一种荧光素酶冻干粉稀释反应液的制作方法

1.本发明涉及荧光素酶干粉技术领域，具体涉及一种荧光素酶冻干粉稀释反应液。


背景技术：

2.萤火虫荧光素酶催化发光是在atp、荧光素和mg
2
存在下发出黄绿色荧光的。一般的多数科学家认为荧光素酶作为催化剂催化的是d-荧光素，d-荧光素氧化发光，而且在一定条件下荧光的发射强度直接与atp的浓度呈正相关。
3.虽然荧光素酶催化发光的原理基本上被研究者所知，但是由于荧光素酶的不稳定性限制了它的应用前景，因此大多数研究者们的主要研究工作放在了稳定性的研究上，比如保护剂的研究或通过定点突变技术来表达稳定性更强的荧光素酶。荧光素酶干粉具有很好的稳定性，可以保存较长的时间而不失去活性。但稀释干粉的缓冲液需要良好的配比才能更好的体现出荧光素酶的活性。针对上述情况，本申请提出了一种荧光素酶冻干粉稀释反应液。


技术实现要素：

4.本发明的目的是提供一种荧光素酶冻干粉稀释反应液，保持了荧光素酶干粉的稳定性能，还能有效体现荧光素酶的活性。
5.本发明采用以下技术方案解决上述技术问题的：
6.一种荧光素酶冻干粉稀释反应液，包括以下组分：包括以下组分：0.1-3mm荧光素、0.1-1mm聚乙二醇，0.1-1mm三羟甲基氨基甲烷，0.5-2mm 4-羟乙基哌嗪丙磺酸，0.1-0.5mm氯化镁，0.01-0.3mm氯化钾，0.05-0.15mm氯化钠、0-3mm甘氨酸、0-20mm谷胱甘肽。
7.进一步地，所述稀释反应液中水分含量不超过90％。
8.进一步地，所述稀释反应液中水为无菌水。
9.进一步地，所述聚乙二醇是聚乙二醇2000或聚乙二醇4000。
10.本发明的优点在于：
11.(1)本发明一种荧光素酶冻干粉稀释反应液，能够在干粉稀释的状态下还能很好地体现出荧光素酶的活性。
12.(2)本发明中提供荧光素酶冻干粉稀释反应液的配方简单，能够适于规模化生产。
附图说明
13.图1是本发明不同实施例中稀释反应液检测结果汇总图。
具体实施方式
14.下面结合具体实施方式对本发明做进一步说明，以下实施例旨在说明本发明而不是对本发明的进一步限定。
15.本发明中稀释反应液中水分含量不超过90％，水为无菌水；
16.另外，需要说明的是，对于下述实施例中，peg为聚乙二醇，tris为三羟甲基氨基甲烷，hepps为4-羟乙基哌嗪丙磺酸。且在下述实施例中聚乙二醇均是聚乙二醇2000，控制组分配比不同，通过atp生物荧光检测仪测得最优配比。
17.下面用具体的实施例对本发明作进一步说明：
18.实施例1
19.实施例1中提供一种荧光素酶冻干粉稀释反应液，包括以下组分：荧光素1mm，peg 1mm，tris 0.1mm，hepps 1mm，氯化镁0.25mm，氯化钾0.01mm，氯化钠0.05mm。
20.其中，检测方法包括：取荧光素酶冻干粉100mg于离心管中，用配置好的稀释缓冲液进行溶解定容到10ml，取10ul 1
×
10-9
m atp标准溶液于反应管中，加入500ul溶解好的反应液，放入手持式atp生物荧光检测仪中进行检测，记录检测数据。重复上述检测步骤10次，得出10组数据。结果汇总如下表1所示：
21.表1：实施例1中得出的检测结果
[0022][0023]
实施例2
[0024]
实施例2中提供一种荧光素酶冻干粉稀释反应液，包括以下组分：荧光素2mm，peg 0.5mm，tris 0.1mm，hepps 1mm，氯化镁0.25mm，氯化钾0.01mm，氯化钠0.05mm，甘氨酸2.5mm。检测结果汇总如下表2所示：
[0025]
表2：实施例2中得出的检测结果
[0026][0027]
实施例3
[0028]
实施例3中提供一种荧光素酶冻干粉稀释反应液，包括以下组分：荧光素2mm，peg 0.5mm，tris 0.1mm，hepps 1mm，氯化镁0.25mm，氯化钾0.01mm，氯化钠0.05mm，甘氨酸2.5mm，谷胱甘肽10mm。检测结果汇总如下表3所示：
[0029]
表3：实施例3中得出的检测结果
[0030][0031]
实施例4
[0032]
实施例4中提供一种荧光素酶冻干粉稀释反应液，包括以下组分：荧光素2.5mm，
peg 0.5mm，tris 0.1mm，hepps 1mm，氯化镁0.25mm，氯化钾0.01mm，氯化钠0.05mm，甘氨酸2.5mm，谷胱甘肽10mm。检测结果汇总如下表4所示：
[0033]
表4：实施例4中得出的检测结果
[0034][0035]
实施例5
[0036]
实施例5中提供一种荧光素酶冻干粉稀释反应液，包括以下组分：荧光素2.5mm，peg 0.5mm，tris 0.1mm，hepps 1mm，氯化镁0.25mm，氯化钾0.01mm，氯化钠0.15mm，甘氨酸2.5mm，谷胱甘肽10mm。检测结果汇总如下表5所示：
[0037]
表5：实施例5中得出的检测结果
[0038][0039]
上述实施例结果表明，综合对比后，实施例3中提供的荧光素酶冻干粉稀释反应液为最佳配比。
[0040]
但是，依据平均atp含量数值而言，实施例1中10组数据的平均数值为4541.6rlu，实施例2中10组数据的平均数值为6439.7rlu，实施例3中10组数据的平均数值为7582.7rlu，实施例4中10组数据的平均数值为7637.2rlu，实施例5中10组数据的平均数值为6391.7rlu；则实施例4中检测出atp含量平均数值最高，提供的荧光素酶冻干粉稀释反应液配比最为优异；因此，本申请中所提供的荧光素酶冻干粉稀释反应液配方能够很好地体现出荧光素酶的活性。
[0041]
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明而并非限制本发明所描述的技术方案；本领域的普通技术人员应当理解，仍然可以对本发明进行修改或等同替换；而一切不脱离本发明的精神和范围的技术方案及其改进，其均应涵盖在本发明的权利要求范围中。


