乳酸菌以及含乳酸菌的组合物、用途的制作方法

1.本发明涉及食品领域，尤其涉及乳酸菌以及含乳酸菌的组合物、用途。


背景技术：

2.便秘(constipation)是指排便频率减少，粪便量少且干结。一般来讲，同一人若一周内大便次数少于2～3次，或者2～3天才大便1次，应需注意是否为便秘。便秘患者除大便次数减少、排便困难、粪便干结外，有时还会伴有便血、肛门疼痛、腹泻等症状。便秘的病因包括功能性和器质性两方面，其中功能性原因多与不良排便习惯、不良饮食习惯及精神心理因素有关，器质性原因主要是指能引起便秘的一些原发病。
3.便秘患者可酌情选用促胃肠动力药、泻药等药物进行治疗：1，泻药：通过刺激肠道分泌和减少吸收、增加肠腔内渗透压和流体静力压而发挥导泻作用。一般分为刺激性泻剂(如酚酞)、盐性泻剂(如硫酸镁溶剂)、渗透性泻剂(如乳果糖)、膨胀性泻剂(如聚乙二醇)、润滑性泻剂(如甘油)。急性便秘可选择盐性泻剂、刺激性泻剂及润滑性泻剂，但用药时间不超过1周。慢性便秘以膨胀性泻剂为宜，不宜长期服用刺激性泻剂。对粪便嵌塞者，可予以盐水或肥皂水灌肠。2，促动力药：常用药物有莫沙必利和伊托必利，通过刺激肠肌间神经元，促进胃肠平滑肌蠕动，促进小肠和大肠的运转，对慢传输型便秘有效，可长期间歇使用。
4.服用药物治疗便秘，不可避免的回出现一些副作用，比如一些含有泻药成分的药物，服用后回导致腹胀、腹痛、腹泻等不适症状。
5.功能性胃肠失调(fgid)为胃肠病医疗中最常见的问题。此等是由于胃肠道不正常作用的结果而发生，而且被界定为慢性腹部复合综合症，诸如，腹痛、腹泻、便秘以及腹胀。根据罗马准则iii，已有超过20种功能性胃肠失调被认定。常见的fgid包含，但不限于，功能性腹痛、肠躁症(ibs)、便秘、功能性腹泻以及功能性消化不良。
6.乳酸菌作为益生菌的最重要菌种，由于其能够调节宿主肠道菌群，已被认为能做为预防或治疗肠胃道健康的另外选择。此外，近年来越来越多的证据也显示乳酸菌能改变宿主对于心理压力的心理和生理反应(zareie等,2006)。


技术实现要素：

7.鉴于此，本发明提供了一种含有乳酸菌的组合物，将该组合物可以制备成即食型乳酸菌，单独服用可用来修复紊乱的肠道，让身体代谢趋向，还可以与其他药物一起服用，例如首荟通便胶囊、新复方芦荟胶囊改善肠道微生态，以及其他药物诸如、新利司他等，提高药物的生物利用度，协同改善机制更加明显。
8.具体而言，上述组合物含有乳双歧杆菌、双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌、两岐双歧杆菌、格氏乳杆菌、干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌、约氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌中的至少五种及抗性糊精、低聚糖。
9.上述乳酸菌还可以选自乳双歧杆菌、双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌、两岐双歧杆菌、格氏乳杆菌、干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌、约氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌中的至少六
种；或者选自乳双歧杆菌、双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌、两岐双歧杆菌、格氏乳杆菌、干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌、约氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌中的至少七种；或者选自乳双歧杆菌、双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌、两岐双歧杆菌、格氏乳杆菌、干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌、约氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌中的至少八种；或者选自乳双歧杆菌、双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌、两岐双歧杆菌、格氏乳杆菌、干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌、约氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌中的至少九种；或者为乳双歧杆菌、双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌、两岐双歧杆菌、格氏乳杆菌、干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌、约氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌的混合菌。
10.本发明还提供了上述组合物中各组分的具体组成，即以重量百分比计算，所述的组合物包含：
11.乳酸菌3-15％；
12.低聚糖20-60％；
13.抗性糊精25-77％。
14.所述的低聚糖选自低聚果糖、低聚异麦芽糖、低聚木糖、水苏糖中的至少一种；优选为，所述的低聚糖为低聚果糖、低聚木糖。
15.所述的乳酸菌为乳双歧杆菌bl-g101、长双歧杆菌bl-g301、鼠李糖乳杆菌lr-g14、两岐双歧杆菌bb-g90、格氏乳杆菌lg-g12、干酪乳杆菌lc-g11、副干酪乳杆菌lpc-g110、约氏乳杆菌lj-g55、嗜酸乳杆菌la-g80、植物乳杆菌lp-g18。
16.以重量比计算，所述的乳酸菌选自
[0017][0018][0019]
进一步优选为：
[0020][0021]
上述组合物中，每g组合物包括至少108至1012cfu乳酸菌；优选为，每g组合物包括至少109至1011cfu乳酸菌。
[0022]
本发明还提供了一种含有上述组合物的食品或保健品。
[0023]
本发明还提供了上述组合物在制备调节肠道功能的药物或食品或保健品中的应用；以及在制备辅助首荟通便胶囊排毒养颜、通便润肠功效作用的药物或食品中的应用。
[0024]
本发明还提供了一种即食型乳酸菌，所述即食型乳酸菌含有上述的组合物。
[0025]
本发明还提供了一种药物组合物，所述的药物组合物包含上述即食型乳酸菌及首荟通便胶囊、复方芦荟胶囊、苁蓉通便口服液、麻仁丸、清宁丸、通便灵胶囊、苁蓉通便胶囊、麻仁润肠丸、麻仁滋脾丸、便秘通、通乐颗粒、新利司他、阿莫西林、伊立替康、异烟肼、利福平、利福喷汀、氟尿嘧啶类抗肿瘤药物中的任意一种。
[0026]
优选为，所述的药物组合物包含上述即食型乳酸菌及首荟通便胶囊、复方芦荟胶囊、苁蓉通便口服液、麻仁丸、清宁丸、通便灵胶囊、苁蓉通便胶囊、麻仁润肠丸、麻仁滋脾丸、便秘通、通乐颗粒中的任意一种。
[0027]
具体方案之一，所述的药物组合物含有上述即食型乳酸菌与首荟通便胶囊(国药准字 z20150041)内容物；进一步优选为，以重量用量比计算，上述即食型乳酸菌与首荟通便胶囊内容物的比例为1-30:1；进一步优选为，以重量用量比计算，上述即食型乳酸菌与首荟通便胶囊内容物的比例为20:1。
[0028]
具体方案之二，所述的药物组合物含有上述即食型乳酸菌与新复方芦荟胶囊(国药准字z13020306)内容物；进一步优选为，以重量用量比计算，上述即食型乳酸菌与新复方芦荟胶囊内容物的比例为1-10:1；进一步优选为，以重量用量比计算，上述即食型乳酸菌与新复方芦荟胶囊内容物的比例为4.65:1。
[0029]
本发明还提供了几种新的乳酸菌，即：
[0030]
所述的两岐双歧杆菌bb-g90(两岐双歧杆菌bifidobaterium bifidum bb-g90)，2013 年5月09日保藏于中国典型培养物保藏中心(cctcc)，保藏编号为cctcc no：m 2013194，保藏地址：中国武汉武汉大学。
[0031]
所述的格氏乳杆菌lg-g12(格氏乳杆菌lactobacillus gasseri lg-g12)，2019年
10月
[0032]
