PPAR-δ激动剂在治疗线粒体肌病中的用途的制作方法

ppar
‑
δ
激动剂在治疗线粒体肌病中的用途
交叉引用
1.本技术要求2019年2月20日提交的美国临时专利申请第62/808,137号的权益，该临时申请的全部内容通过引用并入本文。
技术领域
2.本文描述了使用过氧化物酶体增殖物激活的受体δ(pparδ)激动剂治疗或预防线粒体肌病的方法。


背景技术：

3.健康的线粒体对正常的细胞活动至关重要。线粒体功能障碍会驱动包括急性病况和慢性疾病在内的多种医学病症的发病机制。线粒体功能的不同方面，例如，生物能量学、动力学和细胞信号传导已被充分描述，而这些活性的损伤可能有助于疾病的发病机制。线粒体功能受损导致一系列称为原发性线粒体肌病的病症。原发性线粒体肌病(pmm)是遗传定义的病症，导致氧化磷酸化缺陷，主要但不仅仅影响骨骼肌。parδ是配体激活转录调控子的核调节超家族的成员，在全身表达。pparδ激动剂诱导与脂肪酸氧化和线粒体生物发生相关的基因。pparδ还具有抗炎特性。


技术实现要素：

4.在一方面，本文描述了用于治疗哺乳动物中原发性线粒体肌病(pmm)的方法，包括向患有原发性线粒体肌病的哺乳动物施用过氧化物酶体增殖物激活的受体δ(pparδ)激动剂化合物。
5.在另一方面，本文描述了在患有原发性线粒体肌病的哺乳动物中调节pparδ的方法，包括向患有原发性线粒体肌病的哺乳动物施用pparδ激动剂化合物。
6.在一些实施方案中，治疗原发性线粒体肌病包括增加哺乳动物中的氧化磷酸化(oxphos)、改善哺乳动物的运动耐量、减轻疼痛、减少疲劳、改善认知、改善整体健康、增加存活率或其组合。在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物以足以增加哺乳动物中的oxphos能力、上调涉及oxphos的酶或蛋白质中的任一种的基因表达或其组合的量施用于哺乳动物。
7.在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物以足以改善哺乳动物中的氧化磷酸化能力、上调涉及氧化磷酸化的酶或蛋白质中的任一种的基因表达或其组合的量施用于哺乳动物。
8.在又一方面，本文描述了用于在患有原发性线粒体肌病的哺乳动物中增加脂肪酸氧化(fao)的方法，包括向患有原发性线粒体肌病的哺乳动物施用pparδ激动剂化合物。在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物以足以改善哺乳动物中的fao能力、上调涉及fao的酶或蛋白质中的任一种的基因表达或其组合的量施用于哺乳动物。
9.在一些实施方案中，患有原发性线粒体肌病的哺乳动物具有：至少一个线粒体dna
(mtdna)基因中的至少一个突变或缺失；至少一个线粒体dna(mtdna)缺陷；涉及线粒体功能的至少一个核dna(ndna)基因中的至少一个突变或缺失；或其组合。
10.在一些实施方案中，至少一个线粒体dna(mtdna)基因中的至少一个突变包括选自m.3243a>g、m.8344a>g、m.8993t>g、m.13513g>a、m.11778g>a、m.14484t>c的突变及其组合。在一些实施方案中，至少一个线粒体dna(mtdna)基因中的至少一个突变包括突变m.3243a>g。
11.在一些实施方案中，至少一个线粒体dna(mtdna)基因中的至少一个突变包括选自8284bp缺失、6277bp缺失、4977bp缺失及其组合的突变。
12.在一些实施方案中，涉及线粒体功能的至少一个核dna(ndna)基因中的至少一个突变或缺失包括编码复合物i(nadh：泛醌氧化还原酶)、复合物ii(琥珀酸脱氢酶)、复合物iii(coq
‑
细胞色素c还原酶)、复合物iv(细胞色素c氧化酶)、复合物v(atp合酶)、氨酰基trna合成酶、释放因子、延伸因子、线粒体核糖体蛋白、硫胺素和磷酸盐的溶质载体的ndna基因中的至少一个突变或缺失。在一些实施方案中，编码复合物i的基因包括ndufs1、ndufs2、ndufs3、ndufs4、ndufs6、ndufs7、ndufs8、ndufv1、ndufv2、ndufa1、ndufa2、ndufa9、ndufa10、ndufa11、ndufa12、ndufa13、ndufaf2、ndufaf6或ndufb11。在一些实施方案中，编码复合体ii的基因包括sdha、sdhb、sdhc、sdhd或sdhaf1。在一些实施方案中，编码复合体iii的基因包括uqcrb、bcs1l、uqcrq、uqcrc2、cyc1、ttc19、lyrm7、uqcc2或uqcc3。在一些实施方案中，编码复合体iv的基因包括coa5、surf1、cox10、cox14、cox15、cox20、cox6b1、fastkd2、sco1、sco2、lrpprc、taco1或pet100。在一些实施方案中，编码复合体v的基因包括atpaf2、tmem70、atp5e或atp5a1。在一些实施方案中，编码氨酰基
‑
trna合成酶的基因包括aars2、dars2、ears2、rars2、yars2、fars2、hars2、lars2、vars2、tars2、iars2、cars2、pars2、nars2、kars、gars、sars2或mars2。在一些实施方案中，编码释放因子的基因包括c12orf65。在一些实施方案中，编码延伸因子的基因包括tufm、tsfm或gfm1。在一些实施方案中，编码线粒体核糖体蛋白的基因包括mrps16、mrps22、mrpl3、mrp12或mrpl44。在一些实施方案中，编码硫胺素和磷酸盐的溶质载体的基因包括slc19a3、slc25a3或slc25a19。
13.在一些实施方案中，涉及线粒体功能的至少一个核dna(ndna)基因中的至少一个突变或缺失包括涉及磷脂代谢、有毒化合物代谢、二硫键中继系统、铁硫蛋白组装、trna修饰、mrna加工、线粒体融合或裂变、三磷酸脱氧核苷酸合成、蛋白质质量控制和降解、atp和adp转运或其组合的ndna基因中的至少一个突变或缺失。在一些实施方案中，涉及磷脂代谢的基因包括agk、serac1或taz。在一些实施方案中，涉及毒性化合物代谢的基因包括hibch、echs1、ethe1或mpv17。在一些实施方案中，涉及二硫键中继系统的基因包括gfer。在一些实施方案中，涉及铁硫蛋白组装的基因包括iscu、bola3、nfu1或iba57。在一些实施方案中，涉及trna修饰的基因包括mto1、gtp3bp、trmu、pus1、mtfmt、trit1、trnt1或trmt5。在一些实施方案中，涉及mrna加工的基因包括lrpprc、taco1、elac2、pnpt1、hsd17b10、mtpap或ptcd1。在一些实施方案中，涉及线粒体融合和裂变的基因包括opa1或mfn2。在一些实施方案中，涉及三磷酸脱氧核苷酸合成的基因包括dguok、tk2、tymp、mgme1、suclg1、sucla2、rnaseh1、c10orf2、polg、polg2、dna2或rrm2b。在一些实施方案中，涉及蛋白质质量控制和降解的基因包括fbxl4、afg3l2或spg7。在一些实施方案中，涉及atp和adp转运的基因包括ant1。
