3)洗涤三次，经无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析纯化产物(石油醚/乙酸乙酯＝5:1)，得中间体24-6的类白色固体(132mg，收率84％)。
[0161]
取中间体24-6(670mg，2.188mmol)、乙二醛-1,1-二甲基乙缩醛(341.6mg，3.281mmol)和乙酸铵(506mg，6.564mmol)置于甲醇(10ml)和四氢呋喃(10ml)的混合溶液，常温搅拌4小时。tlc检测反应结束后，加入乙酸乙酯(20ml)稀释反应液，经饱和食盐水洗涤(15ml
×
3)洗涤三次。分出有机相，经无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝100:1)产物，制得中间体24-7的类白色固体(710mg，收率84％)。
[0162]
取中间体24-7(650mg，1.66mmol)置于1n hcl水溶液(15ml)，升温至70℃，搅拌30分钟，tlc检测反应结束后。反应液冷却至室温，饱和碳酸氢钠(15ml)调ph至弱碱性。白色固体析出，抽滤，滤饼经水洗三遍。红外条件下烘干，得中间体24-8的白色固体(640mg，收率90％)。
[0163]
取中间体24-8(100mg，0.29mmol)和邻氟苯胺(65mg，0.581mmol)溶于二氯乙烷(5ml)，加入20ul冰醋酸，缓慢升温至70℃，回流8小时，tlc检测反应结束后，减压蒸除溶剂。
残留物用乙酸乙酯稀释(15ml)，以饱和碳酸氢钠水溶液洗涤(15ml
×
3)有机相三次，用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，得中间体24-9的棕色固体(110mg)。
[0164]
取中间体24-9的粗品(110mg，0.32mmol)溶于四氢呋喃(5ml)和甲醇(5ml)的混合溶液，在冰浴条件下分批加入硼氢化钠(44mg，1.16mmol)，搅拌2小时。tlc检测反应结束后，乙酸乙酯稀释(20ml)反应液，有机相经饱和食盐水洗(10ml
×
3)三次，用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，柱层析(二氯甲烷/甲醇＝100:1)纯化产物，制得化合物24的白色固体(90mg，两步收率71％)。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ8.77(s,1h),8.29(s,1h),7.77(q,j＝9.4hz,2h),7.65(t,j＝7.9hz,1h),7.23(s,1h),6.98(t,j＝9.0hz,2h),6.85(t,j＝8.1hz,1h),6.67(q,j＝7.4hz,2h),4.57(s,2h),3.66(s,3h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
24h18
fn7o[m h]

440.1557,found 440.1628。
[0165]
实施例25
[0166]
6-(2-((2-氟苯基)氨基)甲基)-5-(6-甲氧基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(化合物25)
[0167][0168][0169]
取化合物24(50mg，0.114mmol)和碳酸钾(6mg，0.170mmol)置于dmso(5ml)，在冰浴条件下缓慢加入30％过氧化氢水溶液(20ul，0.170mmol)，室温条件下搅拌过夜。tlc检测反应结束后，加水稀释(10ml)反应液，乙酸乙酯(15ml
×
3)萃取水相，合并有机相，有机相经饱和食盐水(10ml
×
3)洗涤三次，以无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，柱层析纯化产物(二氯甲烷/甲醇＝20：1)，制得化合物25的白色固体(40mg，收率76％)。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ9.74(s,1h),8.30(s,1h),7.97
–
7.48(m,3h),7.22(s,1h),6.98(dd,j＝13.4,5.6hz,2h),6.86(t,j＝8.6hz,1h),6.65(dd,j＝18.2,7.8hz,2h),4.56(s,2h),3.47(s,3h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
24h20
fn7o2[m h]

458.1663,found 458.1738。
[0170]
实施例26
[0171]
6-(2-((3-氟苯基)氨基)甲基)-5-(6-甲氧基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲腈(化合物26)
[0172]
[0173]
参照实施例24，将邻氟苯胺替换为间氟苯胺，制得化合物26。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ8.79(s,1h),8.30(s,1h),7.78(q,j＝9.0hz,2h),7.66(s,1h),7.11(dd,j＝15.2,7.8hz,2h),6.69(d,j＝7.8hz,1h),6.50(dd,j＝21.6,9.9hz,2h),6.37(t,j＝8.4hz,1h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
24h18
fn7o[m h]

440.1557,found 440.1630。
[0174]
实施例27
[0175]
6-(2-((4-氯苯基)氨基)甲基)-5-(6-甲氧基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲腈(化合物27)
[0176][0177]
参照实施例24，将邻氟苯胺替换为间氯苯胺，制得化合物27。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ8.78(s,1h),8.29(s,1h),7.78(q,j＝9.1hz,2h),7.66(t,j＝7.8hz,1h),7.24(s,1h),7.11(d,j＝8.7hz,2h),6.70(t,j＝8.4hz,3h),4.49(s,2h),3.66(s,3h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
24h18
cln7o[m h]

456.1261,found 456.1337。
[0178]
实施例28
[0179]
6-(2-((4-氯苯基)氨基)甲基)-5-(6-甲氧基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(化合物28)
[0180][0181]
参照实施例25，将邻氟苯胺替换为对氯苯胺，制得化合物28。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ9.74(s,1h),8.30(s,1h),7.91
–
7.55(m,3h),7.23(s,1h),7.11(d,j＝8.8hz,2h),6.71(d,j＝8.8hz,2h),6.61(d,j＝8.2hz,1h),4.47(s,2h),3.57(s,3h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
24h20
cln7o2[m h]

474.1367,found 474.1446。
[0182]
实施例29
[0183]
6-(2-((3-氯苯基)氨基)甲基)-5-(6-甲氧基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲腈(化合物29)
[0184][0185]
参照实施例24，将邻氟苯胺替换为间氯苯胺，制得化合物29。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ9.74(s,1h),8.30(s,1h),7.91
–
7.55(m,3h),7.23(s,1h),7.11(d,j＝8.8hz,2h),6.71(d,j＝8.8hz,2h),6.61(d,j＝8.2hz,1h),4.47(s,2h),3.57(s,3h)。hrms(esi)m/
z calcd.for c
24h20
cln7o2[m h]

474.1367,found 474.1446。
[0186]
实施例30
[0187]
6-(2-((3-氯苯基)氨基)甲基)-5-(6-甲氧基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(化合物30)
[0188][0189]
参照实施例25，将邻氟苯胺替换为间氯苯胺，制得化合物30。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ9.74(s,1h),8.30(s,1h),7.91
–
7.55(m,3h),7.23(s,1h),7.11(d,j＝8.8hz,2h),6.71(d,j＝8.8hz,2h),6.61(d,j＝8.2hz,1h),4.47(s,2h),3.57(s,3h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
24h20
cln7o2[m h]

474.1367,found 474.1446。
[0190]
实施例31
[0191]
6-(2-((3-氰基苯基)氨基)甲基)-5-(6-甲氧基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲腈(化合物31)
[0192][0193]
参照实施例24，将邻氟苯胺替换为间氨基苯甲腈制得化合物31。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ8.80(s,1h),8.31(s,1h),7.80(d,2h),7.68(s,1h),7.31(t,2h),7.05(q,3h),6.72(d,1h),4.55(s,2h),3.76(s,3h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
24h20
cln7o2[m h]

474.1367,found 447.1681。
[0194]
实施例32
[0195]
6-(5-(6-甲氧基吡啶-2-基)-2-((萘-1-基甲基)氨基)甲基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲腈(化合物32)
[0196][0197]
参照实施例32，将邻氟苯胺替换为1-萘甲基胺制得化合物32。1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ12.65(s,1h),8.82(s,1h),8.47(s,1h),8.24(s,1h),7.87(m,5h),7.57(d,j＝30.6hz,4h),7.17(s,1h),6.64(s,1h),4.33(s,2h),4.02(s,2h),3.67(s,3h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
29h23
n7o[m h]