17日保藏于中国典型培养物保藏中心(cctcc)，保藏编号为cctcc no：m 2019829 ，保藏地址：中国武汉武汉大学。
[0033]
所述的干酪乳杆菌lc-g11(lactobacillus casei lc-g11)，2013年5月9日保藏于中国典型培养物保藏中心(cctcc)，保藏编号为cctcc no：m 2013196 ，保藏地址：中国武汉武汉大学。所述的副干酪乳杆菌lpc-g110(副干酪乳杆菌lactobacillus paracasei lpc-g110)， 2013年12月23日保藏于中国典型培养物保藏中心(cctcc)，保藏编号为cctcc no：m2013691 ，保藏地址：中国武汉武汉大学。
[0034]
本发明还提供了一种膳食补充剂，所述的膳食补充剂含有上述的两岐双歧杆菌bb-g90、格氏乳杆菌lg-g12、干酪乳杆菌lc-g11、副干酪乳杆菌lpc-g110中的任意一种；优选为，所述的膳食补充剂中，以重量用量比计，含有两岐双歧杆菌bb-g90或格氏乳杆菌 lg-g12或干酪乳杆菌lc-g11或副干酪乳杆菌lpc-g110的总含量为80-83％，低聚麦芽乳糖含量为7-10％，脱脂奶粉含量为3-6％以及水。
[0035]
本发明还提供了上述乳杆菌在发酵乳或发酵乳饮料或果蔬饮料制备中的用途。
[0036]
上述组合物可以以丸剂、片剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂或口服液的任意一种呈现。
[0037]
上述的食品或保健品，可以是益生菌、益生元、饼干、零食或其他形式。
[0038]
本发明另一目的在于提供一种即食型乳酸菌的制备方法，该方法工艺流程为：
[0039]
将各原菌粉从-20℃低温冰箱取出，室温放置，待菌粉温度上升至室温后，取本发明重量菌种与处方量的低聚果糖、低聚木糖以及抗性糊精混合，最终混合益生菌产品活菌总数为。将混合好的样品以2g/条的规格分装至条包中，即得。
[0040]
与现有技术相比，本发明的优点在于：
[0041]
1)在动物模型实验中，由表1结果显示小鼠大便次数和身体扭转次数，实施例各组对于小鼠大便次数和身体扭转次数均具有改善作用，本发明的组合物能有效的针对性地改变肠道菌群，调节肠道菌群结构，改善微环境。
[0042]
2)实验结果表明，在促进大鼠的肠道蠕动，减少肠腔含水量具有不同的治疗效果，总体而言，使用实施例b效果最优。腹腔特征和大便特征中，实验各组均有不同程度的改善，实验组的各组中与观察组在腹部、大便特征中具有显著性差异，本发明组合物的实施例的组合物显著优于现有技术，说明本发明的组合物适合进一步推广应用。
[0043]
3)在本发明所保藏的四种菌株两岐双歧杆菌bb-g90、格氏乳杆菌lg-g12、干酪乳杆菌lc-g11、副干酪乳杆菌lpc-g110的过氧化氢酶(cat)、丙二醛(mda)的测定，结果显示利用4中菌种制备而成的膳食补充剂均有不同程度的改善作用。
具体实施例
[0044]
下面结合具体实施例进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本技术所附权利要求所限定的范围。
[0045]
实施例1：一种即食型乳酸菌，所用的原料与制备工艺如下，以重量比计算如下：
[0046][0047]
制备工艺为：
[0048]
将各原菌粉从-20℃低温冰箱取出，室温放置，待菌粉温度上升至室温后，取本发明重量菌种与处方量的低聚果糖、低聚木糖以及抗性糊精混合，最终混合益生菌产品活菌总数为，将混合好的样品以2g/条的规格分装至条包中，即得。
[0049]
实施例2：一种即食型乳酸菌，所用的原料与制备工艺如下，以重量比计算如下：
[0050][0051]
制备工艺同实施例1。
[0052]
实施例3：一种即食型乳酸菌，所用的原料与制备工艺如下，以重量比计算如下：
[0053][0054]
制备工艺同实施例1。
[0055]
实施例4：一种即食型乳酸菌，所用的原料与制备工艺如下，以重量比计算如下：
[0056][0057][0058]
制备工艺同实施例1。
[0059]
实施例5：一种即食型乳酸菌，所用的原料与制备工艺如下，以重量比计算如下：
[0060][0061]
制备工艺同实施例1。
