用于保护心脏的组合物及其应用的制作方法

1.本发明涉及健康食品或药物加工技术领域，尤其涉及一种用于保护心脏的组合物及其应用。


背景技术：

2.随着社会的进步，飞速发展的今天，导致现代人生活节奏的加快，以及各方面的生活压力等问题，许多中老年人，出现抵抗力低，易感冒，失眠多梦，更年期提前等亚健康症状。随着生活水平的提高，高血压、高血脂等现代病也容易在中老年人群中发病。长期的亚健康状态，以及高血压、高血脂、心脏等疾病，会引发实质性变化，导致人体器官功能的病变，甚至各种心脑血管类的疾病会主动缠身。如果疾病找上门来的时候，已是为时已晚，如果能在日常生活中为人民提供一种健康饮品，能在吃饭、喝水的时候同时食用，能够满足口感、又能增强人体自身免疫力，保护心脏起到一定的作用。达到益寿延年的目的、是目前人民非常期望的事情。


技术实现要素：

3.鉴于上述问题，本发明提供了一种用于保护心脏的组合物，所述组合物经过合理配伍，在保证原有作用的前提下，产生了协同作用。
4.本发明具体技术方案如下：
5.1.一种用于保护心脏的组合物，所述组合物包含d-核糖、黑果腺肋花楸提取物和桑葚提取物。
6.2.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述组合物还包含山竹提取物和植物甾醇。
7.3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中，以重量份计，d-核糖为5-20份，黑果腺肋花楸提取物为1-5份，桑葚提取物为0.2-5份，山竹提取物为0-5份，植物甾醇为0-1份；
8.优选的，d-核糖为8-17份，黑果腺肋花楸提取物为1-3份，桑葚提取物为0.5-3份，山竹提取物为0.3-2份，植物甾醇为0.1-0.5份；
9.进一步优选的，d-核糖为10-14份，黑果腺肋花楸提取物为1-2份，桑葚提取物为1-2份，山竹提取物为0.5-1份，植物甾醇为0.1-0.2份。
10.4.根据权利要求1-3中任一项所述的组合物，其中，所述组合物还包含辅料，优选的，所述辅料选自山梨糖醇、木糖醇、乳糖、麦芽糊精、β-环糊精和α-环糊精中的一种或两种以上。
11.5.一种用于保护心脏的制剂，其中，所述制剂由包含权利要求1-4中任一项所述的组合物的原料制成。
12.6.根据权利要求5所述的制剂，其中，所述制剂的剂型为散剂、颗粒剂、液体制剂、片剂或胶囊剂。
13.7.一种制备用于保护心脏的颗粒剂的制备方法，其包括下述步骤：
14.将权利要求1-4中任一项所述的组合物进行混合得到混合物；
15.将所述混合物进行制粒和整粒，接着进行分装得到。
16.8.根据权利要求7所述的方法，其中，制粒采用干法制粒或湿法制粒。
17.9.根据权利要求7或8所述的方法，其中，整粒后的颗粒粒度为20-40目。
18.10.根据权利要求8所述的方法，其中，采用湿法制粒时，干燥至含水量不大于8.0wt％后整粒。
19.11.权利要求1-4中任一项所述的组合物在用于保护心脏的药物或食品领域中的应用。
20.12.权利要求5或6所述的制剂在用于保护心脏的药物或食品领域中的应用。
21.13.一种药物组合物，其包含权利要求1-4中任一项所述的组合物或者权利要求5或6所述的制剂。
22.14.根据权利要求13所述的药物组合物，其还包含药学上可接受的辅料。
23.15.一种食品组合物，其包含权利要求1-4中任一项所述的组合物或者权利要求5或6所述的制剂。
24.16.根据权利要求15所述的食品组合物，其还包含食品上可接受的辅料。
25.17.一种制备用于保护心脏的散剂的制备方法，其包括下述步骤：
