一种改善肉鸡肉质的益生菌液生产及应用效果评估的制作方法

1.本发明涉及一种可改善鸡肉质的益生菌饲料添加剂生产领域，特别是通过益生菌改善鸡肉质的饲料添加剂生产，属于饲料添加剂技术领域。


背景技术：

2.随着我国人民的生活水平不断提高，人们更加追求健康绿色的食品，关注食品安全。农业农村部第194号公告表明，自2020年7月1日起，促生长类药物饲料添加剂(中药类除外)将不再允许在商品饲料中添加，这对我国的饲料生产和养殖行业来说既是机遇又是挑战。因此，寻找可改善畜禽健康以及畜禽产品品质的饲料添加剂显得至关重要。
3.益生菌发酵饲料是一类集益生菌的功效与优质饲料的优点,具有潜在替代含抗生素饲料的一种新型饲料。在基础饲粮中添加地衣芽胞杆菌、屎肠球菌和丁酸梭菌，能显著降低鸡的滴水损失和蒸煮损失。饲料中添加富铬枯草芽孢杆菌可显著提高鸡胸肉的亮度、红度和黄度，提高了胸肉的持水能力，降低了剪切力和蒸煮损失。在饲粮中添加枯草芽孢杆菌益生菌后，滴水损失、蒸煮损失、剪切力、l
24h
、a
24h
、b
45min
、b
24h
值均受影响。枯草芽孢杆菌饲养的鸡腿肌在死后30min和5h的颜色亮度较高，持水能力较强，蒸煮损失较小(p＝0.056),ph值较低(p＝0.05)。
4.豆渣是生产豆腐、豆浆、豆奶等豆制品过程中产生的副产物，占全豆质量的16％～25％。我国作为豆制品的生产和消费大国，按0.5吨干大豆加工产生2吨湿豆渣计，湿豆渣的年产生量在2000万吨以上。豆渣含有丰富的营养价值，但它不可直接生喂。豆渣含有抗营养因子，将可能导致家畜腹胀、腹泻和肠炎。利用芽孢杆菌、酵母菌和乳酸菌发酵豆渣可去除豆渣中84.98％的胰蛋白酶抑制剂，73.33％的异硫氰酸酯，100％的大豆抗原蛋白。
5.基于上述研究进展，我们拟以湿豆渣为底物，生产芽孢杆菌液。在日粮中添加芽孢杆菌液研究其对鸡生产性能和肉质性质的变化。期望通过对农副产物豆渣的利用，降低芽孢杆菌液的生产成本，通过芽孢杆菌液在鸡生产上的应用，提高禽肉产品品质。本发明为促进农副产物豆渣的高效利用，为畜牧业高效健康养殖提供试验支撑。