14.在一些实施方案中，哺乳动物已被诊断患有kearns
‑
sayre综合征(kss)、leigh综
合征、母系遗传性leigh综合征(mils)、线粒体dna耗竭综合征(mds)、线粒体脑肌病、乳酸性酸中毒和中风样发作(melas)、线粒体神经胃肠道脑肌病(mngie)、肌阵挛性癫痫伴破碎红纤维(merrf)、神经性共济失调和视网膜色素变性(narp)、pearson综合征或进行性眼外肌麻痹(peo)。
15.在一些实施方案中，患有原发性线粒体肌病的哺乳动物还包括继发性线粒体肌病。在一些实施方案中，继发性线粒体肌病是遗传性继发性线粒体肌病。在一些实施方案中，继发性线粒体肌病是后天性继发性线粒体肌病。在一些实施方案中，继发性线粒体肌病涉及由于原发性fao缺陷导致的oxphos功能的继发性缺陷，或继发性线粒体肌病由导致继发性fao疾病的原发性oxphos缺乏引起。
16.在一些实施方案中，pparδ激动剂激活pparδ。在一些实施方案中，pparδ激动剂增加pparδ的活性。在一些实施方案中，pparδ激动剂增加线粒体生物发生。在一些实施方案中，pparδ激动剂增加涉及线粒体生物发生的基因或蛋白质的表达或活性。在一些实施方案中，蛋白质是过氧化物酶体增殖物激活的受体γ共激活因子1
‑
α(pgc
‑
1α)。在一些实施方案中，pparδ激动剂增加涉及氧化磷酸化的基因或其蛋白质的表达或活性。
17.在一些实施方案中，pparδ激动剂增加未突变线粒体dna(mtdna)相对于突变mtdna的比例的百分比。在一些实施方案中，在用pparδ激动剂化合物处理后，未突变的mtdna的百分比增加达至少10％。在一些实施方案中，在用pparδ激动剂化合物处理后，未突变的mtdna的百分比增加达约10％至约20％、约10％至约30％、约10％至约40％、约10％至约50％、约10％至约60％、约10％至约70％、约10％至约80％、或约10％至约90％。
18.在一些实施方案中，所述pparδ激动剂化合物结合至细胞pparδ且激活细胞pparδ，并且基本上不激活细胞过氧化物酶体增殖物激活受体
‑
α(pparα)和细胞过氧化物酶体增殖物激活受体
‑
γ(pparγ)。
19.在一些实施方案中，所述pparδ激动剂化合物是苯氧基烷基羧酸化合物。在一些实施方案中，所述pparδ激动剂化合物是苯氧基乙酸化合物、苯氧基丙酸化合物、苯氧基丁酸化合物、苯氧基戊酸化合物、苯氧基己酸化合物、苯氧基辛酸化合物、苯氧基壬酸化合物或苯氧基癸酸化合物。在一些实施方案中，所述pparδ激动剂化合物是苯氧基乙酸化合物或苯氧基己酸化合物。在一些实施方案中，所述pparδ激动剂化合物是烯丙氧基苯氧基乙酸化合物。
20.在一些实施方案中，所述pparδ激动剂是选自下组的化合物：(z)
‑
[2
‑
甲基
‑4‑
[3
‑
(4
‑
甲基苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑
苯氧基]乙酸；(e)
‑
[2
‑
甲基
‑4‑
[3
‑
[4
‑
[3
‑
(吡唑
‑1‑
基)丙
‑1‑
炔基]苯基]
‑3‑
(4
‑
三氟甲基苯基)
‑
烯丙氧基]苯氧基]乙酸；(e)
‑
[4
‑
[3
‑
(4
‑
氟苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基]乙酸；(e)
‑
[2
‑
甲基
‑4‑
[3
‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]
‑3‑
(4
‑
三氟甲基苯基)烯丙氧基]
‑
苯氧基]乙酸；(e)
‑
[4
‑
[3
‑
(4
‑
氯苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基]乙酸；(e)
‑
[4
‑
[3
‑
(4
‑
氯苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑2‑
甲基苯基]
‑
丙酸；{4
‑
[3,3
‑
双
‑
(4
‑
溴
‑
苯基)
‑
烯丙氧基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基}
‑
乙酸；或其药学上可接受的盐。
[0021]
在一些实施方案中，所述pparδ激动剂化合物是选自下组的化合物：(z)
‑
[2
‑
甲基
‑4‑
[3
‑
(4
‑
甲基苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑
苯氧基]乙酸；(e)
‑
[2
‑
甲基
‑4‑
[3
‑
[4
‑
[3
‑
(吡唑
‑1‑
基)丙
‑1‑
炔基]苯基]
‑3‑
(4
‑
三氟甲基苯基)
‑
烯丙氧基]苯氧基]乙酸；(e)
‑
[4
‑
[3
‑
(4
‑
氟苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基]乙酸；(e)
‑
[2
‑
甲基
‑4‑
[3
‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]
‑3‑
(4
‑
三氟甲基苯基)烯丙氧基]
‑
苯氧基]乙酸；(e)
‑
[4
‑
[3
‑
(4
‑
氯苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基]乙酸；(e)
‑
[4
‑
[3
‑
(4
‑
氯苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑2‑
甲基苯基]
‑
丙酸；{4
‑
[3
‑
异丁氧基
‑5‑
(3
‑
吗啉
‑4‑
基
‑
丙
‑1‑
炔基)
‑
苄硫基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基}
‑
乙酸；{4
‑
[3
‑
异丁氧基
‑5‑
(3
‑
吗啉
