一种铂类配合物及其脂质体和应用的制作方法

1.本发明涉及医药领域，尤其涉及一种铂类配合物及其脂质体和应用。


背景技术：

2.铂类化合物具有一些独特和卓越的理化性质，在高新技术方面发挥着重要作用，被誉为是现代工业的维生素，因此，自20世纪60年代，rosenborg最先发现铂类化合物具有抗肿瘤活性以来，其研究及应用得到了迅速发展。目前已成功开发了顺铂、卡铂、奈达铂、依铂、环铂、奥沙利铂、乐铂、庚铂等，也仍不断有新的铂类配合物被合成并应用于临床试验。虽然这些铂类抗肿瘤药物均有一定的抗肿瘤活性，但疗效优于顺铂的药物鲜有发现。据统计，在我国的抗肿瘤化疗治疗方案中，以顺铂为主或有顺铂参与配伍的方案占所有化疗方案的70％～80％。铂类抗肿瘤药物作为广谱抗癌药物，具有作用强、活性高、无交叉耐药性，易与其他抗肿瘤药物配伍等优点，但其严重的毒副作用(包括肾毒性、神经毒性、耳毒性、胃肠毒性等)及耐药性极大的限制了临床上的大剂量和长期使用。
3.由于广谱抗肿瘤活性带来的非特异性是造成铂类药物产生毒副作用的主要原因，因此，寻找在保留抗肿瘤活性基础上具有低毒副作用的铂类抗肿瘤药物已成为当前的主要研究方向。为此，各国药学工作者致力于合成新的铂类化合物和靶向给药系统的研究(如脂质体、纳米粒、胶束、囊泡等)，期望能够获得高活性，低毒性的抗肿瘤药物。
4.目前已经公布了多种载体担载铂类药物开发的抗肿瘤药物。inhaled lipid-complexed cisplatin(ilc)是我国英特基因科技有限公司开发的一种肺吸入的顺铂脂质体复合物【patent，usa:20140065205a1，2014】，是一种可持续释放的、纳米脂质体包裹的、可通过雾化吸入给药的顺铂新剂型，在欧洲和美国完成的i期肺癌试验和临床ib/iia期骨肉瘤肺转移试验中，均显示了卓越的安全性和良好的治疗效果，随着治疗周期的增加，患者肺部病灶肿瘤不断变小。另外，也有研究者将抗肿瘤药物制备成脂质体，期望通过改变药物的体内分布，达到降低毒性，提高疗效的目的。
5.然而以脂质体为载体的铂类抗肿瘤药物仍然面临着很多挑战。以顺铂为例，spi-77是一种由alza公司采用被动载药开发的顺铂长循环脂质体，具有很好的药代动力学特性，如其在小鼠体内的t
1/2
约16h，是顺铂66倍，延长了其在血液中的循环时间。此外，与顺铂相比，其血浆auc增大六十倍，cmax增加三倍，肾脏中的铂量降低四倍，肿瘤auc升高28倍【cancer chemother pharmacol，1999，43(1)：1
–
7】，但是，spi-77在治疗无法手术的头颈癌【ann oncol，2001，12(4)：493
–
496】、晚期非小细胞肺癌【br j cancer，2006，95(7)：822
–
828】及对铂敏感的复发性卵巢癌【anticancer res，2010，30(2)：541
–
545】的ⅱ期临床试验中均缺乏抗肿瘤活性。认为可能是顺铂等亲水性药物不能顺利通过磷脂膜，只有脂质体在肿瘤组织中释放包埋药物，才能使其具有抗肿瘤活性。lipoplatin是由regulon公司研发的另一个顺铂长循环脂质体，其是将顺铂与二棕榈酰磷脂酰甘油(dppg)形成反胶束后包裹在脂质膜里。临床研究表明，lipoplatin不仅可以降低肾毒性、神经毒性、耳毒性和骨髓毒性，而且疗效与顺铂相当，甚至优于顺铂。其在实体瘤中的积蓄比正常组织高出10-200倍
【anticancer res，2005，25(4)：3031
–
3039】。因此，如何制得高载药量、高活性、低毒性的铂类抗肿瘤药物仍是目前药学工作者面临的巨大挑战。


技术实现要素：

6.本发明的目的在于提供一种铂类配合物及其脂质体。该铂类配合物及其制得的脂质体不仅包封率和载药量较高，而且显著降低了毒性，尤其是肾毒性，而且制备工艺简单、可控，利于工业化扩大生产。
7.本发明提供了式
ⅰ-
a～式
ⅰ-
b所示结构的铂类配合物：
[0008][0009]
r1选自-c
n
h
2n-、-c
n
h
2n-2-、-ar-c
n
h
2n-、ar-c
n
h
2n-2-、-ar-o-c
n
h
2n-、ar-o-c
n
h
2n-2-，n＝0～22；
[0010]
其中，ar为6-14元环的单环，双环，或三环的碳环体系，并且至少一个环体系是芳香族的；优选为亚苯基、萘基、亚蒽基；
[0011]
r2选自-h、-c
b
h
2b-1
、-c
b
h
2b 1
、-ar-c
b
h
2b-1
、-ar-c
b
h
2b 1
、-ar-o-c
b
h
2b-1
或-ar-o-c
b
h
2b 1
，b＝1～22；
[0012]
其中，ar为6-14元环的单环，双环，或三环的碳环体系，并且至少一个环体系是芳香族的；优选为亚苯基、萘基、亚蒽基；
[0013]
其中，任意c上连接的h可以被取代基取代；
[0014]
其中，所述取代基为-oh、-nh2、-cooh、卤素或-ar中的一种或几种；ar如前所述；
[0015]
在本发明的实施例中，
[0016]
r1选自-c
n
h
2n-或-c
n
h
2n-2
，n＝1～10；n优选为1～4；
[0017]
r2选自-c
b
h
2b-1
或-c
b
h
2b 1
，b＝8～18；
[0018]
在本发明的实施例中，
[0019]
r1选自-ch
2-、、
[0020]
r2选自-c
b
h
2b-1
或-c
b
h
2b 1
，b＝12～18。
[0021]
在一些实施例中，
[0022]
r1为
[0023]
r2为-(ch2)
17
ch3。
[0024]
本发明还提供了式
ⅰ-
c～式
ⅰ-
d所示结构的铂类配合物：
[0025][0026]
r3选自-nh2、-(ch2)
c-nhco-(ch2)
d
ch3、-oh、-o-co-(ch2)
c
ch3、-c
d
h
2d-oh、-c
d
h
2d-2-oh、-c
d
h
2d-cooh、-c
d
h
2d-2-cooh、-c
d
h
2d-o-co-(ch2)
c-ch3、，c＝1～21，d＝1～8；
[0027]
r4选自-h、-c
e
h
2e-1
、-c
e
h
2e 1
、-ar-c
e
h
2e-1
、-ar-c
e
h
2e 1
、-ar-o-c
e
h
2e-1
或-ar-o-c
e
h
2e 1
，e＝1～22；
[0028]
其中，
[0029]
ar为6-14元环的单环，双环，或三环的碳环体系，并且至少一个环体系是芳香族的；优选为亚苯基、萘基、亚蒽基；
[0030]
m＝0～10；
[0031]
其中，任意c上连接的h可以被取代基取代；
[0032]
