一种核酸污染清除剂及其制备方法与流程

1.本发明具体涉及一种核酸污染清除剂及其制备方法。


背景技术：

2.随着分子生物学的发展，核酸编辑、扩增、测序、鉴定等以核酸为中心的技术变得越来越先进和方便。尤其是单细胞rna测序、数字pcr和转基因技术的出现，使得核酸技术应用越来越广泛，灵敏度也越来越高。核酸是脱氧核糖核酸(dna)和核糖核酸(rna)的总称，是由许多核苷酸单体聚合成的生物大分子化合物，为生命的最基本物质之一。核酸检测是一项具有高度准确性的科学实验，而污染是一个不可避免的难题，其中实验环境导致的污染既是最容易产生的污染，也是最难消除的污染。
3.在实验室日常工作中，实验室器具、仪器、设备使用频率高，容易出现未及时清洗消毒或清洗消毒不彻底等情况而造成仪器、设备交叉污染，并且严重时可能造成实验室气溶胶污染，使实验结果出现偏差甚至错误，因此对核酸污染进行有效处理刻不容缓。
4.目前市面上现有的商品核酸污染清洁剂存在生产成本过高、产能过小、储存条件要求高、腐蚀性强等缺陷，因此提供一种低成本且腐蚀性低、便于规模化量产的核酸污染清除剂是目前亟待要解决的问题。


