一种藜芦胺类化合物、其制备方法及其应用与流程

1.本发明涉及一种藜芦胺类化合物、其制备方法及其应用。


背景技术：

2.恶性肿瘤是严重威胁人类健康的疾病，其特征是异常细胞的克隆扩增，表现为增殖失控、对正常的稳态信号无反应、对邻近组织的侵袭和转移。恶性肿瘤细胞向重要器官的转移是成功治疗肿瘤的最大障碍，也是肿瘤病人死亡的最主要原因。目前，恶性肿瘤的治疗主要通过手术、化疗和放疗等方法。尽管在手术技术和化疗方面有了显著进步，但目前的医疗手段仍然不能治愈转移性癌症，开发新的治疗方法必须充分认识肿瘤转移的分子机制。
3.例如三阴性乳腺癌是一种严重威胁女性健康的疾病，目前治疗手段以化疗为主，毒副作用大且患者易产生耐药性，临床迫切需要开发有效的靶向疗法。
4.ap-1(activator protein-1,激活蛋白1)是细胞内的一个转录激活因子。它通过调节基因的表达来应对多种刺激，包括细胞因子，生长因子，压力，细菌和病毒感染；因此ap-1控制了许多的细胞进程，包括分化，增殖和凋亡。ap-1上调含有tpa dna应答元件(tre；5'-tgag/ctca-3')的基因的转录。ap-1异二聚体通过亮氨酸拉链形成，并通过特定的保守序列与基因结合来启动基因的表达。
5.ap-1在肿瘤的形成和发展中占有重要地位，其通过信号转导途径将生长信号转导到细胞核，导致多种细胞中涉及生长和恶性转化基因的过度表达，已成为肿瘤治疗及预防干预的重要靶标之一。研究发现，ap-1在多种恶性肿瘤如乳腺癌、肝细胞癌、皮肤癌、结直肠癌中高表达。虽然ap-1在多种癌症发生及发展过程中高表达，但是目前还没有以转录因子ap-1或其特定的dna结合序列为靶点的抗肿瘤药物成功上市。
6.针对dna短小核苷酸序列的药物设计是最有效也最具挑战性的设计策略，开发以dna为靶点的ap-1抑制剂既可以推动癌症新靶点的研究，又可以进一步探索以dna短小核苷酸序列为靶点的药物设计。
7.一系列体外实验表明，藜芦胺(veratramine)作用于ap-1的下游信号传导，但不干扰egf诱导的胞质mapk信号传导级联或其他与ap-1活化有关的激酶，表明基因调节仅发生在由ap-1控制的基因的子集上。动物试验表明，藜芦胺可抑制小鼠体内紫外线诱导的ap-1报告基因的激活，表明藜芦胺可以有效地预防太阳紫外线诱导的皮肤癌的发生，从而明确藜芦胺作为抗肿瘤候选药物的潜在价值。