技术实现要素：

6.本发明的目的是提供一种以豆渣发酵生产芽孢杆菌液的发酵方法及其应用效果，以解决上述现有技术存在的问题，使湿豆渣营养价值得以改善，鸡肉品质获得提升。
7.为实现上述目的，本发明提供了如下方案：本发明提供一种以豆渣发酵生产芽孢杆菌液的发酵方法，以玉米、豆渣等以合适的比例配置生产芽孢杆菌液，生产含有1.2*108个芽孢杆菌/ml菌液的底物成本仅需0.146元/l。
8.本发明所述的芽孢杆菌液饲料添加剂具有改善鸡肉质的作用。
9.本发明公开了以下技术效果：可以玉米、豆渣等以合适的比例配置生产芽孢杆菌液，生产含有1.2*108个芽孢杆菌/ml菌液1l时底物成本仅需0.146元。与对照组相比，芽孢杆菌液的添加有降低湘黄鸡胸肌24h滴水损失的趋势(p＝0.066)，显著降低了72h时的滴水
损失(p＜0.05)。芽孢杆菌液的添加显著增加了45min时的胸肌和腿肌ph值(p＜0.01)。对照组胸肌和腿肌a
48h
值显著低于试验组(p＜0.05)。芽孢杆菌液的处理显著降低了胸肌熟肉的韧度值(p＜0.05)。
具体实施方式
10.下面将结合本发明实施例中的附表，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
11.为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附表和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。
12.实施例(一)
13.1材料与方法
14.1.1菌的活化
15.芽孢杆菌液由市场采购.芽孢杆菌液在酵母提取物胰蛋白胨琼脂培养基上28℃活化2天后，将单菌落接种到酵母提取物胰蛋白胨液体培养基中，28℃、培养2d。
16.1.2菌的驯化
17.将芽孢杆菌单菌落接种于含有豆渣的琼脂培养基中，28℃活化2天后，然后挑取单菌落接种于含有豆渣的液体培养基中，28℃、培养2d。
18.1.3发酵条件优化
19.在250ml三角瓶中添加豆渣，加水后120℃灭菌20min，添加驯化后的芽孢杆菌菌液，28℃培养12或24h后收集产物待测。发酵过程中对对发酵底物，发酵时间，水分含量，装料量进行单因素试验。以芽孢杆菌菌落数为优化目标，获得最优发酵条件。
20.1.4样品收集分析
21.发酵后的产物通过逐级稀释法，采用10
‑7～10
‑
10
菌液涂布于酵母提取物胰蛋白琼脂培养基上，28℃、培养2d后计数。
22.1.5数据统计分析
23.用sas8.0软件的glm程序对结果进行分析。差异显著时采用ttest方法对组间差异进行比较，结果表示为平均值
±
标准误(或标准差)。p<0.05时视为差异显著。
24.2结果与分析
25.结果表明，用玉米淀粉和麦麸作为底物，芽孢杆菌可生长，与酵母提取物胰蛋白胨组无显著差异。在玉米淀粉和麦麸的基础上添加豆渣，对芽孢杆菌菌落数无显著影响。芽孢杆菌甚至可以在单独的豆渣培养基上生长。淀粉以及硫酸锰的添加对芽孢杆菌的生长有显著的促进效应。装料量(底物含量)减少对菌落数无显著影响。用玉米替代玉米淀粉，可显著增加芽孢杆菌的生长。经过优化，可以玉米、豆渣等以合适的比例配置生产芽孢杆菌液，生产20l的含有1.2*108个芽孢杆菌/ml菌液仅仅需要成本为2.92元。
26.实施例(二)
27.1试验动物的选择及饲养管理
28.选择体重相近，健康的4周龄湘黄鸡80只随机分为两组试验。试验期采机械通风和
自然光照，自由采食和饮水。试验期30d。试验鸡舍位于衡阳师范学院动物房，自然通风，光照充足。每日按时进行卫生清理和消毒。每天记录观察鸡群的健康状况。
29.2试验设计
30.2.1试验设计
31.选择体重相近，健康的46日龄湘黄鸡80只，分为对照组和验组，每组10个重复，每重复4只鸡。a组为对照组，饲喂普通水，早中晚每次500ml；b组为试验组，在普通水中添加200ml含有芽孢杆菌的豆渣水。a组及b组采食相同的商业饲粮，营养水平见表1。
32.表1基础日粮营养成分表
[0033][0034][0035]
每千克饲粮提供以下物质：va 5000iu，vd3 1000iu，ve 10mg，vb1 1.8mg，vb2 3.0mg，vb6 3.0mg，vb12 0.01mg，vk3 0.5mg，烟酸25mg，d
‑
泛酸10mg，叶酸0.55mg，生物素0.15mg，锌(硫酸锌)60mg，锰(硫酸锰)80mg，fe(硫酸亚铁)80mg，cu(硫酸铜)8mg，i(碘化钾)0.35mg，se(亚硒酸钠)0.15mg。