26.将权利要求1-4中任一项所述的组合物进行混合得到。
27.18.一种制备用于保护心脏的片剂的制备方法，其包括下述步骤：
28.将权利要求7-10所述的方法制备得到的颗粒剂加入润滑剂进行压片得到。
29.19.一种制备用于保护心脏的胶囊剂的制备方法，其包括下述步骤：
30.将权利要求7-10所述的方法制备得到的颗粒剂加入助流剂，灌装入胶囊得到。
31.发明的效果
32.本发明所提供的组合物，能够提供心动力，改善心肌缺血，保护心肌细胞。同时还能够改善肌肉疲劳，缓解运动后的肌肉酸痛。
具体实施方式
33.下面对本发明做以详细说明。虽然显示了本发明的具体实施例，然而应当理解，可以以各种形式实现本发明而不应被这里阐述的实施例所限制。相反，提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本发明，并且能够将本发明的范围完整的传达给本领域的技术人员。
34.需要说明的是，在说明书及权利要求当中使用了某些词汇来指称特定组件。本领域技术人员应可以理解，技术人员可能会用不同名词来称呼同一个组件。本说明书及权利要求并不以名词的差异作为区分组件的方式，而是以组件在功能上的差异作为区分的准则。如在通篇说明书及权利要求当中所提及的“包含”或“包括”为开放式用语，故应解释成“包含但不限定于”。说明书后续描述为实施本发明的较佳实施方式，然而所述描述乃以说明书的一般原则为目的，并非用以限定本发明的范围。本发明的保护范围当视所附权利要求所界定者为准。
35.本发明提供了一种用于保护心脏的组合物，所述组合物包含d-核糖、黑果腺肋花楸提取物和桑葚提取物。
36.d-核糖是生物体内遗传物质―核糖核酸(rna)的重要组成物质，在核苷类物质、蛋
白质、脂肪代谢中处于枢纽位置，具有重要的生理功能及广阔的应用前景。d-核糖作为生物体内存在于所有细胞中的天然成份，与腺苷酸的形成和三磷酸腺苷(atp)的再生有密切关系，是生命代谢最基本的能量来源之一。在心脏和骨络肌代谢中起关键作用，能够促进局部缺血组织、局部缺氧组织的恢复。
37.d-核糖是生物体内的遗传物质rna(核糖核酸)的重要组成部分，在生物体内处于枢纽位置，有着重要的生理功能。作为生物体内所有细胞的重要成分，与腺嘌呤核苷三磷酸的生成有着重要关系，而腺嘌呤核苷三磷酸是生命活动的基本能量来源。由于人体心脏和骨骼肌自身合成腺嘌呤核苷三磷酸的速度慢，而d-核糖可以促进腺嘌呤核苷三磷酸在心脏和骨骼肌中的合成。从而使心肌细胞功能趋于正常，对心脏有明显的改善同时对心脏缺血引起的心率失常起到保护。
38.糖、脂肪、蛋白质，作为人体的三产能营养素，均在细胞内合成腺嘌呤核苷三磷酸。糖是人体合成腺嘌呤核苷三磷酸的主要物质，经过一系列化学反应，葡萄糖会先生成5-磷酸核糖，继而生成嘌呤核苷酸，最后生成腺嘌呤核苷三磷酸，产生提供给生物体的能量，但这个反应速度比较慢且过于复杂。通过食用d-核糖生成5-磷酸核糖的过程相对于以葡萄糖为原料的方法过程更加简单，而且反应速度也更快。因此人们可以更快的从过度运动中恢复过来。
39.黑果腺肋花楸果实富含vc和抗氧化剂还有多种维生素和矿质元素等物质，抗氧化剂具有抗衰老功能。果实提取物对治疗辐射病和重金属中毒症有很好的疗效，果实还含有治疗癌症和心脏病的特定化合物。它的果实还有从中的提取物对心脏病、高血压等心脑血管疾病具有很好的治疗效果，所述黑果腺肋花楸的功效为：1.控制血糖：黑果腺肋花楸可以控制血糖，避免血糖过高。黑果腺肋花楸中含有的果糖可以直接被人体消化吸收，不需要依赖于胰岛素代谢。2.降低血脂：黑果腺肋花楸还可以降低血脂，其中含有的维生素、氨基酸等有软化血管的作用，还可以清除血管壁上的脂肪。