一种注射用丝素蛋白复合凝胶的制作方法

1.本发明是一种注射用丝素蛋白复合凝胶，属于生物材料技术领域。


背景技术：

2.丝素蛋白是从蚕丝中提取的天然高分子纤维蛋白，具有优异的物理、生物学性能，可广泛应用于骨科、眼科、普外科、整形美容等医疗领域，胶原蛋白是细胞外间质的主要成分，在创伤愈合方面胶原纤维形成网络结构和支架，连接细胞，通过润滑和趋化作用，引导上皮细胞迁入缺损区，并与修复细胞共同构成肉芽组织，胶原在肉芽组织成熟的过程中不断更新和改构，最终向正常结缔组织转化，促进上皮细胞覆盖伤口，完成组织重建。
3.目前用于人体组织功能修复、重建的材料有透明质酸、胶原蛋白、脱细胞基质等，透明质酸和胶原蛋白功能单一，脱细胞基质能够为组织提供大部分所需的营养成分、生长因子，但其生产工艺引入多种有毒害物质，且当前的生产工艺很难保障在保留功能成分的前提下去除干净其中的杂蛋白或含有免疫原性的片段，以至于带来安全隐患，现有的丝素蛋白在使用过程中易变形，现在急需一种注射用丝素蛋白复合凝胶来解决上述出现的问题。