其中，所述取代基为-oh、-nh2、-cooh、卤素或-ar中的一种或几种。
[0033]
在本发明的实施例中，
[0034]
m＝0～8；
[0035]
r3选自-nh2、-(ch2)
c-nhco-(ch2)
d
ch3、-oh、-o-co-(ch2)
c
ch3、-c
d
h
2d-oh、-c
d
h
2d-cooh、-c
d
h
2d-2-cooh、-c
d
h
2d-o-co-(ch2)
c-ch3，c＝8～20，d＝1～6。
[0036]
r4选自-h、-c
e
h
2e-1
或-c
e
h
2e 1
，e＝8～20。
[0037]
在本发明的实施例中，
[0038]
m＝0～6；
[0039]
r3选自-oh、-(ch2)
2-cooh、-(ch2)
4-o-co-(ch2)
14
ch3或-o-co-(ch2)
c-ch3；
[0040]
r4选自-c
e
h
2e 1
，e＝8～18；
[0041]
在一些实施例中，
[0042]
m＝0；
[0043]
r3为-(ch2)
2-cooh；
[0044]
r4为-c
e
h
2e 1
，e＝8～18。
[0045]
在一些实施例中，
[0046]
m＝1～6；
[0047]
r3为-o-co-(ch2)
c-ch3，c＝8～20；
[0048]
r4为-c
e
h
2e 1
，e＝8～18。
[0049]
本发明还提供了式ⅱ所示结构的两亲性化合物，所述的两亲化合物可用于制备铂类配合物：
[0050][0051]
r5选自-h、-c
f
h
2f-1
、-c
f
h
2f 1
、-ar-c
f
h
2f-1
、-ar-c
f
h
2f 1
、-ar-o-c
f
h
2f-1
或-ar-o-c
f
h
2f 1
，f＝1～22；
[0052]
r6选自-c
g
h
2g-1
、-c
g
h
2g-2
或-c
g
h
2g-o-，g＝1～8；
[0053]
r7选自-oh、-c
h
h
2h-1
、-c
h
h
2h 1
、-ar-c
h
h
2h-1
、-ar-c
h
h
2h 1
、-ar-o-c
h
h
2h-1
或-ar-o-c
h
h
2h 1
，h＝1～22；
[0054]
ar为亚苯基、萘基、亚蒽基等共含6-14元环的单环，双环，和三环的碳环体系，并且至少一个环体系是芳香族的；
[0055]
其中，任意c上连接的h可以被取代基取代；
[0056]
其中，所述取代基为-oh、-nh2、-cooh、卤素或-ar中的一种或几种；
[0057]
r6和r7的结构中至少包括1个-cooh。
[0058]
或r6和r7的结构中至少包括1个-coona、-cook等羧酸根离子。
[0059]
本发明提供的两亲性化合物中，
[0060]
r5为-c
f
h
2f 1
，r6为r7为-oh；
[0061]
或r5为-c
f
h
2f 1
，r6为r7为-oh；
[0062]
或r5为-c
f
h
2f 1
，r6为r7为-c
h
h
2h 1
；
[0063]
r5为-c
f
h
2f 1
，r6为r7为-c
h
h
2h 1
；
[0064]
f＝8～18；g＝2～6；h＝8～18。
[0065]
本发明提供的两亲性化合物的结构式如式
ⅱ-
a～式
ⅱ-
b所示：
[0066][0067]
本发明提供的两亲性化合物还包括式
ⅱ-
a及式
ⅱ-
b的羧酸盐。
[0068]
本发明包括的式
ⅱ-
a及式
ⅱ-
b的羧酸盐有硬脂富马酸钠、硬质马来酸钠、硬质丁二酸钠、月桂马来酸钠、肉豆蔻马来酸钾、棕榈马来酸钾(但不仅限于此类盐)，还包括这些化合物的有机碱盐。
[0069]
本发明提供的铂类配合物是由顺铂、卡铂、洛铂、奥沙利铂、奈达铂(但不仅限于此铂类药物)等铂类化合物与一种两亲性化合物中的羧基及酯键的羰基形成的配位键结合而制得。本发明对反应条件没有特殊的要求，本领域公知的可用于制备铂类配合物的反应条
件均可。
[0070]
本发明式i-a、式i-b铂类配合物中使用的两亲性化合物可以由二元羧(如富马酸、马来酸、丁二酸等)或酸酐(如马来酸酐、丁二酸酐等)中的一个羧基与脂肪醇发生酯化反应而制得(但不仅限于此，所有可生成该结构的合成反应均可)。本发明式i-c、式i-d铂类配合物中的两亲性化合物是由脂肪酰氯与羟基酸(如乳酸、柠檬酸、水杨氨酸、酒石酸等，但不仅限于此，有类似结构的化合物均可)发生醇解反应而制得。本发明对反应条件没有特殊的要求，本领域公知的可用于醇与酸，醇与酰氯反应制备酯的反应条件均可。
[0071]
本发明还提供了一种铂类配合物的脂质体，包括本发明提供的铂类配合物、脂质膜材；所述铂类配合物与脂质体膜材的比为99:1～1:99，优选的比为49:51～5:95。
[0072]
所述比例为质量比、摩尔比或体积比。
[0073]
本发明提供的脂质体中，脂质膜材包括磷脂或/和胆固醇的组合物，膜材中磷脂的质量份数为1～100份，胆固醇的质量份数为0～60份。
[0074]
本发明提供的脂质体中，磷脂包括卵磷脂、大豆磷脂、氢化大豆磷脂、磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二月桂酰基磷脂酸、二月桂酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、棕榈酰磷脂酰甘油、二硬脂酰基磷脂酰甘油、磷脂酰丝氨酸、二月桂酰基磷脂酰乙醇胺、二油酰基磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、peg化磷脂等其中的一种或两种以上的组合物。
[0075]
本发明提供的铂类配合物，还可以加入适宜的辅料及附加剂，利用本领域公知的技术制备成不同的剂型，如注射液、注射用冻干粉针，脂质体混悬液、片剂、凝胶剂、植入剂等，用于静脉注射、局部注射、植入、吸入等途径给药。
[0076]
本发明提供了一种治疗癌症的药物，包括本发明提供的脂质体。
[0077]
本发明提供了式ii结构的化合物，该化合物具有良好的生物相容性，其具有的羧基与酯键的羰基基团能够与铂类药物配合，其与铂类药物形成的不稳定的配位键能够增加药物在体内的水合速度从而提高药效。同时，以本发明提供的化合物制得的铂类配合物能够与脂质体的膜材良好的结合，从而提高脂质体的包封率和载药量。并且，以本发明提供的化合物制备铂类配合物后，含有羧基，具有ph敏感性，在较低的ph值环境中(如肿瘤组织)，羧基趋于去质子化，有利于促进药物在肿瘤组织的释放，提高药物的疗效。本发明提供的脂质体能够明显降低药物的毒副作用并提高药效。
附图说明
[0078]
图1-a示实施例1两亲性化合物的质谱；