489.1964,found 486.2041。
[0198]
实施例33
[0199]
6-(5-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)-2-((2-氟苯基)氨基)甲基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲腈(化合物33)
[0200][0201][0202]
将2-氨基-5-溴吡啶(10g，57.8mmol)和n,n-二甲基甲酰胺二甲基缩醛(8.26g，63.96mmol)溶于异丙醇(30ml)，升温至80℃。搅拌3小时，tlc指示反应结束后，减压蒸除溶剂，加入正己烷(20ml)打浆过夜，抽滤得中间体33-1的白色固体粗品(10.11g，粗品收率76％)。
[0203]
取中间体33-1的粗品(2g，8.77mmol)、溴乙腈(1.58g，13.15mmol)、碳酸氢钠(1.47g，17.54mmol)和碘化钾(145mg，0.877mmol)置于dmf(20ml)中，升温至50℃，搅拌过夜。tlc检测反应结束后，向反应液加水(20ml)，搅拌过夜，抽滤收集固体，红外烘干，得中间体33-2的浅棕色固体粗品(1.45g，粗品收率75％)。取中间体33-2的粗品(3.2g，14.41mmol)、三甲基乙炔基硅(1.7g，17.29mmol)、碘化亚铜(274mg，1.441mmol)和双三苯基膦二氯化钯(500mg，0.432mmol)置于无水四氢呋喃(20ml)中。缓慢加入二异丙基胺(2.19g，21.6mmol)，15分钟加完。室温搅拌过夜，tlc检测反应结束后，经硅藻土抽滤，滤饼以乙酸乙酯(10ml
×
3)洗涤三次，收集滤液，以饱和食盐水洗涤三次(15ml
×
3)。分出有机相，以无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10:1)，得中间体33-3的棕褐色固体(2g，收率62％)。
[0204]
将中间体33-3(100mg，0.418mmol)溶于四氢呋喃(5ml)，缓慢加入四丁基氟化铵(120mg，0.46mmol)，室温搅拌30分钟。tlc检测反应结束后，加水稀释反应液，以乙酸乙酯(15ml
×
3)萃取三次，分出有机相，以无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂得中间体33-4的浅棕色固体粗品(85mg，粗品收率100％)。
[0205]
取中间体33-4(1.37g，8.2mmol)、2-溴-5-氟-6-甲基吡啶(1.87g，9.84mmol)、碘化亚铜(156.2mg，0.82mmol)和双三苯基膦二氯化钯(173mg，0.25mmol)溶于无水四氢呋喃(25ml)，缓慢加入二异丙胺(1.25g，12.3mmol)，20分钟加完。ar气氛围下加热回流4小时。tlc检测反应结束后。反应液经硅藻土抽滤，乙酸乙酯(15ml
×
3)洗涤滤饼三次，收集母液，母液经饱和食盐水(20ml x 3)洗涤滤液三次，分出有机相，以无水硫酸钠干燥有机相，浓缩。柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝30:1)，制得中间体33-5的棕褐色固体(1.4g，收率62％)。
[0206]
取中间体33-5(50mg，0.181mmol)、二氯化钯(4mg，0.0181mmol)置于无水dmso(10ml)，升温至140℃，氩气氛围下回流加热10小时。tlc检测反应结束后，反应液加水稀释(15ml)，以乙酸乙酯(15ml
×
3)萃取三次。合并有机相，以饱和食盐水洗涤三次(15ml
×
3)，经无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝5:1)，得中间体33-6的类白色固体33-6(20mg，收率35％)。
[0207]
取33-6(560mg，1.82mmol)、乙二醛-1,1-二甲基乙缩醛(284mg，2.72mmol)和乙酸铵(280mg，6.564mmol)置于甲醇(10ml)和四氢呋喃(10ml)的混合溶液，常温搅拌4小时。tlc检测反应结束后，加入乙酸乙酯(20ml)稀释反应液，饱和食盐水洗涤(15ml
×
3)洗涤三次，经无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝100:1)产物。制得中间体33-7的类白色固体(615mg，收率86％)。
[0208]
取中间体33-7(600mg，1.54mmol)置于1n hcl(15ml)水溶液，升温至70℃，搅拌30分钟。tlc指示反应结束后，反应液冷却至室温，以饱和碳酸氢钠(10ml)调ph至弱碱性。白色固体析出，抽滤，滤饼用水洗(10ml
×
3)三次，红外条件下烘干。制得中间体33-8的白色固体。(460mg，收率76％)。
[0209]
取中间体33-8(100mg，0.288mmol)和邻氟苯胺(65mg，0.577mmol)溶于1，2二氯乙烷(10ml)，加入乙酸20ul。升温至70℃，回流8小时。tlc检测反应结束后，减压蒸除溶剂，残留物经乙酸乙酯稀释(15ml)，以饱和食盐水(15ml
×
3)洗涤有机相三次，用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，得中间体33-9的浅棕色固体(110mg)。
[0210]
取中间体33-9的粗品(110mg，0.25mmol)溶于四氢呋喃(5ml)和甲醇(5ml)的混合溶液，在冰浴条件下分批加入硼氢化钠(44mg，1.16mmol)，搅拌2小时。tlc检测反应结束后，加入乙酸乙酯稀释(20ml)反应液，有机相饱和食盐水洗(10ml
×
3)三次，用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，柱层析(二氯甲烷/甲醇＝10:1)纯化产物。制得化合物33的类白色固体(95mg，两步收率75％)。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ9.02(s,1h),8.29(s,1h),7.77(dd,j＝18.7,9.3hz,2h),7.50(d,2h),6.98(q,j＝13.1,7.3hz,2h),6.83(t,j＝7.9hz,1h),6.65(dd,j＝12.5,6.5hz,1h),4.56(s,2h),2.50(s,3h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
24h17
f2n7[m h]

442.1513,found 442.1587。
[0211]
实施例34
[0212]
6-(5-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)-2-(((1s，2r)-2-羟基-2,3-二氢-1h-茚-1-基)氨
基)甲基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲腈(化合物34)
[0213][0214]
参照化合物33的方法，将邻氟苯胺替换为(1s,2r)-(-)-1-氨基-2-茚醇，制得化合物34。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ9.08(s,1h),8.30(s,1h),7.82(dd,j＝17.7hz,2h),7.51(q,3h),7.25(dd,3h),4.59(s,1h),4.41
–
4.06(m,3h),3.06(dd,j＝19.5hz,2h),2.48(s,3h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
27h22
fn7o.[m h]

480.1870,found 480.1943。
[0215]
实施例35
[0216]
6-(5-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)-2-((3-氟苯基)氨基)甲基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲腈(化合物35)
[0217][0218]
参照实施例33的方法，将邻氟苯胺替换为间氟苯胺，制得化合物35。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ9.03(s,1h),8.29(s,1h),7.78(dd,j＝19.5,9.0hz,2h),7.51(d,j＝5.8hz,2h),7.10(dd,j＝7.3hz,1h),6.70
–
6.16(m,3h),4.49(s,3h),2.51(s,4h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
24h17
f2n7[m h]

442.1513,found 442.1591。
[0219]
实施例36
[0220]
6-(5-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)-2-((2-氟苯基)氨基)甲基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(化合物36)
[0221][0222]
取化合物33(50mg，0.113mmol)和碳酸钾(10mg，0.06mmol)置于dmso(5ml)，在冰浴条件下缓慢加入过氧化氢水溶液(0.136mmol，20ul)。搅拌过夜，tlc检测反应结束后，室温条件下搅拌过夜。tlc检测反应结束后，加水稀释(10ml)反应液，乙酸乙酯(15ml
×
3)萃取水
相，合并有机相，有机相经饱和食盐水(10ml
×
3)洗三次，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，柱层析纯化产物(二氯甲烷/甲醇＝20：1)，制得化合物36的白色固体(30mg，收率56％)。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ9.79(s,1h),8.29(s,1h),7.68(s,2h),7.43(d,2h),7.07
–
6.92(m,2h),6.84(t,j＝8.1hz,1h),6.71
–
6.57(m,1h),4.55(s,2h),2.57(s,3h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
24h19
f2n7o[m h]

