艾地骨化醇在降糖降脂方面的应用的制作方法

1.本发明属于生物医药技术领域，具体涉及艾地骨化醇在降糖降脂方面的应用。


背景技术：

2.本发明背景技术中公开的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
3.艾地骨化醇(eldecalcitol,eld/ed-71，cas号:104121-92-8)，化学式为1α,25-二羟基-2β-(3-羟基丙氧基)维生素d3，是日本中外制药集团(chugai pharmaceutical co.,ltd)新近研发的活性维生素d3类似物，具有促进肠钙吸收、抑制骨钙重吸收、增加血钙浓度、维持骨代谢平衡以及改善骨骼质量的作用，临床上用于骨质疏松症的治疗。该药自从2011年首次在日本上市以来，大量临床实验证据表明ed-71疗效优于传统活性维生素d3骨化三醇，且安全性与骨化三醇类似，具有良好的临床推广前景。
4.与其他活性维生素d3类似物不同，ed-71与血清中维生素d3受体(vitamin d receptor，vdr)的亲和力较低(约为传统活性维生素d3的1/2)，而与维生素d结合蛋白(vitamin d binding protein，vbp)的亲和力较高(约为传统活性维生素d3的4倍)，这可以显著增加其在血浆中的半衰期。因此，ed-71在体内的药效更持久、利用率更高。此外，研究还发现ed-71对甲状旁腺激素的抑制作用减弱，弥补了原有活性维生素d3引起钙、磷失衡的缺陷，优化了对骨质代谢的调节。近年来亦有文献报道ed-71对肌肉有积极作用，可增加肌肉力量和姿势平衡。然而，对于艾地骨化醇的其他用药用途则鲜有报道。


