一种高效表达GDH的工程菌株及其制备方法和应用与流程

技术特征：
1.一种高效表达gdh的工程菌，其特征在于：含有seq id no1所述序列的质粒。2.一种如权利要求1所述的工程菌，其特征在于：所述工程菌利用大肠杆菌rosetta(de3)作为宿主菌。3.一种重组gdh蛋白，其特征在于：通过培养诱导如权利要求1或2所述的工程菌获得。4.一种如权利要求3所述重组gdh蛋白的纯化方法，其特征在于该纯化方法包含以下步骤：a：诱导表达权利要求1或2所述的工程菌，菌液离心集菌后，超声破碎，收集破碎后上清；b：上清利用镍柱亲和层析；c：超滤脱盐，冻干保存。5.根据权利要求4所述的重组gdh蛋白的纯化方法，其体征在于：步骤b中镍柱洗脱液采用咪唑，所述咪唑浓度为50-500mmol/l。6.一种如权利要求1或2所述的工程菌在制备gdh产品中的应用。7.一种如权利要求3所述的重组gdh蛋白在制备gdh产品中的应用。8.一种如权利要求4所述的重组gdh蛋白的纯化方法在制备gdh产品中的应用。9.一种高效表达gdh的工程菌的构建方法，其特征在于该构建方法包括如下步骤：将gdh原始基因构建到pet-14b质粒中，转化大肠杆菌rosetta，培养基培养，获得高效表达gdh的工程菌。

技术总结
本发明公开的是一种高效表达GDH的工程菌株及其制备方法和应用，高效表达GDH的工程菌，含有SEQ ID NO1所述序列的质粒，利用大肠杆菌rosetta(DE3)作为宿主菌，工程菌株构建方法：将GDH原始基因构建到PET-14b质粒中，转化大肠杆菌Rosetta(DE3)，产生出高效表达GDH的工程菌，重组GDH蛋白的纯化方法：诱导表达工程菌，菌液离心集菌后，超声破碎，收集破碎后上清；上清利用镍柱亲和层析；超滤脱盐，冻干保存，本发明通过将GDH原始基因构建到PET-14b中并转化大肠杆菌Rosetta，能够高效表达GDH，酵液酶活高，发酵时间短、效率高，降低了生产成本，适合工业化生产。工业化生产。工业化生产。


技术研发人员：陈剑清 徐晨 唐文杰 王可盈 戴锐 吕正兵
受保护的技术使用者：浙江理工大学绍兴生物医药研究院有限公司
技术研发日：2021.12.03
技术公布日：2022/3/25