一种棉花根腐病菌检测用引物、探针、试剂盒及检测方法与流程

技术特征：
1.一种棉花根腐病菌检测用引物，其特征在于，所述棉花根腐病菌检测用引物的序列为：上游引物myaf序列为5
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gagggcatgcctgttcga
‑3’
，下游引物myar序列为5
’‑
ccaagccaaccctctttcac
‑3’
。2.一种棉花根腐病菌检测用探针，其特征在于，所述棉花根腐病菌检测用探针的序列为：myat序列为5
’‑
cgtcagcataacaaaacctcaagcaccc
‑3’
。3.如权利要求2所述的棉花根腐病菌检测用探针，其特征在于，其中，所述myat探针5’端标记的荧光报告基团为fam，3’端标记的荧光猝灭基团为tamra。4.一种棉花根腐病菌检测用试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1所述的棉花根腐病菌检测用引物。5.如权利要求4所述的棉花根腐病菌检测用试剂盒，其特征在于，还包括如权利要求2或3所述的棉花根腐病菌检测用探针。6.如权利要求5所述的棉花根腐病菌检测用试剂盒，其特征在于，还包括ctab提取液、taq dna聚合酶、阳性对照液以及阴性对照液。7.一种棉花根腐病菌的检测方法，其特征在于包括以下步骤：(1)将菌丝放入液氮中碾碎，加入ctab提取液，65℃水浴30min；(2)10000r/min离心5min，取上清液并加入等体积的萃取液，混合至乳浊状；(3)4℃10000rpm离心5min，取上清液并加入醋酸钠溶液和乙醇，混匀后
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20℃下静置30min；(4)4℃10000rpm离心10min，取沉淀并用乙醇漂洗，晾干后，加入灭菌去离子水溶解沉淀，得到样品dna，4℃保存备用；(5)以上述获得的样品dna为模版，利用上述权利要求1中的引物及权利要求2或3中的探针进行pcr扩增反应，并对结果进行分析。8.如权利要求7所述的棉花根腐病菌的检测方法，其特征在于，所述萃取液为氯仿和异戊醇混合液。9.如权利要求8所述的棉花根腐病菌的检测方法，其特征在于，所述氯仿和异戊醇混合液中氯仿和异戊醇的体积比为24:1。10.如权利要求7所述的棉花根腐病菌的检测方法，其特征在于，所述步骤(5)中pcr扩增反应的条件为：50℃预热2min；95℃预变性10min；95℃15s，60℃l min，40个循环。

技术总结
本发明涉及一种棉花根腐病菌检测用引物、探针、试剂盒以及棉花根腐病菌的检测方法，其中，上游引物myaF序列为5


技术研发人员：张慧丽 李雪莲 段维军 赵雷 陈先锋
受保护的技术使用者：宁波海关技术中心
技术研发日：2021.09.06
技术公布日：2021/12/7