用于快速检测黄曲霉素产毒菌的引物和试剂盒及检测方法与流程

技术特征：
1.一种用于快速检测黄曲霉素产毒菌的引物，其特征在于，包括：上游引物：5'-cttttcgacgcgtttttgga-3'；下游引物：5'-tgggtcagtgtttgtagtgc-3'。2.一种用于快速检测黄曲霉素产毒菌的试剂盒，其特征在于，含有如权利要求1所述的用于快速检测黄曲霉素产毒菌的引物。3.如权利要求2所述的用于快速检测黄曲霉素产毒菌的试剂盒，其特征在于，为常规pcr试剂盒。4.快速检测黄曲霉素产毒菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取待测样品的总dna，作为模板dna；(2)采用如权利要求3所述的用于快速检测黄曲霉素产毒菌的试剂盒对所述的模板dna进行常规pcr扩增；(3)对扩增产物进行检测，并根据检测结果判断待测样品中是否含有黄曲霉素产毒菌。5.如权利要求4所述的快速检测黄曲霉素产毒菌的方法，其特征在于，步骤(2)中，pcr体系为：10
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ex taq buffer(mg
2
free)5μl，浓度为2.5mm的dntp mixture 4μl，浓度为25mm的mgcl
2 4μl，引物各2μl，模板dna 1μl，ex taq 0.5μl，灭菌水补足至50μl。6.如权利要求4所述的快速检测黄曲霉素产毒菌的方法，其特征在于，步骤(2)中，pcr扩增程序为：94℃预变性5min；98℃变性10s，58℃退火30s，72℃延伸1min，35个循环；72℃延伸10min。7.如权利要求2所述的用于快速检测黄曲霉素产毒菌的试剂盒，其特征在于，为实时荧光定量pcr试剂盒。8.快速检测黄曲霉素产毒菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取待测样品的总dna，作为模板dna；(2)采用如权利要求7所述的用于快速检测黄曲霉素产毒菌的试剂盒对所述的模板dna进行荧光定量pcr扩增；(3)对扩增产物进行检测，并根据检测结果判断待测样品中是否含有黄曲霉素产毒菌。9.如权利要求8所述的快速检测黄曲霉素产毒菌的方法，其特征在于，步骤(2)中，pcr体系为：2
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sybr abstart master mix 12.5μl，浓度为200nmol/l的引物各1μl，浓度为20ng/μl的模板dna1.5μl，灭菌水补足至25μl。10.如权利要求8所述的快速检测黄曲霉素产毒菌的方法，其特征在于，步骤(2)中，pcr扩增程序为：94℃预变性5min；94℃变性10s，59℃退火30s，72℃延伸1min，40个循环。

技术总结
本发明公开了一种用于快速检测黄曲霉素产毒菌的引物和试剂盒及检测方法，该用于快速检测黄曲霉素产毒菌的引物，包括上游引物和下游引物，其中，上游引物的核苷酸序列为5'-CTTTTCGACGCGTTTTTGGA-3'；下游引物的核苷酸序列为：5'-TGGGTCAGTGTTTGTAGTGC-3'。本发明针对黄曲霉、寄生曲霉、米曲霉的AflR基因序列设计了上述引物，该引物不仅能够特异性地扩增黄曲霉、寄生曲霉、米曲霉中AflR基因的保守区片段，而且检测灵敏度高，当采用常规PCR进行检测时，其检测下限为4.0


技术研发人员：张晓芹 张尊敬 毛佳乐 刘爽 宋剑锋 林娜
受保护的技术使用者：丽水市中医院
技术研发日：2021.12.15
技术公布日：2022/4/8