技术实现要素：

8.本发明所要解决的技术问题是为了克服现有技术中ap-1抑制类药物单一的缺陷，而提供了一种藜芦胺类化合物、其制备方法及其应用。该藜芦胺类化合物对ap-1通路具有较强选择性抑制活性，具有较强的肿瘤细胞抑制活性；生物活性测试显示对三阴性乳腺癌细胞显示较强的细胞增殖抑制活性，可以用于抗三阴性乳腺癌药物的研发。
9.本发明是通过下述技术方案来解决上述技术问题的。
丁烯基2-甲基烯丙基2-甲基丙-1-烯-1-基或丁-3-烯-1-基例如乙烯基或烯丙基
25.在本发明某些优选实施方案中，所述的如式i所示的藜芦胺类化合物中的某些基团如下定义(未提及的基团同本技术任一方案所述)，
26.当ra为c
1-c4烷基-c(＝o)-时，所述的c
1-c4烷基-c(＝o)-里的c
1-c4烷基独立地为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基；例如甲基或乙基，又例如甲基。
27.在本发明某些优选实施方案中，所述的如式i所示的藜芦胺类化合物中的某些基团如下定义(未提及的基团同本技术任一方案所述)，
28.当ra和rb独立地为卤素时，所述的卤素独立地为氟、氯、溴或碘；例如氟。
29.在本发明某些优选实施方案中，所述的如式i所示的藜芦胺类化合物中的某些基团如下定义(未提及的基团同本技术任一方案所述)，
30.当rd为c
1-c4烷基-c(＝o)-时，所述的c
1-c4烷基-c(＝o)-里的c
1-c4烷基独立地为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基；例如甲基或乙基，又例如甲基。
31.在本发明某些优选实施方案中，所述的如式i所示的藜芦胺类化合物中的某些基团如下定义(未提及的基团同本技术任一方案所述)，
32.当rc和re独立地为c
1-c4烷基-o-或c
1-c4烷基-o-c(＝o)-n(r
1a
)-时，所述的c
1-c4烷基-o-和c
1-c4烷基-o-c(＝o)-n(r
1a
)-里的c
1-c4烷基独立地为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基；例如甲基、乙基或叔丁基。
33.在本发明某些优选实施方案中，所述的如式i所示的藜芦胺类化合物中的某些基团如下定义(未提及的基团同本技术任一方案所述)，
34.当r
1a
、r
1b
和r
1c
独立地为c
1-c4烷基时，所述的c
1-c4烷基独立地为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基。
35.在本发明某些优选实施方案中，所述的如式i所示的藜芦胺类化合物中的某些基团如下定义(未提及的基团同本技术任一方案所述)，
36.r1为甲基、乙基、苄基或甲基-c(＝o)-。
37.在本发明某些优选实施方案中，所述的如式i所示的藜芦胺类化合物中的某些基团如下定义(未提及的基团同本技术任一方案所述)，
38.y1为ra为ho-或c
1-c4烷基-c(＝o)-o-，rb为h；例如(a端表示与三级碳相连)
39.在本发明某些优选实施方案中，所述的如式i所示的藜芦胺类化合物中的某些基团如下定义(未提及的基团同本技术任一方案所述)，
40.y1为ra为卤素，rb为h或卤素；例如(a端表示与三级碳相连)
41.在本发明某些优选实施方案中，所述的如式i所示的藜芦胺类化合物中的某些基团如下定义(未提及的基团同本技术任一方案所述)，
42.y1为
43.在本发明某些优选实施方案中，所述的如式i所示的藜芦胺类化合物中的某些基团如下定义(未提及的基团同本技术任一方案所述)，
44.r
1a
为h。
45.在本发明某些优选实施方案中，所述的如式i所示的藜芦胺类化合物中的某些基团如下定义(未提及的基团同本技术任一方案所述)，
46.r
1b
和r
1c
独立地为h。
47.在本发明某些优选实施方案中，所述的如式i所示的藜芦胺类化合物中的某些基团如下定义(未提及的基团同本技术任一方案所述)，
48.re独立地为ho-或c
1-c4烷基-o-。
49.在本发明某些优选实施方案中，所述的如式i所示的藜芦胺类化合物中的某些基团如下定义(未提及的基团同本技术任一方案所述)，
50.y1为例如
51.在本发明某些优选实施方案中，所述的如式i所示的藜芦胺类化合物中的某些基团如下定义(未提及的基团同本技术任一方案所述)，
52.y2为例如(b端表示与如上所示的式i中的左侧碳相连)
53.在本发明某些优选实施方案中，所述的如式i所示的藜芦胺类化合物中的某些基团如下定义(未提及的基团同本技术任一方案所述)，
54.y2为
55.在本发明某些优选实施方案中，所述的如式i所示的藜芦胺类化合物中的某些基团如下定义(未提及的基团同本技术任一方案所述)，
56.y2为re独立地为ho-或c
1-c4烷基-o-；例如
57.在本发明某些优选实施方案中，所述的如式i所示的藜芦胺类化合物中的某些基团如下定义(未提及的基团同本技术任一方案所述)，
58.为为
59.在本发明某些优选实施方案中，所述的如式i所示的藜芦胺类化合物中的某些基团如下定义(未提及的基团同本技术任一方案所述)，
60.为
61.在本发明某些优选实施方案中，所述的如式i所示的藜芦胺类化合物中的某些基团如下定义(未提及的基团同本技术任一方案所述)，
62.r1为c
1-c4烷基；
63.y1为ra为ho-、rb为h；或，ra为卤素，rb为h或卤素；
64.y2为
65.为
66.且当y1为ra为ho-、rb为h，y2为时，rd为c
1-c4烷基-c(＝o)-。
67.在本发明某些优选实施方案中，所述的如式i所示的藜芦胺类化合物中的某些基团如下定义(未提及的基团同本技术任一方案所述)，
68.r1为c
1-c4烷基；
69.y1为ra为卤素，rb为h或卤素；
70.y2为
71.为
72.较佳地，当ra为卤素，rb为h时，y2为rd为h；
73.或者，当ra为卤素，rb为卤素时，y2为re为ho-；
74.更佳地，ra为卤素，rb为卤素；y2为
75.在本发明某些优选实施方案中，所述的如式i所示的藜芦胺类化合物中的某些基团如下定义(未提及的基团同本技术任一方案所述)，
76.r1为c
1-c4烷基；
77.y1为ra为ho-、rb为h；
78.y2为例如又例如
79.为
80.较佳地，rc为ho-、c
1-c4烷基-o-、c
1-c4烷基-o-c(＝o)-n(r
1a
)、n(r
1er1f
)-或苄基-o-；
81.rd为h或c
1-c4烷基-c(＝o)-；
82.且当rc为ho-时，rd为h；
83.更佳地，rc为c
1-c4烷基-o-、c
1-c4烷基-o-c(＝o)-n(r
1a
)或苄基-o-；
84.rd为h。
85.在本发明某些优选实施方案中，所述的如式i所示的藜芦胺类化合物中的某些基团如下定义(未提及的基团同本技术任一方案所述)，
86.r1为c
2-c4烯基；
87.y1为rc为c
1-c4烷基-o-或c
1-c4烷基-o-c(＝o)-n(r
1a
)；
88.y2为
89.为
90.在本发明某些优选实施方案中，所述的如式i所示的藜芦胺类化合物中的某些基团如下定义(未提及的基团同本技术任一方案所述)，
91.r1为c
2-c4烯基；
92.y1为rc为c
1-c4烷基-o-或c
1-c4烷基-o-c(＝o)-n(r
1a
)；
93.y2为
94.为
95.较佳地，当y1为时，ra为ho-；rb为h；rd为h；
96.更佳地，rd为h；y1为rc为c
1-c2烷基-o-或c
1-c4烷基-o-c(＝o)-n(r
1a
)。
97.在本发明某些优选实施方案中，所述的如式i所示的藜芦胺类化合物中的某些基团如下定义(未提及的基团同本技术任一方案所述)，
98.r1为c
2-c4烯基；
99.y1为rc为c
1-c4烷基-o-或c
1-c4烷基-o-c(＝o)-n(r
1a
)；
100.y2为
101.为
102.较佳地，y2为y1为
103.更佳地，re为c
1-c4烷基-o-；ra为ho-；rb为h。
104.在本发明某些优选实施方案中，所述的如式i所示的藜芦胺类化合物中的某些基团如下定义(未提及的基团同本技术任一方案所述)，
105.r1为苄基；y1为y2为为
106.较佳地，ra为ho-，rb为h；
107.和/或，rd为h。
108.在本发明某些优选实施方案中，所述的如式i所示的藜芦胺类化合物中的某些基团如下定义(未提及的基团同本技术任一方案所述)，
109.r1为c
1-c4烷基-c(＝o)-；y1为y2为为
110.其中，ra为c
1-c4烷基-c(＝o)-o-，rb为h；
111.和/或，rd为c
1-c4烷基-c(＝o)-。
112.在本发明某些优选实施方案中，所述的如式i所示的藜芦胺类化合物选自如下化合物，
113.[0114][0115]
本发明中，所述的如式i所示的藜芦胺类化合物或其药学上可接受的盐可通过包括与化学领域公知方法相似的方法合成，其步骤和条件可参考本领域类似反应的步骤和条件，特别是根据本文说明进行合成。起始原料通常是来自商业来源，例如aldrich或可使用本领域技术人员公知的方法(通过scifinder、reaxys联机数据库得到)容易地制备。
[0116]
本发明中，所述的如式i所示的藜芦胺类化合物或其药学上可接受的盐，也可以通过已制备得到的所述的如式i所示的藜芦胺类化合物或其药学上可接受的盐，采用本领域常规方法，经外周修饰进而得到其他所述的如式i所示的藜芦胺类化合物或其药学上可接受的盐。
[0117]
一般地，本发明的化合物可以通过本发明所描述的方法制备得到，除非有进一步的说明，其中取代基的定义如式i所示。
[0118]
本发明中，所述的如式i所示的藜芦胺类化合物的制备方法，其包括如下方案一、方案二、方案三、方案四、方案五、方案六、方案七、方案八、方案九、方案十或方案十一：
[0119]
方案一、其包括如下步骤：将如式iia所示的化合物与含r1片段的偶联试剂进行如下所示的c-n偶联反应，得到所述的如式i所示的藜芦胺类化合物即可；其中，y1、r1、y2和的定义均如上所述；
[0120][0121]
方案二、当所述的如式i所示的藜芦胺类化合物中，y2为rd为c
1-c4烷基-c(＝o)-时；其包括如下步骤：将如式iib所示的化合物与含所示片段的酰基化试剂进行如下所示的酰化反应，得到所述的如式i所示的藜芦胺类化合物即可；其中，y1、r1和的定义均如上所述；
[0122][0123]
方案三、当所述的如式i所示的藜芦胺类化合物中，y1为时；其包括如下步骤：将如式iic所示的化合物进行如下所示的氧化反应，得到所述的如式i所示的藜芦胺类化合物即可；其中，y2为rd为c
1-c4烷基-c(＝o)-；r1和的定义均如上所述；
[0124][0125]
方案四、当所述的如式i所示的藜芦胺类化合物中，y1为时；其包括如下步骤：将如式iid所示的化合物与式r
c-nh2所示的化合物进行如下所示的亚胺化反应，得到所
述的如式i所示的藜芦胺类化合物即可；其中，y2为rc、rd、re、r1和的定义均如上所述；
[0126][0127]
方案五、当所述的如式i所示的藜芦胺类化合物中，y2为rd为h时；其包括如下步骤：将如式iie所示的化合物进行如下所示的水解反应，得到所述的如式i所示的藜芦胺类化合物即可；其中，y1为ra为ho-，rb为h；或，ra为卤素，rb为h或卤素；rc、r1和的定义均如上所述；
[0128][0129]
方案六、当所述的如式i所示的藜芦胺类化合物中，y1为ra为卤素，rb为h或卤素时；其包括如下步骤：将如式iif所示的化合物与卤(例如氟)化试剂所示的化合物进行如下所示的卤(例如氟)化反应，得到所述的如式i所示的藜芦胺类化合物即可；其中，y2为rd为c
1-c4烷基-c(＝o)-；re、r1和的定义均如上所述；
[0130][0131]
方案七、当所述的如式i所示的藜芦胺类化合物中，为y2为时；其包括如下步骤：将如式iig所示的化合物进行如下所示的氧化反应，得到所述的如式i所示的藜芦胺类化合物即可；其中，y1和r1的定义均如上所述；
[0132][0133]
方案八、当所述的如式i所示的藜芦胺类化合物中，为y2为时；其包括如下步骤：异丙醇铝和环己酮存在下，将如式iig所示的化合物进行如下所示的双键迁移-氧化反应，得到所述的如式i所示的藜芦胺类化合物即可；其中，y1和r1的定义均如上所述；
[0134][0135]
方案九、当所述的如式i所示的藜芦胺类化合物中，y2为时；其包括如下步骤：将如式iih所示的化合物与如式r
e-nh2所示的化合物进行如下所示的亚胺化反应，得到所述的如式i所示的藜芦胺类化合物即可；其中，y1为ra、rb、rc、r1、re和
的定义均如上所述；
[0136][0137]
方案十、当所述的如式i所示的藜芦胺类化合物中，y1为ra为c
1-c4烷基-c(＝o)-o-，
[0138]
rb为h时；其包括如下步骤：将如式iii所示的化合物与含所示片段的酰基化试剂进行如下所示的酰化反应，得到所述的如式i所示的藜芦胺类化合物即可；其中，y2为为rd为c
1-c4烷基-c(＝o)-；re、r1和的定义均如上所述；
[0139][0140]
方案十一、当所述的如式i所示的藜芦胺类化合物中，为时；其包括如下步骤：将如式iij所示的化合物进行如下所示的环氧化反应，得到所述的如式i所示的藜芦胺类化合物即可；其中，y1、r1和y2的定义均如上所述；
[0141][0142]
所述的方案一、方案二、方案三、方案四、方案五、方案六、方案七、方案八、方案九、方案十或方案十一中，所述的反应的条件和操作可为本领域该类反应中常规的条件和操作。
[0143]
用于制备如式i所示的藜芦胺类化合物或其药学上可接受的盐的必要原料或试剂可以商购获得，或者通过本领域已知的合成方法制备。如下实验部分所描述的方法，可以制备游离碱或者其加酸所成盐的本发明的化合物。术语药学上可接受的盐指的是本文所定义的药学上可接受的盐，并且具有母体化合物所有的作用。药学上可接受的盐可以通过在有机碱的合适的有机溶剂中加入相应的酸，根据常规方法处理来制备药学上可接受的盐。
[0144]
成盐实例包括：对于碱加成盐，有可能通过在水性介质中使用碱金属或碱土金属氢氧化物或醇盐(例如乙醇盐或甲醇盐)或适当碱性有机胺(例如二乙醇胺、胆碱或葡甲胺)处理具有适当酸性质子的本发明化合物来制备碱金属(如钠、钾或锂)或碱土金属(如铝、镁、钙、锌或铋)的盐。
[0145]
或者，对于酸加成盐，与无机酸成盐，如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸；和有机酸所形成的盐，如醋酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柃檬酸、乙磺酸、富马酸、葡庚糖酸、谷氨酸、乙醇酸、羟基萘甲酸、2-羟基乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、草酸、丙酮酸、丙二酸、扁桃酸、甲磺酸、黏糠酸、2-萘磺酸、丙酸、水杨酸、琥铂酸、酒石酸、柠檬酸、肉桂酸、对甲苯磺酸或三甲基乙酸。
[0146]
本发明提供了一种药物组合物，其包括如上所述的如式i所示的藜芦胺类化合物或其药学上可接受的盐、和一种或多种药学上可接受的载体。在所述的药物组合物中，所述的如式i所示的藜芦胺类化合物或其药学上可接受的盐的用量可为治疗有效量。
[0147]
所述的药学上可接受的载体(药用辅料)可为药物生产领域中广泛采用的那些辅料。辅料主要用于提供一个安全、稳定和功能性的药物组合物，还可以提供方法，使受试者接受给药后活性成分以所期望速率溶出，或促进受试者接受组合物给药后活性成分得到有效吸收。所述的药用辅料可以是惰性填充剂，或者提供某种功能，例如稳定该组合物的整体ph值或防止组合物活性成分的降解。所述的药用辅料可以包括下列辅料中的一种或多种：粘合剂、助悬剂、乳化剂、稀释剂、填充剂、成粒剂、胶粘剂、崩解剂、润滑剂、抗粘着剂、助流剂、润湿剂、胶凝剂、吸收延迟剂、溶解抑制剂、增强剂、吸附剂、缓冲剂、螯合剂、防腐剂、着色剂、矫味剂和甜味剂。
[0148]
本发明的药物组合物可根据公开的内容使用本领域技术人员已知的任何方法来制备。例如，常规混合、溶解、造粒、乳化、磨细、包封、包埋或冻干工艺。
[0149]
本发明所述的药物组合物可以任何形式给药，包括注射(静脉内)、粘膜、口服(固体和液体制剂)、吸入、眼部、直肠、局部或胃肠外(输注、注射、植入、皮下、静脉内、动脉内、
肌内)给药。本发明的药物组合物还可以是控释或延迟释放剂型(例如脂质体或微球)。固体口服制剂的实例包括但不限于粉末、胶囊、囊片、软胶囊剂和片剂。口服或粘膜给药的液体制剂实例包括但不限于悬浮液、乳液、酏剂和溶液。局部用制剂的实例包括但不限于乳剂、凝胶剂、软膏剂、乳膏剂、贴剂、糊剂、泡沫剂、洗剂、滴剂或血清制剂。胃肠外给药的制剂实例包括但不限于注射用溶液、可以溶解或悬浮在药学上可接受载体中的干制剂、注射用悬浮液和注射用乳剂。所述的药物组合物的其它合适制剂的实例包括但不限于滴眼液和其他眼科制剂；气雾剂：如鼻腔喷雾剂或吸入剂；适于胃肠外给药的液体剂型；栓剂以及锭剂。
[0150]
本发明还提供了一种如上所述的如式i所示的藜芦胺类化合物或其药学上可接受的盐、或如上所述的药物组合物在制备ap-1抑制剂中的应用。
[0151]
在所述的应用中，所述的ap-1抑制剂可用于哺乳动物生物体内；也可用于生物体外，主要作为实验用途，例如：作为标准样或对照样提供比对，或按照本领域常规方法制成试剂盒，为ap-1的抑制效果提供快速检测。
[0152]
本发明还提供了一种所述的如式i所示的藜芦胺类化合物或其药学上可接受的盐或者如上所述的药物组合物在制备药物中的应用。所述的药物可为用于预防和/或治疗细胞增殖性疾病；或者，所述的药物可为用于预防和/或治疗与ap-1相关的疾病或病症的药物。
[0153]
本发明还提供了一种所述的如式i所示的藜芦胺类化合物或其药学上可接受的盐或者如上所述的药物组合物在制备用于预防和/或治疗与ap-1相关的疾病或病症的药物中的应用；所述的与ap-1相关疾病或病症可为细胞增殖性疾病。所述的药物可通过调节ap-1表达和/或活性实现预防和/或治疗细胞增殖性疾病。
[0154]
本发明还提供了一种了预防和/或治疗细胞增殖性疾病(例如ap-1相关的)的方法，所述方法包括向有需要的个体，如人，施用治疗有效量的所述的如式i所示的藜芦胺类化合物或其药学上可接受的盐或者如上所述的药物组合物。
[0155]
本文还提供了一种在体外或体内抑制细胞增殖的方法，所述方法包括使细胞与有效量的本文所限定的所述的如式i所示的藜芦胺类化合物或其药学上可接受的盐或者如上所述的药物组合物接触。
[0156]
如上所述的细胞增殖性疾病，包括癌症；所述的癌症可为皮肤癌、卵巢癌、结肠癌、乳腺癌、肝癌、胰腺癌、胆囊癌、胃肠癌、头颈癌、子宫颈癌、前列腺癌、肺癌、黑素瘤、生殖细胞肿瘤、妊娠滋养层肿瘤、胶质母细胞瘤、骨髓瘤、神经母细胞源性cns肿瘤、单核细胞白血病、b细胞源性白血病、t细胞源性白血病、b细胞源性淋巴瘤、t细胞源性淋巴瘤和肥大细胞源性肿瘤，及其组合。
[0157]
当用作药物时，所述的如式i所示的藜芦胺类化合物或其药学上可接受的盐可以以药物组合物的形式给药。这些组合物可根据药学领域熟知的方法制备，可以各种途径施用，视需要局部或系统性治疗和要治疗的区域而定。给予可以是局部(包括表皮和透皮，眼部和粘膜，包括鼻内，阴道和直肠递送)，肺(例如，通过粉末或气溶胶吸入或吹入，包括通过喷雾器；气管内或鼻内)，口服或胃肠外给予形式。口服给药可以包括配制为每日一次或每日两次(bid)给药的剂型。胃肠外给药包括静脉内、动脉内、皮下、腹膜内肌肉内或注射或输液；或颅内如鞘内或心室内给药。胃肠外给药可以单次推注剂量形式，或可以是通过连续灌注泵。外用给药的药物组合物和制剂可包括透皮贴片、油膏剂、乳液、软膏剂、凝胶、滴剂、栓
剂、喷剂、液体和粉末。常规药学载体、水、粉末或油状基底、增稠剂等可能是必须或需要的。
[0158]
如本文所用，术语“治疗”是指治疗性或缓解性措施。有益的或期望的临床结果包括但不限于：全部或部分减轻与疾病或紊乱或病症有关的症状，减小疾病程度，稳定(即不恶化)疾病状态，延迟或减缓疾病进展，缓解或减轻疾病状态(例如，疾病的一种或多种症状)，以及可检测或不可检测的缓解(无论是部分还是全部)。“治疗”也可以指与不接受治疗的期望存活相比延长生存期。
[0159]
在某些实施方式中，所述的如式i所示的藜芦胺类化合物或其药学上可接受的盐或者如上所述的药物组合物可用于预防如本文所限定的疾病和病症(例如，癌症)。本文使用的术语“预防”意指全部或部分预防本文所述的疾病或病症或其症状的发作、复发或扩散。
[0160]
术语“药用辅料”或“赋形剂”是指药学上可接受的化学物质，例如药学领域的普通技术人员已知的用于帮助给予药用的试剂。它是可以用于制备药物组分的化合物，通常是安全的、无毒的，且是生物学或者其它方面所不可期望的，其包括对于兽用和人用药物可接受的赋形剂。通常的赋形剂包括粘合剂、表面活性剂、稀释剂、崩解剂和润滑剂。
[0161]
除非另外说明，应当应用本文所使用的下列定义。出于本发明的目的，化学元素与元素周期表cas版，和《化学和物理手册》，第75版，1994一致。此外，有机化学一般原理可参考"organic chemistry",thomas sorrell,university science books,sausalito:1999,和"march's advanced organic chemistry”by michael b.smith and jerry march,john wiley&sons,new york:2007中的描述，其全部内容通过引用并入本文。
[0162]
在本说明书中，可由本领域技术人员选择基团及其取代基以提供稳定的结构部分和化合物。当通过从左向右书写的常规化学式描述取代基时，该取代基也同样包括从右向左书写结构式时所得到的在化学上等同的取代基。
[0163]
在本文中定义的某些化学基团前面通过简化符号来表示该基团中存在的碳原子总数。例如，c
1-c6烷基是指具有总共1、2、3、4、5或6个碳原子的如下文所定义的烷基。简化符号中的碳原子总数不包括可能存在于所述基团的取代基中的碳。
[0164]
在本文中，取代基中定义的数值范围如0至4、1-4、1至3等表明该范围内的整数，如1-6为1、2、3、4、5、6。
[0165]
除前述以外，当用于本技术的说明书及权利要求书中时，除非另外特别指明，否则以下术语具有如下所示的含义。
[0166]
术语“一种(个)或多种(个)”或“一种(个)或两种(个)以上”是指即1、2、3、4、5、6、7、8、9或更多。
[0167]
术语“包括”为开放式表达，即包括本发明所指明的内容，但并不排除其他方面的内容。
[0168]
术语“被取代的”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，包括重氢和氢的变体，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。
[0169]
一般而言，术语“取代的”表示所给结构中的一个或多个氢原子被具体取代基所取代。进一步地，当该基团被1个以上所述取代基取代时，所述取代基之间是相互独立，即，所述的1个以上的取代基可以是互不相同的，也可以是相同的。除非其他方面表明，一个取代基团可以在被取代基团的各个可取代的位置进行取代。当所给出的结构式中不只一个位置
能被选自具体基团的一个或多个取代基所取代，那么取代基可以相同或不同地在各个位置取代。
[0170]
在本说明书的各部分，本发明公开化合物的取代基按照基团种类或范围公开。特别指出，本发明包括这些基团种类和范围的各个成员的每一个独立的次级组合。术语“c
x-cy烷基"是指含有x至y个碳原子的直链或支链饱和烃。例如，术语“c1～c6烷基”或“c
1-6
烷基”特别指独立公开的甲基、乙基、c3烷基、c4烷基、c5烷基和c6烷基；“c
1-4
烷基”特指独立公开的甲基、乙基、c3烷基(即丙基，包括正丙基和异丙基)、c4烷基(即丁基，包括正丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基)。
[0171]
术语“卤素”选自于f，cl，br或i，尤其指f或cl。
[0172]
在本技术中，作为基团或是其它基团的一部分(例如用在卤素取代的烷基等基团中)，术语“烷基”意指包括具有指定碳原子数目的支链和直链的饱和脂族烃基；比如含有1至6个碳原子的直链或支链饱和烃链；例如，c
1-c6的烷基。如在“c1～c6烷基”中定义为包括在直链或者支链结构中具有1、2、3、4、5、或者6个碳原子的基团。其中，丙基为c3烷基(包括同分异构体，例如正丙基或异丙基)；丁基为c4烷基(包括同分异构体，例如正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基)；戊基为c5烷基(包括同分异构体，例如正戊基、1-甲基-丁基、1-乙基-丙基、2-甲基-1-丁基、3-甲基-1-丁基、异戊基、叔戊基或新戊基)；己基为c6烷基(包括同分异构体，例如正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1，1，2-三甲基丙基、1，1-二甲基丁基、1，2-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2，3-二甲基丁基)。在某一实施方案中，所述的“烷基”是指c
1-c4烷基。
[0173]
本文所用术语“部分”、“结构部分”、“化学部分”、“基团”、“化学基团”是指分子中的特定片段或官能团。化学部分通常被认为是嵌入或附加到分子上的化学实体。
[0174]
当所列举的取代基中没有指明其通过哪一个原子连接到化学结构通式中包括但未具体提及的化合物时，这种取代基可以通过其任何原子相键合。取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
[0175]
当所列举的基团中没有明确指明其具有取代基时，这种基团仅指未被取代。例如当“c1～c4烷基”前没有“取代或未取代的”的限定时，仅指“c1～c4烷基”本身或“未取代的c1～c4烷基”。
[0176]
在本发明的各部分，描述了连接取代基。当该结构清楚地需要连接基团时，针对该基团所列举的马库什变量应理解为连接基团。例如，如果该结构需要连接基团并且针对该变量的马库什基团定义列举了“烷基”，则应该理解，该“烷基”代表连接的亚烷基基团。
[0177]
在一些具体的结构中，当烷基基团清楚地表示为连接基团时，则该烷基基团代表连接的亚烷基基团，例如，基团“卤代-c1～c6烷基”中的c
1-c6烷基应当理解为c1～c6亚烷基。
[0178]
术语“亚烷基”表示从饱和的直链或支链烃基中去掉两个氢原子所得到的饱和的二价烃基基团。亚烷基基团的实例包括亚甲基(-ch
2-)，亚乙基{包括-ch2ch
2-或-ch(ch3)-}，亚异丙基{包括-ch(ch3)ch
2-或-c(ch3)
2-}等等。
[0179]
除非另有规定，本文使用的所有技术术语和科学术语具有要求保护主题所属领域的标准含义。倘若对于某术语存在多个定义，则以本文定义为准。
[0180]
应该理解，在本发明中使用的单数形式，如“一种”，包括复数指代，除非另有规定。此外，术语“包括”是开放性限定并非封闭式，即包括本发明所指明的内容，但并不排除其他
方面的内容。
[0181]
除非另有说明，本发明采用质谱、元素分析的传统方法，各步骤和条件可参照本领域常规的操作步骤和条件。
[0182]
除非另有指明，本发明采用分析化学、有机合成化学和光学的标准命名及标准实验室步骤和技术。在某些情况下，标准技术被用于化学合成、化学分析、发光器件性能检测。
[0183]
另外，需要说明的是，除非以其他方式明确指出，在本发明中所采用的描述方式
“…
独立地为”应做广义理解，是指所描述的各个个体之间是相互独立的，可以独立地为相同或不同的具体基团。更详细地，描述方式
“…
独立地为”既可以是指在不同基团中，相同符号之间所表达的具体选项之间互相不影响；也可以表示在相同的基团中，相同符号之间所表达的具体选项之间互相不影响。
[0184]
本领域技术人员可以理解，根据本领域中使用的惯例，本技术描述基团的结构式中所使用的是指，相应的基团通过该位点与化合物中的其它片段、基团进行连接。
[0185]
在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
[0186]
本发明所用试剂和原料均市售可得。
[0187]
本发明的积极进步效果在于：本发明提供的化合物可作为一系列新型ap-1抑制剂并用于制备相应的疾病的药物。在初步活性研究中显示本发明提供的化合物具有很强的抑制肿瘤细胞增殖活性；具有制备成为新型抗肿瘤药物的潜力，具有较好的市场化前景。
具体实施方式
[0188]
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
[0189]
实施例1
[0190][0191]
将称量好的藜芦胺(3g,7.33mmol)溶于50ml水中，加入hcho(893μl,8.80mmol)和hcooh(1372μl,36.67mmol)，在氩气保护条件下100℃回流反应12h，tlc监测反应完毕后，加入饱和naoh溶液淬灭，用dcm(20ml
×
3)萃取，无水na2so4干燥，过滤后浓缩得粗品，并用硅胶柱层析(pe/ea＝3:1-1:1)纯化，得到白色固体即为vt-1(2.3g,74％)。
[0192]1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.25(d,j＝6.3hz,1h),7.02(d,j＝7.7hz,1h),5.48(brd,j＝5.1hz,1h),3.87
–
3.82(m,1h),3.73
–
3.67(m,1h),3.61
–
3.53(m,1h),2.97
–
2.91
(m,1h),2.77(dd,j＝15.0,7.5hz,2h),2.66
–
2.53(m,2h),2.47(s,3h),2.41(dd,j＝12.9,4.3hz,1h),2.33(s,3h),2.29
–
2.24(m,1h),2.16(d,j＝7.0hz,1h),2.04
–
1.97(m,1h),1.91
–
1.70(m,8h),1.65
–
1.58(m,1h),1.42(d,j＝7.2hz,3h),1.34
–
1.22(m,2h),1.13(s,3h),0.85(d,j＝6.5hz,3h)；
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ145.12,144.30,142.59,140.96,132.70,123.75,122.03,120.84,71.91,70.78,67.50,64.84,57.09,42.82,41.99,41.89,41.30,38.13,37.02,34.34,31.41,30.49,30.45,28.65,19.34,19.27,16.15,12.86.hrms(esi):m/z calcd for c
28h42
no
2
[m h]