[0062]
实施例6：一种即食型乳酸菌，所用的原料与制备工艺如下，以重量比计算如下：
[0063][0064][0065]
制备工艺同实施例1。
[0066]
实施例7：一种即食型乳酸菌，所用的原料与制备工艺如下，以重量比计算如下：
[0067][0068]
制备工艺同实施例1。
[0069]
实施例8：一种即食型乳酸菌，所用的原料与制备工艺如下，以重量比计算如下：
[0070][0071][0072]
制备工艺同实施例1。
[0073]
实施例9：一种含即食型乳酸菌的药物，所用的原料与制备工艺如下：
[0074]
实施例6所得即食型乳酸菌与首荟通便胶囊(国药准字z20150041)内容物通过常规工艺制备成颗粒剂，以重量用量比计算，实施例6所得即食型乳酸菌与首荟通便内容物的比例为20:7，装袋，每袋2g。
[0075]
实施例10：一种含即食型乳酸菌的药物，所用的原料与制备工艺如下：
[0076]
实施例6所得即食型乳酸菌与新复方芦荟胶囊(国药准字z13020306)内容物制备成颗粒剂，以重量用量比计算，实施例6所得即食型乳酸菌与新复方芦荟胶囊内容物的比例为100:21.5，装袋，每袋2g。
[0077]
实施例11：一种即食型乳酸菌，所用的原料与制备工艺如下，以重量比计算如下：
[0078][0079]
制备工艺同实施例1。
[0080]
实施例12：一种即食型乳酸菌，所用的原料与制备工艺如下，以重量比计算如下：
[0081][0082]
制备工艺同实施例1。
[0083]
实施例13：一种膳食补充剂，所用的原料与制备工艺如下，以重量比计算如下：
[0084][0085]
制备工艺：两岐双歧杆菌bb-g90菌种按质量计以1.5％的接种量接种到培养基中，然后在37-38.5℃下扩大培养10-13h，离心后用ph 7.0的碱性磷酸盐缓冲液清洗3次，用低聚麦芽糖、脱脂奶粉和水重悬两岐双歧杆菌bb-g90，同时检测活菌浓度达10
11-10
12
cfu/ml，混匀后预冻(-5-0℃)，之后进行冷冻干燥得到所述的冻干菌粉即为膳食补充剂。
[0086]
实施例14：一种膳食补充剂，所用的原料与制备工艺如下，以重量比计算如下：
[0087][0088]
制备工艺同实施例13。
[0089]
实施例15：一种膳食补充剂，所用的原料与制备工艺如下，以重量比计算如下：
[0090]
[0091][0092]
制备工艺同实施例13。
[0093]
实施例16：一种膳食补充剂，所用的原料与制备工艺如下，以重量比计算如下：
[0094][0095]
制备工艺同实施例13。
[0096]
实施例17：一种膳食补充剂，所用的原料与制备工艺如下，以重量比计算如下：
[0097][0098]
制备工艺同实施例13。
[0099]
实施例18：一种膳食补充剂，所用的原料与制备工艺如下，以重量比计算如下：
[0100][0101]
制备工艺同实施例13。
[0102]
实施例19：一种膳食补充剂，所用的原料与制备工艺如下，以重量比计算如下：
[0103][0104]
制备工艺同实施例13。
[0105]
实施例20：一种膳食补充剂，所用的原料与制备工艺如下，以重量比计算如下：
[0106]
[0107][0108]
制备工艺同实施例13。
[0109]
实施例21：一种膳食补充剂，所用的原料与制备工艺如下，以重量比计算如下：
[0110][0111]
制备工艺同实施例13。
[0112]
实施例22：一种膳食补充剂，所用的原料与制备工艺如下，以重量比计算如下：
[0113][0114]
制备工艺同实施例13。
[0115]
实施例23：一种膳食补充剂，所用的原料与制备工艺如下，以重量比计算如下：
[0116][0117]
制备工艺同实施例13。
[0118]
实施例24：一种膳食补充剂，所用的原料与制备工艺如下，以重量比计算如下：
[0119][0120]
制备工艺同实施例13。
[0121]
对比实施例1：一种含即食型乳酸菌，所用的原料与制备工艺如下，以重量比计算如下：
[0122]
[0123][0124]
制备工艺同实施例1。
[0125]
对比实施例2：一种含即食型乳酸菌的组合物，所用的原料与制备工艺如下，以重量比计算如下：
[0126][0127]