460.1619,found 460.1695。
[0223]
实施例37
[0224]
6-(2-((3-氰基苯基)氨基)甲基)-5-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲腈(化合物37)
[0225][0226]
参照化合物33的方法，将邻氟苯胺替换为间氨基苯甲腈。制得化合物37。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ9.01(s,1h),8.20(s,1h),7.95
–
7.68(m,2h),7.60(s,1h),7.30(dt,2h),6.98(d,2h),4.50(s,2h),2.53(s,3h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
24h19
f2n7o[m h]

449.1650,found 460.1639。
[0227]
实施例38
[0228]
6-(5-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)-2-((3-氟苯基)氨基)甲基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(化合物38)
[0229][0230]
参照化合物36的方法，将邻氟苯胺替换为间氟苯胺。制得化合物38。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ9.03(s,1h),8.29(s,1h),7.76(t,j＝10.4hz,2h),7.50(t,j＝8.8hz,2h),7.10(dd,j＝15.0,8.1hz,1h),6.53(dd,j＝8.2,1.5hz,1h),6.45(dt,j＝11.8,2.2hz,1h),6.36(qd,1h),4.54(s,2h),2.59(s,3h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
24h19
f2n7o[m h]

460.1619,found 460.1639。
[0231]
实施例39
[0232]
6-(2-((2-氯苯基)氨基)甲基)-5-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲腈(化合物39)
[0233]
[0234]
参照化合物33的方法，将邻氟苯胺替换为邻氯苯胺。制得化合物39。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ9.02(s,1h),8.29(s,1h),7.77(q,j＝9.3hz,2h),7.50(d,j＝6.8hz,1h),7.26(d,j＝7.8hz,1h),7.13(t,j＝7.1hz,1h),6.83(d,j＝7.7hz,1h),6.66(t,j＝7.1hz,1h),4.60(s,2h),2.51(s,3h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
24h19
f2n7o.[m h]

458.1218,found 458.1287。
[0235]
实施例40
[0236]
6-(2-((3-氯苯基)氨基)甲基)-5-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲腈(化合物40)
[0237][0238]
参照化合物33的方法，将邻氟苯胺替换为间氯苯胺。制得化合物40。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ9.03(s,1h),8.29(s,1h),7.78(dd,j＝20.2,9.4hz,2h),7.51(d,j＝6.9hz,2h),7.08(t,j＝8.0hz,1h),6.74(s,1h),6.64(d,j＝8.0hz,2h),4.49(s,2h),2.51(s,3h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
24h17
clfn7[m h]

458.1218,found 458.1282。
[0239]
实施例41
[0240]
6-(5-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)-2-((萘-1-基甲基)氨基)甲基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲腈(化合物41)
[0241][0242]
参照化合物33的方法，将邻氟苯胺替换为1-萘甲基胺。制得化合物41。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ9.01(s,1h),8.24(dd,j＝32.1hz,2h),8.02
–
7.69(m,4h),7.63
–
7.18(m,6h),4.42(s,2h),4.12(s,2h),2.52(s,3h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
29h22
fn7[m h]

488.1921,found 488.1994。
[0243]
实施例42
[0244]
6-(5-(4-氟苯基)-2-((2-氟苯基)氨基)甲基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲腈(化合物42)
[0245][0246]
将2-氨基-5-溴吡啶(10g，57.8mmol)和n,n-二甲基甲酰胺二甲基缩醛(8.26g，63.96mmol)溶于异丙醇(30ml)，升温至80℃。搅拌3小时，tlc指示反应结束后，减压蒸除溶剂，加入正己烷(20ml)打浆过夜，抽滤得中间体42-1的白色固体粗品(10.11g，粗品收率76％)。
[0247]
取中间体42-1的粗品(2g，8.77mmol)、溴乙腈(1.58g，13.15mmol)、碳酸氢钠(1.47g，17.54mmol)和碘化钾(145mg，0.877mmol)置于dmf(20ml)中，升温至65℃，搅拌过夜。tlc检测反应结束后，向反应液加水(20ml)，搅拌过夜，抽滤收集固体，红外烘干，得中间体42-2的浅棕色固体粗品(1.45g，粗品收率75％)。
[0248]
取中间体42-2(4g，17.97mmol)、4-氟苯乙炔(2.81g，23.36mmol)、碘化亚铜(342.24mg，1.797mmol)和双三苯基膦二氯化钯(378mg，0.54mmol)置于无水乙腈(20ml)。缓慢加入二异丙基胺(2.75g，26.96mmol)，15分钟加完。室温搅拌过夜，tlc检测反应结束后，经硅藻土抽滤，滤饼用乙酸乙酯(10ml
×
3)洗涤三次。收集母液，经饱和食盐水经洗涤三次(15ml
×
3)。有机相无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10:1)得中间体42-3的黄色固体(4.2g，收率87％)。
[0249]
取中间体42-3(60mg，0.23mmol)、二氯化钯(5mg，0.0232mmol)置于无水dmso(10ml)，升温至140℃，氩气氛围下加热10小时。tlc检测反应结束后，反应液经硅藻土抽滤，乙酸乙酯(15ml
×
3)洗涤滤饼三次，母液饱和食盐水(15ml
×
3)洗涤三次，有机相经无水硫
酸钠干燥。减压蒸除溶剂，柱层析纯化产物制得中间体42-4的类白色固体(50mg，收率89％)。
[0250]
取中间体42-4(3.5g，11.935mmol)、乙二醛-1,1-二甲基乙缩醛(2.48g，23.87mmol)、乙酸铵(3.68g，47.74mmol)溶于四氢呋喃(10ml)和甲醇(10ml)的混合溶液，常温条件下搅拌4小时。tlc检测反应结束后，常温搅拌4小时，tlc检测反应结束后，加入乙酸乙酯(30ml)稀释反应液，饱和食盐水洗涤(25ml
×
3)洗涤三次，经无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝100:1)产物。制得42-5的类白色固体(3.17g，收率70％)。
[0251]
取化合物42-5(3.17g，8.4mmol)溶于1n hcl(25ml)水溶液，升温至70℃，回流搅拌30分钟，tlc指示反应结束后，反应液冷却至室温，饱和碳酸氢钠(20ml)调ph至弱碱性。白色固体析出，抽滤，滤饼用水洗(20ml
×
3)三次，红外条件下烘干，制得中间体42-6的浅棕色固体(3g，99％)。
[0252]
取中间体42-6(120mg，0.362mmol)、邻氟苯胺(81mg，0.724mmol)溶于二氯乙烷(10ml)，加入乙酸20ul。升温至70℃，回流加热8小时，tlc检测反应结束后，减压蒸除溶剂，经乙酸乙酯稀释(15ml)，饱和食盐水(15ml
×
3)洗涤有机相三次，经无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，制得中间体42-7的棕色固体(110mg)。
[0253]
取中间体42-7(110mg，0.25mmol)溶于四氢呋喃(5ml)和甲醇(5ml)的混合溶液，在冰浴条件下分批加入硼氢化钠(44mg，1.16mmol)，搅拌30分钟。tlc检测反应结束后，乙酸乙酯稀释(20ml)反应液，有机相水洗(10ml
×
3)三次，无水硫酸钠干燥，柱层析(二氯甲烷/甲醇＝10:1)纯化产物。制得化合物42的类白色固体(115mg，两步收率74％)。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ9.50(s,1h),8.76(s,1h),8.15(s,1h),7.63(d,j＝9.2hz,1h),7.53(d,1h),7.39(d,2h),7.21
–
6.97(m,3h),6.77(t,j＝7.7hz,2h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
24h16
f2n6[m h]