‑4‑
基
‑
丙
‑1‑
炔基)
‑
苯硫基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基}
‑
乙酸；{4
‑
[3,3
‑
双
‑
(4
‑
溴
‑
苯基)
‑
烯丙氧基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基}
‑
乙酸；2
‑
[2
‑
甲基
‑4‑
[[3
‑
甲基
‑4‑
[[4
‑
(三氟甲基)苯基]甲氧基]苯基]硫代]苯氧基]
‑
乙酸；(s)
‑4‑
[顺
‑
2,6
‑
二甲基
‑4‑
(4
‑
三氟甲氧基
‑
苯基)哌嗪
‑1‑
磺酰基]
‑
茚满
‑2‑
羧酸或其甲苯磺酸盐(kd
‑
3010)；(2s)
‑2‑
{4
‑
丁氧基
‑3‑
[({[2
‑
氟
‑4‑
(三氟甲基)苯基]羰基}氨基)甲基]苄基}丁酸(tipp
‑
204)；2
‑
[2
‑
甲基
‑4‑
[[[4
‑
甲基
‑2‑
[4
‑
(三氟甲基)苯基]
‑5‑
噻唑基]甲基]硫代]苯氧基]
‑
乙酸(gw
‑
501516)；2
‑
[2,6二甲基
‑4‑
[3
‑
[4
‑
(甲基硫代)苯基]
‑3‑
氧代
‑
1(e)
‑
丙烯基]苯氧基]
‑2‑
甲基丙酸(gft
‑
505)；{2
‑
甲基
‑4‑
[5
‑
甲基
‑2‑
(4
‑
三氟甲基
‑
苯基)
‑
2h
‑
[1,2,3]三唑
‑4‑
基甲硫基]
‑
苯氧基}
‑
乙酸；(r)
‑3‑
甲基
‑6‑
(2
‑
((5
‑
甲基
‑2‑
(4
‑
(三氟甲基)苯基)
‑
1h
‑
咪唑
‑1‑
基)甲基)苯氧基)己酸；(r)
‑3‑
甲基
‑6‑
(2
‑
((5
‑
甲基
‑2‑
(6
‑
(三氟甲基)吡啶
‑3‑
基)
‑
1h
‑
咪唑
‑1‑
基)甲基)苯氧基)己酸；2
‑
(2
‑
甲基
‑4‑
(((2
‑
(4
‑
(三氟甲基)苯基)
‑
2h
‑
1,2,3
‑
三唑
‑4‑
基)甲基)硫代)苯氧基)乙酸；以及(r)
‑2‑
(4
‑
((2
‑
乙氧基
‑3‑
(4
‑
(三氟甲基)苯氧基)丙基)硫代)苯氧基)乙酸；或其药学上接收的盐。
[0022]
在一些实施方案中，所述pparδ激动剂化合物是选自下组的化合物：(z)
‑
[2
‑
甲基
‑4‑
[3
‑
(4
‑
甲基苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑
苯氧基]乙酸；(e)
‑
[2
‑
甲基
‑4‑
[3
‑
[4
‑
[3
‑
(吡唑
‑1‑
基)丙
‑1‑
炔基]苯基]
‑3‑
(4
‑
三氟甲基苯基)
‑
烯丙氧基]苯氧基]乙酸；(e)
‑
[4
‑
[3
‑
(4
‑
氟苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基]乙酸；(e)
‑
[2
‑
甲基
‑4‑
[3
‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]
‑3‑
(4
‑
三氟甲基苯基)烯丙氧基]
‑
苯氧基]乙酸；(e)
‑
[4
‑
[3
‑
(4
‑
氯苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基]乙酸；(e)
‑
[4
‑
[3
‑
(4
‑
氯苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑2‑
甲基苯基]
‑
丙酸；{4
‑
[3
‑
异丁氧基
‑5‑
(3
‑
吗啉
‑4‑
基
‑
丙
‑1‑
炔基)
‑
苄硫基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基}
‑
乙酸；{4
‑
[3
‑
异丁氧基
‑5‑
(3
‑
吗啉
‑4‑
基
‑
丙
‑1‑
炔基)
‑
苯硫基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基}
‑
乙酸；以及{4
‑
[3,3
‑
双
‑
(4
‑
溴
‑
苯基)
‑
烯丙氧基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基}
‑
乙酸；或其药学上可接受的盐。
[0023]
在一些实施方案中，所述pparδ激动剂是(e)
‑
[4
‑
[3
‑
(4
‑
氟苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基]乙酸(化合物i)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述pparδ激动剂是(e)
‑
[4
‑
[3
‑
(4
‑
氟苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基]乙酸或其药学上可接受的盐，并且以约10mg至约500mg的剂量施用至所述哺乳动物。在一些实施方案中，所述pparδ激动剂是(e)
‑
[4
‑
[3
‑
(4
‑
氟苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基]乙酸或其药学上可接受的盐，并且以约50mg至约200mg的剂量施用至所述哺乳动物。在一些实施方案中，所述pparδ激动剂是(e)
‑
[4
‑
[3
‑
(4
‑
氟苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基]乙酸(化合物i)或其药学上可接受的盐，并且以约75mg至约125mg的剂量施
用至所述哺乳动物。在一些实施方案中，所述pparδ激动剂化合物是(e)
‑
[4
‑
[3
‑
(4
‑
氟苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基]乙酸或其药学上可接受的盐，并且以约50mg的剂量施用于哺乳动物。在一些实施方案中，所述pparδ激动剂化合物是(e)
‑
[4
‑
[3
‑
(4
‑
氟苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基]乙酸或其药学上可接受的盐，并以约100mg的剂量施用于哺乳动物。
[0024]
在另一方面，本文提供了一种用于治疗哺乳动物中原发性线粒体肌病的方法，包括向患有原发性线粒体肌病的哺乳动物施用ppar激动剂化合物，其中所述ppar激动剂化合物是(e)
‑
[4
‑
[3
‑
(4
‑