:424.3210,found 424.3214.
[0193]
实施例2
[0194][0195]
将藜芦胺(1g,2.44mmol)溶于丙酮，加入k2co3(3.4g,24.45mmol)和硫酸二乙酯(1.9g,12.2mmol)，56℃条件下回流反应12h。tlc监测反应完毕后，加入氨水搅拌1h淬灭，减压浓缩除去大部分溶剂，水洗并用dcm(5ml
×
3)萃取，合并有机相，无水na2so4干燥后减压浓缩，粗产物用硅胶柱层析(pe/ea＝3:1-1:1)纯化，得到的白色固体即为vt-2(836mg,78％)。
[0196]1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.25(d,j＝8.6hz,1h),7.02(d,j＝7.7hz,1h),5.48(brd,j＝5.2hz,1h),3.83(s,1h),3.69
–
3.62(m,1h),3.61
–
3.53(m,1h),2.98
–
2.88(m,2h),2.84(d,j＝10.9hz,1h),2.77(dd,j＝15.0,7.4hz,1h),2.65
–
2.52(m,3h),2.49
–
2.44(m,1h),2.41(ddd,j＝13.0,4.7,1.9hz,1h),2.33(s,3h),2.31
–
2.23(m,1h),2.04
–
1.96(m,1h),1.92
–
1.76(m,5h),1.73
–
1.55(m,5h),1.38(d,j＝7.1hz,3h),1.25
–
1.23(m,1h),1.13(s,3h),1.10(t,j＝7.1hz,3h),0.88(d,j＝6.7hz,3h)；
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ144.99,144.07,142.57,141.23,132.63,124.09,122.05,120.82,71.93,67.43,67.03,58.69,57.08,46.59,41.99,41.30,41.17,38.13,37.01,34.11,31.41,30.51,30.45,28.31,19.70,19.34,16.10,14.10,11.03.hrms(esi):m/z calcd for c
29h44
no
2
[m h]

:438.3367,found 438.3366.
[0197]
实施例3
[0198][0199]
藜芦胺为原料，烯丙基试剂为3-溴丙烯，合成方法同vt-2
[0200]
白色固体，产率约为89％。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.25(d,j＝7.8hz,1h),7.01(d,j＝7.7hz,1h),5.96(m,1h),5.48(brd,j＝5.2hz,1h),5.26
–
5.16(m,2h),3.81
–
3.86(m,1h),3.74
–
3.65(m,1h),3.61
–
3.51(m,2h),3.04(dd,j＝14.4,7.7hz,1h),2.95(td,j＝11.6,5.3hz,1h),2.86(d,j＝10.9hz,1h),2.76(dd,j＝14.9,7.4hz,1h),2.66
–
2.53(m,2h),2.50
–
2.34(m,2h),2.31(s,3h),2.29
–
2.22(m,1h),2.04
–
1.96(m,1h),1.93
–
1.76(m,7h),1.68
–
1.54(m,2h),1.40(d,j＝7.1hz,3h),1.30
–
1.25(m,1h),1.13(s,3h),0.87(d,j＝6.7hz,3h)；
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ145.01,144.07,142.61,140.98,135.74,132.68,124.04,121.96,120.77,117.41,71.84,67.50,67.42,59.75,57.09,56.23,41.96,41.30,41.27,38.12,36.99,34.21,31.37,30.47,30.43,28.24,19.52,19.32,16.17,13.91.hrms(esi):m/z calcd for c
30h44
no
2
[m h]

:450.3367,found(450.3369)。
[0201]
实施例4
[0202][0203]
藜芦胺为原料，苄基化试剂为溴化苄，合成方法同vt-2
[0204]
白色固体，产率约为90％。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.37
–
7.30(m,5h),7.29
–
7.24(m,1h),7.07(d,j＝7.6hz,1h),5.52(s,1h),4.35(d,j＝13.5hz,1h),3.99(s,1h),3.83(s,1h),3.61
–
3.53(m,1h),3.22(d,j＝13.3hz,1h),3.05
–
2.96(m,1h),2.86
–
2.76(m,2h),2.70
–
2.61(m,3h),2.43(dd,j＝12.8,4.0hz,1h),2.39(s,3h),2.32
–
2.27(t,j＝12.1hz,1h),2.10
–
2.01(m,1h),1.98(d,j＝11.7hz,1h),1.93
–
1.81(m,3h),1.76
–
1.59(m,3h),1.54(d,j＝6.0hz,3h),1.30(t,j＝12.4hz,1h),1.19(s,3h),1.06
–
0.97(m,1h),0.82(d,j＝5.2hz,3h)；
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ144.77,143.91,142.60,141.17,140.25,132.38,
128.31,128.31,128.31,128.31,126.73,124.14,121.83,120.61,71.63,69.02,67.71,59.18,57.15,57.05,41.86,41.33,41.22,38.08,36.92,34.65,31.25,30.39,30.39,27.76,19.50,19.28,16.02,14.40.hrms(esi):m/z calcd for c
34h46
no
2
[m h]