[0079]
图1-b示实施例2两亲性化合物的质谱；
[0080]
图1-c示实施例3两亲性化合物的质谱；
[0081]
图1-d示实施例4两亲性化合物的质谱；
[0082]
图1-e示实施例5两亲性化合物的质谱；
[0083]
图2-a示实施例1两亲性化合物的核磁图谱；
[0084]
图2-b示实施例2两亲性化合物的核磁图谱；
[0085]
图2-c示实施例3两亲性化合物的核磁图谱；
c
b
h
2b 1
，b＝1～22；
[0107]
r3选自-nh2、-(ch2)
c-nhco-(ch2)
d
ch3、-oh、-o-co-(ch2)
c
ch3、-c
d
h
2d-oh、-c
d
h
2d-2-oh、-c
d
h
2d-cooh、-c
d
h
2d-2-cooh、-c
d
h
2d-o-co-(ch2)
c-ch3、，c＝1～21，d＝1～8；
[0108]
r4选自-h、-c
e
h
2e-1
、-c
e
h
2e 1
、-ar-c
e
h
2e-1
、-ar-c
e
h
2e 1
、-ar-o-c
e
h
2e-1
或-ar-o-c
e
h
2e 1
，e＝1～22；
[0109]
m＝0～10；
[0110]
其中，任意c上连接的h可以被取代基取代；
[0111]
其中，所述取代基为-oh、-nh2、-cooh、卤素或-ar中的一种或几种。
[0112]
在本发明中，-c
b
h
2b 1
或-c
e
h
2e 1
为烷基，b的取值为1～22。一些实施例中，b的取值为8～20。在另一些实施例中，b为8～18或b为12～18；在另一些实施例中，b为14～16；在一些实施例中，b为15。e的取值与b的取值可以相同也可以不同，独立的，e的取值为1～22。一些实施例中，e的取值为8～20。在另一些实施例中，e为8～18或e为12～18；在另一些实施例中，e为14～16；在一些实施例中，e为15。所述烷基为直链烷基或支链烷基；在一些实施例中，其为直链烷基。所述烷基为取代或未取代的烷基。所述取代指烷基中任意c上连接的h可以被取代基取代，所述取代烷基的取代基为-nh2、-oh、-cooh、卤素或-ar中的一种或几种。任意c上的取代基个数为1个或两个。本发明中，-c
b
h
2b 1
烷基包括但不限于，甲基(me，-ch3),乙基(et，-ch2ch3),正丙基(n-pr，-ch2ch2ch3),异丙基(i-pr，-ch(ch3)2)，正丁基(n-bu，-ch2ch2ch2ch3),异丁基(i-bu，-ch2ch(ch3)2)，仲丁基(s-bu，-ch(ch3)ch2ch3)，叔丁基(t-bu，-c(ch3)3)，正戊基(-ch2ch2ch2ch2ch3)，2-戊基(-ch(ch3)ch2ch2ch3)，3-戊基(-ch(ch2ch3)2)，2-甲基丁基(-ch2ch(ch3)ch2ch3)，2-甲基-2-丁基(-c(ch3)2ch2ch3)，3-甲基丁基(-ch2ch2ch(ch3)2)，3-甲基-2-丁基(-ch(ch3)ch(ch3)2)，正己基(-ch2ch2ch2ch2ch2ch3)，2-己基(-ch(ch3)ch2ch2ch2ch3)，3-己基(-ch(ch2ch3)ch2ch2ch3)，2-甲基戊基(-ch2ch(ch3)ch2ch2ch3)，2-甲基-2戊基(-ch(ch3)2ch2ch2ch3)，2-甲基-3戊基(-ch(ch2ch3)ch(ch3)2)，3-甲基戊基(-ch2ch2ch(ch3)ch2ch3)，3-甲基-2-戊基(-ch(ch3)ch(ch3)ch2ch3)，3-甲基-3-戊基(-ch(ch3)(ch2ch3)2)，4-甲基-2戊基(-ch(ch3)ch2ch(ch3)2)，4-甲基戊基(-ch2ch2ch2ch(ch3)2)，2,2-二甲基丁基(-ch2c(ch3)2ch2ch3)，3,3-二甲基-2-丁基(-ch(ch3)c(ch3)3)，3,3-二甲基丁基(-ch2ch2c(ch3)3)，2,3-二甲基丁基(-ch2ch(ch3)ch(ch3)2)，2,3-二甲基-2-丁基(-c(ch3)2ch(ch3)2)，正庚基，正辛基、正壬基、正癸基、正十一烷基、正十二烷基、正十三烷基、正十四烷基、正十五烷基、正十六烷基、正十七烷基、正十八烷基。
[0113]
在本发明中，-c
b
h
2b-1
或-c
e
h
2e-1
指烯基，其中至少一个位置为不饱和状态，即一个c-c为sp2双键。b的取值为2～22。一些实施例中，b的取值为8～20。在另一些实施例中，b为8～18或b为12～18；在另一些实施例中，b为14～16；在一些实施例中，b为15。e的取值与b的取值可以相同也可以不同，独立的，e的取值为2～22。一些实施例中，e的取值为8～20。在另一些实施例中，e为8～18或e为12～18；在另一些实施例中，e为14～16；在一些实施例中，e为15。所述烯基为直链烯基或支链烯基，在一些实施例中，其为直链烯基。所述烯基为取代或未取代的烯基。所述取代烯基中任意c上连接的h可以被取代基取代，所述取代烯基的取代基为-nh2、-oh、-cooh、卤素或-ar中的一种或几种。任意c上的取代基个数为1个或两个。所述烯基包括基团有“反”“正”或“e”“z”的定位，其中具体的实例包括，但并不限于，乙烯基(-ch＝ch2)，丙烯基，烯丙基(-ch2ch＝ch2)，丁烯基和4-甲基丁烯基、2-戊烯基、己烯基、庚
烯基、辛烯基、壬烯基、癸烯基、十一烯基、十二烯基、十三烯基、十四烯基、十五烯基、十六烯基、十七烯基、十八烯基。
[0114]
在本发明中，-ar-c
b
h
2b 1
指与苯基或芳基相连接的-c
b
h
2b 1
，-ar-c
b
h
2b-1
指与苯基或芳基相连接的-c
b
h
2b-1，-ar-o-c
b
h
2b 1
指与-ar-o-相连接的-c
b
h
2b 1
，-ar-o-c
b
h
2b-1
指与-ar-o-相连接的-c
b
h
2b-1。-ar-c
e
h
2e 1
指与苯基或芳基相连接的-c
e
h
2e 1
，-ar-c
e
h
2e-1
指与苯基或芳基相连接的-c
e
h
2e-1，-ar-o-c
e
h
2e 1
指与-ar-o-相连接的-c
e
h
2e 1
，-ar-o-c
e
h
2e-1
指与-ar-o-相连接的-c
e
h
2e-1
。所述-ar-表示共含有6-14元环的单环，双环，和三环的碳环体系，并且，至少一个环体系是芳香族的，其中每一个环体系包含3-7元环，其中，具有两个连接点与分子其余部分相连。-ar-可以为亚苯基，萘基和亚蒽基。并且所述-ar-可以是取代或非取代的。