氟苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基]乙酸，或其药学上可接受的盐。
[0025]
在一些实施方案中，治疗原发性线粒体肌病包括增加哺乳动物中的氧化磷酸化(oxphos)、改善哺乳动物的运动耐量、改善肌肉组织学、改善线粒体dna拷贝数、改善异质性水平、改善线粒体质量、减轻疼痛、减少疲劳、改善认知、改善整体健康、增加存活率或其组合。
[0026]
在一些实施方案中，过氧化物酶体增殖物激活的受体δ(pparδ)激动剂化合物以足以增加哺乳动物中的oxphos能力、上调涉及oxphos的酶或蛋白质中的任一种的基因表达或其组合的量施用于哺乳动物。在一些实施方案中，过氧化物酶体增殖物激活的受体δ(pparδ)激动剂化合物以足以增加哺乳动物中的脂肪酸氧化(fao)能力、上调涉及fao的酶或蛋白质中的任一种的基因表达或其组合的量施用于哺乳动物。
[0027]
在另一个方面，本文提供了一种用于治疗人类原发性线粒体肌病的方法，包括向患有原发性线粒体肌病的哺乳动物施用pparδ激动剂化合物，其中在治疗后，哺乳动物在疼痛、认知、身体耐力、肌肉力量、健康感或提高存活率的一个或多个方面具有改善。
[0028]
在一些实施方案中，改善是身体耐力。在一些实施方案中，改善是身体耐力，如由步行耐力或坐
‑
站测试中的一项或多项改善所证明的。在一些实施方案中，改善是肌肉力量。在一些实施方案中，肌肉力量通过握力或腿部力量来测量。在一些实施方案中，改善是增加人的存活率。
[0029]
在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物是：(e)
‑
[4
‑
[3
‑
(4
‑
氟苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基]乙酸或其药学上可接受的盐，并且以约10mg至约500mg的剂量施用于哺乳动物。在一些实施方案中，(e)
‑
[4
‑
[3
‑
(4
‑
氟苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基]乙酸或其药学上可接受的盐以约50mg至约200mg的剂量施用于哺乳动物。在一些实施方案中，(e)
‑
[4
‑
[3
‑
(4
‑
氟苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基]乙酸或其药学上可接受的盐以约75mg至约125mg的剂量施用于哺乳动物。在一些实施方案中，(e)
‑
[4
‑
[3
‑
(4
‑
氟苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基]乙酸或其药学上可接受的盐以约50mg的剂量施用于哺乳动物。在一些实施方案中，(e)
‑
[4
‑
[3
‑
(4
‑
氟苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基]乙酸或其药学上可接受的盐以约100mg的剂量施用于哺乳动物。在一些实施方案中，(e)
‑
[4
‑
[3
‑
(4
‑
氟苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基]乙酸或其药学上可接受的盐以口服溶液、口服混悬液、粉剂、丸剂、片剂或胶囊的形式全身施用于哺乳动物。在一些实施方案中，ppar激动剂化合物每天施用于哺乳动物。在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物每天一次
施用于哺乳动物。
[0030]
在一些实施方案中，将pparδ激动剂全身施用于哺乳动物。在一些实施方案中，所述pparδ激动剂经口服、通过注射或经静脉内施用至所述哺乳动物。在一些实施方案中，所述pparδ激动剂以口服溶液、口服混悬液、粉末、丸剂、片剂或胶囊的形式施用至所述哺乳动物。
[0031]
在一方面，本文描述了一种药物组合物，其包含pparδ激动剂和至少一种药学上可接受的赋形剂。在一些实施方案中，所述药物组合物被配制成通过静脉内施用、皮下施用、口服施用、吸入、鼻腔施用、皮肤施用或眼部施用而施用至哺乳动物。在一些实施方案中，所述药物组合物被配制成通过静脉内施用、皮下施用或口服施用而施用至哺乳动物。在一些实施方案中，所述药物组合物被配制成通过口服施用而施用至哺乳动物。在一些实施方案中，所述药物组合物呈片剂、丸剂、胶囊、液体、混悬液、凝胶、分散液、溶液、乳液、软膏或洗剂的形式。在一些实施方案中，所述药物组合物呈片剂、丸剂或胶囊的形式。
[0032]
在任何前述方面中是进一步的实施方案，其中所述有效量的pparδ激动剂(例如化合物i或其药学上可接受的盐)是：(a)全身施用至所述哺乳动物；并且/或者(b)口服施用至所述哺乳动物；并且/或者(c)静脉内施用至所述哺乳动物；并且/或者(d)通过注射施用至所述哺乳动物；并且/或者(e)非全身或局部施用至所述哺乳动物。
[0033]
在任何前述方面中是进一步的实施方案，其包括所述有效量的pparδ激动剂(例如化合物i或其药学上可接受的盐)的单次施用，包括进一步的实施方案，其中所述pparδ激动剂(例如化合物i或其药学上可接受的盐)每日一次施用至所述哺乳动物或者在一天的时间跨度内多次施用至所述哺乳动物。在一些实施方案中，所述pparδ激动剂(例如化合物i或其药学上可接受的盐)以连续的给药时间表施用。在一些实施方案中，所述pparδ激动剂以连续的每日给药时间表施用。
[0034]
在涉及治疗疾病或病况的任何前述方面或实施方案中是进一步的实施方案，其包括除了施用pparδ激动剂(例如化合物i或其药学上可接受的盐)之外，还施用至少一种另外的药剂。在一些实施方案中，至少一种另外的治疗剂是泛醇、泛醌、烟酸、核黄素、肌酸、l
‑
肉碱、乙酰基
‑
l
‑
肉碱、生物素、硫胺素、泛酸、吡哆醇、α
‑
硫辛酸、正庚酸、coq10、维生素e、维生素c、甲基钴胺素、亚叶酸、n
‑
乙酰
‑
l
‑
半胱氨酸(nac)、锌、亚叶酸/甲酰四氢叶酸钙、白藜芦醇、阿昔莫司、elamipretide、半胱胺、琥珀酸盐、nad激动剂、vatiquinone(epi
‑
743))、omaveloxolone(rta
‑
408)、烟酸、烟酰胺、elamipretide、kl133、kh176或其组合。在一些实施方案中，所述至少一种另外的治疗剂是奇数链脂肪酸、奇数链脂肪酮、l
‑
肉碱或其组合。在一些实施方案中，所述至少一种另外的治疗剂是三庚酸甘油酯(triheptanoin)、正庚酸、甘油三酯，或其盐，或其组合.