技术实现要素：

4.针对现有技术存在的不足，本发明目的是提供一种注射用丝素蛋白复合凝胶，以解决上述背景技术中提出的问题，本发明生产工艺简单，可操控性强。
5.为了实现上述目的，本发明是通过如下的技术方案来实现：一种注射用丝素蛋白复合凝胶，包括如下组份及其重量百分比：透明质酸钠0.1
‑
3%、丝素蛋白溶液0.1
‑
3%，余量为分散液。
6.进一步地，所述丝素蛋白溶液的制备包括如下步骤：选取新鲜的家蚕茧，去除杂物，获得家蚕茧壳，蚕丝脱胶后溶解于盐
‑
甲酸溶解液中获得丝素蛋白溶解液；盐
‑
甲酸溶解液中，盐浓度为3
‑
10w/v%；甲酸浓度为98wt%；丝素蛋白溶解液中丝素蛋白的浓度为10
‑
50w/v%，盐
‑
甲酸溶解液中的盐为溴化锂、氯化钙、氯化锌、氯化镁、氯化锶、硫氰酸锂、硫氰酸钠、硫氰酸镁、硝酸钙中的一种或几种，将丝素蛋白溶解液经注射用水透析形成丝素蛋白溶液，丝素蛋白溶液搅拌静置5h，形成丝素蛋白凝胶。
7.进一步地，所述透明质酸钠为交联或未交联的高分子量透明质酸钠，分子量≥120万，优选180
‑
280万，最优200
‑
240万。
8.进一步地，所述丝素蛋白为0.1万
‑
50万分子量，优选1万
‑
10万分子量，最优2万
‑
5万分子量。
9.进一步地，所述分散液可以是缓冲液、生理盐水或注射用水，优选pbs缓冲液，为产品提供与细胞液相近的渗透压和与组织液相近的酸碱度。
10.进一步地，一种注射用丝素蛋白复合凝胶，具体包含如下步骤：（1）将丝素蛋白溶解在六氟异丙醇中；
（2）通过静电喷雾法将溶有丝素蛋白的六氟异丙醇液滴喷入分散液中；（3）将分散液真空条件下50℃加热挥发溶液中残留的六氟异丙醇溶剂；（4）在分散液中按比例加入透明质酸钠，在25
‑
55
°
c条件下静置3
‑
8h，形成丝素蛋白透明质酸复合凝胶材料，将丝素蛋白透明质酸复合凝胶材料置于截留分子量为8000
‑
15000的透析袋中，以ph为7.4的pbs缓冲液为透析液进行透析处理，取透析后的复合凝胶材料；（5）在24000rpm/min条件下均质5
‑
15min，过60目筛，收集粒径为60目筛的颗粒即为注射用丝素蛋白复合凝胶。
11.本发明的有益效果：本发明的一种注射用丝素蛋白复合凝胶，本发明通过静电喷雾法将丝素蛋白均匀分散在分散液中，在通过透明质酸钠溶胀，使得丝素蛋白均匀分散在透明质酸钠凝胶内，解决了丝素蛋白易变形的问题；单纯的丝素蛋白凝胶在水中极易分散，而将丝素蛋白分散在透明质酸钠凝胶中，利用透明质酸钠的空间结构，使得丝素蛋白能够在遇水后保持稳定，并具有更优异的力学支撑效果；丝素蛋白溶液易析出丝素蛋白，使得丝素蛋白溶液不均匀，且在灌装或注射过程中易发生分层，通过本发明制备的丝素蛋白凝胶利用透明质酸钠的性质避免了丝素蛋白溶液在受到外部压力下发生分层的可能，蚕丝在盐
‑
甲酸中溶解后，直接浸入有机溶剂或水中即可形成凝胶，主要由10
‑
100nm纤维组成，不仅可用于软组织损伤修复如皮肤、眼角膜，而且可用于硬组织损伤修复。
具体实施方式
12.为使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。
13.实施例1：一种注射用丝素蛋白复合凝胶，包括如下组份及其重量百分比：透明质酸钠0.1%、丝素蛋白溶液0.1%，余量为分散液。
14.选取新鲜的家蚕茧，去除杂物，获得家蚕茧壳，蚕丝脱胶后溶解于盐
‑
甲酸溶解液中获得丝素蛋白溶解液；盐
‑
甲酸溶解液中，盐浓度为3w/v%；甲酸浓度为98wt%；丝素蛋白溶解液中丝素蛋白的浓度为10w/v%，盐
‑
甲酸溶解液中的盐为溴化锂、氯化钙、氯化锌、氯化镁、氯化锶、硫氰酸锂、硫氰酸钠、硫氰酸镁、硝酸钙中的一种或几种，透明质酸钠为交联或未交联的高分子量透明质酸钠，分子量≥120万，优选180
‑
280万，最优200
‑
240万，丝素蛋白为0.1万
‑
50万分子量，优选1万
‑
10万分子量，最优2万
‑
5万分子量，分散液可以是缓冲液、生理盐水或注射用水，优选pbs缓冲液，为产品提供与细胞液相近的渗透压和与组织液相近的酸碱度。
15.一种注射用丝素蛋白复合凝胶，具体包含如下步骤：（1）将丝素蛋白溶解在六氟异丙醇中；（2）通过静电喷雾法将溶有丝素蛋白的六氟异丙醇液滴喷入分散液中；（3）将分散液真空条件下50℃加热挥发溶液中残留的六氟异丙醇溶剂；（4）在分散液中按比例加入透明质酸钠，在25
°
c条件下静置3h，形成丝素蛋白透明质酸复合凝胶材料，将丝素蛋白透明质酸复合凝胶材料置于截留分子量为8000的透析袋中，以ph为7.4的pbs缓冲液为透析液进行透析处理，取透析后的复合凝胶材料；（5）在24000rpm/min条件下均质5min，过60目筛，收集粒径为60目筛的颗粒即为注