[0115]
在本发明中，-c
n
h
2n-或-c
d
h
2d-指亚烷基，n的取值为1～8。一些实施例中，n的取值为1～6。在另一些实施例中，n为1～4；在另一些实施例中，n为2～4；所述亚烷基为直链或支链的亚烷基；d的取值与n的取值可以相同也可以不同，独立的，d的取值为1～8。一些实施例中，d的取值为1～6。在另一些实施例中，d为1～4；在另一些实施例中，d为2～4；所述亚烷基为直链或支链的亚烷基；在一些实施例中，其为直链的亚烷基。所述亚烷基为取代或未取代的亚烷基。所述取代指亚烷基中任意c上连接的h可以被取代基取代，所述取代烷基的取代基为-nh2、-oh、-cooh或-ar中的一种或几种。任意c上的取代基个数为1个或两个。本发明中，亚烷基包括但不限于，亚甲基(-ch
2-)，亚乙基(-ch2ch
2-)，正亚丙基(-ch2ch2ch
2-)，异亚丙基(-c(ch3)
2-)，正亚丁基(-ch2ch2ch2ch
2-)，异亚丁基，仲亚丁基，叔亚丁基，正亚戊基，2-亚戊基，3-亚戊基，2-甲基-2-亚丁基，3-甲基-2-亚丁基，3-甲基-1-亚丁基，2-甲基-1-亚丁基，正亚己基，2-亚己基，3-亚己基，2-甲基-2-亚戊基，3-甲基-2-亚戊基，4-甲基-2-亚戊基，3-甲基-3-亚戊基，2-甲基-3-亚戊基，2,3-二甲基-2-亚丁基，3,3-二甲基-2-亚丁基，正亚庚基，正亚辛基，羧基取代的亚丙基、羧基取代的亚正丁基、羧基取代的亚正戊基、氨基取代的亚丙基、氨基取代的亚正丁基、氨基取代的亚正戊基。
[0116]
在本发明中，-c
n
h
2n-2-或-c
d
h
2d-2-指亚烯基，其中至少一个位置为不饱和状态，即一个c-c为sp2双键。n的取值为2～8。一些实施例中，n的取值为2～6。在另一些实施例中，n为2～4。d的取值与n的取值可以相同也可以不同，独立的，d的取值为2～8。一些实施例中，d的取值为2～6。在另一些实施例中，d为2～4。所述烯基为直链亚烯基或支链亚烯基，在一些实施例中，其为直链亚烯基。所述亚烯基为取代或未取代的亚烯基。所述取代亚烯基中任意c上连接的h可以被取代基取代，所述取代亚烯基的取代基为-nh2、-oh、-cooh或-ar中的一种或几种。任意c上的取代基个数为1个或两个。所述亚烯基包括基团有“反”“正”或“e”“z”的定位，其中具体的实例包括，但并不限于，亚乙烯基(-ch＝ch-)，亚丙烯基，亚烯丙基(-ch2ch＝ch-)，亚丁烯基和4-甲基亚丁烯基、2-亚戊烯基、亚己烯基、亚庚烯基、亚辛烯基。
[0117]
在一些实施例中，
[0118]
r1选自-c
n
h
2n-或-c
n
h
2n-2
，n＝1～10；
[0119]
r2选自-c
b
h
2b-1
或-c
b
h
2b 1
，b＝8～20；
[0120]
r3选自-oh、-o-co-(ch2)
c
ch3、-c
d
h
2d-oh、-c
d
h
2d-cooh、-c
d
h
2d-2-cooh、-c
d
h
2d-o-co-(ch2)
c-ch3、，c＝8～20，d＝1～6。
[0121]
r4选自-h、-c
e
h
2e-1
或-c
e
h
2e 1
，e＝8～20。
[0122]
在一些实施例中，
[0123]
m＝0～6；
[0124]
r1选自-ch
2-、、
[0125]
r2选自-c
b
h
2b 1
，b＝12～18；
[0126]
r3为-(ch2)
2-cooh、-ch
2-cooh、-(ch2)
c-co-(ch2)
c-ch3，c＝8～18；
[0127]
r4为-c
e
h
2e-1
或-c
e
h
2e 1
，e＝12～18。
[0128]
在一些实施例中，r1为r2为-(ch2)
17
ch3。
[0129]
在一些实施例中，m＝0；r3为-(ch2)
2-cooh；r4为-c
e
h
2e 1
，e＝8～18。
[0130]
本发明提供的铂类配合物如式式(1)～(18)，其中x＝7～17:
[0131]
[0132][0133]
本发明提供的铂类配合物的结构式(1)～(18)中，x为7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17。
[0134]
本发明提供的铂类配合物由式ii化合物或式iii化合物与铂类化合物反应制得；所述铂类化合物为顺铂、卡铂、奥沙利铂或奈达铂、依铂、洛铂等。
[0135][0136]
r5选自-h、-c
f
h
2f 1
、-c
f
h
2f-1
、-ar-c
f
h
2f 1
、-ar-c
f
h
2f-1
、-ar-o-c
f
h
2f 1
或-ar-oc
f
h
2f-1
,f＝1～22；
[0137]
r6选自-c
g
h
2g-、-c
g
h
2g-2-、-c
g
h
2g-o-或-c
g
h
2g-2-o-,g＝1～8；
[0138]
r7选自-oh、-c
h
h
2h 1
、-c
h
h
2h-1
、-ar-c
h
h
2h 1
、-ar-c
h
h
2h-1
、-ar-o-c
h
h
2h 1
或-ar-oc
h
h
2h-1
,h＝1～22；
[0139]
r8选自-c
i
h
2i-、-c
i
h
2i-2-、-ar-c
i
h
2i-、-ar-c
i
h
2i-2-、-ar-o-c
i
h
2i-、-ar-o-c
i
h
2i-2-,i＝0～22；
[0140]
r9选自-h、-c
p
h
2p 1
、-c
p
h
2p-1
、-ar-c
p
h
2p 1
、-ar-c
p
h
2p-1
、-ar-o-c
p
h
2p 1
、-ar-o-c
p
h
2p-1
,p＝0～22；
[0141]
其中，任意c上连接的h可以被取代基所取代；
[0142]
其中，所述取代基为-oh、-nh2、-cooh、卤素或-ar中的一种或几种。
[0143]
r6和r7的结构中至少包括1个-cooh。
[0144]
在本发明提供的方法中，式ii或式iii化合物与铂类化合物中pt的摩尔比不大于30:1。
[0145]
在一些实施例中，式ii或式iii化合物与铂类化合物中pt的摩尔比为(1～8)：1。
[0146]
在另一些实施例中，式ii或式iii化合物与铂类化合物中pt的摩尔比为(1～5)：1。
[0147]
在另一些实施例中，式ii或式iii化合物与铂类化合物中pt的摩尔比为2：1。
[0148]
在另一些实施例中，式ii或式iii化合物与铂类化合物中pt的摩尔比为1：1。
[0149]
制备铂类配合物的反应中采用的溶剂为水性介质。
[0150]