3.保护视力：黑果腺肋花楸中含有的花青素和叶黄素对保护视力，预防近视都有很大的作用。4.保护肝脏：黑果腺肋花楸中的营养成分可以促进肝脏代谢，如果平时喜欢吃肥腻的食物或者有喝酒的习惯，吃黑果腺肋花楸可以预防酒精肝与脂肪肝的发生。5.降低血压：黑果腺肋花楸有控制血压、软化血管的作用，很适合高血压人群食用。6.抗衰老：黑果腺肋花楸含有丰富的花青素，有抗氧化的功效，经常食用还有抗衰老的作用。7.减肥瘦身：黑果腺肋花楸中的氨基酸可以抑制脂肪的分解和吸收，使脂肪被直接排出体外，因此也有很好的减肥瘦身的效果。8.防止老年痴呆：黑果腺肋花楸中含有丰富的膳食纤维，有软化血管的作用，还可以使大脑细胞保持活力，从而预防老年痴呆的发生。9.保护肠胃：经常食用黑果腺肋花楸还有保护肠胃的作用，其中含有的营养素可以促进肠胃蠕动，预防各种肠道疾病的发生。10.补充营养：黑果腺肋花楸中含有丰富的营养，如蛋白质、维生素及各种微量元素等，经常食用可以为人体补充营养。
40.优选的，黑果腺肋花楸提取物的制备包括下述步骤：取黑果腺肋花楸，加入20倍水，60-80℃提取1.5-2h，减压浓缩或纳滤浓缩，加入5-10份麦芽糊精，喷雾干燥，即得。
41.桑葚为桑科植物桑树的果实。又名桑椹子、桑蔗、桑枣、桑果、桑泡儿，乌椹。早在两千多年前，桑葚已是中国皇帝御用的补品。因桑树特殊的生长环境使桑果具有天然生长，无任何污染的特点，所以桑葚又被称为“民间圣果”。现代研究证实，桑葚果实中含有丰富的活性蛋白、维生素、氨基酸、胡萝卜素、矿物质、白藜芦醇、花青素等成份，营养是苹果的5～6
倍，是葡萄的4倍，具有多种功效，被医学界誉为“21世纪的最佳保健果品”。中医学认为桑椹补益肝肾，滋阴养血，息风，具有主治心悸失眠、头晕目眩、耳鸣、便秘盗汗、瘰疬、关节不利等病症。常吃桑葚能显著提高人体免疫力，具有延缓衰老，明目，美容养颜的功效。现代研究表明，桑椹富含的脂肪酸具有分解脂肪、降低血脂，防止血管硬化等作用。
42.优选的，所述桑葚提取物的制备包括下述步骤：取新鲜紫桑葚，加入20倍水，60-80℃提取1.5-2h，减压浓缩或纳滤浓缩，加入5-10份麦芽糊精，喷雾干燥，即得。
43.在一个实施方案中，所述组合物还包含山竹提取物和植物甾醇。
44.优选的，所述山竹提取物的制备包括下述步骤：取新鲜山竹中果皮，加入20倍水，60-80℃提取1.5-2h，减压浓缩或纳滤浓缩，加入5-10份麦芽糊精，喷雾干燥，即得。
45.所述植物甾醇是一种结构和生化特性与胆固醇相似的甾醇类物质，这种“类脂肪”广泛存在于植物的根、茎、叶和果实中，在人体内不能合成，唯一的途径是通过膳食摄取，其广泛应用于医学、工业、日化、农业。
46.在一个实施方案中，以重量份计，d-核糖为5-20份，黑果腺肋花楸提取物为1-5份，桑葚提取物为0.2-5份，山竹提取物为0-5份，植物甾醇为0-1份；
47.优选的，d-核糖为8-17份，黑果腺肋花楸提取物为1-3份，桑葚提取物为0.5-3份，山竹提取物为0.3-2份，植物甾醇为0.1-0.5份；
48.进一步优选的，d-核糖为10-14份，黑果腺肋花楸提取物为1-2份，桑葚提取物为1-2份，山竹提取物为0.5-1份，植物甾醇为0.1-0.2份。
49.例如，以重量份计，d-核糖可以为5份、6份、7份、8份、9份、10份、11份、12份、13份、14份、16份、17份、18份、19份、20份等；
50.黑果腺肋花楸提取物可以为1份、2份、3份、4份、5份等；
51.桑葚提取物可以为0.2份、0.3份、0.4份、0.5份、0.6份、0.7份、0.8份、0.9份、1份、2份、3份、4份、5份等；
