数字式PCR条码化的制作方法

技术特征：
1.一种含有具备固相支持面的粒子的划分产物，所述固相支持面上偶联有多个寡核苷酸引物，其中所述多个寡核苷酸引物包含：可供通过聚合酶连接和/或延伸的3’端；连接至所述固相支持面的5’端；和至少一个条码区。2.多个权利要求1所述的划分产物，其中所述多个划分产物包括至少约1,000、10,000、50,000、100,000、500,000、1,000,000或更多个含有独特粒子条码的粒子，其中所述独特粒子条码就各粒子自身而言基本相同，粒子之间则彼此独特。3.一种制备如权利要求1所述的划分产物的方法，所述方法包括：将多个反式亚酰胺核苷酸依序偶联至固相支持面以产生在5’端连接至所述固相支持面的多个寡核苷酸引物；以及对所述固相支持面进行划分。4.一种制备如权利要求2所述的多个划分产物的方法，所述方法包括：(a)提供含有固相支持面的的多个粒子；(b)将反式亚酰胺核苷酸偶联到所述多个粒子的固相支持面，其中所述偶联在至少4个分开的反应中进行，各反应分别偶联不同的核苷酸，所述粒子在偶联后合并且混合；(c)将(a)重复6-20次，由此产生多个条码化粒子，其中各条码化粒子各自含有多个拷贝的该粒子独有寡核苷酸条码，其中各粒子自身的所述独有粒子条基本相同，粒子间的则是基本彼此独特的；以及(d)划分所述多个条码化粒子。5.分析多个细胞的核酸的方法，其包括：提供权利要求4所述的多个划分产物，其中每个划分产物包含：含有寡核苷酸群的粒子，所述寡核苷酸群具有捕获序列和该粒子独有的条码；和含有靶核酸的样品；可选将偶联至这些粒子的寡核苷酸引物从所述粒子切下；在各划分产物中，使所述寡核苷酸引物的捕获序列或其部分杂交靶核酸的至少一部分；进行已杂交寡核苷酸引物的模板引导的核酸聚合，从而在各划分产物中将寡核苷酸引物共价连接到靶核酸的至少一部分，其中所述模板引导的核酸聚合在合并划分产物之前或之后进行；合并所述划分产物；以及进行高通量测序。6.分析多个细胞的核酸的方法，其包括：提供权利要求4所述的多个划分产物，其中每个划分产物包含：含有寡核苷酸群的粒子，所述寡核苷酸群具有捕获序列和该粒子独有的条码；和含有靶核酸的样品；可选将偶联至这些粒子的寡核苷酸引物从所述粒子切下；在各划分产物中使所述寡核苷酸引物连接靶核酸的至少一部分，由此使各划分产物中的寡核苷酸引物共价结合靶核酸的至少一部分，其中所述连接在合并划分产物之前进行；
合并所述划分产物；以及进行高通量测序。7.一种双条码化的粒子，其含有固相支持面，所述固相支持面是偶联有多个寡核苷酸引物，其中所述多个寡核苷酸引物包含：第一限定区，其具有10-100个核苷酸的限定序列；粒子条码，其含有6-20个核苷酸，所述多个寡核苷酸引物中全部、基本全部或多数含有相同的粒子条码；以及分子条码，其含有6-20个核苷酸，所述多个寡核苷酸引物中全部或基本全部含有独特的分子条码。8.多个权利要求7所述的双条码化粒子，其中所述多个粒子包括至少约1,000、10,000、50,000、100,000、500,000、1,000,000或更多个独有性粒子条码，其中所述独有性粒子条码就各粒子自身而言基本相同而在粒子之间则是基本彼此独特的。9.含有多个权利要求8所述的双条码化粒子的试剂盒，其还含有用于将所述多个粒子分入多个划分产物的物质。10.从多个前体粒子产生多个带条码粒子的方法，所述方法包括：(a)将核苷酸偶联到所述多个前体粒子，其中所述偶联在至少4个分开的反应中进行，各反应分别偶联不同的核酸，所述粒子在偶联后合并且混合；(b)将(a)重复6-20次，由此产生多个条码化粒子，其中各条码化粒子各自含有多个拷贝的该粒子独有的寡核苷酸条码。

技术总结
本申请涉及数字式PCR条码化。提供用于核酸分析(包括单细胞分析)的方法、组合物和试剂盒。盒。盒。


技术研发人员：J
受保护的技术使用者：生物辐射实验室股份有限公司
技术研发日：2015.06.24
技术公布日：2022/3/21