技术实现要素：

5.针对现有技术中的不足，本发明的目的在于艾地骨化醇在降糖降脂方面的应用。本发明在以糖尿病性骨质疏松症小鼠为试验对象，研究艾地骨化醇对骨质疏松的治疗作用时，意外发现，施用艾地骨化醇的糖尿病性骨质疏松症小鼠，除骨质疏松得到改善之外，血清中葡萄糖含量明显下降，同时实验小鼠的体重、血清总胆固醇也明显降低，肝脏组织中脂肪空泡性变减少，表明艾地骨化醇还具有降糖降脂的作用。基于上述研究成果，从而完成本发明。
6.本发明的第一个方面，提供艾地骨化醇在制备降糖和/或降脂药物中的应用。
7.其中，艾地骨化醇其化学式为1α,25-二羟基-2β-(3-羟基丙氧基)维生素d3；cas号:104121-92-8。
8.进一步的，所述降糖和/或降脂具体表现为：
9.a)降低受试者血糖；
10.b)降低受试者体重、血清总胆固醇，减少肝脏组织中脂肪空泡性变。
11.所述a)中，降低受试者血糖具体为降低受试者血清中的葡萄糖含量。
12.所述受试者可以为糖尿病患者，其因患糖尿病导致高血糖，施用艾地骨化醇后能
够降低受试者血清中葡萄糖含量，甚至可降低至正常血清中的葡萄糖水平，表现出良好的降糖效果。
13.同时，施用艾地骨化醇能够降低受试者的体重、血清总胆固醇，减少肝脏组织中脂肪空泡性变，表明其具有降脂以及降低体重等作用。
14.本发明的第二个方面，提供一种药物组合物，所述药物组合物包含上述艾地骨化醇与至少一种其它药物活性成分组成；所述药物组合物用于降糖和/或降脂。
15.本发明的第三个方面，提供一种药物制剂，所述药物制剂包含如下(a)或(b)：
16.(a)上述艾地骨化醇和至少一种其它非药物活性成分；
17.(b)上述药物组合物和至少一种其它非药物活性成分。
18.本发明的第四个方面，提供一种降糖和/或降脂的方法，所述方法包括：向受试者施加有效剂量的上述艾地骨化醇、上述药物组合物或上述药物制剂。
19.当受试者为糖尿病性骨质疏松症的模型小鼠时，所述降糖和/或降脂具体表现为：
20.1)降低模型小鼠因糖尿病导致的高血糖；
21.2)降低模型小鼠的体重、血清总胆固醇，减少肝脏组织中脂肪空泡性变。
22.上述一个或多个技术方案的有益技术效果：
23.上述技术方案提供艾地骨化醇在降糖降脂方面的应用，本技术通过研究发现，ed-71除了具有改善骨质疏松的效果外，还可用于降低糖尿病导致的高血糖，同时还具有降脂，降低体重、血清总胆固醇，减少肝脏组织中脂肪空泡性变的作用，本发明的应用为首次公开，且与艾地骨化醇已知的临床用药用途不同，为艾地骨化醇开辟了新的药物用途，也为开发高效特异的降糖降脂药物奠定实验基础并提供新的视野，因此具有良好的实际推广应用之价值。
附图说明
24.构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
25.图1为本发明实施例治疗过程中受试小鼠血糖变化图；
26.图2为本发明实施例治疗结束后受试小鼠血糖水平图；
27.图3为本发明实施例治疗过程中受试小鼠体重变化图；
28.图4为本发明实施例治疗结束后受试小鼠形态比较图；
29.图5为本发明实施例治疗结束后受试小鼠血清总胆固醇比较图；
30.图6为本发明实施例治疗结束后受试小鼠肝脏中脂肪空泡性变比较图。
具体实施方式
31.应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
32.需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本发明的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包
括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
33.现结合具体实例对本发明作进一步的说明，以下实例仅是为了解释本发明，并不对其内容进行限定。如果实施例中未注明的实验具体条件，通常按照常规条件，或按照试剂公司所推荐的条件；下述实施例中所用的试剂、耗材等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
34.本发明的一个具体实施方式中，艾地骨化醇在制备降糖和/或降脂药物中的应用。
35.其中，艾地骨化醇其化学式为1α,25-二羟基-2β-(3-羟基丙氧基)维生素d3；cas号:104121-92-8。
36.进一步的，所述降糖和/或降脂具体表现为：
37.a)降低受试者血糖；
38.b)降低受试者体重、血清总胆固醇，减少肝脏组织中脂肪空泡性变。
39.所述a)中，降低受试者血糖具体为降低受试者血清中的葡萄糖含量。
40.进一步的，所述受试者可以为糖尿病患者，其因患糖尿病导致高血糖，施用艾地骨化醇后能够降低受试者血清中葡萄糖含量，甚至可降低至正常血清中的葡萄糖水平，表现出良好的降糖效果。
41.同时，施用艾地骨化醇能够降低受试者的体重、血清总胆固醇，减少肝脏组织中脂肪空泡性变，表明其具有降脂以及降低体重的作用。
42.本发明的第二个方面，提供一种药物组合物，所述药物组合物包含上述艾地骨化醇与至少一种其它药物活性成分组成；所述药物组合物用于降糖和/或降脂。
43.本发明的第三个方面，提供一种药物制剂，所述药物制剂包含如下(a)或(b)：
44.(a)上述艾地骨化醇和至少一种其它非药物活性成分；
45.(b)上述药物组合物和至少一种其它非药物活性成分。
46.其他非药物活性成分包括但不限于药学上可接受的载体、赋形剂和/或稀释剂。
47.其他非药物活性成分包括药学上可接受的载体、赋形剂和/或稀释剂。例如药学上相容的无机或有机酸或碱、聚合物、共聚物、嵌段共聚物、单糖、多糖、离子和非离子型表面活性剂或脂质、药理上无害的盐例如氯化钠、调味剂、维生素例如维生素a或维生素e、生育酚或维生素原、抗氧化剂，例如抗坏血酸，以及用于延长药物活性成分或配方的使用和保存时间的稳定剂和/或防腐剂，和其它现有技术中公知的常用非药物活性成分或助剂和添加剂，以及它们的混合物。