:500.3523,found 500.3520.
[0205]
实施例5
[0206][0207]
将藜芦胺(120mg,0.27mmol)溶于thf中，加入吡啶(214μl,2.66mmol)，冰浴条件下滴加乙酰氯(188μl,2.66mmol)，反应30分钟，tlc点板监测反应完毕后，加入饱和nahco3溶液淬灭,有机相用无水na2so4干燥，减压浓缩并用硅胶柱层析(pe/ea＝5:1-1:1)纯化，得到的白色固体即为vt-5(58mg,44％)。
[0208]1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.22(d,j＝7.8hz,1h),6.97(d,j＝7.7hz,1h),5.52(brd,j＝5.2hz,1h),4.70
–
4.62(m,1h),3.54
–
3.46(m,1h),3.29(s,1h),2.96
–
2.30(m,2h),2.79(dd,j＝14.8,7.3hz,1h),2.65
–
2.54(m,2h),2.53
–
2.42(m,2h),2.39
–
2.34(m,1h),2.32(s,3h),2.17
–
2.08(m,1h),2.05(s,3h),2.04
–
1.97(m,2h),1.94
–
1.80(m,4h),1.72
–
1.69(m,2h),1.40(d,j＝7.2hz,3h),1.37
–
1.29(m,2h),1.25(s,2h),1.16(s,3h),1.00(dd,j＝23.1,12.0hz,1h),0.83(d,j＝6.6hz,3h)；
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ170.63,144.01,143.11,141.47,140.34,132.82,125.39,123.14,120.04,74.04,70.82,67.12,56.98,54.04,44.10,41.30,37.90,37.11,36.23,32.05,30.61,30.49,29.82,27.61,21.55,19.50,19.29,18.92,15.96.hrms(esi):m/z calcd for c
29h42
no
3
[m h]

:452.3159,found 452.3155.
[0209]
实施例6
[0210][0211]
将称量好的藜芦胺(410mg,1.0mmol)溶于5ml无水etoh中，加入无水k2co3(1385mg，10.0mmol)和ch3i(620μl，10.0mmol)，室温搅拌5h，tlc点板监测，待原料消耗完全后，加入2ml氨水淬灭，用dcm(5ml
×
3)萃取，无水na2so4干燥，过滤后浓缩得粗品，并用硅胶柱层析
(dcm/ch3oh＝20:1-5:1)纯化，得到白色固体即为vt-6(350mg，83％)。
[0212]1h nmr(500mhz,meod)δ7.57(d,j＝7.9hz,1h),6.99(d,j＝7.9hz,1h),5.50(brd,j＝5.2hz,1h),4.25(td,j＝10.7,4.6hz,1h),3.65
–
3.58(m,1h),3.54(dd,j＝10.5,1.5hz,1h),3.45(ddd,j＝15.7,11.2,4.3hz,2h),3.22(s,3h),3.12(t,j＝12.5hz,1h),3.03(s,3h),2.91(td,j＝11.6,5.3hz,1h),2.84(dd,j＝14.8,7.3hz,1h),2.64
–
2.55(m,2h),2.39(s,3h),2.38
–
2.21(m,4h),1.97(dd,j＝15.5,12.6hz,1h),1.88(ddd,j＝20.7,12.1,7.9hz,2h),1.79(td,j＝12.0,7.3hz,1h),1.66
–
1.55(m,1h),1.46(d,j＝7.1hz,3h),1.44
–
1.35(m,1h),1.34
–
1.25(m,1h),1.15(s,3h),1.04(d,j＝6.4hz,3h)；
13
c nmr(125mhz,meod)δ145.58,144.10,143.97,143.94,131.02,128.44,122.77,121.73,80.21,72.57,72.55,64.80,58.91,55.11,45.00,43.18,42.64,42.51,39.25,38.05,35.32,32.01,31.48,31.36,25.66,19.63,18.90,18.15,15.58.hrms(esi):m/z calcd for c
29h45
no
2
[m]

:438.3367,found.(438.3368)。
[0213]
实施例7
[0214][0215]
将称量好的藜芦胺(200mg,0.49mmol)溶于dcm中，加入nahco3(62mg,0.74mmol)和mcpba(85mg,0.49mmol)，室温搅拌2h，tlc监测反应完毕后，加水淬灭，用dcm(5ml
×
3)萃取，无水na2so4干燥，过滤后浓缩得粗品，并用硅胶柱层析(dcm/ch3oh＝20:1-5:1)纯化，得到白色固体即为vt-7(55％)。
[0216]1h nmr(500mhz,meod)δ7.39(d,j＝7.7hz,1h),6.97(d,j＝7.8hz,1h),5.49(brd,j＝5.1hz,1h),4.29
–
4.24(m,1h),3.99
–
3.97(m,1h),3.49
–
3.41(m,1h),3.39(dd,j＝9.9,3.0hz,1h),3.21
–
3.11(m,2h),2.97
–
2.89(m,2h),2.82(dd,j＝14.8,7.3hz,1h),2.63
–
2.55(m,2h),2.47
–
2.37(m,2h),2.36(s,3h),2.29
–
2.17(m,2h),2.01
–
1.73(m,5h),1.64
–
1.59(m,1h),1.40(d,j＝7.2hz,3h),1.33
–
1.24(m,2h),1.16(s,3h),1.00(d,j＝6.8hz,3h),0.89(t,j＝7.3hz,3h)；
13
c nmr(125mhz,meod)δ145.64,145.05,144.12,143.97,131.06,127.79,122.79,121.63,78.77,72.56,70.55,66.52,65.14,59.02,43.32,42.65,42.46,39.25,38.06,34.76,32.02,31.54,31.28,24.87,20.46,19.66,18.25,15.37,9.26.hrms(esi):m/z calcd for c
29h44
no
3
[m h]

:454.3316,found(454.3310)。
[0217]
实施例8
[0218][0219]
将vt-1(210mg,0.50mmol)溶于无水dcm中，加入py(400μl,4.96mmol)，冰浴条件下滴加ch3cocl(351μl,4.96mmol)，滴加完毕后0℃反应20min,tlc监测反应完毕后，加入饱和nahco3溶液淬灭，用dcm(5ml
×
3)萃取，无水na2so4干燥，过滤后浓缩得粗品，并用硅胶柱层析(pe/ea＝3:1)纯化，得到白色固体即为vt-8(142mg,61％)。
[0220]1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.26(d,j＝7.5hz,1h),7.01(d,j＝7.7hz,1h),5.51(brd,j＝5.0hz,1h),4.69
–
4.61(m,1h),3.85
–
3.81(m,1h),3.73
–
3.66(m,1h),2.94(td,j＝11.6,5.3hz,1h),2.80
–
2.73(m,2h),2.65
–
2.53(m,2h),2.46(s,3h),2.43(dd,j＝4.9,1.7hz,1h),2.39
–
2.34(m,1h),2.33(s,3h),2.15(dd,j＝8.5,3.6hz,1h),2.05(s,3h),1.94
–
1.78(m,6h),1.74
–
1.64(m,2h),1.41(d,j＝7.2hz,3h),1.37
–
1.26(m,2h),1.14(s,3h),0.85(d,j＝6.5hz,3h)；
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ170.65,144.97,144.18,141.44,141.00,132.69,123.75,122.99,120.81,73.98,70.74,67.48,64.84,56.97,42.81,41.90,41.20,37.85,37.84,37.08,34.32,30.43,30.41,28.67,27.56,21.54,19.27,19.22,16.13,12.80.hrms(esi):m/z calcd for c
30h44
no
3
[m h]

:466.3316,found(466.3315)。
[0221]
实施例9
[0222][0223]
在氩气保护条件下，将草酰氯(184μl,2.15mmol)的无水dcm溶液冷却至-78℃，加入dmso(229μl,3.23mmol)的无水dcm溶液，反应1h后加入vt-8(500mg,1.08mmol)的无水dcm溶液，反应1.5h，加入三乙胺(894μl,6.45mmol)，保护-65℃反应1h，然后撤掉低温，缓慢升至室温搅拌，然后加水淬灭，用饱和nh4cl和饱和nacl溶液多次洗涤，无水na2so4干燥，过滤后浓缩得粗品，并用硅胶柱层析(pe/ea＝19:1)纯化，得到白色固体即为vt-9(283mg,68％)。
[0224]1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.08(d,j＝7.8hz,1h),6.98(d,j＝7.7hz,1h),5.52(brd,j＝5.3hz,1h),4.70
–
4.61(m,1h),3.61(d,j＝9.9hz,1h),3.41
–
3.35(m,1h),2.97(td,j＝11.7,5.3hz,1h),2.89(dd,j＝13.4,2.9hz,1h),2.82
–
2.70(m,2h),2.63
–
2.53(m,3h),
2.52
–
2.42(m,2h),2.38
–
2.32(m,1h),2.28(s,3h),2.20
–
2.13(m,1h),2.05(s,6h),1.94
–
1.83(m,3h),1.74
–
1.64(m,1h),1.39
–
1.24(m,2h),1.15(s,3h),1.09(d,j＝6.7hz,3h),0.96(d,j＝6.5hz,3h)；
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ210.25,170.60,143.53,142.66,141.44,140.11,131.21,125.23,123.21,120.06,74.04,73.25,61.73,56.97,50.05,41.32,37.90,37.89,37.09,36.82,35.12,32.11,30.49,30.46,27.59,21.53,21.02,19.29,19.29,15.50.hrms(esi):m/z calcd for c
30h42
no
3
[m h]

:464.3159,found(464.3162)。
[0225]
实施例10
[0226][0227]
将vt-9(387mg，0.84mmol)溶于无水etoh中，加入盐酸羟胺(581mg,8.4mmol)和无水乙酸钠(686mg,8.4mmol)，室温条件下反应4h。tlc监测反应完毕后，加水淬灭，用dcm萃取。有机相用无水na2so4干燥，过滤后浓缩得粗品，并用硅胶柱层析(pe/ea＝5:1-3:1)纯化，得到白色固体即为vt-10(297mg,74％)。
[0228]1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.08(d,j＝7.8hz,1h),6.98(d,j＝7.8hz,1h),5.52(d,j＝5.2hz,1h),4.71
–
4.62(m,1h),3.49
–
3.42(m,2h),2.97(td,j＝11.6,5.3hz,1h),2.93
–
2.82(m,2h),2.79(dd,j＝14.7,7.3hz,1h),2.66
–
2.52(m,2h),2.45(ddd,j＝12.9,4.8,1.6hz,1h),2.40
–
2.32(m,2h),2.30(s,3h),2.08(s,3h),2.06(s,3h),1.96
–
1.79(m,3h),1.76
–
1.63(m,1h),1.39
–
1.25(m,3h),1.16(s,3h),1.10(d,j＝6.6hz,3h),0.97(d,j＝6.3hz,3h),0.91
–
0.83(m,1h)；
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ170.62,143.37,142.50,141.28,141.28,131.32,124.67,123.12,120.01,73.98,69.08,59.99,59.98,56.88,53.44,41.16,37.77,36.97,34.87,30.57,30.43,30.36,29.24,28.99,27.48,21.44,20.82,19.62,19.20,15.70.hrms(esi):m/z calcd for c
30h43
n2o
3
[m h]

:479.3268,found 479.3270.
[0229]
实施例11
[0230][0231]
将vt-10(150mg,0.34mmol)溶于ch3oh中，加入naoh(27mg,0.68mmol)，在65℃条件下回流反应2h。tlc监测反应完毕后，加水淬灭，用dcm萃取。有机相用无水na2so4干燥，过滤后浓缩得粗品，并用硅胶柱层析(pe/ea＝3:1-1:1)纯化，得到白色固体即为vt-11(112mg,
82％)。
[0232]1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.07(d,j＝7.8hz,1h),6.98(d,j＝7.7hz,1h),5.49(brd,j＝5.2hz,1h),3.63
–
3.55(m,1h),3.44(d,j＝22.6hz,2h),2.97(td,j＝11.6,5.3hz,1h),2.86(d,j＝11.8hz,2h),2.78(dd,j＝14.7,7.4hz,1h),2.66
–
2.53(m,3h),2.45
–
2.39(m,1h),2.30(s,3h),2.29
–
2.28(m,3h),2.07
–
2.00(m,4h),1.90
–
1.79(m,3h),1.66
–
1.56(m,2h),1.32
–
1.23(m,2h),1.14(s,3h),1.10(d,j＝6.5hz,3h),0.97(d,j＝6.4hz,3h)；
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ158.00,143.55,142.55,142.71,142.55,131.44,124.75,122.30,120.07,72.01,69.17,60.28,57.11,42.03,41.39,40.65,38.18,37.05,34.83,31.45,30.75,30.63,30.50,29.25,21.01,19.72,19.44,15.84.hrms(esi):m/z calcd for c
28h41
n2o
2
[m h]

