一种从猪血中纯化重组人血清白蛋白的方法及应用与流程

技术特征：
1.一种从猪血中纯化重组人血清白蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)含有人血清白蛋白的猪血上清经阴离子交换层析后，得到第一层析产物；(2)所述第一层析产物经复合型离子交换层析，得到第二层析产物；(3)所述第二层析产物经疏水层析，得到纯化的重组人血清白蛋白。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述阴离子交换层析使用的介质为阴离子交换层析介质；优选地，所述阴离子交换层析介质包括nanogel 50q；优选地，步骤(2)所述复合型离子交换层析使用的介质为复合型离子交换层析介质；优选地，所述复合型离子交换层析介质包括agrose hcm；优选地，步骤(3)所述疏水层析使用的介质为疏水层析介质；优选地，所述疏水层析介质包括聚丙烯。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述阴离子交换层析包括装柱、上样和洗脱；优选地，所述阴离子交换层析的具体操作包括：将阴离子交换层析介质装柱后得到阴离子交换层析柱，加入缓冲溶液a，随后，加入所述含有人血清蛋白的猪血上清，再向所述阴离子交换层析柱中加入淋洗液，而后，依次加入洗脱液a和洗脱液b进行一次洗脱和二次洗脱，收集所述二次洗脱后的液体作为第一层析产物；优选地，所述缓冲溶液a包括磷酸缓冲溶液；优选地，所述淋洗液包括含有氯化钠的磷酸缓冲溶液；优选地，所述一次洗脱采用洗脱液a，所述洗脱液a包括含有氯化钠的磷酸缓冲溶液；优选地，所述洗脱液a中的氯化钠溶液的电导率为19～21ms/cm，优选为19.5～20.5ms/cm，进一步优选为19.8ms/cm；优选地，所述二次洗脱采用洗脱液b，所述洗脱液b包括含有氯化钠的磷酸缓冲溶液；优选地，所述洗脱液b中的氯化钠溶液的摩尔浓度为0.8～1.2m，优选为0.9～1.1m，进一步优选为1m；优选地，所述缓冲溶液a、淋洗液、洗脱液a和洗脱液b的ph值相同或不同，所述ph值为7.2～7.6，优选为7.3～7.5，进一步优选为7.4；优选地，所述缓冲溶液a、淋洗液、洗脱液a和洗脱液b的ph值相同。4.根据权利要求1
‑
3任一项所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述复合型离子交换层析包括装柱、上样和洗脱；优选地，所述复合型离子交换层析的具体操作包括：将复合型离子交换层介质装柱后得到复合型离子交换层柱，加入缓冲溶液b，随后，加入所述第一层析产物，而后，加入洗脱液c进行洗脱，收集所述洗脱后的液体作为第二层析产物；优选地，所述复合型离子交换层析中的洗脱为等度洗脱；优选地，所述缓冲溶液b包括磷酸缓冲溶液；优选地，所述洗脱液c为含有氯化钠溶液的磷酸缓冲溶液；优选地，所述缓冲溶液b和洗脱液c的ph值相同或不同，所述ph值为5.7～6.3，优选为
5.8～6.2，进一步优选为6；优选地，所述缓冲溶液b和洗脱液c的ph值相同。5.根据权利要求1
‑
4任一项所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述疏水层析包括装柱、上样和洗脱；优选地，所述疏水层析的具体操作包括：将疏水层析介质装柱后得到疏水层析柱，加入缓冲溶液c，随后，加入所述第二层析产物，而后，加入洗脱液d进行洗脱，收集所述洗脱后的液体，得到所述纯化的重组人血清白蛋白；优选地，所述疏水层析中的洗脱为梯度洗脱；优选地，所述缓冲溶液c为含有氯化钠溶液的磷酸缓冲溶液；优选地，所述洗脱液d包括磷酸缓冲溶液；优选地，所述缓冲溶液c和洗脱液d的ph值相同或不同，所述ph值为6.7～7.3，优选为6.8～7.2，进一步优选为7；优选地，所述缓冲溶液c和洗脱液d的ph值相同。6.根据权利要求1