制备工艺同实施例1。
[0128]
对比实施例3：一种含即食型乳酸菌的组合物，所用的原料与制备工艺如下，以重
量比计算如下：
[0129][0130]
制备工艺同实施例1。
[0131]
对比实施例4：一种含即食型乳酸菌的组合物，所用的原料与制备工艺如下，以重量比计算如下：
[0132][0133]
制备工艺同实施例1。
[0134]
对比实施例5：一种含即食型乳酸菌的组合物，所用的原料与制备工艺如下，以重量比计算如下：
[0135]
[0136][0137]
制备工艺同实施例1。
[0138]
验证实施例
[0139]
一、本发明组合物对小鼠肠炎实验的治疗评价
[0140]
实验单位：鲁南制药集团山东新时代药业有限公司药理中心
[0141]
动物：balb/c小鼠由鲁南制药集团股份有限公司提供，实验动物合格证批号为：syxk
[0142]
(鲁)20180008，雌雄各半，3-4周龄，体重在18-22g。
[0143]
1.1造模及分组
[0144]
小鼠按照齐宇等产肠毒素大肠杆菌k88诱发balb/c小鼠肠炎模型的建立及评价方式建立小鼠肠炎模型。取造模完成的小鼠130只，随机分为模型对照组、阳性药组、实施例1、2、 3、4、5、6组及对比实施例1、2、3、4、5组，每组10只；另取正常小鼠10只，为空白对照组。
[0145]
各给药组小鼠按照以下方式进行给药：
[0146]
实施例1组：灌胃给予实施例1的组合物(0.78g/kg/d)；
[0147]
实施例2组：灌胃给予实施例2的组合物(0.78g/kg/d)；
[0148]
实施例3组：灌胃给予实施例3的组合物(0.78g/kg/d)；
[0149]
实施例4组：灌胃给予实施例4的组合物(0.78g/kg/d)；
[0150]
实施例5组：灌胃给予实施例5的组合物(0.78g/kg/d)；
[0151]
实施例6组：灌胃给予实施例6的组合物(0.78g/kg/d)；
[0152]
对比实施例1组：灌胃给予对比实施例1的组合物(0.78g/kg/d)；
[0153]
对比实施例2组：灌胃给予对比实施例2的组合物(0.78g/kg/d)；
[0154]
对比实施例3组：灌胃给予对比实施例3的组合物(0.78g/kg/d)；
[0155]
对比实施例4组：灌胃给予对比实施例4的组合物(0.78g/kg/d)；
[0156]
对比实施例5组：灌胃给予对比实施例4的组合物(0.78g/kg/d)；
[0157]
阳性对照组：服用肠炎宁片(给药剂量：0.44g/kg/d)。
[0158]
空白组对照组及模型对照组给予淀粉(剂量为0.78mg/日/灌胃)，连续给药4天；试验期间，模型对照组、各剂量组、空白对照组给予维持饲料组。
[0159]
1.2检测指标
[0160]
末次给药1h后，分别统计小鼠在24小时内的大便次数及8h内身体扭转次数，用于表征小鼠腹泻与腹痛次数，各组检测指标测量结果见表1。
[0161]
1.3统计学处理
[0162]
所有实验数据均以均数
±
标准差表示，采用spss19.0软件进行组间显著性t检验。
[0163]
表1各实施例各项指标的测定结果(n＝10)
[0164]
组别大便次数身体扭转次数(次数/8h)空白对照组2.2
±
0.473.12
±
0.88模型对照组8.1
±
1.77
**
19.72
±
4.01
**
阳性药组3.3
±
1.01
&&
5.72
±
1.52
&&
实施例1组3.8
±
0.40
&&##
6.81
±
1.14
&&##
实施例2组3.7
±
0.51
&&##
6.19
±
1.08
&&##
实施例3组2.8
±
0.46
&&##
5.25
±
1.27
&&##
实施例4组2.5
±
0.39
&&##
4.99
±
0.77
&&##
实施例5组2.5
±
0.51
&&##
4.25
±
1.01
&&##
实施例6组2.2
±
0.47
&&##
3.76
±
1.15
&&##
对比实施例1组8.0
±
1.27
**
18.19
±
3.22
**
对比实施例2组5.7
±
1.32
*&&
6.29
±
2.78
*&&
对比实施例3组5.4
±
1.94
*&&
6.67
±
4.14