427.1405,found 427.1477。
[0254]
实施例43
[0255]
6-(5-(4-氟苯基)-2-((3-氟苯基)氨基)甲基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲腈(化合物43)
[0256][0257]
参照实施例42的方法，将邻氟苯胺替换为间氟苯胺制得化合物43。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ9.50(s,1h),8.64(s,1h),8.25(s,1h),7.67(d,j＝9.4hz,1h),7.57(d,j＝9.3hz,1h),7.49(dd,j＝8.6,5.4hz,2h),7.13(dt,j＝15.0,8.4hz,3h),6.52(d,j＝8.3hz,1h),6.44(d,j＝11.8hz,1h),6.36(t,j＝8.4hz,1h),4.48(s,2h)。hrms(esi)m/zcalcd.for c
24h16
f2n6[m h]

427.1405,found 427.1478。
[0258]
实施例44
[0259]
6-(5-(4-氟苯基)-2-((2-氟苯基)氨基)甲基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(化合物44)
[0260][0261]
取化合物42(60mg，0.140mmol)和碳酸钾(10mg，00.07mmol)置于dmso(5ml)，在冰浴条件下缓慢加入30％过氧化氢水溶液(0.155mmol，16ul)。室温搅拌过夜，tlc检测反应结束后，加水稀释(10ml)反应液，乙酸乙酯(15ml
×
3)萃取水相，合并有机相，有机相饱和食盐水(10ml
×
3)洗三次，经无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，柱层析纯化产物(二氯甲烷/甲醇＝20：1)，制得化合物44的白色固体(40mg，收率64％)。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ9.50(s,1h),8.64(s,1h),8.25(s,1h),7.67(d,j＝9.4hz,1h),7.57(d,j＝9.3hz,1h),7.49(dd,j＝8.6,5.4hz,2h),7.13(dt,j＝15.0,8.4hz,3h),6.52(d,j＝8.3hz,1h),6.44(d,j＝11.8hz,1h),6.36(t,j＝8.4hz,1h),4.48(s,2h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
24h18
f2n6o.[m h]

445.1510,found 445.1587。
[0262]
实施例45
[0263]
6-(2-((3-氯苯基)氨基)甲基)-5-(4-氟苯基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲腈(化合物45)
[0264][0265]
参照实施例42的方法，将邻氟苯胺替换为间氯苯胺制得化合物45。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ8.64(s,1h),8.25(s,1h),7.67(d,j＝9.2hz,1h),7.57(d,j＝9.5hz,1h),7.53
–
7.41(m,2h),7.13(dt,j＝15.9,8.3hz,3h),6.74(s,1h),6.64(d,j＝7.9hz,2h),4.44(s,2h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
24h16
clfn6[m h]

443.1109,found443.1181。
[0266]
实施例46
[0267]
6-(2-((3-氰基苯基)氨基)甲基)-5-(4-氟苯基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲腈(化合物46)
[0268][0269]
参照实施例42的方法，将邻氟苯胺替换为间氨基苯甲腈制得化合物46。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ8.64(s,1h),8.25(s,1h),7.68(d,j＝9.3hz,1h),7.60(d,1h),7.49(t,2h),7.29(t,j＝8.2hz,1h),7.17(t,j＝8.1hz,2h),6.99(t,j＝12.4hz,3h),4.51(s,2h)。hrms(esi)calcd.for c
25h16
fn7.[m h]

434.1109,found 434.1524。
[0270]
实施例47
[0271]
6-(2-((3-氯苯基)氨基)甲基)-5-(4-氟苯基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(化合物47)
[0272][0273]
参照实施例42的方法，将邻氟苯胺替换为间氯苯胺制得化合物47。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ9.65(s,1h),8.27(s,1h),7.63(d,j＝9.5hz,1h),7.48(dd,j＝17.1,9.0hz,3h),7.23
–
6.99(m,3h),6.75(s,1h),6.65(d,j＝7.7hz,2h),4.46(s,2h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
24h18
clfn6o.[m h]

461.1215,found 4461.1286。
[0274]
实施例48
[0275]
6-(2-((2-氯苯基)氨基)甲基)-5-(4-氟苯基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲腈(化合物48)
[0276][0277]
参照实施例42的方法，将邻氟苯胺替换为邻氯苯胺制得化合物48。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ9.65(s,1h),8.27(s,1h),7.63(d,j＝9.5hz,1h),7.48(dd,j＝17.1,9.0hz,3h),7.23
–
6.99(m,3h),6.75(s,1h),6.65(d,j＝7.7hz,2h),4.46(s,2h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
24h16
clfn6[m h]

461.1215,found 461.1286。
[0278]
实施例49
[0279]
6-(2-((2-氯苯基)氨基)甲基)-5-(4-氟苯基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(化合物49)
[0280][0281]
参照实施例44的方法，将邻氟苯胺替换为间邻氯苯胺制得化合物49。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ9.65(s,1h),8.27(s,1h),7.63(d,j＝9.5hz,1h),7.48(dd,j＝17.1,9.0hz,3h),7.23
–
6.99(m,3h),6.75(s,1h),6.65(d,j＝7.7hz,2h),4.46(s,2h)。hrms(esi)m/z calcd.for c
24h16
clfn6[m h]

