一种鱼蛋白肽及其制备方法与应用与流程

1.本发明属于水产饲料技术领域，尤其涉及一种鱼蛋白肽及其制备方法与应用。


背景技术：

2.蛋白肽是蛋白质中20个天然氨基酸以不同组成和排列方式构成的从二肽的线性、环型结构的不同肽类的总称，是一种生物活性物质，机体摄食蛋白质经消化道的酶作用后，大多以低分子量肽形式吸收的，以游离氨基酸形式吸收的比例很小。研究表明，低分子量肽比游离氨基酸消化更快、吸收更多，其生物效价和营养价值比游离氨基酸更高；且蛋白质酶解后的产物小肽不但容易消化、吸收，而且还具有抗高血压、抗胆固醇、抗血栓形成、改善脂质代谢、增强动物体体能、帮助恢复疲劳、促进钙磷和其它微量元素的吸收、促进大脑发育、提高记忆力、增强巨噬细胞和b细胞活力、增强免疫功能、保护表皮细胞、防止黑色素沉淀、消除体内自由基等功效。目前已开发的肽类食品或饲料产品有大豆肽、酪蛋白肽、玉米蛋白肽、水产蛋白肽等。
3.鱼蛋白肽属于水产蛋白肽的一种，是以鱼类组织为材料，采用自溶酶解、酶解法、液态发酵法或固态发酵与液态酶解相结合等方法制得，其中发酵或酶解是使用最为普遍的方法。然而，无论是微生物发酵还是蛋白酶酶解，均会产生苦味肽，会极大的影响鱼蛋白肽的适口性，在作为饲料添加剂使用时会明显降低养殖动物的摄食率。因此，通常需要在鱼蛋白肽的制备过程中增加去除苦味的程序，但也造成了成本的增加；或者是在鱼蛋白肽中加入掩味剂和增香剂，从而一定程度上改善口感，但该方法也会使成本增加。
4.因此，希望提供一种能够有效减少鱼蛋白肽苦味的制备方法，以降低鱼蛋白肽的生产成本，使其能够更好的应用于动物饲料领域。