*&&
对比实施例4组3.4
±
1.51
&&##
5.56
±
1.27
&&#
对比实施例5组4.9
±
0.59
&&#
10.25
±
2.25
&&#
[0165]
注：与空白对照组相比，
*
p《0.05，
**
p《0.01；
[0166]
与模型对照组相比，
&
p《0.05，
&&
p《0.01；
[0167]
与阳性药组相比，
％
p《0.05，
％％
p《0.01
[0168]
与对比实施例1组相比，
#
p《0.05，
##
p《0.01。
[0169]
由表1结果显示小鼠大便次数和身体扭转次数，空白对照组与模型对照组相比看出，本发明的造模是成功的，实施例1-6组对于小鼠大便次数和身体扭转次数均具有改善作用，对比实施例1-5由于采用的比例、辅料不同，均达不到本发明所述的技术效果。
[0170]
二、对出口梗阻型大鼠便秘模型作用的研究
[0171]
2.1材料与方法
[0172]
实验动物：sd大鼠，雌雄各半，体重180～220g，由鲁南制药集团股份有限公司提供，实验动物合格证批号为：syxk(鲁)20180008；实验前适应性饲养一周。
[0173]
2.2造模方法
[0174]
采用直肠不全结扎法造模。将大鼠随机分为空白组、模型组、实施例6组、实施例9 组、实施例10组、对比实施例1组、对比实施例2组，共计7个组，每组10只，雌雄各半。空白组不做任何处理。其他各组大鼠以30mg/kg剂量的戊巴比妥钠麻醉，开腹，暴露直肠，以10号丝线经腹壁从距肛门1-1.5cm处“8”字形从直肠下方绕过再经腹壁引出，丝线引入点和引出点在腹壁相距约0.5cm。在丝线内套入直径为0.5cm的铁丝，打结，保持直肠被部分缩窄并悬吊于腹壁、肠壁血运正常状态。闭合腹腔，大鼠苏醒后给与正常饮食。
[0175]
大鼠造模后，各给药组分别按照以下方式灌胃给予相应的药物：
[0176]
实施例6组：灌胃给予实施例6的组合物(0.54g/kg/d)；
[0177]
实施例9组：灌胃给予实施例9的组合物(相当于0.54g/kg/d即食型乳酸菌 0.19g/kg/d 首荟通便胶囊)；
[0178]
实施例10组：灌胃给予实施例10的组合物(相当于0.54g/kg/d即食型乳酸菌
0.15g/kg/d 复方芦荟胶囊)；
[0179]
对比实施例1组：灌胃给予对比实施例1的组合物(0.54g/kg/d)；
[0180]
对比实施例2组：灌胃给予对比实施例2的组合物(0.54g/kg/d)。
[0181]
空白组、模型组分别灌胃给予等量的生理盐水。
[0182]
连续给药3天，每天一次。
[0183]
2.3检测指标
[0184]
末次给药1h后，各组小鼠给予墨汁灌胃，灌胃结束30min后，立即脱颈椎处死大鼠，打开腹腔，分离肠系膜，以大肠上端至幽门为“小肠长度”，从幽门至墨汁前沿为“墨汁推进长度”。
[0185]
计算墨汁推进率：墨汁推进率(％)＝墨汁推进长度/小肠长度
×
100％
[0186]
称量小肠湿重，80℃烘干至恒重，称重。
[0187]
计算肠腔含水率：小肠含水率(％)＝(小肠湿重-小肠干重)/小肠湿重。
[0188]
数据结果采用spss19.0软件进行分析。
[0189]
2.4实验结果
[0190]
结果见表3。
[0191]
表2碳末推进率和小肠含水率的比较(n＝10)
[0192]
分组碳末推进率(％)小肠含水率(％)空白组44.6
±
7.655.8
±
9.5模型组32.9
±
8.5
**
68.4
±
8.3
**
实施例6组38.5
±
5.4
&
60.9
±
9.2
&&
实施例9组43.8
±
6.6
##@@
56.1
±
4.4
#
实施例10组37.2
±
5.6
**&
59.8
±
10.1对比实施例1组35.2
±
5.8
**&&
62.7
±
11.5
*&
对比实施例2组38.2
±
9.3
*&
57.1
±
10.3
[0193]
注：与空白对照组相比，
*
p《0.05，
**
p《0.01；
[0194]
与模型对照组相比，
&
p《0.05，
&&
p《0.01；
[0195]
与对比实施例1组相比，
#
p《0.05，
##
p《0.01；
[0196]
与对比实施例2组相比，