技术特征：
1.一种荧光素酶冻干粉稀释反应液，其特征在于，包括以下组分：0.1-3mm荧光素、0.1-1mm聚乙二醇，0.1-1mm三羟甲基氨基甲烷，0.5-2mm 4-羟乙基哌嗪丙磺酸，0.1-0.5mm氯化镁，0.01-0.3mm氯化钾，0.05-0.15mm氯化钠、0-3mm甘氨酸、0-20mm谷胱甘肽。2.根据权利要求1所述的一种荧光素酶冻干粉稀释反应液，其特征在于，所述稀释反应液中水分含量不超过90％。3.根据权利要求2所述的一种荧光素酶冻干粉稀释反应液，其特征在于，所述稀释反应液中水为无菌水。4.根据权利要求1所述的一种荧光素酶冻干粉稀释反应液，其特征在于，所述聚乙二醇是聚乙二醇2000或聚乙二醇4000。

技术总结
本发明提供了一种荧光素酶冻干粉稀释反应液，包括以下组分：0.1-3mM荧光素、0.1-1mM聚乙二醇，0.1-1mM三羟甲基氨基甲烷，0.5-2mM 4-羟乙基哌嗪丙磺酸，0.1-0.5mM氯化镁，0.01-0.3mM氯化钾，0.05-0.15mM氯化钠、0-3mM甘氨酸、0-20mM谷胱甘肽。本发明提供的荧光素酶冻干粉稀释反应液，在保持了荧光素酶干粉的稳定性能的同时，还能有效体现荧光素酶的活性。还能有效体现荧光素酶的活性。还能有效体现荧光素酶的活性。


技术研发人员：马振桥 丁海平 李坤
受保护的技术使用者：合肥巅峰生物科技有限公司
技术研发日：2021.12.21
技术公布日：2022/4/15