48.所述药物制剂可以单位剂量形式给药。给药剂型可以是常用的艾地苯化合物剂型形式，或者其他可行的剂型，比如本领域技术人员可以在常规的剂型中选择适合于艾地苯化合物的剂型，通过加入与艾地苯化合物相容的载体、赋形剂、粘合剂、稀释剂等来实现。该处所述的常规剂型比如液体剂型、固体剂型、外用制剂、喷剂等等，比如下列剂型：真溶液类、胶体类、微粒剂型、乳剂剂型、混旋剂型、片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、栓剂、冻干粉针剂、包合物、填埋剂、贴剂、擦剂等。
49.本发明的第四个方面，提供一种降糖和/或降脂的方法，所述方法包括：向受试者施加有效剂量的上述艾地骨化醇、上述药物组合物或上述药物制剂。
50.所述受试者是指已经是治疗、观察或实验的对象的动物，包括人和非人动物，如小鼠，进一步为c57blks/j iar- leprdb/ leprdb小鼠(db/db)，其可视为糖尿病性骨质疏松
症的动物模型。所述“治疗有效量”是指包括本发明化合物在内的活性化合物或药剂的量，该量可引起研究者、兽医、医生或其他医疗人员所追求的组织系统、动物或人的生物学或医学响应，这包括减轻或部分减轻受治疗的疾病、综合征、病症或障碍的症状。必须认识到，本发明所述活性成分的最佳给药剂量和间隔是由其性质和诸如给药的形式、路径和部位以及所治疗的特定动物等外部条件决定的，而这一最佳给药剂量可用常规的技术确定。同时也必须认识到，最佳的疗程，即同时化合物在额定的时间内每日的剂量，可用本领域内公知的方法确定。
51.当受试者为糖尿病性骨质疏松症的模型小鼠时，所述降糖和/或降脂具体表现为：
52.1)降低模型小鼠因糖尿病导致的高血糖；
53.2)降低模型小鼠的体重、血清总胆固醇，减少肝脏组织中脂肪空泡性变。
54.以下通过实施例对本发明做进一步解释说明，但不构成对本发明的限制。应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中为注明具体条件的试验方法，通常按照常规条件进行。
55.实施例
56.一、实验设计
57.1、投药过程：
58.c57blks/j iar- leprdb/ leprdb小鼠(db/db)被视作糖尿病性骨质疏松症的模型。雄性db/db小鼠(体重：33-45g；年龄：8w；n＝4)购自南京大学(中国江苏)模型动物研究所，并在标准实验室条件下饲养：12小时明暗循环，恒温20℃，湿度48％。随后小鼠被随机分配到以下两组：对照组，口服pbs 4周；ed-71组，口服ed-71(0.25μg/kg，每周3次)治疗4周。
59.2、血糖测定：
60.在药物干预期间，小鼠每5天禁食、水8小时，备测小鼠空腹血糖。8小时后，尾静脉穿刺获取尾静脉血，采用血糖仪(鱼跃医疗器械有限公司，中国)检测空腹血糖水平。
61.3、生化分析：
62.治疗结束后，将小鼠麻醉，采用眼眶静脉丛采血方法收集血样。3000rpm下离心10min以分离血清样品，-80℃储存样品。根据制造商的说明，使用试剂盒(迈瑞医疗有限公司，中国)检测血清葡萄糖、血清总胆固醇水平。
63.4、切片制备
64.(1)治疗结束后，将小鼠麻醉，解剖获取小鼠肝脏，在4℃冷藏条件下固定24h后，pbs溶液浸泡洗涤2天。
65.(2)组织经70％、80％、90％、100％(i)和100％(ii)的梯度浓度酒精搅拌脱水，每个浓度脱水6小时。
66.(3)脱水完成后，将组织浸泡在二甲苯溶液中透明，每次1.5小时，进行两次。
67.(4)组织透明后，埋入液体石蜡，包埋机两蜡缸依次浸泡，每次3小时，进行两次。
68.(5)通过石蜡切片机制备5微米连续石蜡切片，并将切片置于42℃烘烤机烘烤4h，及在37℃烤箱中烘烤12h待用。
69.5、he染色：
70.(1)将石蜡切片浸泡在二甲苯ⅰ液和二甲苯ⅱ液中脱蜡，每次10分钟。将切片放入浓度梯度为100％(i)、100％(ii)、90％、80％和70％的梯度酒精再次水化，每次2分钟，随后
用双蒸水漂洗2次。
71.(2)将漂洗后的切片浸泡在苏木精染液中浸泡15min后，双蒸水漂洗2次。
72.(3)随后将切片浸泡在伊红染液中浸泡7min后，双蒸水漂洗2次。
73.(4)然后切片通过70％、80％、90％、100％(i)和100％(ii)的酒精浓度梯度脱水，每次2min。将切片浸泡在二甲苯溶液，每次10分钟，进行两次。最后使用中性树胶封片。光学显微镜下观察肝脏组织中细胞脂肪性变情况。
74.6、统计分析：
75.采用image pro plus 6.0软件进行图像测量和统计分析。每项指标至少有10个以上独立样本进行分析。所有数据均进行正态性检验。对于符合正态分布的数据组，进行单向方差分析以评估多个组之间的差异。随后，使用tukey's检验进行组织成对比较。对于不符合正态分布的数据组，执行kruskal-wallis检验，然后进行dunn检验。所有值均为平均值
±
标准差。本实验中所有统计学分析结果，p《0.05表示有统计学意义。
76.二、实验结果
77.1、降糖效果
78.采用db/db小鼠模拟糖尿病骨质疏松症，给予0.25μg/kg ed-71每周三次。在为期4周治疗过程中，每四天进行空腹血糖监测，结果显示，ed-71治疗组小鼠的血糖水平明显降低，4周后基本降低至正常水平(图1)；治疗结束后，在处死小鼠前取静脉血，制备血清，生化分析显示，经ed-71治疗后，血清中葡萄糖含量明显下降，可降低至正常血清葡萄糖水平(图2)。因此，我们的研究发现，ed-71除了具有改善骨质疏松的效果外，还可用于降低糖尿病导致的高血糖。
79.2、降脂效果
80.同样，采用db/db小鼠模拟糖尿病骨质疏松症，给予0.25μg/kg ed-71每周三次的处理。在为期4周治疗过程中，每四天进行体重监测，结果显示，ed-71治疗组小鼠的体重水平明显降低(图3)；治疗结束后，进行拍照以进行形态比较(图4)；血清生化分析显示，给予ed-71后，小鼠体内血清总胆固醇含量明显降低(图5)。he染色显示，给予ed-71后，小鼠肝脏中脂肪空泡性变明显减少(图6)；因此，我们发现ed-71还具有降脂、降体重等作用。
81.本发明未尽事宜为公知技术。
82.上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。