[0035]
在一些实施方案中，受试者是人。
[0036]
提供了制品，其包括包装材料、在包装材料内的本文所述的pparδ激动剂化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)或其药学上可接受的盐，以及表明pparδ激动剂化合物用于调节pparδ的活性，或用于治疗、预防或改善线粒体肌病的一种或多种症状的标签。
[0037]
本文所述的化合物、方法和组合物的其他目的、特征和优势将从以下详细说明中变得显而易见。然而应当理解，该详细说明和具体示例在示出具体实施方案的同时仅以说明的方式给出，因为对于本领域技术人员而言，在本公开内容的精神和范围内的各种变化
和修改将从该详细说明中变得显而易见。
附图说明
[0038]
图1示出了向遗传诊断的患有肌病的原发性线粒体肌病患者(mtdna缺陷)施用化合物1(每天一次100mg，持续12周)对12分钟步行测试的影响。9名患者在12周治疗方案的过程中显示了12分钟步行测试的改善。
[0039]
图2示出了向遗传诊断的患有肌病的原发性线粒体肌病患者(mtdna缺陷)施用化合物1(每天一次100mg，持续12周)对疼痛评分的影响。在12周治疗方案的过程中，施用化合物1的9名患者的平均短暂疼痛指数(bpi)评分下降。
具体实施方式
[0040]
健康的线粒体对正常的细胞活动至关重要。线粒体以atp的形式收集能量，同时调节细胞代谢。线粒体在细胞中发挥许多关键作用，包括氧化磷酸化、脂肪酸氧化(β
‑
氧化)、中心碳代谢和细胞生长中间体的生物合成。
[0041]
脂肪酸降解的主要途径是线粒体脂肪酸β
‑
氧化(fao)。fao是诸如肝脏、心脏和骨骼肌的器官中能量自稳态的关键代谢途径。脂肪酸转运蛋白(fatp)是完整的膜蛋白，其增强长链和极长链脂肪酸进入细胞的吸收。在胞质溶胶中，脂肪酸被酰基
‑
coa合成酶激活为酰基辅酶a(coa)酯，然后它们可以被导向多种不同的代谢途径中，例如脂质合成和fao。fao需要酰基
‑
coa的线粒体输入。由于线粒体膜对酰基
‑
coa是不可渗透的，因此需要肉碱循环以输入到线粒体中。该系统需要l
‑
肉碱，且由两种酰基转移酶、肉碱棕榈酰基转移酶1和2(cpt1和cpt2)和肉碱酰基肉碱转位酶(cact)组成。在线粒体内，酰基
‑
coa通过β
‑
氧化降解，这是四个酶促步骤的循环过程。每个循环通过释放两个羧基末端碳原子作为乙酰基
‑
coa来缩短酰基
‑
coa。fao不仅产生乙酰基
‑
coa来为克雷布斯循环(也称为三羧酸(tca)循环)和生酮提供燃料，而且还还原黄素腺嘌呤二核苷酸(到fadh2)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(到nadh)，并且这些还原的产物直接供入电子传递链(呼吸链)。为了能够完全降解脂肪酸，β
‑
氧化机制具有不同链长特异性酶。
[0042]
氧化磷酸化(oxphos)是一种代谢途径，负责以atp的形式产生大部分细胞能量。oxphos途径包括呼吸链的复合物i
‑
iv和复合物v、atp合酶。复合物i(nadh：辅酶q氧化还原酶)通过将辅酶q10(也称为coq)从其泛醌(coq；q)形式还原为泛醇(qh2)来氧化nadh，从而在线粒体内膜上产生电化学梯度。复合物ii(琥珀酸
‑
coq氧化还原酶)将克雷布斯循环(也称为三羧酸(tca)循环)与呼吸链错综复杂地联系在一起。复合物ii通过将coq从其泛醌(coq；q)形式还原为泛醇(qh2)来氧化琥珀酸。复合物iii(泛醇
‑
细胞色素c氧化还原酶)通过泛醇氧化来催化细胞色素c的还原并产生电化学梯度。复合物iv(细胞色素c氧化酶)负责呼吸链的末端酶促反应，其将电子(e
‑
)转移到分子氧并产生电化学梯度。复合物v将跨膜电化学质子(h )梯度能转化为机械能，其催化adp和磷酸盐(p)之间的化学键能以形成atp。
[0043]
健康的线粒体功能需要超过1,500种蛋白质，其中13种蛋白质由线粒体dna(mtdna)编码，其余由核(ndna)编码。约100种蛋白质直接涉及氧化磷酸化和atp的产生。破坏线粒体功能的ndna或mtdna基因的突变导致毁灭性线粒体疾病，称为原发性线粒体肌病(pmm)。在具有mtdna突变的患者中，由于单个细胞中存在多个mtdna基因组，导致同一细胞
或组织中的突变和野生型基因组(异质性)的混合物，使得遗传和临床表现进一步复杂化。
[0044]
许多常见的线粒体病症与oxphos途径的功能障碍有关。此类功能障碍可包括oxphos复合物活性的缺陷和/或oxphos复合物的稳态水平降低导致atp产生减少或其组合(nsihia
‑
sefaa,a和mckenzie,m,(2016),biosci.rep.,36,e00313,doi:10.1042/bsr20150295)。导致这些病症的缺陷可能是由以下引起的：1)编码oxphos蛋白的蛋白亚基的基因突变；2)oxphos复合物生物发生所需蛋白质的突变；或3)mtdna的复制、转录和翻译所必需的蛋白质的突变(同上)。oxphos复合物和fao途径在生化上是相关联的，因为在fao期间产生的nad和fadh2将它们的电子传递给oxphos复合物。研究表明，一个途径中的原发性病症导致另一途径中的继发性缺陷(同上)。
[0045]
由于线粒体是哺乳动物细胞中的能量产生的主要来源，因此原发性线粒体肌病的临床特征通常涉及能量需求最高的组织。此外，所有人体组织中都存在mtdna，这意味着多器官系统中发生功能障碍。最常受影响的器官系统是神经、肌肉、心脏和内分泌系统。原发性线粒体肌病通常是进展型病况，其产生重大残疾，在一些情况下产生过早死亡，通常是由于心脏或神经系统受累，如心律失常或癫痫。肌病可能是线粒体疾病的唯一临床特征，但也可能是其他线粒体疾病或病症的组成部分
[0046]
pparδ是骨骼肌中最丰富的ppar亚型，与糖酵解ii型肌纤维相比，在氧化型i肌纤维中的表达更高。短期运动和耐力训练都会导致人类和啮齿动物骨骼肌中pparδ的表达增加。啮齿动物研究表明，pparδ激活的一个关键特征是诱导骨骼肌脂肪酸氧化。在小鼠骨骼肌中激活pparδ时，纤维组成向氧化型i变化，诱导脂肪酸氧化、线粒体呼吸、氧化代谢和慢缩肌收缩器官。除了pparδ激活的代谢作用外，pparδ还刺激过氧化物酶体增殖物激活的受体γ共激活因子