@
p《0.05，
@@
p《0.01。
[0197]
由表2可以看出，空白组与模型组相比，具有显著性差异(p《0.01)。实施例6、9、10 组、对比实施例1、2组与模型组相比，在促进大鼠的肠道蠕动，减少肠腔含水量具有不同的治疗效果，总体而言，使用实施例9组效果最优。
[0198]
三、膳食补充剂缓解小鼠体内抗生素导致的氧化应激损伤
[0199]
实验单位：鲁南制药集团山东新时代药业有限公司药理中心
[0200]
动物：昆明种小鼠，雄性，由鲁南制药集团股份有限公司提供，实验动物合格证批号为：syxk(鲁)20180008，雌雄各半，3-4周龄，体重在18-22g。
[0201]
3.1造模及分组
[0202]
昆明种小鼠120只，随机分为空白对照组、抗生素模型组、实施例13、14、15、16、 17、18、19、20、21、22、23、24组，每组10只。实验共42天，空白对照组在实验期间每天灌胃0.2ml无菌生理盐水溶液；抗生素模型组及各实施例组前14天每天灌胃0.2ml 的500mg/kg
氨苄青霉素溶液，自第15天起，抗生素模型组灌胃给予0.2ml无菌生理盐水溶液，各实施例组灌胃相应的膳食补充剂(冷冻干燥制备的膳食补充剂溶解于1ml无菌生理盐水溶液中，调整活菌数为10
10
)。
[0203]
3.2肝脏、肾脏中过氧化氢酶(cat)、丙二醛(mda)的测定
[0204]
末次给药后，取小鼠肝脏、肾脏，分别制作组织匀浆后，分别测定过氧化氢酶(cat)、丙二醛(mda)的含量。
[0205]
3.3结果统计
[0206]
对最终的分数进行汇总并采用spss19.0进行统计分析。
[0207]
表3抗生素导致的氧化应激损伤的检测
[0208][0209]
注：与对照组相比，
#
p＜0.05，
##
p＜0.05；
[0210]
与抗生素造模组相比，
▲
p＜0.05，
▲▲
p＜0.01。
[0211]
四、鲁南制药集团员工服用本发明药物组合物考察
[0212]
4.1.1实验材料
[0213]
药品：首荟通便胶囊，生产商：鲁南厚普制药有限公司。
[0214]
实验人员：从鲁南制药集团员工中筛选有减轻功能性便秘的意愿人群中，随机挑选120 志愿者。
[0215]
分组以及服用方法：
[0216]
实验组
①
组：首荟通便胶囊2粒/次 实施例6的组合物2g/次，早、中、晚各一次，每天三次；
[0217]
实验组
②
组：首荟通便胶囊2粒/次，早、中、晚各一次，每天三次；
[0218]
实验组
③
组：实施例6的组合物2g/次，早、中、晚各一次，每天三次。
[0219]
观察组：复方芦荟胶囊2粒/次，早、晚各一次。
[0220]
不间断服用14天，第二天开始统计实验组观察并记录各组的结果，14天之后再次统计便秘的情况以及胃肠道情况信息。
[0221]
4.1.2指标特征
[0222]
1)大便特征：排便次数以及满意度，服用相关实施例药物/组合物之后，24小时内排便的次数，连续14天统计。排便的难易程度：非常满意10分，满意7分，一般3分，差 1分。
[0223]
2)腹部特征：腹痛、腹鸣、腹泻、腹胀减轻程度分别为非常满意10分，满意7分，一般3分，差1分。
[0224]
3)14天之后，排便次数和腹痛、腹鸣、腹泻、腹胀情况统计。
[0225]
4.1.3结果检测
[0226]
对最终的分数进行汇总并采用spss19.0进行统计分析。
[0227]
表4腹部特征统计结果(n＝20)
[0228][0229]
注：与实验组
②
组相比，
#
p＜0.05，
##
p＜0.01；
[0230]
与观察组相比，
▲
p＜0.05，
▲▲
p＜0.01。
[0231]
表5大便特征统计结果(n＝20)
[0232][0233]
注：与实验组
②
组相比，
#
p＜0.05，
##
p＜0.01；
[0234]
与观察组相比，
▲
p＜0.05，
▲▲
p＜0.01。
[0235]
从表4和表5可以看出，腹腔特征和大便特征中，实验各组均有不同程度的改善，实验组的各组中与观察组在腹部、大便特征中具有显著性差异，实验组
②
组的各项指征最优。
[0236]
4.2.1各实施例感官指标
[0237]
产品：本发明实施例6、对比实施例1-4的产品。