在本发明提供的实施例中，水性介质为水或甘露醇水溶液或氯化钠水溶液或甘油水溶液或含糖的水溶液或磷酸盐缓冲液等(不仅限于此些)、也可以是含有二甲基甲酰胺(dmf)、二甲基亚砜(dmso)或乙醇的上述水溶液。
[0151]
本发明提供了式ii所示结构的两亲性化合物：
[0152][0153]
r5选自-h、-c
f
h
2f 1
、-c
f
h
2f-1
、-ar-c
f
h
2f 1
、-ar-c
f
h
2f-1
、-ar-o-c
f
h
2f 1
或-ar-oc
f
h
2f-1
,f＝1～22；
[0154]
r6选自-c
g
h
2g-、-cgh
2g-2-、-c
g
h
2g-o-或-cgh2g-2-o-,g＝1～8；
[0155]
r7选自-oh、-c
h
h
2h 1
、-c
h
h
2h-1
、-ar-c
h
h
2h 1
、-ar-c
h
h
2h-1
、-ar-o-c
h
h
2h 1
或-ar-oc
h
h
2h-1
,h＝1～22；
[0156]
其中，任意c上连接的h可以被取代基所取代；
[0157]
其中，所述取代基为-oh、-nh2、-cooh、卤素或-ar中的一种或几种；
[0158]
r6和r7的结构中至少包括1个-cooh。
[0159]
在本发明中，-c
f
h
2f 1
或
--
c
h
h
2h 1
为烷基，f的取值为1～22。一些实施例中，f的取值为8～20。在另一些实施例中，f为8～18或f为12～18；在另一些实施例中，f为14～16；在一些实施例中，f为15。h的取值与f的取值可以相同也可以不同，独立的，h的取值为1～22。一些实施例中，h的取值为8～20。在另一些实施例中，h为8～18或h为12～18；在另一些实施例中，h为14～16；在一些实施例中，h为15。所述烷基为直链烷基或支链烷基；在一些实施例中，其为直链烷基。所述烷基为取代或未取代的烷基。所述取代指烷基中任意c上连接的h可以被取代基取代，所述取代烷基的取代基为-nh2、-oh、-cooh、卤素或-ar中的一种或几种。任意c上的取代基个数为1个或两个。本发明中，-c
b
h
2b 1
烷基包括但不限于，甲基(me，-ch3),乙基(et，-ch2ch3),正丙基(n-pr，-ch2ch2ch3),异丙基(i-pr，-ch(ch3)2)，正丁基(n-bu，-ch2ch2ch2ch3),异丁基(i-bu，-ch2ch(ch3)2)，仲丁基(s-bu，-ch(ch3)ch2ch3)，叔丁基(t-bu，-c(ch3)3)，正戊基(-ch2ch2ch2ch2ch3)，2-戊基(-ch(ch3)ch2ch2ch3)，3-戊基(-ch(ch2ch3)2)，2-甲基丁基(-ch2ch(ch3)ch2ch3)，2-甲基-2-丁基(-c(ch3)2ch2ch3)，3-甲基丁基(-ch2ch2ch(ch3)2)，3-甲基-2-丁基(-ch(ch3)ch(ch3)2)，正己基(-ch2ch2ch2ch2ch2ch3)，2-己基(-ch(ch3)ch2ch2ch2ch3)，3-己基(-ch(ch2ch3)ch2ch2ch3)，2-甲基戊基(-ch2ch(ch3)ch2ch2ch3)，2-甲基-2戊基(-ch(ch3)2ch2ch2ch3)，2-甲基-3戊基(-ch(ch2ch3)ch(ch3)2)，3-甲基戊基(-ch2ch2ch(ch3)ch2ch3)，3-甲基-2-戊基(-ch(ch3)ch(ch3)ch2ch3)，3-甲基-3-戊基(-ch(ch3)(ch2ch3)2)，4-甲基-2戊基(-ch(ch3)ch2ch(ch3)2)，4-甲基戊基(-ch2ch2ch2ch(ch3)2)，2,2-二甲基丁基(-ch2c(ch3)2ch2ch3)，3,3-二甲基-2-丁基(-ch(ch3)c(ch3)3)，3,3-二甲基丁基(-ch2ch2c(ch3)3)，2,3-二甲基丁基(-ch2ch(ch3)ch(ch3)2)，2,3-二甲基-2-丁基(-c(ch3)2ch(ch3)2)，正庚基，正辛基、正壬基、正癸基、正十一烷基、正十二烷基、正十三烷基、正十四烷基、正十五烷基、正十六烷基、正十七烷基、正十八烷基。
[0160]
在本发明中，-c
f
h
2f-1
或-c
h
h
2h-1
指烯基，其中至少一个位置为不饱和状态，即一个c-c为sp2双键。f的取值为2～22。一些实施例中，f的取值为8～20。在另一些实施例中，f为8～18或f为12～18；在另一些实施例中，f为14～16；在一些实施例中，f为15。h的取值与f的取值可以相同也可以不同，独立的，h的取值为2～22。一些实施例中，h的取值为8～20。在另一些实施例中，h为8～18或h为12～18；在另一些实施例中，h为14～16；在一些实施例中，h为15。所述烯基为直链烯基或支链烯基，在一些实施例中，其为直链烯基。所述烯基为取代或未取代的烯基。所述取代烯基中任意c上连接的h可以被取代基取代，所述取代烯基的取代基为-nh2、-oh、-cooh、卤素或-ar中的一种或几种。任意c上的取代基个数为1个或两个。所述烯基包括基团有“反”“正”或“e”“z”的定位，其中具体的实例包括，但并不限于，乙烯基(-ch＝ch2)，丙烯基，烯丙基(-ch2ch＝ch2)，丁烯基和4-甲基丁烯基、2-戊烯基、己烯基、庚烯基、辛烯基、壬烯基、癸烯基、十一烯基、十二烯基、十三烯基、十四烯基、十五烯基、十六烯基、十七烯基、十八烯基。
[0161]
在本发明中，-ar-c
f
h
2f 1
指与苯基或芳基相连接的-c
f
h
2f 1
，-ar-c
f
h
2f-1
指与苯基或芳基相连接的-c
f
h
2f-1
，-ar-o-c
f
h
2f 1
指与-ar-o-相连接的-c
f
h
2f 1
，-ar-o-c
f
h
2f-1
指与-ar-o-相连接的-c
f
h
2f-1
。-ar-c
h
h
2h 1
指与苯基或芳基相连接的-c
h
h
2h 1
，-ar-c
h
h
2h-1
指与苯基或芳基相连接的-c
h
h
2h-1
，-ar-o-c
h
h
2h 1
指与-ar-o-相连接的-c
h
h
2h 1
，-ar-o-c
h
h
2h-1
指与-ar-o-相连
接的-c
h
h
2h-1
。所述-ar-表示共含有6-14元环的单环，双环，和三环的碳环体系，并且，至少一个环体系是芳香族的，其中每一个环体系包含3-7元环，其中，具有两个连接点与分子其余部分相连。-ar-可以为亚苯基，萘基和亚蒽基。并且所述-ar-可以是取代或非取代的。
[0162]
在本发明中，-c
g
h