‑
1α(pgc
‑
1α)，这种作用伴随着线粒体生物发生。这种类型的适应性与响应于体育锻炼观察到的适应性相同，事实上，pparδ的转基因(tg)过表达小鼠表现出增加的跑步耐力(wang等人,plos biol.2:e294(2004))。
[0047]
线粒体疾病患者的管理侧重于降低发病率和死亡率的策略以及器官特异性并发症的早期治疗。原发性线粒体肌病代表了显著未满足的医疗需求领域；目前没有针对原发性线粒体肌病患者的可用疾病改善疗法。
[0048]
在一些实施方案中，本文描述了用于治疗哺乳动物原发性线粒体肌病的方法和组合物，包括向患有原发性线粒体肌病的哺乳动物施用pparδ激动剂化合物。在一些实施方案中，本文进一步描述了用于在患有原发性线粒体肌病的哺乳动物中调节pparδ的方法和组合物，包括向患有原发性线粒体肌病的哺乳动物施用pparδ激动剂化合物。在一些实施方案中，在患有原发性线粒体肌病的哺乳动物中调节pparδ导致与原发性线粒体肌病相关的一种或多种症状的改善。在一些实施方案中，哺乳动物是人。
[0049]
在一些实施方案中，患有原发性线粒体肌病的哺乳动物已被诊断患有kearns
‑
sayre综合征(kss)、leigh综合征、母系遗传性leigh综合征(mils)、线粒体dna耗竭综合征(mds)、线粒体脑肌病、乳酸性酸中毒和中风样发作(melas)、线粒体神经胃肠道脑肌病(mngie)、肌阵挛性癫痫伴破碎红纤维(merrf)、神经性共济失调和视网膜色素变性(narp)、pearson综合征、或进行性眼外肌麻痹(peo)。
[0050]
在一些实施方案中，患有原发性线粒体肌病的哺乳动物还包括继发性线粒体肌病。在一些实施方案中，继发性线粒体肌病是指除由原发性线粒体肌病引起的异常线粒体
功能以外的任何异常线粒体功能(参见例如，d.niyazov等人，molecular syndromology 2016；7；122
‑
137)。
[0051]
在一些实施方案中，继发性线粒体肌病是遗传性继发性线粒体肌病。在一些实施方案中，继发性线粒体肌病涉及非oxphos基因的突变。在一些实施方案中，继发性线粒体肌病涉及由原发性fao缺陷引起的oxphos功能的继发性缺陷。在一些实施方案中，继发性线粒体肌病由导致继发性fao疾病的原发性oxphos缺乏引起。在一些实施方案中，继发性线粒体肌病是后天性继发性线粒体肌病。例如，后天性继发性线粒体肌病是引起氧化应激的环境因素的结果，包括但不限于衰老、炎症和线粒体毒性药物(mitotoxic drugs)。在一些实施方案中，线粒体毒性药物包括皮质类固醇、丙戊酸、苯妥英、巴比妥酸盐、丙泊酚、挥发性麻醉剂、非去极化肌肉松弛剂、局部麻醉剂、他汀类药物、贝特类、双胍类、格列酮类、β
‑
受体阻滞药、胺碘酮、神经松弛剂、抗生素或化疗药物。在一些实施方案中，化疗药物是阿霉素或基于铂的化疗药物例如顺铂。
[0052]
在一些实施方案中，本文描述了用pparδ激动剂治疗哺乳动物的方法和组合物，其中pparδ激动剂激活pparδ。在一些实施方案中，pparδ激动剂增加pparδ的表达。在一些实施方案中，pparδ激动剂增加pparδ的活性。在一些实施方案中，pparδ激动剂增加涉及线粒体功能的基因或其蛋白质的表达或活性。在一些实施方案中，基因是核dna(ndna)基因。在一些实施方案中，基因是线粒体dna(mtdna)基因。
[0053]
在一些实施方案中，pparδ激动剂增加ndna基因的表达或活性，其中ndna基因包括但不限于ndufs1、ndufs2、ndufs3、ndufs4、ndufs6、ndufs7、ndufs8、ndufv1、ndufv2、ndufa1、ndufa2、ndufa9、ndufa10、ndufa11、ndufa12、ndufa13、ndufaf2、ndufaf6、ndufb11、sdha、sdhb、sdhc、sdhd、sdhaf1、uqcrb、bcs1l、uqcrq、uqcrc2、cyc1、ttc19、lyrm7、uqcc2、uqcc3、coa5、surf1、cox10、cox14、cox15、cox20、cox6b1、fastkd2、sco1、sco2、lrpprc、taco1、pet100、atpaf2、tmem70、atp5e,atp5a1、aars2、dars2、ears2、rars2、yars2、fars2、hars2、lars2、vars2、tars2、iars2、cars2、pars2、nars2、kars、gars、sars2、mars2、c12orf65、tufm、tsfm,gfm1、mrps16、mrps22、mrpl3、mrp12、mrpl44、slc19a3、slc25a3、slc25a19,agk、serac1,taz、hibch、echs1、ethe1、mpv17、gfer,iscu、bola3、nfu1,iba57、mto1、gtp3bp、trmu、pus1、mtfmt、trit1、trnt1、trmt5、lrpprc、taco1、elac2、pnpt1、hsd17b10、mtpap、ptcd1,opa1、mfn2、dguok、tk2、tymp、mgme1、suclg1、sucla2、rnaseh1、c10orf2、polg、polg2、dna2、rrm2b、fbxl4、afg3l2、spg7和ant1。
[0054]
在一些实施方案中，ndna基因编码复合物i(nadh：泛醌氧化还原酶)、复合物ii(琥珀酸脱氢酶)、复合物iii(coq
‑
细胞色素c还原酶)、复合物iv(细胞色素c氧化酶)、复合物v(atp合酶)、氨酰基
‑
trna合成酶、释放因子、延伸因子、线粒体核糖体蛋白、硫胺素和磷酸盐的溶质载体，或其组合。在一些实施方案中，编码复合物i的基因包括ndufs1、ndufs2、ndufs3、ndufs4、ndufs6、ndufs7、ndufs8、ndufv1、ndufv2、ndufa1、ndufa2、ndufa9、ndufa10、ndufa11、ndufa12、ndufa13、ndufaf2、ndufaf6或ndufb11。在一些实施方案中，编码复合物ii的基因包括sdha、sdhb、sdhc、sdhd或sdhaf1。在一些实施方案中，编码复合物iii的基因包括uqcrb、bcs1l、uqcrq、uqcrc2、cyc1、ttc19、lyrm7、uqcc2或uqcc3。在一些实施方案中，编码复合物iv的基因包括coa5、surf1、cox10、cox14、cox15、cox20、cox6b1、fastkd2、sco1、sco2、lrpprc、taco1或pet100。在一些实施方案中，编码复合物v的基因包括