[0238]
实验人员：从鲁南制药集团员工中50人，进行试验。
[0239]
分组模式：随机分组，实验组
①
组(实施例6的组合物)、实验组
②
组(对比实施例1 的组合物)、实验组
③
组(对比实施例2的组合物)、实验组
④
组(对比实施例3的组合物)、实验组
⑤
组(对比实施例4的组合物)，每组10人。
[0240]
指标：
[0241]
1)口感程度：服用组合物的口感满意度：非常满意10分，满意7分，一般3分，差 1分。
[0242]
2)饮食：服用组合物之后食欲情况：非常满意10分，满意7分，一般3分，差1分。
[0243]
3)气味：服用组合物的清香程度：非常满意10分，满意7分，一般3分，差1分。
[0244]
4)口臭改善：服用组合物的口臭改变程度：非常满意10分，满意7分，一般3分，差1分。
[0245]
表6各实施例各项指标的测定结果(n＝20)
[0246]
组别口感程度气味饮食口臭实验组
①
组96.7
±
10.7
#@@￥￥
96.5
±
10.2
#@@￥￥
98.5
±
9.3
##@
▲▲
97.9
±
8.6
##@
▲▲
实验组
②
组81.4
±
10.187.2
±
8.157.5
±
7.365.5
±
7.7实验组
③
组71.3
±
9.676.8
±
6.587.2
±
8.584.8
±
8.2实验组
④
组50.7
±
10.756.5
±
8.693.8
±
9.990.8
±
9.9实验组
⑤
组76.7
±
8.575.9
±
8.492.5
±
8.391.5
±
8.6
[0247]
注：与实验组
②
组相比，
#
p＜0.05，
##
p＜0.01；与实验组
③
组相比
@
p＜0.05，
@@
p＜0.01；
[0248]
与实验组
④
组相比，
￥
p＜0.05，
￥￥
p＜0.01；与实验组
⑤
组相比，
▲
p＜0.05，
▲▲
p＜0.01。
[0249]
从表6可以看出，实施例6的组合物与对比实施例1-4的组合物相比，在口感、气味等指标测量上，本发明实施例6的组合物显著优于对比实施例1-4，说明本发明的组合物适合进一步推广应用。
[0250]
四、活菌数测定
[0251]
贮存条件：以铝箔袋真空热封包装，避光、避湿、避氧，置于-20℃条件下贮存；
[0252]
活菌数量：测定贮存0天、15天、30天、120天后的实施例13、16、19、22的活菌数量，考察贮存温度和贮存时间对益生菌膳食补充剂活性的影响。其中实施例13、16、19、 22的活菌数量如表7。
[0253]
方法：以平板菌落计数法测定其初始时的活菌数。贮存一定时间后，以相同方法测定
[0254]
益生菌膳食补充剂的活菌数。结果如表7所示：
[0255]
表7活菌数的测定的变化
[0256][0257]
五、不同乳酸菌对人体肠细胞黏附性能的比较
[0258]
实验用菌株：两岐双歧杆菌bb-g90、格氏乳杆菌lg-g12、干酪乳杆菌lc-g11、副干酪乳杆菌lpc-g110
[0259]
培养ht-29细胞于rpmi 1640(10％胎牛血清，1％抗生素)培养基中，每两天更换培养基直到细胞达到80-90％。调整细胞浓度为1
×
105cells/ml，接种于六孔培养板中，在培养板中预先放入18
×
18mm无菌盖玻片，并置于37℃，95％空气/5％co2培养箱中培养，直到生长成为致密单层细胞。用pbs缓冲液清洗细胞两次后，每孔加入1ml无抗生素的rpmi培养基和1ml培养好并重悬于pbs中的菌悬液(细菌总数为108)，混匀后置于培养箱中孵育，每株菌有三个平行。培养2h后，取出培养板，用pbs缓冲液清洗细胞直至除去未黏附的乳酸菌。加入无水甲醇固定30min后对细胞玻片进行革兰氏染色。
[0260]
在显微镜下随机选取20个视野，计数100个细胞上黏附的乳酸菌个数。将乳酸菌与ht-29 细胞共培养2h后固定制成玻片，显微镜观察乳酸菌情况。具体见表8：
[0261]
表8细胞黏附菌数
[0262]
菌种黏附菌数(个/细胞)两岐双歧杆菌bb-g9040.2
±
2.25格氏乳杆菌lg-g1241.0
±
1.27干酪乳杆菌lc-g1138.6
±
0.24副干酪乳杆菌lpc-g11042.7
±
2.66