:437.3163,found(437.3160)。
[0233]
实施例12
[0234][0235]
vt-9为原料，合成方法同vt-10制得
[0236]
中间体数据：1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.10(d,j＝7.8hz,1h),6.98(d,j＝7.7hz,1h),5.52(dd,j＝3.2,2.0hz,1h),4.70
–
4.61(m,1h),3.90(s,3h),3.40(s,2h),2.97(td,j＝11.6,5.3hz,1h),2.89
–
2.76(m,2h),2.73
–
2.53(m,3h),2.45(ddd,j＝12.9,4.9,1.7hz,1h),2.39
–
2.32(m,1h),2.30(s,3h),2.27
–
2.18(m,2h),2.07(s,3h),2.05(s,3h),1.95
–
1.81(m,3h),1.70(ddd,j＝14.0,11.8,6.2hz,2h),1.38
–
1.24(m,3h),1.15(s,3h),1.09(d,j＝6.2hz,3h),0.94(d,j＝6.1hz,3h).
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ170.64,156.87,143.34,142.52,141.42,141.42,131.55,124.80,123.27,119.98,74.08,69.25,61.56,59.97,57.02,41.66,41.29,37.92,37.11,35.31,31.08,30.57,30.51,29.82,29.14,27.62,21.56,20.93,19.80,19.33,15.93.
[0237]
进一步，合成方法同vt-11
[0238]
白色固体，产率约为65％。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.10(d,j＝7.8hz,1h),6.98(d,j＝7.7hz,1h),5.49(brd,j＝5.3hz,1h),3.90(s,3h),3.61
–
3.55(m,1h),3.40(s,2h),2.97(td,j＝11.6,5.3hz,1h),2.86(d,j＝10.6hz,1h),2.79(dd,j＝14.7,7.4hz,1h),2.71
–
2.53(m,3h),2.42(ddd,j＝12.9,4.8,1.9hz,1h),2.31(s,3h),2.29
–
2.20(m,2h),2.09
–
2.00(m,4h),1.91
–
1.79(m,3h),1.67
–
1.56(m,2h),1.31
–
1.24(m,2h),1.14(s,3h),1.09(d,j＝6.2hz,3h),0.95(d,j＝6.0hz,3h)；
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ156.99,143.44,142.61,142.56,141.72,131.55,124.78,122.28,119.98,71.95,69.27,61.56,59.93,57.11,
42.04,41.70,41.37,38.18,37.04,35.33,31.46,31.03,30.63,30.51,29.12,20.91,19.81,19.42,15.93.hrms(esi):m/z calcd for c
29h43
n2o
2
[m h]

:451.3319,found(451.3314)。
[0239]
实施例13
[0240][0241]
vt-9为原料，合成方法同vt-10
[0242]
白色固体，产率约为85％。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.10(d,j＝7.8hz,1h),6.98(d,j＝7.7hz,1h),5.52(brd,j＝5.2hz,1h),4.71
–
4.62(m,1h),4.18
–
4.12(m,2h),3.41(s,2h),2.97(td,j＝11.6,5.3hz,1h),2.86(d,j＝11.6hz,1h),2.79(dd,j＝14.7,7.3hz,1h),2.73(dd,j＝13.9,3.6hz,1h),2.65
–
2.53(m,2h),2.48
–
2.42(m,1h),2.36(dd,j＝19.5,8.0hz,2h),2.30(s,3h),2.28
–
2.22(m,1h),2.15
–
2.07(m,3h),2.05(s,4h),1.95
–
1.81(m,4h),1.75
–
1.65(m,1h),1.39
–
1.32(m,1h),1.29(t,j＝7.0hz,4h),1.15(s,3h),1.09(d,j＝6.2hz,3h),0.95(d,j＝6.2hz,3h)；
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ170.64,143.28,143.25,142.48,141.86,141.41,131.51,124.79,123.28,119.98,74.07,69.30,69.01,60.10,56.99,41.29,41.26,37.91,37.10,35.28,31.29,30.56,30.50,29.18,27.62,21.56,20.99,19.82,19.33,15.91,15.02,14.78.hrms(esi):m/z calcd for c
32h47
n2o
3
[m h]

:507.3581,found(507.3580)。
[0243]
实施例14
[0244][0245]
vt-13为原料，合成方法同vt-11
[0246]
白色固体，产率约为60％。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.10(d,j＝7.8hz,1h),6.98(d,j＝7.7hz,1h),5.49(brd,j＝5.2hz,1h),4.19
–
4.11(m,2h),3.62
–
3.54(m,1h),3.41(s,2h),2.97(td,j＝11.6,5.3hz,1h),2.86(d,j＝11.5hz,1h),2.78(dd,j＝14.7,7.4hz,1h),2.72(d,j＝10.6hz,1h),2.66
–
2.53(m,2h),2.41(ddd,j＝12.9,4.7,1.8hz,1h),2.30(s,3h),2.29
–
2.22(m,2h),2.09
–
1.99(m,5h),1.92
–
1.79(m,4h),1.72
–
1.56(m,3h),1.28(t,j＝7.0hz,5h),1.14(s,4h),1.11
–
1.07(m,3h),1.05(d,j＝6.8hz,1h),0.95(d,j＝6.1hz,
3h)；
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ156.60,143.38,142.56,142.56,141.77,131.52,124.77,122.25,119.97,71.91,69.33,69.00,60.06,57.10,42.02,41.54,41.35,38.17,37.02,35.28,31.43,31.25,30.61,30.49,29.14,20.96,19.81,19.41,15.90,15.00.hrms(esi):m/z calcd for c
30h45
n2o
2
[m h]

:465.3476,found 465.3471.
[0247]
实施例15
[0248][0249]
由vt-9为原料、合成方法同vt-10，得到中间体进一步，合成方法同vt-11
[0250]
白色固体，产率约为55％。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.11(d,j＝7.8hz,1h),6.98(d,j＝7.7hz,1h),5.49(d,j＝5.3hz,1h),3.58(tt,j＝11.2,4.5hz,1h),3.47(s,2h),3.01
–
2.89(m,2h),2.87
–
2.76(m,2h),2.65
–
2.53(m,2h),2.42(ddd,j＝12.9,4.8,1.9hz,1h),2.30(s,3h),2.20
–
1.99(m,5h),1.92
–
1.80(m,4h),1.61(ddd,j＝26.8,13.7,3.9hz,2h),1.32(s,9h),1.31
–
1.24(m,2h),1.14(s,3h),1.11(d,j＝6.1hz,3h),0.91(d,j＝6.6hz,3h)；
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ154.18,143.19,142.56,142.53,141.97,131.28,124.94,122.37,120.00,77.48,72.02,69.13,61.23,57.08,42.07,41.41,39.10,38.21,37.06,34.42,32.15,31.50,30.63,30.52,29.20,27.85,27.85,27.85,21.43,19.67,19.44,15.66.hrms(esi):m/z calcd for c
32h49
n2o
2
[m h]

:493.3789,found(493.3794).
[0251]
实施例16
[0252]
[0253]
由vt-9为原料、合成方法同vt-10，得到中间体进一步，合成方法同vt-11
[0254]
白色固体，产率约为59％。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.41
–
7.26(m,5h),7.08(d,j＝7.7hz,1h),6.97(d,j＝7.7hz,1h),5.49(brd,j＝3.7hz,1h),5.17(s,2h),3.63
–
3.54(m,1h),3.42(s,2h),2.97(td,j＝11.6,5.2hz,1h),2.89
–
2.75(m,3h),2.67
–
2.53(m,2h),2.46
–
2.38(m,1h),2.30(s,4h),2.16(s,2h),2.02(s,3h),1.93
–
1.79(m,3h),1.71
–
1.56(m,2h),1.28(dd,j＝13.3,9.5hz,2h),1.14(s,3h),1.04(d,j＝3.3hz,3h),0.94(d,j＝4.1hz,3h)；
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ157.51,143.36,142.56,142.56,141.73,138.64,131.45,128.38,128.38,128.15,128.15,127.69,124.76,122.29,119.98,75.60,71.95,69.19,60.14,57.09,42.04,41.37,41.03,38.18,37.03,34.96,31.64,31.45,30.62,30.50,29.34,20.99,19.79,19.42,15.86.hrms(esi):m/z calcd for c
35h47
n2o
2
[m h]

:527.3632,found(527.3636).
[0255]
实施例17
[0256][0257]
由vt-9为原料、合成方法同vt-10，得到中间体进一步，合成方法同vt-11
[0258]
白色固体，产率约为45％。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ8.21(s,1h),7.06(d,j＝7.8hz,1h),6.97(d,j＝7.7hz,1h),5.48(brd,j＝5.2hz,1h),3.62
–
3.53(m,1h),3.46
–
3.37(m,2h),2.96(td,j＝11.6,5.3hz,1h),2.86(d,j＝8.4hz,1h),2.78(dd,j＝14.7,7.3hz,1h),2.66
–
2.52(m,3h),2.42(ddd,j＝12.9,4.6,1.7hz,1h),2.29(s,3h),2.28
–
2.24(m,2h),2.08(s,3h),2.06
–
1.99(m,2h),1.93
–
1.78(m,5h),1.66
–
1.56(m,1h),1.32
–
1.23(m,3h),1.14(s,3h),1.09(d,j＝6.2hz,3h),0.96(d,j＝6.0hz,3h)；
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ158.19,150.66,143.61,142.70,142.60,141.25,131.40,125.04,122.19,119.95,71.92,71.06,60.27,57.15,42.02,41.37,38.18,37.03,35.72,32.88,31.44,30.61,30.50,29.82,29.38,20.40,19.74,19.42,15.85.hrms(esi):m/z calcd for c
29h43
n4o
2
[m h]

:
479.3381,found(479.3381).
[0259]
实施例18
[0260][0261]
将vt-9(200mg,0.43mmol)和叔丁基咔唑(571mg,4.32mmol)溶于ch3oh中，滴加3滴乙酸溶液，65℃下回流反应12h，tlc监测反应完毕后，不经处理直接加入naoh(35mg,0.86mmol)进行水解反应，tlc监测反应完毕后，冷却至室温，加水淬灭。用dcm萃取，合并有机相并用无水na2so4干燥，过滤后浓缩得粗品，并通过硅胶柱层析(pe/ea＝3:1-1:1)纯化，得到白色固体即为vt-18(185mg,80％)。
[0262]1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.16(d,j＝7.1hz,1h),6.99(d,j＝7.4hz,1h),5.48(d,j＝4.3hz,1h),3.63
–
3.39(m,3h),2.96(td,j＝11.6,5.3hz,2h),2.77(dd,j＝14.7,7.3hz,1h),2.66
–
2.36(m,5h),2.29(s,6h),2.12
–
2.00(m,4h),1.89
–
1.78(m,5h),1.53(s,9h),1.29
–
1.24(m,2h),1.13(s,3h),1.11(d,j＝6.2hz,3h),0.99(d,j＝6.2hz,3h).
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ153.11,143.56,142.59,142.50,131.70,125.04,122.32,120.13,120.09,81.25,72.00,71.42,60.02,57.12,42.03,41.36,38.17,37.03,32.34,31.45,30.63,30.50,28.83,28.48,28.48,28.48,28.43,28.41,20.91,19.95,19.43,16.03.hrms(esi):m/z calcd for c
33h50
n3o
3
[m h]

:536.3847,found 536.3848.
[0263]
实施例19
[0264][0265]
将vt-18(200mg,0.37mmol)溶于无水dcm中，加入三氟乙酸(832μl,11.21mmol)，室温条件下搅拌30min，lc-ms监测反应完毕后，加饱和nahco3溶液淬灭。有机相用无水na2so4干燥，过滤后浓缩得粗品，并用c
18
柱层析(h2o/ch3cn＝40％-60％)纯化，冷冻干燥得到白色固体即为vt-19(115mg,71％)。
[0266]1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.09(d,j＝7.8hz,1h),6.97(d,j＝7.7hz,1h),5.48(brd,j＝5.3hz,1h),5.04(s,1h),3.62
–
3.46(m,2h),3.42
–
3.31(m,2h),2.97(td,j＝11.6,5.3hz,1h),2.87
–
2.74(m,2h),2.67
–
2.38(m,4h),2.29(s,3h),2.28
–
2.16(m,3h),2.06(s,
3h),2.02(dt,j＝14.3,3.0hz,1h),1.92
–
1.78(m,4h),1.67
–
1.55(m,2h),1.26(ddd,j＝13.3,8.9,4.2hz,1h),1.14(s,3h),1.06(d,j＝6.3hz,3h),0.97(d,j＝6.2hz,3h).
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ143.18,142.41,142.33,141.86,131.49,124.84,122.15,119.74,71.83,71.44,60.32,56.97,41.91,41.21,38.03,36.89,36.61,31.32,31.11,30.47,30.38,28.52,20.63,19.89,19.27,15.81.hrms(esi):m/z calcd for c
28h42
n3o

[m h]