2g-指亚烷基，g的取值为1～8。一些实施例中，g的取值为1～6。在另一些实施例中，g为1～4；在另一些实施例中，g为2～4；所述亚烷基为直链或支链的亚烷基；在一些实施例中，其为直链的亚烷基。所述亚烷基为取代或未取代的亚烷基。所述取代指亚烷基中任意c上连接的h可以被取代基取代，所述取代烷基的取代基为-nh2、-oh、-cooh或-ar中的一种或几种。任意c上的取代基个数为1个或两个。本发明中，亚烷基包括但不限于，亚甲基(-ch
2-)，亚乙基(-ch2ch
2-)，正亚丙基(-ch2ch2ch
2-)，异亚丙基(-c(ch3)
2-)，正亚丁基(-ch2ch2ch2ch
2-)，异亚丁基，仲亚丁基，叔亚丁基，正亚戊基，2-亚戊基，3-亚戊基，2-甲基-2-亚丁基，3-甲基-2-亚丁基，3-甲基-1-亚丁基，2-甲基-1-亚丁基，正亚己基，2-亚己基，3-亚己基，2-甲基-2-亚戊基，3-甲基-2-亚戊基，4-甲基-2-亚戊基，3-甲基-3-亚戊基，2-甲基-3-亚戊基，2,3-二甲基-2-亚丁基，3,3-二甲基-2-亚丁基，正亚庚基，正亚辛基，羧基取代的亚丙基、羧基取代的亚正丁基、羧基取代的亚正戊基、氨基取代的亚丙基、氨基取代的亚正丁基、氨基取代的亚正戊基。
[0163]
在本发明中，-c
g
h
2g-2-指亚烯基，其中至少一个位置为不饱和状态，即一个c-c为sp2双键。g的取值为2～8。一些实施例中，g的取值为2～6。在另一些实施例中，g为2～4。所述烯基为直链亚烯基或支链亚烯基，在一些实施例中，其为直链亚烯基。所述亚烯基为取代或未取代的亚烯基。所述取代亚烯基中任意c上连接的h可以被取代基取代，所述取代亚烯基的取代基为-nh2、-oh、-cooh或-ar中的一种或几种。任意c上的取代基个数为1个或两个。所述亚烯基包括基团有“反”、“正”或“e”、“z”的定位，其中具体的实例包括，但并不限于，亚乙烯基(-ch＝ch-)，亚丙烯基，亚烯丙基(-ch2ch＝ch-)，亚丁烯基和4-甲基亚丁烯基、2-亚戊烯基、亚己烯基、亚庚烯基、亚辛烯基。
[0164]
在本发明中，-c
g
h
2g-o-或-c
g
h
2g-2-o-指与-o-相连接的-c
g
h
2g-或-c
g
h
2g-2-。
[0165]
在本发明的实施例中，两亲性化合物中：
[0166]
r1选自-c
f
h
2f 1
、-c
f
h
2f-1
，f＝8～18；
[0167]
r2选自-c
g
h
2g-、-c
g
h
2g-1-nh-，g＝2～6；
[0168]
r3选自-oh、-c
h
h
2h 1
、-c
h
h
2h-1
，h＝8～18。
[0169]
其中，任意c上连接的h可以被一个或两个取代基所取代；
[0170]
其中，所述取代基为-nh2或-cooh。
[0171]
所述r2和r3的结构中至少包括1个-cooh。
[0172]
在本发明的实施例中，
[0173]
r5为-c
f
h
2f 1
，r6为r7为-oh；
[0174]
或r5为-c
f
h
2f 1
，r6为r7为-oh；
[0175]
或r5为-c
f
h
2f 1
，r6为r7为-c
h
h
2h 1
；
[0176]
或r5为-c
f
h
2f 1
，r6为r7为-c
h
h
2h 1
；
[0177]
f＝8～18；g＝2～6；h＝8～18。
[0178]
本发明的实施例中，其结构为：
[0179][0180]
本发明提供的化合物制得的铂类配合物能够与脂质体的膜材良好的结合，从而提高脂质体的包封率和载药量。并且，以本发明提供的化合物制备铂类配合物后，含有羧基，具有ph敏感性，在较低的ph值环境中(如肿瘤组织)，羧基趋于去质子化，有利于促进药物在肿瘤组织的释放，提高药物的疗效,降低药物的毒副作用。
[0181]
本发明还提供了一种铂类配合物的脂质体，包括本发明提供的铂类配合物、脂质膜材；所述铂类配合物与脂质体膜材的比为99:1～1:99。
[0182]
所述比例为质量比、摩尔比或体积比。
[0183]
本发明提供的脂质体中，脂质膜材包括磷脂或/和胆固醇的组合物，膜材中磷脂的质量份数为1～100份，胆固醇的质量份数为0～60份。
[0184]
本发明提供的脂质体中，磷脂包括卵磷脂、大豆磷脂、氢化大豆磷脂、磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二月桂酰基磷脂酸、二月桂酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、棕榈酰磷脂酰甘油、二硬脂酰基磷脂酰甘油、磷脂酰丝氨酸、二月桂酰基磷脂酰乙醇胺、二油酰基磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、peg化磷脂等其中的一种或两种以上的组合物。
[0185]
本发明提供的脂质体中，或也还包括长循环材料，本发明采用的长循环材料为mpeg
2000-dspe，mpeg
5000-dspe、mpeg
2000-dmpe，mpeg
5000-dmpe，mpeg
2000-dppe，mpeg
5000-dppe等。
[0186]
本发明提供的脂质体中长循环材料的质量分数为0～50％。
[0187]
进一步地，本发明提供的脂质体中长循环材料的质量分数为6～35％。
[0188]
本发明提供的脂质体中还可包括抗氧化剂；本发明采用的抗氧化剂为l-半胱氨酸、抗坏血酸、dl-ɑ-生育酚、亚硫酸钠、焦亚硫酸钠或无水亚硫酸氢钠中任一种或两者以上的组合物。
[0189]
本发明提供的脂质体中，抗氧化剂的质量分数不高于20％。
[0190]
本发明提供的脂质体中，还可加入等渗调节剂，所述等渗调节剂为甘露醇、山梨醇、葡萄糖、蔗糖或氯化钠中任一种或两者以上的组合物。
[0191]
在一些实施例中，脂质体的制备方法为：在本发明提供的铂类配合物的水性溶液中迅速注入适量含有膜材、抗氧化剂或/和长循环材料的含有机溶剂的溶液，40～50℃搅拌30min，过脂质体挤压器匀化得到新型铂类脂质体。此外，长循环材料也可以在脂质体形成后加入，修饰脂质体表面。
[0192]
在另一些实施例中，脂质体的制备方法为：取膜材、抗氧化剂及长循环材料于圆底烧瓶中，加入适量有机溶剂溶解，加入本发明提供的铂类配合物的水性溶液，机械或超声匀化形成w/o乳剂，减压旋转蒸发除去有机溶剂，在容器壁上形成薄膜，注入水化介质，40～55℃使得膜材水化1～2h，过脂质体挤压器匀化得到新型铂类脂质体。
[0193]
在另一些实施例中，脂质体的制备方法为：取膜材、抗氧化剂及本发明提供的铂类配合物于圆底烧瓶中，加入适量有机溶剂溶解，减压旋转蒸发除去有机溶剂，在容器壁上形成薄膜，注入水化介质使得膜材水化1h～2h，过脂质体挤压器或微射流匀化得到新型铂类脂质体。