技术实现要素：

5.本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种鱼蛋白肽及其制备方法与应用。采用该制备方法所制得鱼蛋白肽的营养价值高且苦味强度低，具有良好的适口性，可作为蛋白类饲料原料的替代物应用于动物饲料中。
6.本发明提供了一种鱼蛋白肽的制备方法，包括以下步骤：
7.(1)将水产动物蛋白与水混合后进行研磨，得到混合料；
8.(2)在所述混合料中加入胰蛋白酶进行一次水解，再加入风味蛋白酶进行二次水解；
9.(3)水解结束后，加热灭酶，过滤取滤液，得到所述鱼蛋白肽。
10.本发明发现，通过对水产动物蛋白采用胰蛋白酶和风味蛋白酶双酶分步水解的方式，不仅可以增加蛋白酶的特异性催化位点从而提高蛋白的水解度；更关键的是，该方法可以有效减少苦味肽的产生，无需加入掩味剂和增香剂，也不需要额外进行去除苦味的步骤，也能保证所制得的鱼蛋白肽具备良好的适口性，可作为水产饲料添加剂进行使用。同时，本发明还发现加酶顺序对水解产物的苦味肽含量有较大影响，采用胰蛋白酶、风味蛋白酶依
次进行水解的方式所得鱼蛋白肽的苦味强度更低。
11.优选的，步骤(1)所述水产动物蛋白来源于鱼肉、鱼皮、鱼鳞或鱼骨中的至少一种。
12.优选的，步骤(1)所述混合料中水产动物蛋白与水的重量比为1：(2.5-4)。
13.优选的，步骤(2)中采用胰蛋白酶进行水解的温度为47-52℃。
14.优选的，步骤(2)中采用胰蛋白酶进行水解的ph为7.0-7.5。
15.优选的，步骤(2)中采用胰蛋白酶进行水解的酶添加量为1-1.5％。上述酶添加量的含义为胰蛋白酶占水产动物蛋白总质量的1-1.5％。
16.优选的，步骤(2)中采用胰蛋白酶进行水解的时间为4-5h。
17.优选的，步骤(2)中采用风味蛋白酶进行水解的温度为55-58℃。
18.优选的，步骤(2)中采用风味蛋白酶进行水解的ph为6.2-6.5。
19.优选的，步骤(2)中采用风味蛋白酶进行水解的酶添加量为3-5％。上述酶添加量的含义为风味蛋白酶占水产动物蛋白总质量的3-5％。
20.优选的，步骤(2)中采用风味蛋白酶进行水解的时间为1.5-2h。
21.优选的，步骤(3)中加热灭酶的温度为85-90℃，加热灭酶的时间为10-25min。
22.本发明还提供了一种鱼蛋白肽，由上述制备方法所制得。本发明所述鱼蛋白肽的营养丰富，易于吸收，且具有苦味强度低的优势，适口性更强。
23.本发明还提供了一种鱼蛋白肽粉，由上述鱼蛋白肽经冷冻干燥或喷雾干燥所制得。
24.优选的，所述喷雾干燥的参数为：喷雾压力为15-20mpa，进风温度为150-165℃、出风温度为75-90℃。
25.本发明还提供了上述鱼蛋白肽或鱼蛋白肽粉在制备水产饲料添加剂中的应用。由于上述鱼蛋白肽或鱼蛋白肽粉具备比传统水产饲料中鱼粉更好的营养价值和消化吸收率，因而可用于全部或部分替代饲料中的鱼粉用量。
26.相对于现有技术，本发明的有益效果如下：
27.本发明采用胰蛋白酶和风味蛋白酶双酶对水产蛋白进行依次水解的方式，能够有效降低所制得鱼蛋白肽中的苦味肽含量，显著减少鱼蛋白肽的苦味强度，从而提高适口性，使其更适用于在水产饲料中的添加和使用。相较于常规去除鱼蛋白肽中苦味的方法，本发明所采用的制备方法更为简便、生产成本更低，更有利于大规模推广和应用。
具体实施方式
28.为了让本领域技术人员更加清楚明白本发明所述技术方案，现列举以下实施例进行说明。需要指出的是，以下实施例仅为本发明的优选实施例，对本发明要求的保护范围不构成限制作用，任何未违背本发明的精神实质和原理下所做出的修改、替代、组合，均包含在本发明的保护范围内。
29.以下实施例中所用的原料、试剂或装置如无特殊说明，均可从常规商业途径得到，或者可以通过现有已知方法得到。
30.实施例1
31.本实施例提供一种鱼蛋白肽粉，其制备方法包括以下步骤：
32.(1)选用罗非鱼下角料(包括鱼皮、鱼骨和鱼鳞)作为水产动物蛋白，将100重量份
的水产动物蛋白与250重量份的水混合，经研磨成浆，得到混合料；
33.(2)往步骤(1)制得的混合料中加入1.5重量份的胰蛋白酶，进行一次水解；一次水解的温度为50℃，ph为7.2，水解的时间为4.5h；
34.一次水解完成后，继续加入3重量份的风味蛋白酶，进行二次水解；二次水解的温度为55℃，ph为6.5，水解的时间为2h；所用胰蛋白酶和风味蛋白酶均购买自南宁庞博生物工程有限公司。
35.(3)水解结束后，以90℃加热灭酶20min，过滤取滤液，得到含有鱼蛋白肽的水解液；
36.(4)经喷雾干燥，得到鱼蛋白肽粉；其中，喷雾干燥的压力为15mpa，进风温度为155℃、出风温度为80℃。
37.实施例2
38.本实施例提供一种鱼蛋白肽粉，其制备方法包括以下步骤：
39.(1)选用罗非鱼下角料(包括鱼皮、鱼骨和鱼鳞)作为水产动物蛋白，将100重量份的水产动物蛋白与250重量份的水混合，经研磨成浆，得到混合料；
40.(2)往步骤(1)制得的混合料中加入1重量份的胰蛋白酶，进行一次水解；一次水解的温度为50℃，ph为7.2，水解的时间为4h；
41.一次水解完成后，继续加入3.5重量份的风味蛋白酶，进行二次水解；二次水解的温度为55℃，ph为6.5，水解的时间为2h；所用胰蛋白酶和风味蛋白酶均购买自南宁庞博生物工程有限公司。