:436.3322,found 436.3325.
[0267]
实施例20
[0268][0269]
在ar保护条件下，将vt-9(216mg,0.47mmol)溶于无水dcm(2.5ml)中，冰浴下滴加dast(1.7ml,14.00mmol)，半小时内滴加完毕，之后撤去冰浴，室温条件下反应24h。tlc监测大部分原料反应完毕后，将反应液缓慢倒入冰水中淬灭，完全淬灭后将有机相用无水na2so4干燥，过滤后浓缩得粗品，并用硅胶柱层析(pe/ea＝3:1)纯化，得到白色固体即为vt-20(115mg,51％)。
[0270]1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.12(d,j＝7.7hz,1h),6.98(d,j＝7.8hz,1h),5.52(brd,j＝5.2hz,1h),4.71
–
4.62(m,1h),3.53
–
3.44(m,1h),3.02
–
2.75(m,4h),2.65
–
2.53(m,2h),2.48
–
2.42(m,1h),2.39
–
2.32(m,1h),2.29(s,3h),2.24(s,3h),2.22
–
2.12(m,3h),2.05(s,3h),1.95
–
1.81(m,3h),1.75
–
1.65(m,1h),1.48
–
1.31(m,5h),1.15(s,3h),0.87(d,j＝6.2hz,3h)；
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ170.65,143.48,142.72,141.63,141.42,130.62,125.57/123.54/121.54,125.07,123.27,119.94,74.06,66.97/66.80/66.63,63.02,57.05,43.42/43.23/43.04,41.31,38.31,37.93,37.91,37.13,33.67,30.52,30.49,27.62,25.13/25.07,21.58,19.92/19.88,19.33,18.36,15.55.hrms(esi):m/z calcd for c
30h42
f2no
2
[m h]

:486.3178,found(486.3177).
[0271]
实施例21
[0272][0273]
vt-20为原料，合成方法同vt-11
[0274]
白色固体，产率约为40％。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.12(d,j＝7.7hz,1h),6.99(d,
j＝7.7hz,1h),5.49(brd,j＝5.2hz,1h),3.63
–
3.47(m,2h),2.98(td,j＝11.6,5.3hz,2h),2.88(d,j＝9.5hz,1h),2.78(dd,j＝14.7,7.4hz,1h),2.66
–
2.53(m,2h),2.42(ddd,j＝12.9,4.7,1.7hz,1h),2.29(s,3h),2.27(s,3h),2.23
–
2.13(m,2h),2.09
–
1.99(m,1h),1.92
–
1.79(m,4h),1.61(ddd,j＝27.2,13.8,4.0hz,1h),1.50
–
1.39(m,1h),1.36(dd,j＝6.7,3.4hz,3h),1.32
–
1.23(m,1h),1.14(s,3h),0.89(d,j＝6.0hz,3h)；
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ143.72,142.90,142.54,141.36,130.59,126.15/123.33/120.82,125.01,122.26,120.07,71.96,67.09/66.89/66.75,62.96,57.14,43.25/43.07/42.87,42.02,41.37,38.48,38.17,37.04,33.69,31.44,30.58,30.47,25.05/24.99,20.00/19.96,19.42,18.31,15.56.hrms(esi):m/z calcd for c
28h40
f2no

[m h]

:444.3072,found(444.3075).
[0275]
实施例22
[0276][0277]
vt-21为原料，合成方法同vt-9
[0278]
白色固体，产率约为70％。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.13(d,j＝7.4hz,1h),6.99(d,j＝7.4hz,1h),5.82(brd,j＝1.1hz,1h),3.51
–
3.45(m,1h),3.12
–
2.72(m,4h),2.64
–
2.37(m,7h),2.28(s,3h),2.24(s,3h),2.21
–
2.00(m,4h),1.90(td,j＝14.2,4.5hz,1h),1.82
–
1.76(m,1h),1.52
–
1.40(m,2h),1.34(dd,j＝6.8,3.2hz,3h),1.29(s,3h),0.88(d,j＝6.3hz,3h).
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ199.50,170.20,142.57,142.51,141.98,130.84,125.30,125.27,119.56,66.94/66.77/66.60,63.00,59.70,43.91,38.68,38.32,36.34,33.95,33.66,33.36,30.20,29.72,25.10/25.04,19.88/19.83,18.34,17.00,15.52.hrms(esi):m/z calcd for c
28h38
f2no

[m h]

:442.2916,found 442.2918.
[0279]
实施例23
[0280][0281]
vt-22为原料，合成方法同vt-10
[0282]
白色固体，产率约为83％。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.12(d,j＝7.8hz,1h),6.98(d,j＝7.8hz,1h),5.60
–
5.51(m,1h),3.51
–
3.44(m,1h),3.06
–
2.78(m,5h),2.66
–
2.56(m,2h),2.46
–
2.31(m,2h),2.29(s,3h),2.24(s,3h),2.23
–
2.02(m,5h),1.98
–
1.85(m,2h),1.54
–
1.39(m,2h),1.35(dd,j＝6.9,3.2hz,4h),1.26(s,1h),1.23(s,3h).hrms(esi):m/z calcd for c
28h39
f2n2o

[m h]

:457.3025,found 457.3031.
[0283]
实施例24
[0284][0285]
在ar保护条件下，将vt-8(300mg,0.65mmol)的无水dcm溶液置于-78℃条件下，加入dast(2.4ml,19.35mmol)的无水dcm溶液，反应30分钟后，将反应液移入室温条件下反应12h。tlc监测大部分原料反应完毕后，将反应液缓慢倒入冰水中淬灭，完全淬灭后将有机相用无水na2so4干燥，过滤后浓缩得粗品，并用硅胶柱层析(pe/ea＝2:1)纯化，得到白色固体(185mg,61％)。然后按照vt-11的方法水解得到vt-24。
[0286]1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.16(d,j＝7.1hz,1h),6.98(d,j＝7.8hz,1h),5.48(brd,j＝5.2hz,1h),4.80(d,j＝47.9hz,1h),3.67
–
3.53(m,2h),2.99(td,j＝11.5,5.2hz,2h),2.78(dd,j＝14.8,7.4hz,1h),2.67
–
2.56(m,3h),2.53(s,3h),2.42(ddd,j＝12.9,4.7,1.8hz,1h),2.31(s,3h),2.29
–
2.24(m,1h),2.17(s,1h),2.06
–
1.95(m,3h),1.91
–
1.78(m,4h),1.66
–
1.56(m,1h),1.41(d,j＝6.7hz,3h),1.31
–
1.23(m,2h),1.14(s,3h),0.93(d,j＝6.0hz,3h)；
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ144.04,142.83,142.56,141.15,131.03,125.97,122.18,119.85,89.36/87.97,71.93,69.77/69.61,64.14,57.18,42.36,41.99,41.31,39.56/39.41,38.14,37.03,34.96,31.42,30.51,30.51,27.49,19.39,18.85,15.94,15.45.hrms(esi):m/z calcd for c
28h41
fno

[m h]

:426.3167,found 426.3169.
[0287]
实施例25
[0288][0289]
将藜芦胺(500mg,1.22mmol)溶于thf中，加入et3n(1236mg,12.22mmol)，然后加入fmoccl(3161mg,12.22mmol)的thf溶液，室温条件下反应1h，加水淬灭，将有机相分离出来浓缩，通过硅胶柱层析(pe/ea＝5:1)纯化，得到白色中间体。接下来的乙酰化步骤同vt-8。
然后将中间体同vt-9的方法合成同vt-10的方法合成水解乙酰基方法同vt-11。
[0290]
脱fmoc的方法：溶于dmf中，加入2ml哌啶，室温搅拌30min，tlc监测反应完成后，加入5ml水分三次水洗，并用dcm萃取，将有机相用无水na2so4干燥，过滤后浓缩得粗品，并用硅胶柱层析(pe/ea＝3:1)纯化，得到vt-26，白色固体，产率约为14％。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.06(d,j＝7.8hz,1h),7.01(d,j＝7.7hz,1h),5.49(brd,j＝5.1hz,1h),3.71
–
3.53(m,2h),3.36(d,j＝10.3hz,1h),3.14
–
3.05(m,1h),2.97(td,j＝11.9,4.4hz,2h),2.79(dd,j＝14.8,7.3hz,1h),2.67
–
2.54(m,2h),2.41(dd,j＝12.8,4.6hz,1h),2.38
–
2.34(m,1h),2.32(s,3h),2.31
–
2.24(m,1h),2.15
–
2.00(m,2h),1.96
–
1.80(m,5h),1.66
–
1.56(m,1h),1.31
–
1.25(m,1h),1.22(d,j＝6.7hz,2h),1.14(s,3h),1.02(d,j＝7.0hz,1h),0.96(d,j＝6.2hz,3h)；
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ157.63,144.03,143.25,142.63,140.79,132.90,122.18,122.12,120.66,71.91,65.09,57.05,52.33,41.97,41.38,38.14,37.02,32.25,31.39,31.06,30.66,30.47,20.74,19.40,18.83,17.19,15.98.hrms(esi):m/z calcd for c
27h39
n2o
2
[m h]

:423.3006,found(423.3002)。
[0291]
实施例26
[0292][0293]
vt-3为原料，合成方法同vt-8
[0294]
白色固体，产率约为55％。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.25(d,j＝7.0hz,1h),7.02(d,j＝7.7hz,1h),6.01
–
5.92(m,1h),5.51(brd,j＝5.2hz,1h),5.30
–
5.17(m,2h),4.70
–
4.61(m,1h),3.85
–
3.80(m,1h),3.73
–
3.66(m,1h),3.57(dd,j＝14.4,5.0hz,1h),3.03(dd,j＝14.4,7.7hz,1h),2.94(td,j＝11.6,5.2hz,1h),2.86(d,j＝11.0hz,1h),2.77(dd,j＝14.9,7.4hz,1h),2.65
–
2.53(m,2h),2.49
–
2.42(m,2h),2.36(d,j＝11.4hz,1h),2.31(s,3h),2.05(s,3h),2.01(dd,j＝9.6,7.1hz,1h),1.95
–
1.78(m,5h),1.75
–
1.58(m,2h),1.40(d,j＝7.1hz,3h),1.36
–
1.26(m,2h),1.15(s,3h),0.90(d,j＝12.1hz,1h),0.87(d,j＝6.6hz,3h)；
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ170.48,144.78,143.87,141.33,140.91,135.66,
132.59,123.92,122.87,120.66,117.27,73.84,67.35,67.26,59.66,56.85,56.11,41.21,41.08,37.73,37.73,36.95,34.07,30.32,30.29,28.17,27.44,21.42,19.42,19.10,16.06,13.73.hrms(esi):m/z calcd for c
32h46
no
3
[m h]

:492.3472,found 492.3474.
[0295]
实施例27
[0296][0297]
vt-27为原料，合成方法同vt-9
[0298]
白色固体，产率约为75％。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.07(d,j＝7.8hz,1h),6.96(d,j＝7.8hz,1h),5.52(brd,j＝5.2hz,1h),5.35
–
5.24(m,1h),4.95
–
4.87(m,2h),4.70
–
4.61(m,1h),3.55(d,j＝9.6hz,1h),3.52
–
3.44(m,1h),3.06
–
2.92(m,2h),2.83
–
2.74(m,3h),2.63
–
2.54(m,3h),2.47
–
2.41(m,2h),2.39
–
2.32(m,1h),2.28(s,3h),2.17
–
2.11(m,1h),2.05(s,3h),1.95
–
1.79(m,4h),1.74
–
1.67(m,1h),1.38
–
1.27(m,2h),1.16(s,3h),1.09(d,j＝6.7hz,3h),0.97(d,j＝6.2hz,3h)；
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ210.71,170.65,143.62,142.52,141.43,140.23,136.16,131.35,125.64,123.22,119.93,116.79,74.19,74.07,57.11,55.25,53.61,48.38,41.27,37.92,37.10,33.39,32.74,30.51,30.50,27.63,21.57,20.61,19.56,19.35,19.30,15.79.hrms(esi):m/z calcd for c
32h44
no
3
[m h]

:490.3316,found 490.3313.
[0299]
实施例28
[0300]
[0301]
vt-28为原料，合成方法同vt-10，得到中间体进一步合成方法同vt-11
[0302]
白色固体，产率约为68％。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.08(d,j＝7.8hz,1h),6.96(d,j＝7.7hz,1h),5.49(brd,j＝5.1hz,1h),5.31(dd,j＝16.8,9.3hz,1h),4.89(d,j＝13.6hz,2h),3.89(s,3h),3.62
–
3.55(m,1h),3.40
–
3.38(m,2h),3.01
–
2.83(m,3h),2.79(dd,j＝14.6,7.3hz,2h),2.66
–
2.53(m,2h),2.45(ddd,j＝17.1,13.6,5.3hz,3h),2.31(s,3h),2.19
–
1.99(m,3h),1.92
–
1.78(m,3h),1.73(s,1h),1.67
–
1.56(m,1h),1.32
–
1.23(m,2h),1.16(s,3h),1.07(d,j＝6.1hz,3h),0.98(d,j＝6.6hz,3h)；
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ158.19,143.61,142.70,142.60,141.25,131.40,125.04,122.19,119.95,77.41,77.16,76.91,71.92,71.06,60.27,57.15,42.02,41.37,38.18,37.03,35.72,32.88,31.44,30.61,30.50,29.82,29.38,20.40,19.74,19.42,15.85.hrms(esi):m/z calcd for c
31h45
n2o
2
[m h]