atpaf2、tmem70、atp5e或atp5a1。在一些实施方案中，编码氨酰基
‑
trna合成酶的基因包括aars2、dars2、ears2、rars2、yars2、fars2、hars2、lars2、vars2、tars2、iars2、cars2、pars2、nars2、kars、gars、sars2或mars2。在一些实施方案中，编码释放因子的基因包括c12orf65。在一些实施方案中，编码延伸因子的基因包括tufm、tsfm或gfm1。在一些实施方案中，编码线粒体核糖体蛋白的基因包括mrps16、mrps22、mrpl3、mrp12或mrpl44。在一些实施方案中，编码硫胺素和磷酸盐的溶质载的基因包括slc19a3、slc25a3或slc25a19。
[0055]
在一些实施方案中，ndna基因涉及磷脂代谢、有毒化合物代谢、二硫键中继系统、铁硫蛋白组装、trna修饰、mrna加工、线粒体融合或裂变、三磷酸脱氧核苷酸合成、蛋白质质量控制和降解、atp和adp转运或其组合。在一些实施方案中，涉及磷脂代谢的基因包括agk、serac1或taz。在一些实施方案中，涉及有毒化合物代谢的基因包括hibch、echs1、ethe1或mpv17。在一些实施方案中，涉及二硫键中继系统的基因包括gfer。在一些实施方案中，涉及铁硫蛋白组装的基因包括iscu、bola3、nfu1或iba57。在一些实施方案中，涉及trna修饰的基因包括mto1、gtp3bp、trmu、pus1、mtfmt、trit1、trnt1或trmt5。在一些实施方案中，涉及mrna加工的基因包括lrpprc、taco1、elac2、pnpt1、hsd17b10、mtpap或ptcd1。在一些实施方案中，涉及线粒体融合和裂变的基因包括opa1或mfn2。在一些实施方案中，涉及三磷酸脱氧核苷酸合成的基因包括dguok、tk2、tymp、mgme1、suclg1、sucla2、rnaseh1、c10orf2、polg、polg2、dna2或rrm2b。在一些实施方案中，涉及蛋白质质量控制和降解的基因包括fbxl4、afg3l2或spg7。在一些实施方案中，涉及atp和adp转运的基因包括ant1。
[0056]
在一些实施方案中，本文描述了使用pparδ激动剂治疗哺乳动物的方法和组合物，其中pparδ激动剂增加线粒体dna(mtdna)基因的表达或活性。在一些实施方案中，mtdna基因包含至少一个突变、缺失、缺陷或其组合。在一些实施方案中，至少一个线粒体dna(mtdna)基因中的至少一个突变包括选自m.3243a>g、m.8344a>g、m.8993t>g、m.13513g>a、m.11778g>a、m.14484t>c及其组合的突变。在一些实施方案中，至少一个线粒体dna(mtdna)基因中的至少一个突变包括突变m.3243a>g。在一些实施方案中，mtdna基因包括选自8284bp缺失、6277bp缺失、4977bp缺失及其组合的突变。
[0057]
在一些实施方案中，pparδ激动剂增加未突变的线粒体dna(mtdna)的百分比。在一些实施方案中，pparδ激动剂使未突变的mtdna的百分比增加至少或约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、95％或大于95％。在一些实施方案中，pparδ激动剂在约10％至约90％、约20％至约80％、约30％至约70％或约40％至约60％的范围内增加未突变的mtdna的百分比。在一些实施方案中，pparδ激动剂增加未突变的mtdna的百分比，使得细胞中的mtdna的比例基本上是未突变的。在一些实施方案中，细胞中未突变的mtdna与突变的mtdna的比例为至少或约1.25:1、1.5:1、1.75:1、2.0:1、2.5:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1或大于10:1。
[0058]
在一些实施方案中，pparδ激动剂增加线粒体生物发生。在一些实施方案中，pparδ激动剂增加涉及线粒体生物发生的基因或其蛋白质的表达或活性。在一些实施方案中，pparδ激动剂增加涉及线粒体生物发生的基因的转录。在一些实施方案中，pparδ激动剂增加涉及线粒体生物发生的蛋白质的翻译。在一些实施方案中，蛋白质是转录因子。在一些实施方案中，蛋白质是过氧化物酶体增殖物激活的受体γ共激活因子1
‑
α(pgc
‑
1α)。
[0059]
在一些实施方案中，本文所述的pparδ激动剂调节pgc
‑
1α的表达或活性。在一些实施方案中，pparδ激动剂增加增殖物激活的受体γ共激活因子1
‑
α基因的转录。在一些实施方案中，pparδ激动剂增加pgc
‑
1α蛋白的翻译。在一些实施方案中，pparδ激动剂调节pgc
‑
1α的翻译后修饰。例如，pparδ激动剂调节pgc
‑
1α磷酸化、乙酰化、去乙酰化、sumo化、泛素化、o
‑
连接的β
‑
n
‑
乙酰氨基葡萄糖化、甲基化或其组合。
[0060]
在一些实施方案中，pparδ激动剂减小线粒体生物发生的降低速率。在另一个实施方案中，本文描述了一种相对于对照增加哺乳动物的一个或多个组织中的线粒体生物发生的方法，其中线粒体生物发生的增加包括将在用pparδ激动剂治疗后哺乳动物中线粒体生物发生的一个或多个测量与同一哺乳动物中的线粒体生物发生的基线测量进行比较。在一些实施方案中，哺乳动物的组织包括肌肉组织。在另一个实施方案中，减小哺乳动物中的线粒体生物发生的增加速率包括比对照更快地返回到哺乳动物的线粒体生物发生的基线测量。在进一步的实施方案中，增加哺乳动物中的线粒体生物发生的降低速率包括在对照返回到基线的时间的少于95％、或少于90％、或少于85％、或少于80％、或少于75％、或少于70％、或少于65％、或少于60％、或少于55％、或少于50％的时间段后返回到哺乳动物的线粒体生物发生的基线测量。在另一个实施方案中，哺乳动物中的线粒体生物发生的增加大于相对于对照的线粒体生物发生的增加。在另一个实施方案中，相对于用pparδ激动剂治疗前的哺乳动物的线粒体生物发生的基线测量，哺乳动物中的线粒体生物发生的增加包括大于1％、大于2％、大于3％、大于4％、大于5％、大于6％、大于7％、大于8％、大于9％、大于10％、大于15％、大于20％、大于25％、大于30％、大于35％、大于40％、大于45％或大于50％的线粒体生物发生的增加。