42.(3)水解结束后，以90℃加热灭酶20min，过滤取滤液，得到含有鱼蛋白肽的水解液；
43.(4)经喷雾干燥，得到鱼蛋白肽粉；其中，喷雾干燥的压力为15mpa，进风温度为155℃、出风温度为80℃。
44.对比例1
45.本对比例提供一种鱼蛋白肽粉，其制备方法包括以下步骤：
46.(1)选用罗非鱼下角料(包括鱼皮、鱼骨和鱼鳞)作为水产动物蛋白，将100重量份的水产动物蛋白与250重量份的水混合，经研磨成浆，得到混合料；
47.(2)往步骤(1)制得的混合料中加入4.5重量份的胰蛋白酶进行水解；水解的温度为50℃，ph为7.2，水解的时间为6.5h；所用胰蛋白酶购买自南宁庞博生物工程有限公司。
48.(3)水解结束后，以90℃加热灭酶20min，过滤取滤液，得到含有鱼蛋白肽的水解液；
49.(4)经喷雾干燥，得到鱼蛋白肽粉；其中，喷雾干燥的压力为15mpa，进风温度为155℃、出风温度为80℃。
50.与实施例1相比，对比例1只采用胰蛋白酶进行单酶水解。
51.对比例2
52.本对比例提供一种鱼蛋白肽粉，其制备方法包括以下步骤：
53.(1)选用罗非鱼下角料(包括鱼皮、鱼骨和鱼鳞)作为水产动物蛋白，将100重量份的水产动物蛋白与250重量份的水混合，经研磨成浆，得到混合料；
54.(2)往步骤(1)制得的混合料中加入4.5重量份的风味蛋白酶进行水解；水解的温
度为55℃，ph为6.5，水解的时间为6.5h；所用风味蛋白酶购买自南宁庞博生物工程有限公司。
55.(3)水解结束后，以90℃加热灭酶20min，过滤取滤液，得到含有鱼蛋白肽的水解液；
56.(4)经喷雾干燥，得到鱼蛋白肽粉；其中，喷雾干燥的压力为15mpa，进风温度为155℃、出风温度为80℃。
57.与实施例1相比，对比例1只采用风味蛋白酶进行单酶水解。
58.对比例3
59.本对比例提供一种鱼蛋白肽粉，其制备方法包括以下步骤：
60.(1)选用罗非鱼下角料(包括鱼皮、鱼骨和鱼鳞)作为水产动物蛋白，将100重量份的水产动物蛋白与250重量份的水混合，经研磨成浆，得到混合料；
61.(2)往步骤(1)制得的混合料中加入3重量份的风味蛋白酶，进行一次水解；一次水解的温度为55℃，ph为6.5，水解的时间为2h；
62.一次水解完成后，继续加入1.5重量份的胰蛋白酶，进行二次水解；二次水解的温度为50℃，ph为7.2，水解的时间为4.5h；所用胰蛋白酶和风味蛋白酶均购买自南宁庞博生物工程有限公司。
63.(3)水解结束后，以90℃加热灭酶20min，过滤取滤液，得到含有鱼蛋白肽的水解液；
64.(4)经喷雾干燥，得到鱼蛋白肽粉；其中，喷雾干燥的压力为15mpa，进风温度为155℃、出风温度为80℃。
65.与实施例1相比，对比例3依次采用风味蛋白酶和胰蛋白酶进行分步水解。
66.产品效果测试
67.目前国内外常用的苦味的评价方法主要有四种：人的感官评定，动物的感官评定、钙成像法以及电子舌。就目前而言，最精确和贴近生活的评价方法依然是人的感官评价。而利用感官评定对苦味进行评定的方法也主要有三种：(1)将样品的苦味与标准品进行对照，得到的样品与标准品的苦味值相近时标准品的苦味值定位待评定样品的苦味值；(2)将样品苦味样品进行稀释，将能够尝出苦味的最大稀释倍数作为苦味值(3)根据标准品设置不同浓度作为苦味强度的参考值，根据苦味与分值之间形成的线性关系对样品进行感官评定。本发明采用上述感官评定方法(3)对实施例1-2、对比例1-3所制得的鱼蛋白肽粉的苦味强度进行测定。
68.以不同浓度(质量体积比)的咖啡因水溶液设置苦味强度标准品，设置规则如表1所示。
69.表1苦味强度标准品
70.咖啡因浓度00.03％0.09％0.15％苦味强度02610
71.取实施例1-2、对比例1-3所制得的鱼蛋白肽粉各2.5g，分别溶于100ml的超纯水中，作为待测样品。选用5位具有一定感官评价知识和能力的评定员组成评定小组，评定员先用水漱口，取待评定的待测样品2-3ml放入口中，让样品分散于整个口腔，主要让舌根部感受苦味，10s后将样品吐出，用水漱口。并与标准品进行评测比较，根据标准品的苦味强度
值对待测样品进行苦味强度打分，取平均值作为苦味强度。两次待测样品进行苦味评定的中间至少间隔5min，防止两次感官评定的样品之间相互影响。测试结果如表2所示。
72.表2待测样品的苦味强度
73.待测样品实施例1实施例2对比例1对比例2对比例3苦味强度1.71.63.86.43.0
74.由表2可以看出：根据对比例1-2的比较可知，在相同水解时间和酶添加量的条件下，相比于胰蛋白酶，采用风味蛋白酶进行单酶水解后的鱼蛋白肽的苦味强度更低。而将对比例3与对比例1-2比较，发现依次采用风味蛋白酶和胰蛋白酶进行分步水解时，所制得的鱼蛋白肽的苦味强度还获得少量降低。而实施例1-2则表明，通过调整风味蛋白酶和胰蛋白酶的水解顺序，采用胰蛋白酶、风味蛋白酶依次进行水解的方式所得鱼蛋白肽的苦味强度却能够实现更为显著的降低。
75.上面对本技术实施例作了详细说明，但是本技术不限于上述实施例，在所属技术领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本技术宗旨的前提下作出各种变化。此外，在不冲突的情况下，本技术的实施例及实施例中的特征可以相互组合。