[0194]
在另一些实施例中，脂质体的制备方法为：取膜材、抗氧化剂及长循环材料于圆底烧瓶中，加入适量有机溶剂溶解，加入本发明提供的铂类化合物，超声或机械匀化形成w/o乳剂，减压旋转蒸发除去部分有机溶剂，注入水化介质，机械搅拌形成w/o/w后，减压旋转蒸发除去有机溶剂，过脂质体挤压器、微射流匀化分散得到新型铂类脂质体。
[0195]
本发明提供了一种治疗癌症的药物，包括本发明提供的脂质体。
[0196]
本发明提供的药物可用于治疗的癌症，如乳腺癌、非小细胞肺癌、睾丸癌、胰腺癌、直肠癌、肝癌，卵巢癌或头颈部癌。
[0197]
本发明提供的药物的剂型为注射剂(混悬型或注射用冻干粉末)、乳剂、亚微乳剂等。
[0198]
实验表明，本发明提供的脂质体能够显著提高铂类化合物的血药浓度，延长药物在体内的滞留时间，并且可以使铂类药物浓集于癌变器官，不仅可以减少用药剂量，增加疗效，而且可以降低药物的毒副作用，适用于多种肿瘤疾病的治疗。
[0199]
本发明提供了式ii结构的化合物，该化合物具有良好的生物相容性，其具有的羧基与酯键的羰基基团能够与铂类药物配合，其与铂类药物形成的不稳定的配位键能够增加药物在体内的水合速度从而提高药效。同时，以本发明提供的化合物制得的铂类配合物能够与脂质体的膜材良好的结合，从而提高脂质体的包封率和载药量。并且，以本发明提供的化合物制备铂类配合物后，含有羧基，具有ph敏感性，在较低的ph值环境中(如肿瘤组织)，羧基趋于去质子化，有利于促进药物在肿瘤组织的释放。本发明提供的脂质体能够降低药物的毒副作用，尤其是肾毒性，并保持一定疗效。
[0200]
本发明采用的试剂或仪器皆为普通市售品，皆可在市场购买到。
[0201]
实施例1两亲性化合物及其制备：
[0202][0203]
其制备方法为：
[0204]
1.实施例1～2
[0205]
在反应容器中，加入1.4mol马来酸酐，1.0mol十八醇，1000ml环己烷，室温下，滴加13.50g三乙胺，加热至60℃反应4h后，减压蒸馏至干；然后在残余物中加入丙酮900ml，加热至56℃，搅拌30min，降温至40℃搅拌1h，然后减压蒸馏至油状液后，降温至室温，加水适量至析出固体，搅拌1h，抽滤，分别用水及石油醚洗涤数次，所得固体60℃真空干燥20h，即得实施例1～2中的两亲性化合物。对制得的两亲性化合物进行质谱表征，结果如图1-a～1-b。
[0206]
或在反应容器中，加入1.2mol酸酐(马来酸酐或丁二酸酐)，1.0mol脂肪醇(十六醇或十八醇)，1000ml环己烷，室温下，滴加8.1g三乙胺，加热至50℃反应4h后，减压蒸馏除去环乙烷得到固体；然后在所得固体中加入无水乙醇800ml，加热至60℃溶解，搅拌30min，降温至40℃，搅拌1h，然后减压蒸馏至油状液后，降温至室温，加水适量至析出固体，搅拌1h，抽滤，分别用水及石油醚洗涤数次，所得固体60℃真空干燥20h，即得实施例1～2中的两亲性化合物。对制得的两亲性化合物进行核磁、红外及xrd表征，结果如图2-a～2-b、3-a～3-b及4-a～4-b。
[0207]
2.实施例3～6
[0208]
在反应容器中，加入1.4mol酸酐(马来酸酐或丁二酸酐)，1.0mol脂肪醇(十六醇或十八醇)，1000ml环己烷，室温下，滴加13.50g三乙胺，加热至60℃反应4h后，减压蒸馏至干；然后在残余物中加入丙酮900ml，加热至56℃，搅拌30min，降温至40℃搅拌1h，然后加水适量，降温至室温，搅拌1h，析出固体，抽滤，丙酮洗涤，所得固体60℃真空干燥20h，即得实施例3～6中的两亲性化合物。对制得的两亲性化合物实施例3～5进行质谱表征，结果如图1-c～1-e，对实施例3～4进行核磁表征，结果如图2-c～2-d，对实施例4～5进行红外光谱表征，结果如图3-c～3-d。
[0209]
或在反应容器中，加入1.2mol酸酐(马来酸酐或丁二酸酐)，1.0mol脂肪醇(十六醇或十八醇)，1000ml环己烷，室温下，滴加8.1g三乙胺，加热至50℃反应4h后，减压蒸馏除去环乙烷得到固体；然后在所得固体中加入无水乙醇800ml，加热至60℃溶解，搅拌30min，降
温至40℃保温1h，然后加水适量至有少量固体析出，搅拌1h，降温至室温，析出固体，抽滤，乙醇洗涤，所得固体60℃真空干燥20h，即得实施例3～5中的两亲性化合物。对制得的两亲性化合物实施例3～5进行xrd表征，结果如图4-c～4-e。
[0210]
实施例7～20铂类配合物的制备
[0211]
表1实施例7～20
[0212]
[0213][0214]
制备方法：将两亲性化合物加入水中，在一定条件下使其搅拌溶解，加入铂类化合物(两亲性化合物与铂类化合物的摩尔比1:1-10:1)，加热搅拌4h，反应得到铂类配合物，经干燥得到铂类配合物的固体粉末。
[0215]
实施例21～31逆向蒸发法制备脂质体
[0216]
表2实施例21～31
[0217][0218][0219]
取配方量的膜材、抗氧化剂置于圆底烧瓶中，加入适量的有机溶剂溶解(有机溶剂选用：氯仿或水饱和乙醚或二氯甲烷、甲醇、乙醇或其中至少两种溶剂的混合溶剂)，溶解，加入处方量的铂类配合物水溶液，(有机溶剂：水相体积比＝3:1～6:1)，机械或超声均化形成w/o乳剂，减压旋转蒸发除去有机溶剂，在容器壁上形成薄膜，注入水化介质℃(生理盐水或5％葡萄糖或5％蔗糖或7％蔗糖或注射用水或3％甘露醇水溶液)，40(或55℃)使得膜材水化1h～2h，过脂质体挤压器或微射流匀化得到铂类配合物脂质体，加入长循环材料搅拌室温搅拌1h，即得。
[0220]
实施例32～34乙醇注入法制备脂质体
[0221]
表3实施例32～34
[0222][0223]
取配方量的铂类配合物置于圆底烧瓶中，加入适量的水及7％蔗糖，溶解后迅速注入配方量膜材的乙醇溶液，40～50℃搅拌30min，过脂质体挤压器匀化，加适量水及7％蔗糖稀释至一定浓度即得到新型铂类脂质体。
[0224]
实施例35薄膜分散法制备脂质体
[0225]
表4实施例35
[0226][0227]
取配方量的膜材和抗氧化剂、长循环材料、加入配方量的铂类配合物置于圆底烧瓶中，加入适量的氯仿溶解，减压旋转蒸发除去有机溶剂，在容器壁上形成薄膜，注入水化介质(注射用水)，40～55℃使得膜材水化1～2h，过脂质体挤压器匀化得到新型铂类脂质体。
[0228]
实施例36复乳法制备脂质体
[0229]
表5实施例36
[0230][0231]