52.山竹提取物可以为0、1份、2份、3份、4份、5份等；
53.植物甾醇可以为0、0.1份、0.2份、0.3份、0.4份、0.5份、0.6份、0.7份、0.8份、0.9份、1份等。
54.在一个实施方案中，以重量份计，当加入5-20份d-核糖时，需要加入1-5份的黑果腺肋花楸提取物、0.2-5份的桑葚提取物、0-5份的山竹提取物和0-1份的植物甾醇。
55.在一个实施方案中，所述组合物由d-核糖、黑果腺肋花楸提取物、桑葚提取物、山竹提取物和植物甾醇组成。
56.在一个实施方案中，所述组合物还包含辅料，优选的，所述辅料选自山梨糖醇、木糖醇、乳糖、麦芽糊精、β-环糊精和α-环糊精中的一种或两种以上。
57.对于辅料的用量，本发明不作任何限制，本领域技术人员可以根据需要进行选择。
58.本发明通过将上述几种成分进行配伍，在保证原有作用的前提下，产生了协同作用，本发明所述的组合物具有提高心动力，改善心肌缺血，保护心肌细胞的作用。
59.本发明提供了一种用于保护心脏的制剂，所述制剂由包含上述所述的组合物的原料制成。
60.在一个实施方案中，所述制剂的剂型为散剂、颗粒剂、液体制剂、片剂或胶囊剂。
61.本发明提供了一种制备用于保护心脏的颗粒剂的制备方法，其包括下述步骤：
62.将上述所述的组合物进行混合得到混合物；
63.将所述混合物进行制粒和整粒，接着进行分装得到。
64.对于所述组合物的各种成分，进行粉碎、过80-100目筛，接着进行混合得到混合物。
65.优选的，混合30min后得到所述的混合物。
66.所述筛为标准筛。
67.在制备过程中，需要加入辅料以得到颗粒剂，如上述所述的辅料。
68.在一个实施方案中，制粒采用干法制粒或湿法制粒。
69.在一个实施方案中，整粒后的颗粒粒度为20-40目。
70.在一个实施方案中，采用湿法制粒时，干燥至含水量不大于8.0wt％后整粒，优选的，干燥温度为50-70℃。
71.本发明提供了上述所述的组合物或者上述所述的制剂在用于保护心脏的药物或食品领域中的应用。
72.本发明提供了一种药物组合物，其包含上述所述的组合物或者上述所述的制剂。
73.在一个实施方案中，所述药物组合物还包含药学上可接受的辅料。
74.所述药学上可接受的辅料是本领域技术人员公知的辅料，本领域技术人员可以根据需要进行选择，例如，所述辅料可以为乳糖、糊精、环糊精、麦芽糊精、淀粉、预胶化淀粉、蔗糖、异麦芽酮糖醇等。
75.本发明提供了一种食品组合物，其包含上述所述的组合物或者上述所述的制剂。
76.在一个实施方案中，所述食品组合物还包含食品上可接受的辅料。
77.所述食品上可接受的辅料是本领域技术人员公知的辅料，本领域技术人员可以根据需要进行选择，例如所述辅料可以为乳糖、糊精、环糊精、麦芽糊精、淀粉、蔗糖、异麦芽酮糖醇等。
78.本发明所述的组合物具有一定的降低nf-κb p65蛋白和mpo蛋白表达效果，表明所述的组合物具有降低心肌缺血再灌注损伤的功效。
79.本发明所述的组合物具有降低血脂的效果，进而有利于心脏健康。
80.本发明提供了一种制备用于保护心脏的散剂的制备方法，其包括下述步骤：
81.将上述所述的组合物进行混合得到。
82.对于上述所述的组合物，其可以加入辅料或者不加入辅料，均可以用于制备散剂。
83.对于辅料，例如可以为乳糖、麦芽糊精、糊精、预胶化淀粉、淀粉等允许的辅料
84.本发明提供了一种制备用于保护心脏的片剂的制备方法，其包括下述步骤：
85.将上述所得到的颗粒剂加入润滑剂进行压片得到。
86.所述润滑剂是本领域公知的润滑剂，例如可以为硬脂酸镁、微粉硅胶等。
87.本发明提供了一种制备用于保护心脏的胶囊剂的制备方法，其包括下述步骤：