‑
5任一项所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述含有人血清白蛋白基因的猪血在上样前还包括前处理的步骤；优选地，所述前处理步骤包括：取含有人血清蛋白的猪血上清加水进行稀释，随后加入稳定剂，调节ph，并进行热处理，得到除杂的猪血；优选地，所述稳定剂包括辛酸和/或辛酸钠；优选地，所述稳定剂的摩尔浓度为45～55mm，优选为48～52mm，进一步优选为50mm；优选地，所述热处理的温度为65～75℃，优选为68～72℃，进一步优选为70℃；优选地，所述热处理的时间为3.5～4.5h，优选为3.8～4.2h，进一步优选为4h；优选地，所述前处理步骤得到的含有人血清蛋白的猪血上清的电导率为4～5ms/cm。7.根据权利要求1
‑
6任一项所述的方法，其特征在于，所述第一层析产物在上样前经过稀释处理；优选地，稀释所述第一层析产物使用的溶液为含有氯化钠溶液的磷酸缓冲溶液；优选地，所述稀释后的第一层析产物的电导率为7.6～8.4ms/cm，优选为7.8～8.2ms/cm，进一步优选为8ms/cm；优选地，所述第二层析产物在上样前经过稀释处理；优选地，稀释所述第二层析产物使用的溶液为含有氯化钠溶液的磷酸缓冲溶液；优选地，所述稀释后的第二层析产物的电导率为155～165ms/cm，优选为158～163ms/cm，进一步优选为162ms/cm。8.根据权利要求1
‑
7任一项所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)稀释含有人血清蛋白的猪血上清，加入摩尔浓度为45～55mm的稳定剂，调节ph，65～75℃加热3.5～4.5h，得到除杂的猪血；向nanogel 50q阴离子交换层析柱中加入缓冲溶液a，并将除杂的猪血进行稀释作为阴离子交换层析的上样溶液，所述稀释后含有人血清蛋白的猪血上清的电导率范围为4～5ms/cm；随后依次加入淋洗液、洗脱液a和洗脱液b，其中，洗脱液a用于一次洗脱，洗脱液b用于
二次洗脱，而后收集所述二次洗脱后的液体，得到第一层析产物；(2)向agrose hcm复合型离子交换层析柱中加入缓冲溶液b，并将步骤(1)所述的第一层析产物进行稀释作为复合型离子交换层析柱的上样溶液，所述稀释后的第一层析产物的电导率为7.6～8.4ms/cm，随后加入洗脱液c进行等度洗脱，收集所述等度洗脱后的液体，得到第二层析产物；(3)向聚丙烯疏水层析柱中加入缓冲溶液c，并将步骤(2)所述的第二层析产物进行稀释作为疏水层析柱的上样溶液，所述稀释后的第二层析产物的电导率为155～165ms/cm，随后加入洗脱液d进行梯度洗脱，收集所述梯度洗脱后的液体，得到纯化的重组人血清白蛋白。9.一种利用如权利要求1
‑
8任一项所述的方法制备得到的重组人血清白蛋白。10.一种如权利要求1
‑
8任一项所述的方法在制备重组人血清白蛋白中的应用。

技术总结
本发明提供了一种从猪血中纯化重组人血清白蛋白的方法及应用。所述方法包括以下步骤：(1)含有人血清白蛋白的猪血上清经阴离子交换层析后，得到第一层析产物；(2)所述第一层析产物经复合型离子交换层析，得到第二层析产物；(3)所述第二层析产物经疏水层析，得到纯化的重组人血清白蛋白。所述方法在阴离子交换层析步骤之前还存在前处理操作，以除去部分杂质。本发明提供的方法高效，简便，能够得到高纯度的重组人血清白蛋白以应用于临床治疗，且三步层析操作所使用的层析介质已经实现商业化，能够更好地进一步实现工业化，具有重大的现实意义。意义。意义。


技术研发人员：赵传博 金百胜
受保护的技术使用者：常熟纳微生物科技有限公司
技术研发日：2021.08.27
技术公布日：2021/12/2