461.1215,found 461.1286。
[0282]
实施例50
[0283]
6-(5-(4-氟苯基)-2-((2-氟苯基)氨基)甲基)-1h-咪唑-4-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-甲腈(化合物50)
[0284][0285]
将3-氨基-6-氯哒嗪(5g，38.59mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺二甲基缩醛(30ml)，升温至80℃，回流加热搅拌3小时，tlc指示反应结束后，减压蒸除溶剂n,n-二甲基甲酰胺二甲基缩醛，后加入正己烷(20ml)打浆过夜，滤饼正己烷洗涤三遍(15ml
×
3)，抽滤得中间体
50-1的白色固体(7g，收率98％)。
[0286]
取中间体50-1(6g，32.497mmol)、溴乙腈(7.8g，48.74mmol)、碳酸氢钠(5.46g，65mmol)和碘化钾(500mg，3.25mmol)置于异丙醇(20ml)，升温至50℃。回流加热，搅拌过夜，tlc检测反应结束后，减压蒸除溶剂，乙酸乙酯稀释(30ml)，反应液经水洗(20ml
×
3)三遍，用无水硫酸钠干燥。过滤，减压蒸除溶剂，柱层析纯化产物(石油醚/乙酸乙酯＝15:1)。产物经红外条件下烘干得中间体50-2的淡黄色固体(6.2g，收率100％)。
[0287]
取中间体50-2(100mg，0.56mmol)、4-氟苯乙炔(100.9mg，0.84mmol)和碘化亚铜(11mg，0.056mmol)，双三苯基膦二氯化钯(12mg，0.0168mmol)置于无水乙腈(10ml)。缓慢加入二异丙基胺(100.72mg，1.008mmol)，15分钟加完。升温至70℃，氩气氛围下回流搅拌过夜，tlc检测反应结束后，经硅藻土抽滤，滤饼经乙酸乙酯(10ml
×
3)洗涤三次。收集母液，经饱和食盐水洗涤三次(15ml
×
3)。收集有机相，有机相无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1:1)得中间体50-3的棕褐色固体(100mg，收率65％)。
[0288]
取中间体50-3(200mg，0.763mmol)、二氯化钯(13mg，0.0763mmol)溶于无水dmso(10ml)，升温至140℃，氩气氛围下回流加热10小时。tlc检测反应结束后，反应液经硅藻土抽滤，乙酸乙酯(15ml
×
3)洗涤滤饼三次，母液饱和食盐水(15ml
×
3)洗涤三次，有机相经无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，柱层析纯化产物制得化合物的黄色固体50-4(150mg，收率67％)。
[0289]
取中间体50-4(460mg，1.57mmol)、乙二醛-1,1-二甲基乙缩醛(325.5mg，3.13mmol)、乙酸铵(241.3mg，3.13mmol)溶于四氢呋喃(10ml)和甲醇(10ml)的混合溶液，常温条件下搅拌4小时。tlc检测反应结束后，加入乙酸乙酯(30ml)稀释反应液，饱和食盐水洗涤(25ml
×
3)洗涤三次，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝50:1)产物。制得化合物50-5的类白色固体(500mg，收率84％)。
[0290]
取化合物50-5(500mg，8.4mmol)溶于1n hcl(25ml)水溶液，升温至70℃，搅拌30分钟，tlc指示反应结束后，反应液冷却至室温，饱和碳酸氢钠(20ml)调ph至弱碱性。白色固体析出，抽滤，滤饼经水洗(20ml
×
3)三次，红外条件下烘干，制得中间体50-6的黄色固体(400mg，收率76％)。
[0291]
取化合物50-6(150mg，0.45mmol)和邻氟苯胺(106.65mg，0.90mmol)溶于二氯乙烷(10ml)，加入乙酸20ul。升温至70℃，tlc检测反应结束后，减压蒸除溶剂，残留物经乙酸乙酯稀释(15ml)，饱和食盐水(15ml
×
3)洗涤有机相三次，用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，制得中间体50-7的棕色固体(150mg)。
[0292]
取中间体50-7的粗品(150mg，0.35mmol)溶于四氢呋喃(5ml)和甲醇(5ml)的混合溶液，在冰浴条件下分批加入硼氢化钠(68mg，1.8mmol)，tlc检测反应结束后，乙酸乙酯稀释(20ml)反应液，有机相用水洗(10ml
×
3)三次，经无水硫酸钠干燥，柱层析(二氯甲烷/甲醇＝30：1)纯化产物。制得化合物50的白色固体(90mg，两步收率46％)。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ8.29(s,1h),8.10(t,2h),7.76(t,2h),7.19(t,j＝8.8hz,2h),6.97(dd,j＝7.6hz,2h),6.84(t,j＝8.0hz,1h),6.67(q,1h),4.57(s,2h)。
[0293]
实施例51
[0294]
6-(5-(4-氟苯基)-2-((3-氟苯基)氨基)甲基)-1h-咪唑-4-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-甲腈(化合物51)
[0295][0296]
参照实施例50的方法，将邻氟苯胺替换为间氟苯胺制得化合物51。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ8.29(s,1h),8.12(d,2h),7.79(t,2h),7.31
–
7.01(m,3h),6.61
–
6.30(m,3h),4.47(s,2h)。
[0297]
实施例52
[0298]
6-(5-(4-氟苯基)-2-(((2-氟苯基)氨基)甲基)-1h-咪唑-4-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-甲酰胺(化合物52)
[0299][0300]
取化合物50(60mg，0.140mmol)和碳酸钾(10mg，0.07mmol)溶于dmso(5ml)，冰浴条件下加入30％过氧化氢水溶液(0.17mmol，20ul)。搅拌过夜，tlc检测反应结束后，室温条件下搅拌过夜，tlc检测反应结束后，加水稀释(10ml)反应液，乙酸乙酯(15ml
×
3)萃取水相，合并有机相，有机相饱和食盐水(10ml
×
3)洗三次，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，柱层析纯化产物(二氯甲烷/甲醇＝20：1)，制得化合物52的白色固体(40mg，收率64％)。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ8.27(s,1h),8.15(d,j＝8.1hz,1h),7.95(s,1h),7.53(t,2h),7.21(t,j＝8.7hz,2h),6.99(dd,j＝12.9,7.2hz,2h),6.82(t,j＝7.7hz,1h),6.76
–
6.58(m,1h),4.57(s,2h)。
[0301]
实施例53
[0302]
6-(5-(4-氟苯基)-2-((3-氟苯基)氨基)甲基)-1h-咪唑-4-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-甲酰胺(化合物53)
[0303][0304]
参照实施例52的方法，将邻氟苯胺替换为间氟苯胺制得化合物53。1h nmr
(300mhz,meoh-d4)δ8.27(s,1h),8.16(t,1h),7.95(s,1h),7.66
–
7.42(m,2h),7.16(dd,j＝30.2hz,3h),6.76
–
6.08(m,3h),4.49(s,2h).
[0305]
实施例54
[0306]
6-(5-(4-氟苯基)-2-(((3-氟苯基)氨基)甲基)-1h-咪唑-4-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-羧酸乙酯(化合物54)
[0307][0308]
将3-氨基-6-氯哒嗪(5g，38.59mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺二甲基缩醛(30ml)，升温至80℃，回流加热搅拌3小时，tlc指示反应结束后，减压蒸除溶剂，加入正己烷(20ml)打浆过夜，抽滤得中间体54-1的白色固体(7g，收率98％)。
[0309]
取中间体54-1(3g，16.25mmol)、溴乙酸乙酯(4.07g，24.37mmol)、碳酸氢钠(2.73g，32.5mmol)、碘化钾(269mg，1.625mmol)溶于dmf(20ml)，升温至65℃。搅拌3h，tlc检测反应结束后，减压蒸除溶剂，乙酸乙酯稀释(30ml)，反应液水洗(20ml
×
3)三遍，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂，柱层析纯化产物(石油醚/乙酸乙酯＝15:1)。产物经红外条件下烘干得中间体54-2的淡黄色固体(2.79g，收率80％)。
[0310]
取中间体54-2(1.38g，6.12mmol)、4-氟苯乙炔(882mg，7.33mmol)和碘化亚铜(117mg，0.612mmol)和双三苯基膦二氯化钯(130mg，0.184mmol)置于无水dmf(20ml)。缓慢加入二异丙基胺(1.25g，12.24mmol)，15分钟加完。升温至70℃，氩气氛围下回流搅拌过夜，tlc检测反应结束后，经硅藻土抽滤，滤饼用乙酸乙酯(10ml