88.将权利要求7-10所得到的颗粒剂加入助流剂，灌装入胶囊得到。
89.对于助流剂，是本领域公知的助流剂，例如可以为滑石粉、微粉硅胶等。
90.本发明所述的组合物，其包含d-核糖、黑果腺肋花楸提取物和桑葚提取物，d-核糖、黑果腺肋花楸提取物和桑葚提取物协同作用，使得cinc-1mrna及nf-κb p65蛋白表达量下调，从而提升抗缺血再灌注损伤的疗效，进而对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有较强的保
护作用。
91.本发明所述的组合物，其包含d-核糖、黑果腺肋花楸提取物和桑葚提取物，三者协同相互作用，能够显著降低mpo的表达，即具有显著的降低心肌缺血再灌注损伤的功效。
92.本发明所述的组合物，d-核糖、黑果腺肋花楸提取物和桑葚提取物协同共同作用，再加入少量的植物甾醇，对于改善血脂水平有较好的作用，进而有利于心脏健康。
93.实施例
94.本发明对试验中所用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述，在下面的实施例中，如果无其他特别的说明，％表示wt％，即重量百分数。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品，其中，所述份指的是重量份，d-核糖购自于河南巨龙生物医药有限公司，黑果腺肋花楸、桑葚均为市售品。
95.实施例1植物甾醇用量对产品外观的影响
96.(1)将d-核糖、黑果腺肋花楸提取物、桑葚提取物、山竹提取物、植物甾醇、β-环糊精和乳糖进行粉碎，过80-100目标准筛，然后按照表1的用量进行混合，混合30min后得到混合物。
97.(2)将所述的混合物进行干法制粒和整粒，使得颗粒粒度为20-40目，然后进行分装，分装到食品级包装袋中，每袋含d-核糖1.8g，测定颗粒成型率以及溶化性，其结果如表1所示，其中，颗粒成型率为20-40目颗粒的重量/总重量*100％；
98.溶化性：取单剂量包装颗粒1袋，加热水50ml，搅拌5min，观察溶液状态。
99.表1植物甾醇用量考察结果
[0100][0101]
从上表可以看出，植物甾醇加入量过多，会影响产品的成型率及溶化性，故其质量控制在3.8％以下较为适宜。
[0102]
实施例2-1颗粒剂的制备
[0103]
(1)将d-核糖、黑果腺肋花楸提取物、桑葚提取物、β-环糊精和乳糖进行粉碎，过80-100目标准筛，然后将粉碎后的2份d-核糖、1.2份黑果腺肋花楸提取物、1份桑葚提取物、0.5份山竹提取物、0.1份植物甾醇、6份β-环糊精和14份乳糖进行混合，混合30min后得到混合物。
[0104]
(2)将所述的混合物进行干法制粒和整粒，使得颗粒粒度为20-40目，然后进行分装，分装到食品级包装袋中，每袋3.1g。
[0105]
实施例2-2颗粒剂的制备
[0106]
(1)将d-核糖、黑果腺肋花楸提取物、桑葚提取物、山竹提取物、植物甾醇、山竹提取物、植物甾醇、β-环糊精和乳糖进行粉碎，过80-100目标准筛，然后将粉碎后的5份d-核糖、1.2份黑果腺肋花楸提取物、1份桑葚提取物、0.5份山竹提取物、0.1份植物甾醇、5份β-环糊精和12份乳糖进行混合，混合30min后得到混合物。
[0107]
(2)将所述的混合物进行湿法制粒，在50℃干燥至含水量为7.5％后进行整粒，使得颗粒粒度为20-40目，然后进行分装，分装到食品级包装袋中，每袋3.1g。
[0108]
实施例2-3颗粒剂的制备
[0109]
