一种鉴定广地龙配方颗粒的特异性引物对及其应用的制作方法

技术特征：
1.广地龙特异引物对，其特征在于：所述广地龙特异引物对由核苷酸序列如seq id no.1所示的单链dna分子和核苷酸序列如seq id no.2所示的单链dna分子组成。2.根据权利要求1所述的广地龙特异引物对，其特征在于：所述广地龙特异引物对中的两条引物之间的摩尔比为1:1。3.用于鉴定广地龙的试剂，其特征在于：包括权利要求1或2所述的广地龙特异引物对。4.用于鉴定广地龙的试剂盒，其特征在于：包括权利要求1或2所述的广地龙特异引物对或权利要求3所述的试剂。5.权利要求1或2所述的广地龙特异引物对、权利要求3所述的试剂或权利要求4所述的试剂盒在如下a1)-a8)任一种中的应用；a1)在鉴别或辅助鉴别广地龙及常见广地龙混伪品中的应用，所述常见广地龙混伪品为通俗环毛蚓、威廉环毛蚓、栉盲环毛蚓、多肉远盲蚓、壮伟远盲蚓、保宁腔蚓、皮质远盲蚓和/或暗孔远盲蚓；a2)在制备鉴别或辅助鉴别广地龙及常见广地龙混伪品的产品中的应用，所述常见广地龙混伪品为通俗环毛蚓、威廉环毛蚓、栉盲环毛蚓、多肉远盲蚓、壮伟远盲蚓、保宁腔蚓、皮质远盲蚓和/或暗孔远盲蚓；a3)在鉴定或辅助鉴定广地龙中的应用；a4)在制备鉴定或辅助鉴定广地龙的产品中的应用；a5)在鉴定或辅助鉴定待测样本中是否含有广地龙中的应用；a6)在制备鉴定或辅助鉴定待测样本中是否含有广地龙的产品中的应用；。a7)在制备鉴别广地龙配方颗粒真伪的产品中的应用；a8)在鉴别广地龙配方颗粒真伪中的应用。6.一种检测或辅助检测待测样本是否为广地龙或是否含有广地龙的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：a1)采用权利要求1或2所述的广地龙特异引物对对所述待测样本的基因组dna进行pcr扩增，得到扩增产物；a2)凝胶电泳检测所述扩增产物，根据检测结果按照如下确定所述待测样本是否为广地龙或是否含有广地龙：若所述扩增产物在100～250bp之间有单一dna条带者，则所述待测样本为或候选为广地龙，或者含有或候选含有广地龙；若所述扩增产物在100～250bp之间没有dna条带者，则所述待测样本不为或候选不为广地龙，或者不含有或候选不含有广地龙。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述pcr扩增采用的引物退火条件为62℃退火2min。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述pcr扩增中采用的pcr反应程序为：94℃初始变性5min；94℃变性30s，62℃退火2min，72℃延伸30s，36个循环；72℃终延伸60min。9.根据权利要求7或8所述的方法，其特征在于：所述方法中pcr反应体系中模板dna浓度为30ng/25μl。10.根据根据权利要求7或8所述的方法，其特征在于：所述方法中taq dna聚合酶为2
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m5pcr mix。

技术总结
本发明公开了广地龙特异引物对、PCR试剂、PCR试剂盒和检测方法。该广地龙特异引物对由核苷酸序列如SEQ ID No.1所示的单链DNA分子和核苷酸序列如SEQ ID No.2所示的单链DNA分子组成。该PCR方法能准确检测中药配方颗粒中是否含有广地龙。鉴定方法准确、快捷，在鉴别广地龙与常见广地龙混伪品方面具有更高的特异性。性。


技术研发人员：张辉 袁媛 谭沛 蒋超 郑晓英 江斌
受保护的技术使用者：中国中医科学院中药研究所
技术研发日：2021.12.21
技术公布日：2022/4/5