×
3)洗涤三次。收集母液，饱和
食盐水洗涤三次(15ml
×
3)。有机相经无水硫酸钠干燥，浓缩柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝5:1)得中间体54-3的棕褐色固体(1.12g，收率86％)。
[0311]
取中间体54-3(1.12g，3.62mmol)、二氯化钯(64mg，0.362mmol)置于无水dmso(20ml)，升温至140℃，氩气氛围下回流加热10小时。tlc检测反应结束后，反应液经硅藻土抽滤，乙酸乙酯(15ml
×
3)洗涤滤饼三次，收集母液，母液饱和食盐水(15ml
×
3)洗涤三次，有机相经无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1:1)产物，制得中间体54-4的浅棕色固体(650mg，收率52％)。
[0312]
取中间体54-4(650mg，1.9mmol)、乙二醛-1,1-二甲基乙缩醛(297.4mg，2.86mmol)和乙酸铵(293mg，3.8mmol)溶于四氢呋喃(10ml)和甲醇(10ml)的混合溶液，常温条件下搅拌4小时。tlc检测反应结束后，加入乙酸乙酯(30ml)稀释反应液，经饱和食盐水洗涤(25ml
×
3)洗涤三次，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂，柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝100:1)产物。制得中间体54-5的类白色固体(530mg，收率72％)。
[0313]
取中间体54-5(530mg，1.24mmol)溶于1n hcl(25ml)水溶液，升温至70℃，回流加热搅拌30分钟，tlc指示反应结束后，反应液冷却至室温，饱和碳酸氢钠(20ml)调ph至弱碱性。白色固体析出，抽滤，滤饼经水洗(20ml
×
3)三次，红外条件下烘干，制得中间体54-6的黄色固体(385mg，收率82％)。
[0314]
取化合物54-6(100mg，0.264mmol)、邻氟苯胺(62.29mg，0.53mmol)溶于二氯乙烷(10ml)，加入乙酸20ul。升温至70℃，回流加热8小时，tlc检测反应结束后，减压蒸除溶剂，乙酸乙酯稀释(15ml)，饱和食盐水(15ml
×
3)洗涤有机相三次，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，得中间体54-7的棕色固体(110mg)。
[0315]
取中间体54-7的粗品(110mg，0.23mmol)溶于四氢呋喃(5ml)和甲醇(5ml)的混合溶液，在冰浴条件下分批加入硼氢化钠(40mg，1.056mmol)，tlc检测反应结束后，乙酸乙酯稀释(20ml)反应液，有机相水洗(10ml
×
3)三次，无水硫酸钠干燥，柱层析(二氯甲烷/甲醇＝30：1)纯化产物，制得化合物54的白色固体(78mg，两步收率79％)。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ8.33(s,1h),8.13
–
7.63(m,2h),7.22(d,j＝28.8hz,1h),7.04
–
6.87(m,1h),6.83(t,1h),6.66(q,j＝5.2hz,1h),4.34(q,2h),1.36(t,3h)。
[0316]
实施例55
[0317]
6-(5-(4-氟苯基)-2-(((2-氟苯基)氨基)甲基)-1h-咪唑-4-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-甲酰肼(化合物55)
[0318]
[0319]
取化合物54(104mg，0.227mmol)、水合肼(45mg，0.907mmol)溶于乙醇，升温至80℃，加热回流4小时。tlc检测反应结束后，减压蒸除溶剂，无水乙醚(5ml)打浆，抽滤，滤饼经红外烘干。制得化合物55的白色固体(100mg，收率95％)。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ8.37
–
8.07(m,2h),7.88(d,j＝9.3hz,1h),7.66(t,2h),7.26(dd,j＝19.0,10.2hz,2h),7.14
–
6.95(m,2h),6.87(t,j＝8.9hz,1h),6.61(s,1h),4.44(s,2h)。
[0320]
实施例56
[0321]
6-(2-(((3-氯苯基)氨基)甲基)-5-(4-氟苯基)-1h-咪唑-4-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-羧酸乙酯(化合物56)
[0322][0323]
参照实施例54的方法，将邻氟苯胺替换为间氯苯胺制得化合物56。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ8.45
–
8.18(m,2h),8.08(d,2h),7.95(d,j＝9.3hz,1h),7.24(q,2h),7.10(q,1h),6.77(s,1h),6.65(q,1h),4.37(s,2h),4.30(q,j＝6.3hz,2h),1.26(t,3h)。
[0324]
实施例57
[0325]
6-(2-(((4-氯苯基)氨基)甲基)-5-(4-氟苯基)-1h-咪唑-4-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-羧酸乙酯(化合物57)
[0326][0327]
参照实施例54的方法，将邻氟苯胺替换为对氯苯胺，制得化合物57。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ8.40
–
8.19(m,2h),8.09(q,2h),7.93(d,1h),7.23(t,j＝8.8hz,2h),7.12(d,j＝8.3hz,2h),6.73(d,j＝8.5hz,2h),4.35(s,2h),4.29(q,2h),1.27(t,j＝13.8,6.9hz,3h)。
[0328]
实施例58
[0329]
6-(5-(4-氟苯基)-2-((2-氟苯基)氨基)甲基)-1h-咪唑-4-基)-n-羟基咪唑[1,2-a]吡啶-3-羧肟酰胺(化合物58)
[0330][0331]
取化合物42(80mg，0.18mmol)和盐酸羟胺(14.34mg，0.206mmol)溶于乙醇(10ml)，后滴加n,n-二异丙基胺(50ul，0.282mmol)。常温搅拌4小时，tlc检测反应结束后，加水稀释反应液。乙酸乙酯(15ml
×
3)和甲醇(5ml
×
3)萃取有机相三次，分液，经无水硫酸钠干燥有机相，减压蒸除溶剂，后柱层析纯化产物(二氯甲烷/甲醇＝30:1)，制得化合物58的白色固体(75mg，收率91％)。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ9.50(s,1h),8.01(s,1h),7.57(d,j＝9.3hz,1h),7.45(dd,j＝8.7,5.3hz,2h),7.36(d,j＝9.3hz,1h),7.11(t,j＝8.8hz,2h),7.04
–
6.93(m,2h),6.81(t,j＝7.8hz,1h),6.66(dd,j＝11.9,7.0hz,1h),4.55(s,2h)。
[0332]
实施例59
[0333]
6-(5-(-氟苯基)-2-((3-氟苯基)氨基)甲基)-1h-咪唑-4-基)-n-羟基咪唑[1,2-a]吡啶-3-羧肟酰胺(化合物59)
[0334][0335]
参照实施例58的方法，将邻氟苯胺替换为间氟苯胺，制得化合物59。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ9.50(s,1h),8.00(s,1h),7.57(d,j＝9.3hz,1h),7.46(dd,j＝8.7,5.4hz,2h),7.19
–
7.03(m,3h),6.52(d,j＝8.1hz,1h),6.44(d,j＝11.8hz,1h),6.37(t,j＝8.6hz,1h),4.47(s,2h)。
[0336]
实施例60
[0337]
n-((6-(4-(4-氟苯基)-2-((2-氟苯基)氨基)甲基)-1h-咪唑-5-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-基)甲基)乙酰胺(化合物60)
[0338][0339]
取中间体42-5(30mg，0.079mmol)和丁酸酐(16mg，0.158mmol)溶于甲醇(4ml)。分批加入硼氢化钠(9mg，0.237mmol)，在冰浴条件下分批加入氯化镍(20mg，0.079mmol)。溶液由黑色逐渐变为淡黄色，搅拌30分钟，tlc检测反应结束后，加15ml水稀释反应液。乙酸乙酯(15ml
×
3)和甲醇(5ml
×
3)萃取有机相三次，分液，收集有机相，经无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，柱层析纯化产物(二氯甲烷/甲醇＝30:1)，制得中间体60-1的白色固体(20mg，收率64％)。
[0340]
取中间体60-1(105mg，0.25mmol)溶于1n hcl水溶液，升温至70℃，加热回流30分钟。tlc检测反应结束后，加入饱和碳酸钠溶液(5ml)调ph至8，乙酸乙酯(15ml
×
3)和甲醇(5ml
×