[0036]
2.2样品采集与处理
[0037]
每周对鸡进行称重，对饲料摄入量进行统计。第74日龄时，每个重复随机选取2只鸡，电击致晕后屠宰。采集胸肌、腿肌等组织器官进行称重。用生理盐水轻轻冲洗食糜后，取十二指肠、空肠、回肠肠段进行4％多聚甲醛固定。剪取背最长肌的胸肌和腿肌(股四头肌和股二头肌)，锡箔纸包裹，液氮速冻，
‑
80℃保存。采集胸肌、腿肌进行肉质性状测定。
[0038]
2.3指标测定与方法
[0039]
2.3.1生产性能测定
[0040]
计算平均日增重、平均日采食量、料肉比。
[0041]
2.3.2器官指数的计算
[0042]
按照公式：器官指数(％)＝器官鲜重(g)*100/活体重(g)计算器官指数。
[0043]
2.3.3肉质性状的测定
[0044]
用ph计测定胸肌、腿肌屠宰后45minji 24h的ph值。用cr
‑
400型色差计(konica minolta)检测屠宰后45min以及24h时胸肌、腿肌的l*值、a*值和b*值，每个样品每次测三次，通过计算取平均值。称取屠宰后45min鸡胸肌或腿肌5g，将肉用细铁丝悬挂在倒置的透明塑料杯中，置于4℃冰箱24h后，取出肉样，称重，滴水损失为悬挂过程中损失的重量占肉样的比例。称取5g左右的胸肌或腿肌，放置在蒸锅的蒸格上蒸煮30分钟，在自然环境中晾冷15分钟，再次称重，蒸煮损失为蒸煮过程中损失的肉重量占肉样的比例。剪取胸肌和腿肌的生肉，胸肌蒸煮损失后的熟肉各一块，在tpa质构仪上按照仪器自带firmness和toughness程序分别测定剪切力及韧度。
[0045]
2.4数据处理与分析
[0046]
数据用excel 2010进行初步的处理，然后采用sas 8.0软件进行glm单因素方差分析，组间差异采用ttest检验，结果以平均值
±
标准误(mean
±
se)来表示，显著水平为p<0.05。
[0047]
3结果与分析
[0048]
3.1芽孢杆菌液的添加对湘黄鸡生产性能的影响
[0049]
饮水中添加芽孢杆菌液对湘黄鸡整个试验期的平均日增重、平均日采食量、料肉比没有显著影响(p>0.05)(表2)。
[0050]
表2芽孢杆菌液的添加对湘黄鸡生产性能的影响
[0051]
[0052][0053]
备注：adfi:平均日采食量；adg:平均日增重；f:g：料肉比
[0054]
3.2芽孢杆菌液的添加对湘黄鸡器官指数的影响
[0055]
芽孢杆菌液的添加对肝脏、脾脏、肠、的重量及器官指数没有显著影响，对肠道长度没有显著影响(p>0.05)，但对照组鸡的心脏重量显著低于试验组(p＜0.05)(表3)。
[0056]
表3芽孢杆菌液的添加对湘黄鸡器官重及器官指数的影响
[0057][0058][0059]
备注：肠重量包含其中的内容物。
[0060]
3.2芽孢杆菌液的添加对湘黄鸡肉质的影响
[0061]
与对照组相比，芽孢杆菌液的添加有降低24h滴水损失的趋势(p＝0.066)(表4)，
显著降低了72h时的滴水损失(p＜0.05)。芽孢杆菌液的添加显著增加了45min时的胸肌和腿肌ph值(p＜0.01)，对蒸煮损失、24h和72h时的ph值无显著影响(p>0.05)。对照组胸肌a
48h
值显著低于试验组(p＜0.05)，胸肌的其他肉色相关指标如l值，a值和b值未受芽孢杆菌液的添加的影响(p>0.05)。对照组的腿肌的a
45min
和a
48h
值显著低于试验组(p＜0.05)，腿肌的其他肉色相关指标如l
45min
,b
45min
,l
24h
,a
24h
,b
24h
,l
48h
,b
48h
值在组间差异不显著(p>0.05)。芽孢杆菌液的添加对胸肌和腿肌生肉的剪切力以及韧度没有显著影响(p>0.05)，但它的处理显著降低了胸肌熟肉的韧度值(p＜0.05)，对胸肌熟肉的剪切力没有显著影响(p>0.05)。
[0062]
表4芽孢杆菌液的添加对湘黄鸡肉质性状的影响
[0063]
[0064][0065]
4结论
[0066]
该芽孢杆菌液添加剂可通过降低胸肌滴水损失，增加胸肌和腿肌的ph值，提高胸肌和腿肌的a
48h
值改善湘黄鸡的肉质。
[0067]
本发明所述的益生菌液添加剂具有生产成本低廉(底物成本仅为0.146元/l)，改善湘黄鸡胸肌和腿肌肉质的显著效果。
[0068]
以上所述仅是本发明的一种实施方式，应当指出，对于本领域普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干相似的变形和改进，这些也应视为本发明的保护范围之内。