一种基于外泌体的光控信号放大技术及其在microRNA检测及成像中的应用的制作方法

技术特征：
1.一种检测核酸分子的探针组合，其特征在于，所述探针组合中包括发卡链h1、发卡链h2和发卡链h3；所述发卡链h1从5’到3’依次包括：序列a，序列b，序列c和序列d；所述序列a、b能够与靶核酸互补；所述序列b能够与序列d互补；所述序列c、d与所述发卡链h2的5’端序列互补；所述发卡链h2从5’到3’依次包括：序列e，序列f，序列g和序列h；所述序列f与所述序列h互补；所述序列g、h与所述发卡链h3的3’端序列互补；所述发卡链h3从5’到3’依次包括：序列i，序列j，序列k和序列l；所述序列i与所述序列k互补；所述序列l、k与所述发卡链h2的序列g、h互补；其中，序列e优选为gctgta；序列f优选为gggtagatagagattt；序列g优选为aaatca；序列h优选为tatcaaaatctctatctaccc；序列i优选为aaatctctatctacccta；序列j优选为cagctt；序列k优选为tgggtagatagagattt；序列l优选为tgatatgat。2.根据权利要求1所述的探针组合，其特征在于，所述发卡链h2上修饰有第一荧光基团，所述发卡链h3上修饰有第二荧光基团，且所述第一荧光基团与所述第二荧光基团之间能发生荧光共振能量转移。3.根据权利要求1所述的探针组合，其特征在于，所述发卡链h1的3’端连接有胆固醇基团。4.根据权利要求3所述的探针组合，其特征在于，所述发卡链h2在3’端依次连接光控基团和胆固醇基团；所述发卡链h3在3’端依次连接光控基团和胆固醇基团；所述光控基团具有紫外照射断键特性。5.根据权利要求4所述的探针组合，其特征在于，所述光控基团包括：pc
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linker。6.一种核酸分子的检测方法，包括如下步骤：(1)将外泌体与权利要求4～5任一项所述的探针组合混合孵育；(2)加入待测样品和镁盐，紫外线照射，继续孵育；(3)检测荧光信号强度，计算待测样品中核酸分子的含量。7.一种核酸分子检测试剂盒，其特征在于，所述核酸分子检测试剂盒中包括权利要求1～5任一项所述的探针组合。8.权利要求1～5任一项所述的探针组合在核酸分子定性或定量检测中的应用。9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述应用适用于活细胞内的核酸分子定性或定量检测。10.权利要求1～5任一项所述的探针组合在活细胞细胞成像中的应用。

技术总结
本发明公开了一种基于外泌体的光控信号放大技术及其在microRNA检测及成像中的应用，该方法通过发卡链上的疏水基团使三个发卡链固定于外泌体膜上，将载有探针的外泌体与细胞孵育后，紫外光照一定时间，使光控发卡链H2、H3上的光控基团断裂(光剪切)，使探针从外泌体上切下，当存在目标miRNA时，三个发卡链与目标miRNA发生HCR反应，由于发卡链H1不含光控基团，依然会固定在外泌体上，因此会在外泌体膜上进行HCR回收荧光聚集，从而可以通过激光共聚焦显微镜实现较好的细胞成像效果。聚焦显微镜实现较好的细胞成像效果。


技术研发人员：邹小勇 张艳飞 戴宗
受保护的技术使用者：中山大学
技术研发日：2021.08.24
技术公布日：2021/12/14