3)萃取混合液三次，分液，收集有机相，经无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，制得中间体60-2粗品为白色固体(100mg，收率100％)。
[0341]
取中间体60-2(50mg，0.132mmol)，邻氟苯胺(29.4mmol，0.265mmol)溶于二氯乙烷(10ml)，加入乙酸20ul。缓慢升温至70℃，tlc检测反应结束后，减压蒸除溶剂，乙酸乙酯稀释(15ml)，饱和食盐水(15ml
×
3)洗涤有机相三次，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，得中间体60-3的棕色固体(75mg)。
[0342]
取中间体60-3的粗品(75mg，0.123mmol)溶于四氢呋喃(5ml)和甲醇(5ml)的混合溶液，在冰浴条件下分批加入硼氢化钠(20mg，0.528mmol)，tlc检测反应结束后，乙酸乙酯稀释(20ml)反应液，有机相经水洗(10ml
×
3)三次，用无水硫酸钠干燥，柱层析(二氯甲烷/甲醇＝30:1)纯化产物。制得化合物60(40mg，两步收率64％)。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ8.50(s,1h),7.64
–
7.41(m,5h),7.33(d,j＝9.4hz,1h),7.10(t,j＝8.5hz,2h),6.97(t,j＝8.2hz,2h),6.83(t,j＝7.9hz,1h),6.66(q,j＝5.2hz,1h),4.66(s,2h),4.54(s,2h),1.93(s,3h)。
[0343]
实施例61
[0344]
n-((6-(2-((3-氰基苯基)氨基)甲基)-4-(4-氟苯基)-1h-咪唑-5-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-基)甲基)乙酰胺(化合物61)
[0345][0346]
参照实施例60的方法，将邻氟苯胺替换为间氨基苯甲腈，制得化合物61。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ8.49(s,1h),7.77
–
7.40(m,5h),7.31(t,2h),7.21
–
6.77(m,5h),4.67(s,2h),4.50(s,2h),1.89(s,3h)。
[0347]
实施例62
[0348]
n-((4-(3-(1,2,4-恶二唑-3-基)咪唑[1,2-a]吡啶-6-基)-5-(4-氟苯基)-1h-咪唑-2-基)甲基)-2-氟苯胺(化合物62)
[0349][0350]
取化合物59(90mg，0.196mmol)溶于原甲酸三乙酯(5ml)溶液，加入20ul三氟乙酸，升温至80℃，搅拌3.5小时，tlc检测反应结束后，乙酸乙酯稀释(20ml)反应液，反应液水洗(10ml
×
3)三次，收集有机相，经无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，残余物柱层析(二氯甲烷/甲醇＝30:1)纯化。制得化合物62的白色固体(80mg，收率87％)。1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ9.75(s,1h),9.23(s,1h),8.42(dd,j＝41.4,33.7hz,2h),7.95
–
7.60(m,2h),7.46(d,j＝8.7hz,3h),7.40(d,j＝6.6hz,1h),7.34
–
7.18(m,3h),7.10(t,j＝8.5hz,1h),5.00(s,2h)。
[0351]
实施例63
[0352]
n-((6-(5-(4-氟苯基)-2-((2-氟苯基)氨基)甲基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-基)甲基)异丁酰胺(化合物63)
[0353][0354]
取中间体42-5(150mg，0.40mmol)和异丁酸酐(125mg，0.795mmol)溶于甲醇(4ml)。加入硼氢化钠(45.4mg，1.2mmol)，在冰浴条件下分批加入氯化镍(104mg，0.8mmol)。溶液由黑色逐渐变为淡黄色。搅拌30分钟，tlc检测反应结束后，加水稀释反应液。乙酸乙酯(15ml
×
3)和甲醇(5ml
×
3)萃取有机相三次，分液，收集有机相，经无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，柱层析纯化产物(二氯甲烷/甲醇＝30:1)，制得中间体63-1的白色固体(100mg，收率55％)。
[0355]
取中间体63-1(100mg，0.22mmol)溶于1n hcl水溶液，升温至70℃，加热回流30分钟。tlc检测反应结束后，加入饱和碳酸钠溶液(5ml)调ph至8，乙酸乙酯(15ml
×
3)和甲醇(5ml
×
3)萃取有机相三次，分液，无水硫酸钠干燥有机相，减压蒸除溶剂，制得中间体63-2粗品为白色固体(80mg，收率100％)。
[0356]
取中间体63-2粗品(80mg，0.197mmol)，邻氟苯胺(43mg，0.394mmol)溶于二氯乙烷(10ml)，加入乙酸20ul。升温至70℃，tlc检测反应结束后，减压蒸除溶剂，乙酸乙酯稀释(15ml)，饱和食盐水(15ml
×
3)洗涤有机相三次，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，得中间体63-3的棕色固体(75mg)。
[0357]
取中间体63-3的粗品(75mg，0.150mmol)溶于四氢呋喃(5ml)和甲醇(5ml)的混合溶液，冰浴条件下分批加入硼氢化钠(17mg，0.450mmol)，tlc检测反应结束后，乙酸乙酯稀释(20ml)反应液，有机相水洗(10ml
×
3)三次，无水硫酸钠干燥，柱层析(二氯甲烷/甲醇＝30:1)纯化产物。制得化合物63的白色固体(40mg，两步收率41％)。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ8.48(s,1h),7.62
–
7.39(m,4h),7.30(d,j＝9.3hz,1h),7.10(t,j＝8.8hz,2h),6.99(dd,j＝13.3,5.6hz,2h),6.82(t,j＝8.1hz,1h),6.67(t,1h),4.67(s,2h),4.54(s,2h),2.40(dt,j＝13.9,7.8hz,1h),1.01(s,j＝17.9hz,6h)。
[0358]
实施例64
[0359]
n-((6-(5-(4-氟苯基)-2-((2-氟苯基)氨基)甲基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-基)甲基)新戊酰胺(化合物64)
[0360][0361]
参照实施例63的方法，将异丁酸酐替换为特戊酸酐，制得化合物64。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ8.53(s,1h),7.59
–
7.37(m,4h),7.28(d,j＝9.3hz,1h),7.09(t,j＝8.7hz,2h),7.04
–
6.92(m,2h),6.82(t,j＝8.2hz,1h),6.66(q,1h),4.66(s,2h),4.54(s,2h),1.11(s,9h)。
[0362]
实施例65
[0363]
甲基((6-(5-(4-氟苯基)-2-((2-氟苯基)氨基)甲基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-基)甲氨基甲酸酯(化合物65)
[0364][0365]
参照实施例63的方法，将异丁酸酐替换为焦碳酸二甲酯，制得化合物65。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ8.49(s,1h),7.62
–
7.42(m,4h),7.31(d,j＝9.5hz,1h),7.10(t,j＝8.7hz,2h),6.99(t,j＝9.1hz,2h),6.82(t,j＝8.0hz,1h),6.66(d,j＝5.4hz,1h),4.59(s,2h),4.54(s,2h),3.61(s,3h)。
[0366]
实施例66
[0367]
n-((6-(5-(4-氟苯基)-2-((2-氟苯基)氨基)甲基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-基)甲基)丙酰胺(化合物66)
[0368][0369]
参照实施例63的方法，将异丁酸酐替换为丙酸酐，制得化合物66。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ8.46(s,1h),7.67
–
7.39(m,4h),7.30(d,j＝8.4hz,1h),7.09(t,j＝8.5hz,2h),6.98(t,j＝8.1hz,2h),6.82(t,j＝8.2hz,1h),6.66(q,1h),4.66(s,2h),4.53(s,2h),2.13(dd,j＝15.0,7.4hz,2h),1.06(t,j＝7.5hz,3h)。
[0370]
实施例67
[0371]
6-(2-((2-氟苯基)氨基)甲基)-5-苯基-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲腈
(化合物67)
[0372][0373]