技术实现要素：

5.针对现有技术的不足，本发明提供了一种核酸污染清除剂，该清除剂成本低、无腐蚀性，对核酸的清除效果佳。
6.本发明的核酸污染清除剂是由以下质量百分数的原料组成：
7.过氧化物0.4～1.0％，
8.乙醇3～4％，
9.异丙醇0.2-0.4％，
10.表面活性剂0.2～0.8％，
11.裂解剂0.1～1.0％，
12.金属盐0.01～0.1％，
13.聚乙二醇0.1～1.0％，
14.其余为去离子水。
15.优选地，所述过氧化物为过氧化氢、过氧乙酸或过氧化锌中的至少一种。
16.优选地，所述表面活性剂为阳离子表面活性。
17.进一步优选地，所述阳离子表面活性剂为季铵盐类表面活性剂。
18.优选地，所述金属盐为铜盐或锌盐中的至少一种。
19.进一步优选地，所述铜盐为硝酸铜、氯化铜、硫酸铜中的至少一种，所述锌盐为硝酸锌、硫酸锌、氯化锌中的至少一种。
20.优选地，所述聚乙二醇为聚乙二醇200、聚乙二醇400、聚乙二醇600、聚乙二醇800
中的至少一种。
21.优选地，所述裂解剂为盐酸吗啉胍。
22.本发明的另一目的是提供了所述核酸污染清除剂的制备方法，包括以下步骤：
23.(1)按比例称取原料，然后将过氧化物和去离子水混合，得到混合物一；
24.(2)在混合物一中加入表面活性剂，充分混合后再加入聚乙二醇、乙醇和异丙醇，搅拌均匀后得到混合物二；
25.(3)在混合物二中依次加入裂解剂和金属盐，搅拌均匀后得到所述核酸污染清除剂。
26.与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
27.本发明所提供的核酸污染清除剂中过氧化物含量低，从而降低了清除剂的腐蚀性能。为了提高清除剂对核酸污染的处理效果，本发明还加入了一定比例的金属盐、裂解剂等成分，从而确保了清除效果。本发明的核酸污染清除剂成本低廉且便于工业化量产。
具体实施方式
28.本发明提供了一种核酸污染清除剂是由以下质量百分数的原料组成：
29.过氧化物0.4～1.0％，乙醇3～4％，异丙醇0.2-0.4％，表面活性剂0.2～0.8％，裂解剂0.1～1.0％，金属盐0.01～0.1％，聚乙二醇0.1～1.0％，其余为去离子水。
30.在一些实施例中，本发明所述过氧化物为过氧化氢、过氧乙酸或过氧化锌中的至少一种。
31.在一些实施例中，本发明核酸污染清除剂中所述表面活性剂为阳离子表面活性。
32.在一些实施例中，本发明核酸污染清除剂中所述阳离子表面活性剂为季铵盐类表面活性剂。
33.在一些实施例中，本发明核酸污染清除剂中所述金属盐为铜盐或锌盐中的至少一种。
34.在一些实施例中，本发明核酸污染清除剂中所述铜盐为硝酸铜、氯化铜、硫酸铜中的至少一种，所述锌盐为硝酸锌、硫酸锌、氯化锌中的至少一种。
35.在一些实施例中，本发明核酸污染清除剂中所述聚乙二醇为聚乙二醇200、聚乙二醇400、聚乙二醇600、聚乙二醇800中的至少一种。
36.在一些实施例中，本发明核酸污染清除剂中所述裂解剂为盐酸吗啉胍。
37.本发明所述核酸污染清除剂的制备方法，包括以下步骤：
38.(1)按比例称取原料，然后将过氧化物和去离子水混合，得到混合物一；
39.(2)在混合物一中加入表面活性剂，充分混合后再加入聚乙二醇、乙醇和异丙醇，搅拌均匀后得到混合物二；
40.(3)在混合物二中依次加入裂解剂和金属盐，搅拌均匀后得到所述核酸污染清除剂。
41.下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。
42.实施例1
43.一种核酸污染清除剂由以下步骤制备而成：
44.(1)称取以下重量百分数的原料：
45.过氧化氢0.8％，乙醇3.5％，异丙醇0.3％，季铵盐类表面活性剂0.6％，盐酸吗啉胍0.7％，硝酸铜0.5％、硝酸锌0.01％，聚乙二醇6000.4％，其余为去离子水，首先将过氧化氢和去离子水混合，得到混合物一；
46.(2)在混合物一中加入季铵盐类表面活性剂，充分混合后再加入聚乙二醇600、乙醇和异丙醇，搅拌均匀后得到混合物二；
47.(3)在混合物二中依次加入盐酸吗啉胍和硝酸铜、硝酸锌，搅拌均匀后得到所述核酸污染清除剂。
48.实施例2
49.一种核酸污染清除剂由以下步骤制备而成：
50.(1)称取以下重量百分数的原料：
51.过氧乙酸0.5％，乙醇3.5％，异丙醇0.3％，季铵盐类表面活性剂0.5％，盐酸吗啉胍0.5％，氯化铜0.3％、氯化锌0.5％，聚乙二醇4000.5％，其余为去离子水，首先将过氧乙酸和去离子水混合，得到混合物一；
52.(2)在混合物一中加入表面活性剂，充分混合后再加入聚乙二醇400、乙醇和异丙醇，搅拌均匀后得到混合物二；
53.(3)在混合物二中依次加入盐酸吗啉胍和氯化铜、氯化锌，搅拌均匀后得到所述核酸污染清除剂。
54.实施例3
