T细胞抗原受体、其多聚体复合物及其制备方法和应用与流程

技术特征：
1.一种t细胞抗原受体，其特征在于，所述的t细胞抗原受体特异性结合cmv pp65，所述的t细胞抗原受体包含α链的cdr1α
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cdr3α和β链的cdr1β
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cdr3β，其中，cdr1α的氨基酸序列包含seq id no：1或包含与seq id no：1所示氨基酸序列具有至少80％同源性，cdr2α的氨基酸序列包含seq id no：2或包含与seq id no：2所示氨基酸序列具有至少80％同源性，cdr3α的氨基酸序列包含seq id no：3
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4中的任一种或包含与seq id no：3
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4中任一种所示氨基酸序列具有至少80％同源性，cdr1β的氨基酸序列包含seq id no：5
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6中的任一种或包含与seq id no：5
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6中任一种所示氨基酸序列具有至少80％同源性，cdr2β的氨基酸序列包含seq id no：7
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8中的任一种或包含与seq id no：7
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8中任一种所示氨基酸序列具有至少80％同源性，cdr3β的氨基酸序列包含seq id no：9
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10中的任一种或包含与seq id no：9
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10中任一种所示氨基酸序列具有至少80％同源性；优选的，所述的cdr1α
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cdr3α及cdr1β
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cdr3β包含下列任一组：2.根据权利要求1所述的t细胞抗原受体，其特征在于，其β链的氨基酸序列包含seq id no：32
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33中的任一种或包含与seq id no：32
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33任一种所示氨基酸序列具有至少80％同源性，其α链的氨基酸序列包含seq id no：34
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35中的任一种或包含与seq id no：34
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35任一种所示氨基酸序列具有至少80％同源性；优选的，其α链与β链的氨基酸直接连接或间接连接，优选为间接连接，更优选通过fp2a连接；进一步优选的，所述的t细胞抗原受体的氨基酸序列包含seq id no：28或30中的任一种或包含与seq id no：28或30任一种所示氨基酸序列具有至少80％同源性。3.一种编码权利要求1
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2任一所述的t细胞抗原受体的核酸。4.一种表达载体，其特征在于，所述的表达载体包含权利要求3所述的核酸。5.一种宿主细胞或免疫细胞，其特征在于，所述的宿主细胞包含权利要求3所述的核酸或权利要求4所述的表达载体，所述的免疫细胞表达权利要求1
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2任一所述的t细胞抗原受体，优选的，所述的免疫细胞选自t细胞或干细胞，进一步优选的，所述的免疫细胞分离自受试者的t细胞衍生。6.一种重组t细胞的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)从阳性t细胞克隆得到权利要求3所述的核酸；2)分离、培养原代t细胞；3)将步骤1)得到的核酸递送至步骤2)所述的原代t细胞中，获得表达权利要求1
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2任一
所述t细胞抗原受体的重组t细胞；优选的，所述的制备方法还包括敲除细胞内源性tcr的步骤。7.一种t细胞抗原受体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)从阳性t细胞克隆得到权利要求3所述的核酸；(2)将步骤(1)得到的核酸连接至载体骨架，获得表达载体；(3)将步骤(2)获得的表达载体转化至宿主细胞，然后诱导其表达；(4)获得t细胞抗原受体。8.一种多聚体复合物，其特征在于，所述多聚体复合物包含权利要求1
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2任一所述的t细胞抗原受体。9.根据权利要求8所述的多聚体复合物，其特征在于，所述多聚体复合物还包括单体，生物素分子，以及链霉亲和素分子或亲和素分子，其中，所述单体包括mhc分子α链胞外区和β2m链及抗原肽，所述单体与所述生物素分子偶联，所述生物素分子与所述链霉亲和素或亲和素分子结合；优选的，所述的抗原肽包含seq id no：11；优选的，所述的mhc分子为hla
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a*2402。10.一种权利要求8
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9任一所述的多聚体复合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：i)表达和纯化在c端连接avi
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tag序列的mhc分子α链胞外区和β2m链；ii)将抗原肽、步骤i)获得的β2m链和在c端连接avi
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tag序列的mhc分子α链胞外区复性折叠，制备单体；iii)将步骤ii)制备的单体生物素化，获得生物素化的单体；iv)将步骤iii)获得的生物素化的单体与带荧光标记的链霉亲和素或亲和素反应，制备抗原肽
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mhc分子四聚体；v)将步骤iv)得到的抗原肽
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mhc分子四聚体与t细胞共孵育，形成t细胞抗原受体与抗原肽
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mhc分子四聚体复合物。11.权利要求1
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2任一所述的t细胞抗原受体、权利要求3所述的核酸、权利要求4所述的表达载体、权利要求5所述的宿主细胞、权利要求5所述的免疫细胞、权利要求8
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9任一所述的多聚体复合物在制备诊断或治疗肿瘤或与cmv相关疾病的产品中的应用，或者在t细胞标记、检测、细胞分选或活化中的应用。12.一种药物组合物或试剂盒，所述的药物组合物或试剂盒包含下列任一组：i)权利要求1
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2任一所述的t细胞抗原受体；ii)权利要求3所述的核酸；iii)权利要求4所述的表达载体；iv)权利要求5所述的宿主细胞；v)权利要求5所述的免疫细胞；或vi)权利要求8
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9任一所述的多聚体复合物。

技术总结
本发明提供了一种T细胞抗原受体、表达T细胞抗原受体(TCR)的免疫细胞，及其制备方法和应用。本发明所述的TCR能够特异性地被病毒抗原肽提呈细胞激活，提高胞外细胞因子IFNγ、IL2的释放水平及乳酸脱氢酶释放量，且显著地杀伤靶细胞。杀伤靶细胞。杀伤靶细胞。


技术研发人员：陈花 刘光娜 雷蕾 刘芳 贾乐梅 黄道盛 赵学强 林欣
受保护的技术使用者：清华大学
技术研发日：2021.02.01
技术公布日：2022/1/3