一种氧糖剥夺共PM2.5染毒模型的构建方法及应用与流程

技术特征：
1.一种氧糖剥夺共pm2.5染毒模型的构建方法，其特征在于包括以下步骤：步骤(1)：用th-150c型智能颗粒物中流量采样器采集待检测环境的pm2.5颗粒一定时间；步骤(2)：制备pm2.5悬浊液；步骤(3)：神经细胞pc12的培养神经细胞pc12接种于培养瓶中，然后加入培养基进行重悬细胞，接种密度为1
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104个/瓶，在恒温co2培养箱中培养，待细胞覆盖培养瓶80％后得到培养好的神经细胞pc12；恒温co2培养箱的培养条件为37℃、5％co2，培养时间为24h；步骤(4)：利用氧糖剥夺装置对步骤(3)培养好的神经细胞pc12进行氧糖剥夺，同时加入步骤(2)不同浓度的pm2.5悬浊液进行染毒，建立细胞氧糖剥夺共pm2.5染毒模型；具体是：将步骤(3)培养好的神经细胞pc12，用胰酶消化，加培养基终止消化并离心，离心后加入培养基多次吹打均匀，得到细胞悬浮液；然后将上述细胞悬浮液接种到96孔板中，接种密度为8
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103个/孔，待细胞贴壁长满孔板的80％，吸弃原培养基，用pbs洗涤2次，用无糖的dmem培养基洗涤1次，得到洗涤后的贴壁细胞；在上述保有洗涤后贴壁细胞的96孔板中每孔加入无糖的dmem培养基和步骤(2)pm2.5悬浊液，然后置于氧糖剥夺装置中，在混合气体通气环境中，ogd和pm2.5染毒联合处理4-8h；最后将96孔板中无糖的dmem培养基吸弃，pbs清洗一次，再加入培养基和步骤(2)pm2.5，放入co2恒温培养箱继续培养2-6h；恒温co2培养箱的培养条件为37℃、5％co2。2.根据权利要求1所述的一种氧糖剥夺共pm2.5染毒模型的构建方法，其特征在于步骤(2)具体是：2-1将步骤(1)采集得到的粘附有pm2.5颗粒的滤膜浸入超纯水中，放在20-25℃下超声振荡处理60-80min，刮取滤膜表面的pm2.5颗粒，过滤，得到过滤后的悬浮液；2-2将过滤后的悬浮液分装至离心管中，锡箔纸封瓶，用针扎小口，置于4℃冰箱过夜；隔天对其进行冷冻干燥处理24小时，得到灰黑色颗粒物，即pm2.5颗粒物；将上述pm2.5颗粒物与培养基混合，配制成不同终浓度的悬浊液，置于4℃冰箱保存备用。3.根据权利要求1所述的一种氧糖剥夺共pm2.5染毒模型的构建方法，其特征在于步骤(2)所述混合气体包括体积比为95：5的氮气和二氧化碳气体。4.根据权利要求1所述的一种氧糖剥夺共pm2.5染毒模型的构建方法，其特征在于步骤(2)所述的培养基的主成分包括dmem培养基88wt％、胎牛血清10wt％、抗生素2wt％。5.根据权利要求4所述的一种氧糖剥夺共pm2.5染毒模型的构建方法，其特征在于步骤(2)所述抗生素包括青霉素和链霉素。6.根据权利要求1所述的一种氧糖剥夺共pm2.5染毒模型的构建方法，其特征在于步骤(2)所述氧糖剥夺装置包括容器本体、与容器本体可拆卸连接的盖子；容器本体为上端开放的容器，其上端与盖子配合实现密封；在盖子的顶部开有两个通孔，分别作为出气口和进气口。7.根据权利要求6所述的一种氧糖剥夺共pm2.5染毒模型的构建方法，其特征在于步骤(2)所述容器本体和盖子的材质为玻璃透明材质。8.一种用于评估pm2.5暴露对缺血性脑卒中康复的细胞模型，采用权利要求1-7任一项
所述方法制备得到的氧糖剥夺共pm2.5染毒模型。

技术总结
本发明公开一种氧糖剥夺共PM2.5染毒模型的构建方法及应用。采用自制的氧糖剥夺装置对神经细胞进行氧糖剥夺造模，其次用不同剂量的PM2.5对氧糖剥夺的细胞进行染毒建立氧糖剥夺共PM2.5染毒模型，用于评估外源污染物暴露对缺氧缺糖损伤的神经细胞毒性的影响，从而反应对缺血性脑卒中的影响。本发明体外模型操作简便、建模成功率高，所需样本量小，基于酶标仪的数据获得方便快速，具有重复性好等优点。具有重复性好等优点。具有重复性好等优点。


技术研发人员：刘珂舟 贾瑞 严明 印梦婕
受保护的技术使用者：杭州电子科技大学
技术研发日：2021.11.03
技术公布日：2022/3/3