(1)将d-核糖、黑果腺肋花楸提取物、桑葚提取物、山竹提取物、植物甾醇、β-环糊精和乳糖进行粉碎，过80-100目标准筛，然后将粉碎后的8份d-核糖、1.2份黑果腺肋花楸提取物、1份桑葚提取物、0.5份山竹提取物、0.1份植物甾醇、4份β-环糊精和10份乳糖进行混合，混合30min后得到混合物。
[0110]
(2)将所述的混合物进行湿法制粒，在50℃干燥至含水量为7.8％后进行整粒，使得颗粒粒度为20-40目，然后进行分装，分装到食品级包装袋中，每袋3.1g。
[0111]
实施例2-4颗粒剂的制备
[0112]
(1)将d-核糖、黑果腺肋花楸提取物、桑葚提取物、山竹提取物、植物甾醇、β-环糊精和乳糖进行粉碎，过80-100目标准筛，然后将粉碎后的10份d-核糖、1.2份黑果腺肋花楸提取物、1份桑葚提取物、0.5份山竹提取物、0.1份植物甾醇、4份β-环糊精和8份乳糖进行混合，混合30min后得到混合物。
[0113]
(2)将所述的混合物进行干法制粒和整粒，使得颗粒粒度为20-40目，然后进行分装，分装到食品级包装袋中，每袋3.1g。
[0114]
实施例2-5至实施例2-15颗粒剂的制备
[0115]
按表2中各处方量称取相应原料，加入适量β-环糊精和乳糖(二者比例约为5:11)，调整份数共计24.8份，混合均匀，制粒、分装。制备工艺同实施例2-4。
[0116]
对比例1颗粒剂的制备
[0117]
(1)将d-核糖、β-环糊精和乳糖进行粉碎，过80-100目标准筛，然后将粉碎后的14份d-核糖、3.4份β-环糊精和7.4份乳糖进行混合，混合30min后得到混合物。
[0118]
(2)将所述的混合物进行干法制粒和整粒，使得颗粒粒度为20-40目，然后进行分装，分装到食品级包装袋中，每袋3.1g。
[0119]
对比例2颗粒剂的制备
[0120]
按表2中各处方量称取相应原料，加入适量β-环糊精和乳糖(二者比例约为5:11)，调整份数共计24.8份，混合均匀，制粒、分装。制备工艺同实施例2-4。
[0121]
对比例3-对比例4颗粒剂的制备
[0122]
按表2中各处方量称取相应原料，加入适量β-环糊精和乳糖(二者比例约为5:11)，调整份数共计24.8份，混合均匀，制粒、分装。制备工艺同实施例2-4。
[0123]
表2实施例2-1至2-15以及对比例1-4中各种组分配比表
[0124][0125][0126]
实验例1不同配方对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用对比
[0127]
动物模型和分组：10周龄的清洁级健康sd雄性大鼠126只，体重约250
±
30g，于手术前随机分为假手术组、缺血再灌注组、实施例2-1至2-15组以及对比例1组、对比例2组、对比例3组和对比例4组共21组，每组6只。以2％戊巴比妥钠(40mg/kg)经腹腔注射麻醉后，行气管切开术，接小动物呼吸机(频率80次/min，呼吸比1：1，潮气量18ml)。于大鼠胸骨左缘2～5肋处，逐层打开皮肤、肌肉、肋骨，暴露心脏，分离心包，于左心耳与肺动脉圆锥之间找出左冠状动脉前降支，用5.0带线缝合针在前降支起始后0.2cm处穿一结扎线。
[0128]
假手术组：穿线后不结扎缝合线，45min后取下缝合线，关闭胸腔。于手术后第二天灌胃给予生理盐水，连续给药7天。
[0129]
缺血再灌注组：结扎缝合线，以心尖部变苍白为心肌缺血形成，45min后剪断缝合线，使缺血冠脉恢复灌注，关闭胸腔。于手术后第二天灌胃给予生理盐水，连续给药7天。
[0130]
给药组：结扎缝合线，以心尖部变苍白为心肌缺血形成，45min后剪断缝合线，使缺血冠脉恢复灌注，关闭胸腔。于手术后第二天灌胃给予各组药物，连续给药7天。各组给药剂量为700mg/kg体重的各组颗粒。