参照实施例42的方法，将对氟苯乙炔替换为苯乙炔，制得化合物67。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ8.65(s,1h),8.25(s,1h),7.63(dd,j＝20.4,9.5hz,2h),7.53
–
7.33(m,4h),7.00(dd,j＝13.4,5.6hz,2h),6.83(t,j＝8.1hz,1h),6.71
–
6.60(m,1h),4.56(s,2h)。
[0374]
实施例68
[0375]
6-(2-((2-氟苯基)氨基)甲基)-5-苯基-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲(化合物68)
[0376][0377]
取化合物67(130mg，0.318mmol)和碳酸钾(22mg，0.159mmol)置于dmso(5ml)，冰浴条件下缓慢加入30％过氧化氢水溶液(0.382mmol，39ul)。搅拌过夜，tlc检测反应结束后，室温条件下搅拌过夜，tlc检测反应结束后，加水稀释(10ml)反应液，以乙酸乙酯(15ml
×
3)萃取水相，合并有机相，有机相经饱和食盐水(10ml
×
3)洗三次，用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，柱层析纯化产物(二氯甲烷/甲醇＝20：1)，制得化合物68的类白色固体(120mg，收率88％)。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ9.68(s,1h),8.27(s,1h),7.60(d,j＝9.3hz,1h),7.46(dd,j＝15.9,8.4hz,2h),7.35(dd,j＝14.7,7.0hz,3h),6.99(t,j＝8.2hz,2h),6.83(t,j＝8.4hz,1h),6.66(t,1h),4.54(s,2h)。
[0378]
实施例69
[0379]
6-(5-(3-氯-4-氟苯基)-2-((2-氟苯基)氨基)甲基)-1h-咪唑-4-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲腈(化合物69)
[0380][0381]
参照化合物1的合成，将2-溴-6-甲基吡啶替换为2-氯-1-氟-4-碘苯，制得化合物69。1h nmr(300mhz,meoh-d4)δ8.74
–
8.59(m,1h),8.28(s,1h),7.66(dd,j＝19.7,8.2hz,
a]吡啶-3-甲酰胺(化合物72)
[0392][0393]
参照化合物68的合成，制得化合物72。1hnmr(300mhz,meoh-d4)δ9.65(s,1h),8.29(s,1h),7.66(d,j＝9.3hz,1h),7.52(d,j＝9.3hz,1h),7.44
–
7.32(m,1h),7.31
–
7.16(m,2h),6.99(dd,j＝13.3,5.6hz,2h),6.81(t,j＝8.4hz,1h),6.65(dd,j＝12.5,7.3hz,1h),4.54(s,2h)。
[0394]
实施例73
[0395]
化合物对alk5激酶的抑制活性
[0396]
实验目的：采用adp-glo的方法，测试化合物对alk5激酶的抑制活性并计算其ic
50
值，以vactosertib(ew-7197)作为阳性对照化合物(其合成过程参考文献：j.med.chem.2014,57,4213-4238)。
[0397]
实验方法：1)储存液配制：化合物溶解在100％dmso中，配制成10mm储存液，避光储存。2)配制1
×
kinase buffer。3)化合物浓度梯度的配制：受试化合物的测试起始浓度为1μm，3倍稀释，10个浓度，单孔测试。在384孔板中稀释成100倍终浓度的100％dmso溶液。使用分液器echo 550转移50nl到384孔板的化合物孔；阴性对照孔和阳性对照孔中分别加50nl的dmso。用1
×
kinase buffer配制2倍终浓度的激酶溶液。在化合物孔和阳性对照孔分别加2.5μl的2倍终浓度的激酶溶液；在阴性对照孔中加2.5μl的1
×
kinase buffer。1000rpm离心30秒，振荡混匀后室温孵育10分钟。用1
×
kinase buffer配制2倍终浓度的atp溶液。加入2.5μl的2倍终浓度的atp溶液，起始反应。将384孔板1000rpm离心30秒，振荡混匀后室温孵育120分钟。加入5μladp-glo reagent，1000rpm离心30秒，振荡混匀后室温孵育120分钟。加入10μlkinase detection reagent,1000rpm离心30秒，振荡混匀后室温孵育30分钟。用envision读数。
[0398]
实验结果：以浓度的log值作为x轴，百分比抑制率为y轴，采用分析软件graphpad prism 5的log(inhibitor)vs.response-variable slope拟合量效曲线，从而得出各个化合物对酶活性的ic
50
值，部分结果如表1所示。
[0399]
表1、化合物对alk5激酶的抑制活性
[0400]
[0401]
[0402]
[0403]
[0404][0405]
本实验结果表明，本发明合成的化合物对于alk5有明显的抑制作用。同时与ew7197活性相当，这表明化合物对于alk5过度表达导致的疾病具有潜在的治疗作用，具有良好的开发潜力和市场前景。
[0406]
实施例74
[0407]
化合物对tgf-β诱导下lx-2细胞中col1a1基因表达的影响
[0408]
实验目的：采用rt-qpcr方法检测化合物对tgf-β诱导下lx-2细胞中col1a1基因表达的影响，以vactosertib(ew-7197)作为阳性对照化合物。
[0409]
实验方法：lx-2细胞置于dmem完全培养基(含10％胎牛血清和1％streptomycin/penicillin)中，在含5％co2的37℃培养箱中培养。
[0410]
引物序列col1a1:f:gtgcgatgacgtgatctgtga；r:cggtggtttcttggtcggt。gapdh:f:ggagcgagatccctccaaat；r:ggctgttgtcatacttctcatgg。
[0411]
在12孔板中，取活细胞比例90％以上的细胞进行实验。将lx-2细胞按照20万每孔铺板，置于含5％co2的37℃培养箱中培养。18-24小时后，弃去原有培养基，用1ml无菌pbs洗细胞1次，加入含有适当浓度化合物和10ng/ml tgf-β的完全培养基，受试化合物的终浓度均设置为1、0.1μm，给药时间为12小时。随后提取rna，逆转录为cdna，并进行rt-qpcr检测，检测col1a1基因表达变化情况。实验结果如图1所示。
[0412]
实验结果(图1)表明，化合物3、4、5、6、7、8和9均能降低col1a1基因相对表达，且化合物在0.1μm时对col1a1基因相对表达的抑制作用优于阳性对照化合物ew7197。此外，本发明化合物对tgf-β诱导下lx-2细胞中col1a1基因表达有明显的抑制作用，而该基因是肺纤维化疾病中成纤维细胞过度表达的显著标志物，说明本发明的化合物可以在一定程度上对于纤维化疾病有防治作用，尤其是肺纤维化疾病。
[0413]
实施例75
[0414]
化合物对tgf-β下游smad信号通路的抑制活性
[0415]
实验目的：采用荧光素酶法检测化合物对tgf-β刺激的hepg2细胞的抑制活性，计算其ic
50
值，以vactosertib(ew-7197)作为阳性对照化合物。
[0416]
实验方法：收集人肝癌hepg2细胞，用含10％fbs的mem培养基调整细胞密度为7.5
×
105/ml，以每孔1ml加入60mm细胞培养皿中。过夜培养后，按照质粒sbe-luc(beyotime，产品编号：c0526-1.5ml)转染试剂lipom6000为1(5μg):2(10μl)加入到opti-mem减血清培养基中，室温静置5分钟后，取500μl转染混合物加入细胞培养皿中，混匀，置于含5％co2的37℃培养箱中培养。4小时后，适当体积胰酶消化细胞，离心并重悬细胞，调整细胞浓度为1
×
105/ml，按照100μl/孔加入到96孔板中，置于含5％co2的37℃培养箱中培养18-24小时。
[0417]
将化合物用dmso配制成10mm的储备液，在检测化合物之前根据起始浓度需要，用含10ng/ml tgf-β的完全培养基对化合物进行二次稀释。取6μl化合物加入594μl含10ng/ml tgf-β的完全培养基中，吹打混匀，用含10ng/ml tgf-β的培养基对化合物进行3倍稀释。取100μl配制好化合物按照浓度梯度加入至96孔细胞培养板中。置于含5％co2的37℃培养箱中培养24小时。24小时后用荧光素酶报告基因检测试剂盒测定荧光素酶活性，采用graphpad prism对所得数据进行曲线拟合并计算ic
50
。
[0418]
实验结果：实施例中所列化合物对tgf-β下游smad信号通路的抑制活性的部分结果如表2所示。
[0419]
表2、化合物对tgf-β下游smad信号通路的抑制活性
[0420]
[0421][0422]
实验结果(表2)表明，本发明的化合物对tgf-β下游smad信号通路具有显著的抑制活性，尤其是部分化合物如化合物4的活性显著优于阳性对照化合物ew7197。
[0423]
实施例76
[0424]
片剂
[0425]
将实施例41中制得的化合物41或者其他实施例的化合物(50g)、羟丙甲基纤维素e(150g)、淀粉(200g)、聚维酮k30适量和硬脂酸镁(1g)混合，制粒，压片。
[0426]
此外，可以根据药典2015版常规制剂法，将实施例1～72制得的化合物赋予不同的药物辅料制成胶囊剂、散剂、颗粒剂、丸剂、注射剂、糖浆剂、口服液、吸入剂、软膏剂、栓剂或贴剂等。