55.一种核酸污染清除剂由以下步骤制备而成：
56.(1)称取以下重量百分数的原料：
57.过氧化锌1.0％，乙醇4％，异丙醇0.2％，季铵盐类表面活性剂0.8％，盐酸吗啉胍1.0％，硫酸铜0.5％、氯化锌0.5％，聚乙二醇2000.1％，其余为去离子水，首先将过氧化锌和去离子水混合，得到混合物一；
58.(2)在混合物一中加入季铵盐类表面活性剂，充分混合后再加入聚乙二醇200、乙醇和异丙醇，搅拌均匀后得到混合物二；
59.(3)在混合物二中依次加入盐酸吗啉胍和硫酸铜、氯化锌，搅拌均匀后得到所述核酸污染清除剂。
60.实施例4
61.一种核酸污染清除剂由以下步骤制备而成：
62.(1)称取以下重量百分数的原料：
63.过氧化氢1.0％，乙醇4％，异丙醇0.3％，季铵盐类表面活性剂0.6％，盐酸吗啉胍0.7％，硝酸铜0.5％、硝酸锌0.01％，聚乙二醇6000.4％，其余为去离子水，首先将过氧化氢和去离子水混合，得到混合物一；
64.(2)在混合物一中加入季铵盐类表面活性剂，充分混合后再加入聚乙二醇600、乙醇和异丙醇，搅拌均匀后得到混合物二；
65.(3)在混合物二中依次加入盐酸吗啉胍和硝酸铜、硝酸锌，搅拌均匀后得到所述核酸污染清除剂。
66.实施例5
67.一种核酸污染清除剂由以下步骤制备而成：
68.(1)称取以下重量百分数的原料：
69.过氧化氢0.4％，乙醇3％，异丙醇0.2％，季铵盐类表面活性剂0.3％，盐酸吗啉胍0.1％，氯化铜0.5％，聚乙二醇6000.4％，其余为去离子水，首先将过氧化氢和去离子水混合，得到混合物一；
70.(2)在混合物一中加入季铵盐类表面活性剂，充分混合后再加入聚乙二醇600、乙醇和异丙醇，搅拌均匀后得到混合物二；
71.(3)在混合物二中依次加入盐酸吗啉胍和氯化铜，搅拌均匀后得到所述核酸污染清除剂。
72.实施例6
73.一种核酸污染清除剂由以下步骤制备而成：
74.(1)称取以下重量百分数的原料：
75.过氧化氢0.7％，乙醇4％，异丙醇0.3％，季铵盐类表面活性剂0.6％，盐酸吗啉胍0.7％，硝酸锌1.0％，聚乙二醇8000.4％，其余为去离子水，首先将过氧化氢和去离子水混合，得到混合物一；
76.(2)在混合物一中加入季铵盐类表面活性剂，充分混合后再加入聚乙二醇800、乙醇和异丙醇，搅拌均匀后得到混合物二；
77.(3)在混合物二中依次加入盐酸吗啉胍和硝酸锌，搅拌均匀后得到所述核酸污染清除剂。
78.对比例1
79.一种核酸污染清除剂由以下步骤制备而成：
80.(1)称取以下重量百分数的原料：
81.过氧化氢0.8％，乙醇3.5％，季铵盐类表面活性剂0.6％，盐酸吗啉胍0.7％，硝酸铜0.5％、聚乙二醇6000.4％，其余为去离子水，首先将过氧化氢和去离子水混合，得到混合物一；
82.(2)在混合物一中加入季铵盐类表面活性剂，充分混合后再加入聚乙二醇600、乙醇，搅拌均匀后得到混合物二；
83.(3)在混合物二中依次加入盐酸吗啉胍，搅拌均匀后得到所述核酸污染清除剂。
84.对比例2
85.一种核酸污染清除剂由以下步骤制备而成：
86.(1)称取以下重量百分数的原料：
87.过氧化氢0.8％，乙醇3.5％，异丙醇0.3％，季铵盐类表面活性剂0.6％，盐酸吗啉胍0.7％，其余为去离子水，首先将过氧化氢和去离子水混合，得到混合物一；
88.(2)在混合物一中加入季铵盐类表面活性剂，充分混合后再加入乙醇和异丙醇，搅拌均匀后得到混合物二；
89.(3)在混合物二中依次加入盐酸吗啉胍，搅拌均匀后得到所述核酸污染清除剂。
90.利用上述实施例以及对比例制备的清除剂进行检测，具体如下：
91.在离心管中依次装入表1所述的试剂，然后置于超声仪中进行超声处理30min，混合均匀后瞬间离心，静置5min。
92.最后用1％琼脂糖胶电泳检测离心管中的样品，并在紫外灯下观察。
93.表1
94.试剂使用量tbgreenpremixextaqⅱ(2x)12.5μlpcrforwardprimer(20μm)0.5μlpcrreverseprimer(20μm)0.5μlλdna模板(1μg/ml)2.5μl灭菌水7.2μl核酸污染清除剂1.8μl
95.通过实验发现，装有实施例1-6所述清除剂的样品，在紫外灯下无亮带，而装有对比例1-2所述清除剂的样品，在紫外灯下有不同程度的亮带。说明对比例1-2制备的清除剂对核酸污染的清除效果欠佳。本发明实施例1-6所制备的清除剂对核酸污染的清除效果远远高于对比例。
96.需要说明的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例，显然本发明不仅仅限于以上实施例，还可以有其他变形。本领域的技术人员从本发明公开内容直接导出或间接引申的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。