射用丝素蛋白复合凝胶。
16.实施例2：一种注射用丝素蛋白复合凝胶，包括如下组份及其重量百分比：透明质酸钠1%、丝素蛋白溶液1%，余量为分散液。
17.选取新鲜的家蚕茧，去除杂物，获得家蚕茧壳，蚕丝脱胶后溶解于盐
‑
甲酸溶解液中获得丝素蛋白溶解液；盐
‑
甲酸溶解液中，盐浓度为6w/v%；甲酸浓度为98wt%；丝素蛋白溶解液中丝素蛋白的浓度为30w/v%，盐
‑
甲酸溶解液中的盐为溴化锂、氯化钙、氯化锌、氯化镁、氯化锶、硫氰酸锂、硫氰酸钠、硫氰酸镁、硝酸钙中的一种或几种，透明质酸钠为交联或未交联的高分子量透明质酸钠，分子量≥120万，优选180
‑
280万，最优200
‑
240万，丝素蛋白为0.1万
‑
50万分子量，优选1万
‑
10万分子量，最优2万
‑
5万分子量，分散液可以是缓冲液、生理盐水或注射用水，优选pbs缓冲液，为产品提供与细胞液相近的渗透压和与组织液相近的酸碱度。
18.一种注射用丝素蛋白复合凝胶，具体包含如下步骤：（1）将丝素蛋白溶解在六氟异丙醇中；（2）通过静电喷雾法将溶有丝素蛋白的六氟异丙醇液滴喷入分散液中；（3）将分散液真空条件下50℃加热挥发溶液中残留的六氟异丙醇溶剂；（4）在分散液中按比例加入透明质酸钠，在40
°
c条件下静置6h，形成丝素蛋白透明质酸复合凝胶材料，将丝素蛋白透明质酸复合凝胶材料置于截留分子量为10000的透析袋中，以ph为7.4的pbs缓冲液为透析液进行透析处理，取透析后的复合凝胶材料；（5）在24000rpm/min条件下均质10min，过60目筛，收集粒径为60目筛的颗粒即为注射用丝素蛋白复合凝胶。
19.实施例3：一种注射用丝素蛋白复合凝胶，包括如下组份及其重量百分比：透明质酸钠3%、丝素蛋白溶液3%，余量为分散液。
20.选取新鲜的家蚕茧，去除杂物，获得家蚕茧壳，蚕丝脱胶后溶解于盐
‑
甲酸溶解液中获得丝素蛋白溶解液；盐
‑
甲酸溶解液中，盐浓度为10w/v%；甲酸浓度为98wt%；丝素蛋白溶解液中丝素蛋白的浓度为50w/v%，盐
‑
甲酸溶解液中的盐为溴化锂、氯化钙、氯化锌、氯化镁、氯化锶、硫氰酸锂、硫氰酸钠、硫氰酸镁、硝酸钙中的一种或几种，透明质酸钠为交联或未交联的高分子量透明质酸钠，分子量≥120万，优选180
‑
280万，最优200
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240万，丝素蛋白为0.1万
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50万分子量，优选1万
‑
10万分子量，最优2万
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5万分子量，分散液可以是缓冲液、生理盐水或注射用水，优选pbs缓冲液，为产品提供与细胞液相近的渗透压和与组织液相近的酸碱度。
21.一种注射用丝素蛋白复合凝胶，具体包含如下步骤：（1）将丝素蛋白溶解在六氟异丙醇中；（2）通过静电喷雾法将溶有丝素蛋白的六氟异丙醇液滴喷入分散液中；（3）将分散液真空条件下50℃加热挥发溶液中残留的六氟异丙醇溶剂；（4）在分散液中按比例加入透明质酸钠，在55
°
c条件下静置8h，形成丝素蛋白透明质酸复合凝胶材料，将丝素蛋白透明质酸复合凝胶材料置于截留分子量为15000的透析袋中，以ph为7.4的pbs缓冲液为透析液进行透析处理，取透析后的复合凝胶材料；（5）在24000rpm/min条件下均质15min，过60目筛，收集粒径为60目筛的颗粒即为注射用丝素蛋白复合凝胶。
22.对本发明产品实施例的粘弹性模量交点、遇水后分散情况、灌装后注射推力与丝素蛋白凝胶、ha凝胶做对比，结果如下表：
对比指标实施例所得的产品丝素蛋白凝胶交联ha凝胶粘弹性模量交联点0.0028hz0.0031hz0.0012hz交联点粘弹模量766pa983pa121pa加入水中静置2h无明显分散现象分散无明显分散现象注射推力6~10n3~99n，注射中点堵塞针头5~7n
由上表格可知，交联点频率越低，说明材料越接近固态，越难发生不可逆形变，交联点粘弹模量越大，说明材料在该频率下力学强度越高。
23.以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点，对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
24.此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。