:477.3476,found477.3478.
[0303]
实施例29
[0304][0305]
vt-28为原料，合成方法同vt-10，得到中间体进一步合成方法同vt-11
[0306]
白色固体，产率约为64％。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.09(d,j＝7.8hz,1h),6.96(d,j＝7.8hz,1h),5.49(brd,j＝5.1hz,1h),5.31(dt,j＝15.7,6.4hz,1h),4.89(d,j＝13.6hz,2h),4.18
–
4.11(m,2h),3.62
–
3.55(m,1h),3.42
–
3.35(m,2h),3.01
–
2.84(m,3h),2.83
–
2.75(m,2h),2.66
–
2.39(m,5h),2.31(s,3h),2.29
–
2.25(m,1h),2.24
–
1.99(m,3h),1.92
–
1.78(m,3h),1.71(s,1h),1.66
–
1.57(m,1h),1.28(t,j＝7.0hz,4h),1.16(s,3h),1.06(d,j＝6.0hz,3h),0.98(d,j＝6.6hz,3h)；
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ157.85,143.46,
142.53,142.34,141.97,136.80,132.07,125.11,122.27,119.89,116.41,71.96,68.96,68.57,59.51,57.18,55.11,42.05,41.31,38.18,37.01,31.46,30.61,30.54,30.17,29.10,27.04,20.18,20.14,19.43,16.25,15.00.hrms(esi):m/z calcd for c
32h47
n2o
2
[m h]

:491.3632,found 491.3638.
[0307]
实施例30
[0308][0309]
vt-28为原料，合成方法同vt-10，得到中间体进一步合成方法同vt-11
[0310]
白色固体，产率约为66％。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.09(d,j＝7.8hz,1h),6.97(d,j＝7.7hz,1h),5.50(brd,j＝5.2hz,1h),5.35
–
5.27(m,1h),4.89(d,j＝13.1hz,2h),3.63
–
3.55(m,1h),3.42(s,2h),3.01
–
2.76(m,5h),2.66
–
2.49(m,3h),2.42(ddd,j＝13.0,4.8,1.9hz,1h),2.35(dd,j＝15.4,7.6hz,1h),2.31(s,3h),2.20
–
2.11(m,2h),2.08
–
2.00(m,1h),1.93
–
1.79(m,3h),1.72
–
1.57(m,3h),1.31(s,9h),1.29
–
1.24(m,1h),1.16(s,3h),1.05(d,j＝6.2hz,3h),0.96(d,j＝6.2hz,3h)；
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ155.54,143.29,142.53,142.30,142.19,137.00,131.96,125.18,122.31,119.84,116.26,77.16,71.99,67.41,68.51,58.31,57.17,55.55,42.06,41.33,38.19,37.02,36.22,31.48,30.62,30.56,30.40,29.18,27.80,27.80,27.80,20.48,20.17,19.44,16.12.hrms(esi):m/z calcd for c
34h51
n2o
2
[m h]

:519.3945,found 519.3947.
[0311]
实施例31
[0312][0313]
vt-28为原料，合成方法同vt-10，得到中间体进一步合成方法同vt-11
[0314]
白色固体，产率约为60％。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.41
–
7.27(m,5h),7.05(d,j＝7.8hz,1h),6.95(d,j＝7.8hz,1h),5.49(d,j＝5.2hz,1h),5.32
–
5.24(m,1h),5.15(s,2h),4.90
–
4.83(m,2h),3.63
–
3.55(m,1h),3.44
–
3.36(m,2h),3.01
–
2.89(m,2h),2.85
–
2.73(m,3h),2.65
–
2.39(m,5h),2.30(s,3h)，2.22
–
1.99(m 3h)，1.92
–
1.78(m 3h)，1.67
–
1.53(m 3h)，1.32
–
1.24(m 1h)，1.16(s，3h)，1.00(dj＝6.2hz,3h),0.96(d,j＝6.6hz,3h)；
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ158.77,143.47,142.52,142.35,141.89,138.64,136.79,132.00,128.38,128.38,128.11,128.11,127.69,125.09,122.30,119.89,116.45,75.51,71.99,68.29,59.18,57.18,55.00,42.06,41.32,38.18,37.02,36.32,31.48,30.62,30.55,30.35,29.32,20.18,20.18,19.44,16.21.hrms(esi):m/z calcd for c
37h49
n2o
2
[m h]

:553.3789,found 553.3792.
[0315]
实施例32
[0316]
[0317]
vt-28为原料，合成方法同vt-18
[0318]
白色固体，产率约为63％。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.54(s,1h),7.13(d,j＝7.8hz,1h),6.95(d,j＝7.7hz,1h),5.47(brd,j＝5.1hz,1h),5.36
–
5.22(m,1h),4.86(d,j＝12.2hz,2h),3.63
–
3.51(m,2h),3.38
–
3.32(m,1h),3.01
–
2.69(m,5h),2.64
–
2.32(m,4h),2.29(s,3h),2.06
–
1.76(m,9h),1.66
–
1.56(m,1h),1.52(s,9h),1.31
–
1.21(m,1h),1.14(s,3h),1.06(d,j＝6.9hz,3h),0.98(d,j＝6.6hz,3h)；
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ154.36,153.01,143.45,142.47,142.18,142.00,136.62,132.04,125.26,122.23,119.90,116.38,81.07,71.88,71.40,60.16,57.15,55.16,41.98,41.24,38.13,36.95,31.75,31.38,30.56,30.49,28.47,28.44,28.44,28.44,20.15,20.12,19.39,16.31.hrms(esi):m/z calcd for c
35h52
n3o
3
[m h]

:562.4003,found 562.4004.
[0319]
实施例33
[0320][0321]
将vt-1(1.22mmol)和异丙醇铝(499mg,2.44mmol)溶于甲苯中，加入环己酮(1.3ml,12.22mmol)，将反应在110℃回流反应6h，tlc点板监测反应完毕后，将反应液过滤，滤液真空浓缩并用硅胶柱层析(pe/ea＝2:1-1:1)纯化，得到白色固体即为vt-35(415mg,83％)。
[0322]
白色固体，产率约为60％。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.27(d,j＝7.9hz,1h),7.02(d,j＝7.7hz,1h),5.82(s,1h),3.87
–
3.83(m,1h),3.72
–
3.65(m,1h),3.03(td,j＝12.0,2.9hz,1h),2.80(d,j＝10.8hz,1h),2.73(dd,j＝14.7,7.0hz,1h),2.64
–
2.50(m,3h),2.47(s,3h),2.46
–
2.37(m,3h),2.33(s,3h),2.18(d,j＝5.4hz,1h),2.02(ddd,j＝13.2,5.0,2.5hz,1h),1.94
–
1.69(m,6h),1.50
–
1.44(m,1h),1.42(d,j＝7.2hz,3h),1.28(s,3h),0.86(d,j＝6.6hz,4h)；
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ199.38,169.81,143.83,143.27,141.26,132.72,125.18,123.89,120.26,70.67,67.34,64.61,59.48,43.65,42.66,41.75,38.48,36.13,34.27,33.75,33.07,29.96,29.50,28.42,19.11,16.74,15.98,12.88.hrms(esi):m/z calcd for c
28h40
no
2
[m h]

:422.3054,found(422.3055).
[0323]
实施例34
[0324][0325]
将vt-3同vt-35的方法合成vt-36
[0326]
白色固体，产率约为58％。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.26(d,j＝7.7hz,1h),7.02(d,j＝7.7hz,1h),5.98
–
5.90(m,1h),5.82(d,j＝1.1hz,1h),5.25
–
5.15(m,2h),3.83(s,1h),3.72
–
3.65(m,1h),3.55(d,j＝11.1hz,1h),3.04(td,j＝11.9,3.1hz,2h),2.87(d,j＝10.1hz,1h),2.73(dd,j＝14.7,7.0hz,1h),2.64
–
2.37(m,7h),2.31(s,3h),2.03(ddd,j＝13.2,5.0,2.5hz,1h),1.93
–
1.59(m,5h),1.50
–
1.43(m,1h),1.40(d,j＝7.0hz,3h),1.29(s,3h),0.87(d,j＝6.6hz,3h).
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ199.47,169.90,143.90,143.20,141.40,135.07,132.71,125.31,124.41,120.40,117.85,71.88,67.70,67.28,59.61,56.24,43.78,41.20,38.61,36.25,34.42,33.87,33.20,30.10,29.62,27.97,19.45,16.89,16.14,14.31.hrms(esi):m/z calcd for c
30h42
no
2
[m h]

:448.3210,found 448.3216.
[0327]
实施例35
[0328][0329]
将vt-36(100mg，0.22mmol)溶于无水etoh中，加入盐酸羟胺(155mg,2.24mmol)和无水乙酸钠(184mg,2.24mmol)，室温条件下反应4h。tlc监测反应完毕后，加水淬灭，用dcm萃取。有机相用无水na2so4干燥，过滤后浓缩得粗品，并用硅胶柱层析(pe/ea＝5:1)纯化，得到白色固体即为vt-45(67mg,63％)。
[0330]
白色固体，产率约为45％。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.25(d,j＝7.9hz,1h),7.01(d,j＝7.5hz,1h),5.98
–
5.90(m,1h),5.87(d,j＝1.7hz,1h),5.21(t,j＝13.7hz,2h),3.87(s,3h),3.86(s,1h),3.72
–
3.65(m,1h),3.58(dd,j＝14.2,4.5hz,1h),3.11
–
2.86(m,5h),2.73
–
2.67(m,1h),2.58
–
2.34(m,8h),2.30(s,4h),2.24
–
2.17(m,1h),1.95
–
1.83(m,4h),1.67(ddd,j＝19.7,12.5,5.4hz,3h),1.52(td,j＝13.9,5.0hz,1h),1.40(d,j＝7.1hz,
3h),1.39
–
1.18(m,7h),1.15(s,3h),0.96
–
0.89(m,1h),0.87(d,j＝6.6hz,4h).hrms(esi):m/z calcd for c
31h45
n2o
2
[m h]

:477.3476,found 477.3472.
[0331]
实施例36
[0332][0333]
vt-36为原料，合成方法同vt-45
[0334]1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.25(d,j＝7.8hz,1h),7.02(d,j＝7.6hz,1h),5.99
–
5.91(m,1h),5.89(d,j＝1.6hz,1h),5.24
–
5.17(m,3h),4.15
–
4.07(m,3h),3.84(s,1h),3.72
–
3.65(m,1h),3.57(d,j＝11.3hz,1h),3.07
–
2.93(m,4h),2.87(d,j＝10.6hz,1h),2.70(dt,j＝12.3,6.1hz,1h),2.58
–
2.34(m,8h),2.31(s,4h),2.22(ddd,j＝17.4,14.7,5.1hz,1h),1.87(dtd,j＝15.0,12.7,6.8hz,4h),1.72
–
1.59(m,3h),1.53(td,j＝13.8,4.8hz,1h),1.40(d,j＝7.1hz,4h),1.38
–
1.23(m,11h),1.20(s,1h),1.15(s,3h),0.93
–
0.88(m,1h),0.87(d,j＝6.6hz,4h).hrms(esi):m/z calcd for c
32h47
n2o
2
[m h]

:491.3632,found 491.3635.
[0335]
实施例37
[0336][0337]
将藜芦胺(500mg,1.2mmol)溶于thf中，冰浴条件下加入py(967mg,12.2mmol)，然后缓慢滴加ch3cocl(960mg,12.2mmol)，滴加完毕后撤去冰浴，室温条件下反应1h，点板监测反应完毕后，加入碳酸氢钠溶液淬灭，直至没有气泡产生，用dcm(10ml
×
3)萃取，合并有机相，减压蒸馏浓缩的粗产品，然后通过硅胶柱层析得到中间体为白色固体(489mg,75％)。取中间体(200mg,0.37mmol)溶于dcm中，加入nahco3(63mg,0.75mmol)，冰浴条件下加入mcpba(97mg,0.56mmol)，撤去冰浴后室温反应2h，通过硅胶柱层析纯化得到白色固体vt-47(135mg,66％)。
[0338]1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.01(t,j＝8.3hz,2h),6.87(ddd,j＝21.0,16.6,7.7hz,
2h),5.26(s,1h),5.19(s,1h),5.10(d,j＝10.5hz,1h),5.05
–
4.96(m,1h),4.84
–
4.78(m,1h),4.31(t,j＝12.7hz,1h),4.03(d,j＝9.8hz,1h),3.46(s,1h),3.32
–
3.20(m,2h),3.13(dd,j＝13.9,4.3hz,1h),3.07
–
3.04(m,1h),2.99
–
2.83(m,4h),2.73
–
2.54(m,3h),2.52
–
2.35(m,3h),2.23(d,j＝8.2hz,4h),2.21
–
2.08(m,6h),2.04(dd,j＝14.8,7.5hz,15h),1.99
–
1.88(m,5h),1.87(d,j＝3.8hz,3h),1.83
–
1.39(m,16h),1.34
–
1.23(m,6h),1.20(d,j＝5.4hz,3h),1.12(dd,j＝9.0,2.9hz,6h),1.06(d,j＝7.1hz,2h).hrms(esi):m/z calcd for c
33h46
no
6
[m h]