[0131]
于第8天取各实验组结扎处远端左心室游离壁心肌组织约250mg，置于-80℃液氮保存。
[0132]
其中，采用rt-pcr法检测心肌组织中细胞因子诱导的中性粒细胞趋化物-1(cinc-1)mrna的表达，具体操作如下：取心肌组织50mg，按照动物rnaout使用手册提取心肌细胞总rna，以beckman coulter du800仪测定总rna的d(260)/d(280)值以及rna浓度，按高效率逆转录试剂盒说明书进行反转录获得cdna，并以之为模板进行pcr扩增。pcr引物序列及扩增条件分别为：内参照β-actin上游引物序列如seq id no:1所示，其核苷酸序列为：5
’‑
gagagggaaatcgtgcgtgac-3’，下游引物序列如seq id no：2所示，其核苷酸序列为：5
’‑
catctgctggaaggtggaca-3’，退火温度58℃，循环30次，产物长度452bp；cinc-1上游引物序列如seq id no：3所示，其核苷酸序列为：5
’‑
ggcagggattcacttcaagaaca-3’，下游引物序列如seq id no：4所示，其核苷酸序列为：5
’‑
ttacttggggcaccctttagca-3’，退火温度58℃，循环30次，产物长度175bp。pcr产物进行琼脂糖凝胶电泳，结果采用凝胶成像系统进行分析，其结果如表3所示。
[0133]
nf-κb p65蛋白的表达：取心肌组织100mg，按westem及ip细胞裂解液说明书提取总蛋白，bca法测定蛋白质浓度，sds-page凝胶电泳，湿转法转移至pvdf膜，常规洗膜后37℃下5％脱脂奶粉封闭1h，洗膜后加入兔抗大鼠nf-κb p65一抗(1∶500稀释)和兔抗大鼠β-actin一抗(1∶2000稀释)4℃孵育过夜，洗膜后加入辣根酶标记山羊抗兔二抗(1∶2000稀释)37℃孵育1h，化学发光法显色，凝胶成像分析系统进行分析，其结果如表3所示。
[0134]
elisa检测心肌组织中mpo蛋白量：按照mpo elisa试剂盒说明书操作步骤测定心肌组织中mpo蛋白表达量，其结果如表4所示。
[0135]
表3各组间cinc-1 mrna及nf-κb p65蛋白的表达(x
±
s，n＝6)
[0136][0137][0138]
注：#，p＜0.05，与假手术组比较；*，p＜0.05，与缺血再灌注组比较；**，p＜0.01，与缺血再灌注组比较
[0139]
从表3可以看出，其他各组与假手术组相比p均小于0.05，提示造模成功，各给药组相比缺血再灌注组均表现出一定的降低cinc-1mrna及nf-κb p65蛋白表达效果，提示具有降低心肌缺血再灌注损伤的功效。此外，将实施例2-1～2-7比较可知，随着d-核糖占比的增
加，cinc-1mrna及nf-κb p65蛋白表达量较模型组下降越明显，但当增加到一定用量时，其下降效果不再增加。
[0140]
比较实施例2-5、2-3、2-4、2-8、2-9与对比例1和对比例2，可以发现如黑果腺肋花楸、桑葚、山竹、植物甾醇等成分的加入能够起到更好的协同作用，提升抗缺血再灌注损伤的疗效。
[0141]
比较实施例2-5与2-10、2-11可以发现黑果腺肋花楸、桑葚、山竹、植物甾醇的加入量也存在适宜的范围，加入量过低效果不好，但过高效果并不最优。特别是比较实施例2-5及实施例2-15、对比例3、对比例4可以看出黑果腺肋花楸对增强d-核糖改善心肌缺血再灌注损伤的效果尤为明显，其次是山竹提取物，也能够与d-核糖产生协同增效的作用。
[0142]
表4各组间心肌组织中mpo的表达
[0143][0144][0145]