取配方量的膜材、抗氧化剂置于圆底烧瓶中，加入适量的乙醚，溶解，加入配方量的铂类化合物水溶液(有机相与水相体积比3:1)，超声或机械匀化形成w/o乳剂，减压旋转蒸发除去部分有机溶剂，注入7％蔗糖水溶液，机械搅拌形成w/o/w后，减压旋转蒸发除去有机溶剂，过脂质体挤压器、微射流匀化匀化分散得到新型铂类脂质体。
[0232]
实施例37脂质体质量考察
[0233]
用电镜观察本发明制得的含铂类配合物脂质体的形态，用zetasizernanozs90激光粒度测定仪测定脂质体的粒径及分布。以《中国药典》提供的方法计算本发明制得脂质体的包封率。结果如表6：
[0234]
表6脂质体粒度及包封率考察结果
[0235]
实施例序号平均粒径(nm)包封率(％)21123.491.322119.695.123102.894.524107.794.425106.593.6
26117.391.227102.298.12896.792.529109.497.230115.892.631114.194.93296.490.133105.392.534124.890.6
[0236]
图5、图6为实施例24制得的脂质体的形态和粒度图谱，其他实施例制得脂质体的检测情况与此相似。
[0237]
结果表明，本发明提供的新型铂类配合物脂质体制剂的粒径在90～150nm之间，包封率为90～98％之间。与现有文献及专利已报道的脂质体不同，该铂类脂质体具有包封率高，稳定性好及抗癌活性强的特点。
[0238]
实施例38参比脂质体的制备
[0239]
按照文献方法(cn106995465b)，以顺铂和两亲性化合物b(结构式如b所示)制备铂类配合物a(结构如a所示)，作为含酰胺键的铂类配合物，并按该专利(cn106995465b)中实施例31制备其脂质体，其中铂类配合物a的用量相当于顺铂12mg，膜材用量为胆固醇20mg，大豆卵磷脂200mg，抗氧化剂ve用量为5mg，水化介质为注射用水，制备方法为逆向蒸发法。所制备脂质体的粒径为101.7nm，包封率为92.76％。
[0240][0241]
实施例39脂质体的药效
[0242]
1.对肿瘤的抑制率
[0243]
以生理盐水、注射用顺铂、实施例32、33制得的脂质体及参比脂质体(实施例38所制备的脂质体)为实验材料，取spf级km小鼠，雄性，6-8周龄，体重18～22g。取对数增长的肉瘤s180细，将单细胞浓度调至为(1-5)
×
106cell/ml。将s180细胞悬液接种于小鼠的右侧腋窝皮下，每只0.2ml，建立是s180肉瘤株腋下接种模型。将荷瘤小鼠随机分为7组，每组7只，分别为生理盐水组，注射用顺铂对照组，实验组(分别给予本发明实施例32、33提供的铂类配合物脂质体及参比脂质体)，组内标号，各组尾静脉，顺铂对照组，实验组，先每隔两天给药一次，给药四次，再每隔三天给药一次，给药四次，给药剂量分别为5mg/kg和10mg/kg。给药后，每日观察小鼠的存活状态，给药后第20天处死小鼠，取出肿瘤，生理盐水洗净表面，滤纸吸干，称重，计算抑瘤率，计算方法如下：
[0244]
肿瘤抑制率(％)＝(对照组的平均瘤重-受试组的平均瘤重)
÷
对照组的平均瘤重
×
100
[0245]
实验结果显示，给药组的肿瘤生长均比对照组的肿瘤生长缓慢，实验组与顺铂对照组相比较，能够显著的抑制肿瘤的生长，同时可以显著的延长荷瘤小鼠的生存时间。肿瘤
重量及相关参数分别见表8，存活率见表9。
[0246]
表8荷肉瘤s180的km小鼠尾静脉注射5mg/kg及10mg/kg实验材料的肿瘤重量及肿瘤抑制率
[0247]
实施例序号平均肿瘤重量(g)抑制率(％)生理盐水4.5520—实施例32(5mg/kg)1.702162.61实施例32(10mg/kg)0.693184.77实施例33(5mg/kg)1.723662.14实施例33(10mg/kg)0.737383.80参比脂质体(5mg/kg)1.742961.71参比脂质体(10mg/kg)0.756283.39
[0248]
荷肉瘤s180的km小鼠存活率结果见图7(7a-7d)和表9。
[0249]
表9荷肉瘤s180的km小鼠20天的存活率
[0250]
实施例序号存活率(％)生理盐水85.71顺铂对照组(5mg/kg)0顺铂对照组(10mg/kg)0实施例32(5mg/kg)85.71实施例32(10mg/kg)85.71实施例33(5mg/kg)85.71实施例33(10mg/kg)85.71参比脂质体(5mg/kg)71.43参比脂质体(10mg/kg)71.43
[0251]
结果表明，实施例32制得的脂质体与等剂量的参比脂质体抑瘤率相当，存活率明显高于参比脂质体，说明本发明提供的脂质体不仅能够有效抑制肿瘤生长，提高小鼠存活率，而且显著降低顺铂毒性，改善小鼠生存状态，因此也说明含酯键的铂类配合物较含酰胺键的毒性更低。
[0252]
荷肉瘤s180的km小鼠肾脏组织切片结果见图8。
[0253]
结果表明，cddp-s组小鼠肾脏可见肾小球萎缩，肾小囊扩张，出现明显肾损伤现象，而本发明提供的脂质体未观察到明显肾损伤，说明本发明提供的脂质体能够显著降低顺铂肾毒性。
[0254]
实施例40脂质体安全性
[0255]
1.存活状态、体重
[0256]
将km小鼠随机分组，每组10只，组内标号，给药前禁食12h，可自由饮水，分别以10mg/kg剂量尾静脉注射生理盐水、市售顺铂对照组及实施例33得到的脂质体。在给药后连续14天观察并记录小鼠和体重变化。
[0257]
结果见图9和图10。结果表明，与顺铂对照组相比，实施例33制得的脂质体小鼠体重下降明显减轻，生存状态良好，存活率显著提高，表明顺铂配合物脂质体毒性显著降低。
[0258]
2.ld
50
[0259]
将km小鼠随机分为14个剂量组，每组10只。群饲1天，观察各组小鼠是否正常，给药前称各鼠体重。根据体重计算各小鼠静脉注射实施例33及参比脂质体的剂量，组距为1.3，每个剂量组给药的浓度分别为26、33.8、43.94、57.12、74.26、96.54、125.50mg/kg。给药后7天内，记录各组小白鼠死亡数，实验期间，各组动物群饲，自由饮食。将动物死亡数，输入ld
50
值软件，计算ld
50
。
[0260]
结果表明，实施例33制得的脂质体的ld
50
值为68.01mg/kg，参比脂质体(实施利38)的ld
50
值为45.90mg/kg，因此实施例33制得的脂质体较参比脂质体而言，安全性更高。进一步证明含酯键的铂类配合物较含酰胺键的毒性更低，认为可能前者在体内的代谢产物毒性较后者小，因此安全性更高。
[0261]
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。