:552.3320,found(552.3324).
[0339]
实施例38
[0340][0341]
合成方法同vt-47(vt-5通过mcpba的过氧化反应得到)
[0342]1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.01(t,j＝12.0hz,1h),6.85(ddd,j＝24.1,18.1,7.7hz,1h),4.93(d,j＝9.9hz,1h),4.18(s,1h),3.93(d,j＝5.2hz,1h),3.72(s,1h),3.39
–
3.02(m,5h),2.96
–
2.34(m,11h),2.23(d,j＝5.8hz,4h),2.14(s,6h),2.12
–
1.89(m,6h),1.87(d,j＝4.0hz,6h),1.81
–
1.34(m,10h),1.27
–
1.19(m,5h),1.15(d,j＝8.4hz,6h),1.08(d,j＝7.0hz,3h).hrms(esi):m/z calcd for c
29h42
no
4
[m h]

:468.3108,found 468.3109.
[0343]
实施例39
[0344][0345]
将vt-48(100mg,0.21mmol)溶于(thf:h2o＝3:1)的混合溶液中，滴加f3ccooh(48mg,0.42mmol)，室温搅拌6h，点板监测反应完成后，加入nahco3溶液淬灭，dcm(5ml
×
3)萃取，合并有机相，减压浓缩干燥，并通过硅胶柱层析(dcm/ch3oh＝10:1)纯化，得到白色固体vt-49。
[0346]1h nmr(500mhz,meod)δ7.08(d,j＝6.9hz,1h),7.00(d,j＝7.7hz,1h),6.92(d,j＝7.2hz,1h),6.80(d,j＝7.7hz,1h),4.24
–
3.94(m,6h),3.66(s,2h),3.22
–
3.12(m,3h),
2.90(dd,j＝33.7,12.3hz,2h),2.65
–
2.55(m,2h),2.37(t,j＝13.2hz,2h),2.30
–
2.17(m,9h),2.16(s,6h),2.14
–
1.88(m,9h),1.84(d,j＝7.3hz,9h),1.71
–
1.47(m,6h),1.29(t,j＝4.4hz,11h),1.22(d,j＝6.5hz,3h),1.16(d,j＝7.1hz,3h),1.08(d,j＝7.1hz,3h).hrms(esi):m/z calcd for c
29h44
no
5
[m h]

:486.3214,found 486.3220.
[0347]
效果实施例1ap-1荧光素酶报告基因实验
[0348]
1.实验目的
[0349]
验证化合物是否对ap-1信号通路有抑制作用
[0350]
2.实验材料
[0351]
(1)细胞株
[0352]
hek293/ap-1-luc细胞株：上海陶术生物科技有限公司构建
[0353]
以ap-1/dna相互作用位点为研究对象，选用dna结合位点为5
′-
tgactca-3
′
，设置4次重复序列，构建在pgl4.32载体上。当ap-1通路被激活后，将会和特异性的序列结合，启动报告基因转录。
[0354]
(2)质粒
[0355]
(3)寡脱氧核苷酸
[0356]
(4)试剂
[0357]
试剂名称公司型号fbsbiowests1820dmem培养基wisent319-005-cl0.25％胰酶wisent325-043-cldpbsgibco14040117lipofectamine2000lifetechnology11668019hygromycin byeasen60225es03bright-glo assay kitpromegae2620pma罗恩r038872-5mg
[0358]
(5)仪器及耗材
[0359]
仪器及型号公司型号96孔细胞培养板corningcls3610nivo美国perkinelmer [0360]
3.实验步骤
[0361]
(1)细胞转染
[0362]
1)母细胞的准备，选择细胞代数早，细胞状态良好的hek293细胞。
[0363]
2)细胞转染前铺板，细胞转染铺在六孔板中，转染前细胞汇合度到60％-80％为宜，太满或太稀均不适合做转染。
[0364]
3)转染前试剂准备，使用lipofectamine2000做为转染试剂。按照每孔加入2μg质粒、5μl lipofectamine2000的比例进行转染，按照转染试剂说明书进行操作。
[0365]
4)转染24小时后，消化细胞，根据前期观察的状态按照1：10、1:20、1:40传到10cm皿中，具体比例根据转染效率确定。
[0366]
5)细胞传到10cm皿中后24小时加入抗生素进行抗生素筛选，同时做无转染的母细
胞对照，hygromycin使用浓度为100μg/ml。
[0367]
6)每3天细胞换液一次，同时加入新的抗生素，待10天左右，母细胞全部死亡，继续等细胞皿里面的克隆细胞长到肉眼可见开始挑选克隆细胞到96孔板中。
[0368]
7)待细胞在96孔板上长到80％时，传代到24孔板中，前期细胞太少在24孔板中长不起来。
[0369]
8)根据24孔板长势，挑选克隆做检测。
[0370]
(2)克隆检测
[0371]
1)根据24孔板长势铺板96孔板做检测，24孔板中克隆汇合度大于50％以上的，根据经验值按照不同密度进行96孔板的铺板，96孔板在铺板前需用matrigel进行包被。
[0372]
2)将铺好的板子放入5％co
2 37℃培养箱中过夜培养。
[0373]
3)第二天去掉培养基，将培养基换成80μl含有0.1％血清的dmem培养基。
[0374]
4)96孔板每孔加入终浓度为10nm的pma试剂，化合物与细胞在5％co
2 37℃培养箱中孵育24小时。
[0375]
5)结束孵育后，按照bright glo试剂产品说明，加入bright glo溶液，立即在读板机上读取荧光值。
[0376]
(3)克隆复测
[0377]
1)前期筛选信号窗口比较好的克隆，传到6孔板中，待细胞汇合度到达80％以后，准备铺96孔板进行复测，96孔板在铺板前需用matrigel进行包被。
[0378]
2)将铺好的板子放入5％co
2 37℃培养箱中过夜培养。
[0379]
3)第二天去掉培养基，将培养基换成含有0.1％血清的dmem培养基。
[0380]
4)将藜芦胺配置成终浓度为10μm的化合物溶液，加入到细胞中。
[0381]
5)复测克隆中，加药孔和阳性孔，每孔加入终浓度为10nm的pma试剂。阴性对照孔加入含dmso溶剂的培养基。化合物与细胞在5％co
2 37℃培养箱中孵育24小时。
[0382]
6)结束孵育后，按照bright glo试剂产品说明，加入bright glo溶液，立即在读板机上读取荧光值。
[0383]
(4)ap-1报告基因检测
[0384]
1)将hek293/ap-1细胞用胰酶消化后计数，按照每孔6x104细胞铺于提前包被过matrigel的96孔白边透明底板中。
[0385]
2)将铺好的板子放入5％co
2 37℃培养箱中过夜培养。
[0386]
3)第二天去掉培养基，将培养基换成含有0.1％血清的dmem培养基。
[0387]
4)实验当天用dmso将化合物溶解成高浓度储备液。
[0388]
5)96孔板每孔加入20μl 5x化合物工作液，工作液中含有5x pma(50nm)，化合物与细胞在5％co
2 37℃培养箱中孵育24小时。
[0389]
6)结束孵育后，按照bright glo试剂产品说明，加入bright glo溶液。立即在读扳机上读取荧光值。
[0390]
7)抑制率计算公式：inhibition％＝(1-reading test
/reading 0.5％dmso
)
×
100。
[0391]
表1藜芦胺衍生物(30μm)对hek293/ap-1模型细胞的增殖抑制活性
[0392][0393][0394]
表2藜芦胺衍生物(10μm)对hek293/ap-1模型细胞的增殖抑制活性
[0395]
化合物编号抑制率(％)化合物编号抑制率(％)vt-1440.41vt-2335.51vt-1538.63vt-2742.62vt-1637.65vt-2953.52vt-1842.31vt-3061.58vt-1945.98vt-3330.80vt-2254.715veratramine31.05
[0396]
由上可知，10μm时，本发明的化合物具有与veratramine相当或更优的抑制活性。30μm时，本发明的化合物具有比veratramine更优的抑制活性，明显优于化合物6、7、17、49。
[0397]
效果实施例2nf-κb荧光素酶报告基因实验
[0398]
1.实验目的
[0399]
检测化合物的是否专一作用于ap-1信号通路而对nf-κb信号通路没有影响。
[0400]
2.实验材料
[0401]
(1)细胞株
[0402]
hek293/nf-κb细胞株：上海陶术生物科技有限公司构建
[0403]
(2)试剂
[0404]
试剂名称公司型号dmem培养基bi06-1055-57-1acsfbs美国gibco10099-141dmso美国sigmad8418penicillin&streptomycin(p/s)procellpb1801200.25％胰酶-edta中国源培s310kjbright glo美国promegae2620
tnfα美国peprotech315-01a
[0405]
(3)仪器及耗材
[0406][0407][0408]
3.实验步骤
[0409]
(1)细胞复苏
[0410]
将需要复苏的细胞从液氮罐内迅速取出，在37℃水浴锅中融化，迅速加入预热的培养基中。1000转/分钟，离心5min后将离心管取出，弃去上清液，向离心管内加入新鲜预热的培养基，重悬细胞，然后将细胞悬液加入培养皿中，5％co
2 37℃培养。
[0411]
(2)细胞传代
[0412]
贴壁细胞传代：当细胞长满培养皿80～90％，用0.25％胰酶消化细胞，然后用新的培养基将细胞重悬，将细胞按适当比例传代，约2～4天传代1次。
[0413]
(3)细胞接种及药物处理
[0414]
1)检测前1天，根据细胞生长速度将细胞按40000细胞每孔接种于96孔细胞板中，每孔接种80μl细胞悬液，37℃，5％co2培养箱，孵育过夜。
[0415]
2)根据实验要求，每孔加入10μl化合物工作液孵育1小时后，加入10μl tnfα(200ng/ml)，5％co
2 37℃培养箱，避光孵育24小时。
[0416]
3)结束孵育后，加入bright glo 50μl/孔，在nivo上测定化学发光，计算抑制率。
[0417]
4)抑制率计算公式:inhibition％＝((rfucmpd
–
aver(rfuneg.ctrl))/((aver(rfuday0)
–
aver(rfuneg.ctrl))
×
100％。其中：rfucmpd：样品孔的发光值(待测化合物)
[0418]
rfu blank：空白孔发光值(细胞 培养基 dmso)
[0419]
rfuneg.ctrl：阴性孔发光值(细胞 培养基 dmso tnfα)
[0420]
表3藜芦胺衍生物对nf-κb信号通路的抑制活性
[0421]
化合物ic
50
(μm)vt-1421.62vt-159.2vt-1621.17vt-18》30vt-19》30vt-22》30vt-23》30vt-27》30vt-2920.31vt-3016.59veratramine》30imd-03544.8
[0422]
由上可知，本发明的化合物对nf-κb信号通路的抑制活性的ic
50
值均大于imd-0354
[0423]
(其为合成的选择性nf-kb抑制剂，还抑制nf-kb亚基p65进入细胞核。)，且大部分化合物大于20μm；部分化合物对nf-κb信号通路的抑制活性的ic
50
值大于30μm，表明这些衍生物与imd-0354相比几乎不具有抑制活性。
[0424]
可见，本发明的化合物对ap-1信号通路具有选择性抑制活性。
[0425]
效果实施例3三阴性乳腺癌细胞增殖抑制实验
[0426]
1.实验目的
[0427]
以cell titer glo(ctg)法检测化合物对mda-mb-231细胞的生长抑制作用。
[0428]
2.实验材料
[0429]
(1)细胞株
[0430]
mda-mb-231细胞：购于atcc
[0431]
(2)试剂
[0432]
试剂名称公司型号dmem培养基bi06-1055-57-1afbsbioserafb-1058/500penicillin&streptomycin(p/s)wisent450-201-elcell titer glo试剂promegag7572
[0433]
(3)仪器及耗材
[0434]
仪器及型号公司型号96孔细胞培养板costar3610细胞培养皿nest 酶标仪penivo5
[0435]
其他常规仪器：co2培养箱、超净工作台、离心机、eppendorff移液器等。
[0436]
3.实验步骤
[0437]
(1)细胞培养基配制
[0438]
mda-mb-231：dmem 10％fbs 1％p/s
[0439]
(2)药物配置
[0440]
将化合物用细胞对应培养液稀释成实验设计浓度。
[0441]
(3)细胞增殖实验
[0442]
1)细胞经计数后按照以下密度接种于384孔培养板，每孔40μl。放入37℃，5％co2培养箱过夜培养。
[0443]
2)mda-mb-231 500个细胞每孔，每孔加入10μl的待测化合物，使化合物终浓度达到excel附件数据layout的浓度。继续培养72h后，每孔加入ctg 100μl。
[0444]
3)室温静置10min，在酶标仪上测定各孔化学发光值。
[0445]
表4藜芦胺衍生物对三阴性乳腺癌细胞的增殖抑制活性
[0446]
化合物编号ic
50
(μm)vt-2212.22vt-2310.89veratramine10.37。