注：#，p＜0.05，与假手术组比较；*，p＜0.05，与缺血再灌注组比较；**，p＜0.01，与缺血再灌注组比较
[0146]
由表4可知，其他各组与假手术组相比p均小于0.05，提示造模成功，各给药组相比缺血再灌注组均表现出一定的mpo表达降低效果，提示具有降低心肌缺血再灌注损伤的功效。整体表现为含黑果腺肋花楸及桑葚提取物组降低mpo效果更为突出。
[0147]
比较实施例2-5、2-15、对比例3、对比例4，实施例2-4可以看出黑果腺肋花楸、桑葚提取物及山竹提取物对改善d-核糖降低mpo的效果具有协同增效效果，尤以黑果腺肋花楸提取物效果最为明显。
[0148]
实验例2不同配方对小鼠血脂水平的影响
[0149]
动物及分组：c57bl/6小鼠，雄性，体重18～22g，(北京维通利华实验动物公司)，清
洁级。经过适应性喂养1w后，将小鼠随机分为正常对照、高脂对照、实施例1-处方1组，实施例2-1至2-15组，对比例1组，对比例2组，对比例3组、对比例4组共23组，每组6只。正常对照组采用基础饲料喂饲、其他组均采用高脂饲料喂饲，实验期间各组动物自由摄食、饮蒸馏水。
[0150]
给药：给药组灌胃给予各组药物，给药剂量为860mg/kg体重的各组颗粒。正常对照组及高脂对照组给予等量生理盐水溶液。连续给药5w，处死小鼠(禁食12h，自由饮蒸馏水)，拆除眼球采血，3000r/min离心15min，留取血清进行血生化检测，检测指标为：胆固醇(tc)、甘油三酯(tg)、低密度脂蛋白胆固醇(ldl-c)、高密度脂蛋白胆固醇(hdl-c)和游离脂肪酸(ffa)，均采用全自动生化分析仪(tba-2000fr，日本东芝)测定，其结果如表5所示。
[0151]
表5各组血脂水平对比
[0152][0153][0154]
注：#，p＜0.05，与正常对照组比较；*，p＜0.05，与高脂对照组比较
[0155]
由于心脏健康与血脂密切相关，故测定了不同组方对高脂小鼠血脂水平的改善情况。从上表可以看出，不同组方具有不同程度的降低血脂的效果，特别是少量植物甾醇的加入对于改善血脂水平有较好的作用，进而更有利于心脏健康。
[0156]
实验例3
[0157]
给予处于亚健康的中老年人100人，年龄55-65周岁，血脂、血压分别处于高血脂、高血压的临界状态，症状为头晕、头蒙、心律不齐、睡眠不好、面部出现痤疮色素沉积。食用本发明实施例2-5的固体饮料，每日早晚各一次，每次一袋，50ml温水冲服。连续食用两月后，血压、血脂转为正常，头晕、头蒙、心律不齐、睡眠不好、面部出现痤疮色素沉积的症状均
得到改善，身体轻盈充满活力，睡眠得到改善，心脏活力增强、面部红润，充满年轻态。
[0158]
实验例4
[0159]
55-65岁中老年人100人，随机分成两组，一组给予实施例2-5组的固体饮料1袋，50ml温水冲服，另外一组给予50ml温水作为空白组。服用后开展5km登山健步走运动，活动时间2-2.5h。相比空白组给药组普遍出现出精力更加充沛，活动过程中未出现明显气喘等症。经随访第2、3天出现腿部酸痛的人数仅占12％，而空白组腿部酸痛的发生率高达70％，且空白组行进过程中多数人群有明显气喘症状。
[0160]
综上所述，本发明所述的组合物，能够提升抗缺血再灌注损伤的疗效，能够降低mpo表达，并能够减低血脂，进而有利于心脏健康。
[0161]
本发明所述的组合物能够使睡眠得到改善，心脏活力增强，并使人充满年轻态，此外，其能够改善肌肉疲劳，缓解运动后的肌肉酸痛。
[0162]
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。