[0061]
肌肉组织是在大多数动物中发现的包含肌肉细胞的软组织。肌肉细胞含有蛋白质细丝，蛋白质细丝可相互滑过并产生收缩，从而改变肌肉细胞的长度和形状。肌肉的功能是产生力量和运动。身体有三种类型的肌肉：a)骨骼肌(负责移动四肢和身体外部区域的肌肉)；b)心肌(心脏的肌肉)；c)平滑肌(位于动脉壁和肠壁中的肌肉)。
[0062]
如本文所用，术语“肌肉细胞”是指有助于肌肉组织的任何细胞。成肌细胞、卫星细胞、肌管和肌原纤维组织都包括在术语“肌肉细胞”中，并且都可以使用本文所述的方法进行治疗。肌肉细胞作用可以在骨骼肌、心肌和平滑肌中诱发。
[0063]
骨骼肌或随意肌通常通过肌腱锚定在骨骼上，并且通常用于影响骨骼运动，例如移动或保持姿势。尽管骨骼肌的某些控制通常作为无意识反射保持(例如，姿势肌肉或横膈膜)，但骨骼肌会对有意识的控制做出反应。平滑肌或不随意肌位于器官和结构例如食道、胃、肠、子宫、尿道和血管的壁内。与骨骼肌不同，平滑肌不受有意识控制。心肌也是一种不随意肌，但在结构上更类似于骨骼肌，并且仅存在于心脏中。心肌和骨骼肌有横纹，因为它们含有肌节，这些肌节组装成高度规则的束状布置。相比之下，平滑肌细胞的肌原纤维不在肌节中布置，因此没有横纹。
[0064]
骨骼肌进一步分为两大类型：i型(或“慢缩肌”)和ii型(或“快缩肌”)。i型肌纤维具有致密的毛细血管并富含线粒体和肌红蛋白，这使i型肌肉组织呈现出特征性的红色。i型肌纤维可以携带更多氧气并使用脂肪或碳水化合物作为燃料维持有氧活动。i型肌纤维长时间收缩，但力量很小。ii型肌纤维可以细分为三个主要亚型(iia、iix和iib)，它们的收缩速度和产生的力各不相同。ii型肌纤维收缩迅速而有力，但很快疲劳，因此在肌肉收缩变
得疼痛之前只产生短暂的无氧爆发性活动。
[0065]
使用对氧化磷酸化复合体具有特异性的荧光标记抗体，例如来自life technologies的抗
‑
oxphox复合体vd亚基抗体，或在活细胞染色中使用线粒体特异性染料，例如来自life technologies的mito
‑
tracker探针，经由组织切片染色通过线粒体质量和体积来测量线粒体的生物发生。还可以通过使用诸如qpcr的技术监测一种或多种与线粒体生物发生相关的转录因子(如pgc1α、nrf1或nrf2)的基因表达来测量线粒体的生物发生.
[0066]
通过为呼吸链提供底物，fao对于肌肉线粒体中的atp产生至关重要，尤其是在运动期间。脂肪酸的来源因运动强度而异，其中游离脂肪酸的贡献随着运动强度而增加。fao所涉及的任何酶的突变都可能导致各种临床症状，特别是在禁食期间和需要高能量的器官中。在婴儿期，患者可能出现心脏症状，例如扩张型或肥厚型心肌病和/或心律失常。或者，fao缺陷可能表现为较轻的、较晚(“成人”)发病的疾病，其特征是运动诱发的肌病和横纹肌溶解。
[0067]
ppar(ppar
‑
α、ppar
‑
δ、ppar
‑
γ)以其对fao的转录调控而闻名。ppar的激活可触发涉及fao的酶的基因表达的上调，导致残留酶活性的增加，从而校正处理的细胞中的fao通量。在一项使用培养的患者肌肉细胞的研究中，pparδ(gw 072)的特定激动剂和pparα(gw7647)(在较低程度上)刺激对照成肌细胞中的fao(djouadi,f.等人，j.clin.endocrinol.metab.90,1791
–
1797,2005)。
[0068]
用化合物1的体外研究已表明了其引起人和大鼠肌肉细胞系中脂肪酸氧化的剂量依赖性增加的能力。此外，化合物1治疗使对于体内脂肪酸代谢(cpt1b)和线粒体生物发生(pgc1α)而言重要的途径中的多种已知的pparδ调节基因的表达模式发生改变。
[0069]
在一些实施方案中，通过将鉴定为患有原发性线粒体肌病的哺乳动物的fao能力与没有原发性线粒体肌病的哺乳动物(即，对照)的fao能力进行比较来测量fao能力的缺陷。在一些实施方案中，本文描述了在患有原发性线粒体肌病的哺乳动物中增加fao能力的方法，包括向患有原发性线粒体肌病的哺乳动物施用pparδ激动剂化合物(例如，化合物1或其药学上可接受的盐)。在一些实施方案中，本文描述了将患有原发性线粒体肌病的哺乳动物的fao能力提高针对没有原发性线粒体肌病的哺乳动物所观察到的水平的约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约75％、约80％、约95％、约100％或大于100％的方法。在一些实施方案中，本文描述了将患有原发性线粒体肌病的哺乳动物的fao能力增加到与针对没有原发性线粒体肌病的哺乳动物中观察到的水平的基本相似的水平的方法，包括向患有原发性线粒体肌病的哺乳动物施用pparδ激动剂化合物(例如，化合物1，或其药学上可接受的盐)。在一些实施方案中，本文描述了将患有原发性线粒体肌病的哺乳动物的fao能力恢复(即，通过改善或增加使其正常化)到针对没有原发性线粒体肌病的哺乳动物中观察到的水平的基本相似的水平的方法，包括向患有原发性线粒体肌病的哺乳动物施用pparδ激动剂化合物(例如，化合物1，或其药学上可接受的盐)。
[0070]
在一些实施方案中，向患有原发性线粒体肌病的哺乳动物施用pparδ激动剂化合物(例如,化合物1或其药学上可接受的盐)使涉及脂肪酸β
‑
氧化途径的一种或多种酶或蛋白质的活性的缺乏恢复(即,通过增加使其正常化)。在一些实施方案中，恢复活性包括将活性增加到在没有原发性线粒体肌病的哺乳动物中观察到的基本上相似的水平。
[0071]
在一些方面，将pparδ激动剂化合物以治疗有效量施用于受试者(例如，人)。如本文所用，术语“有效量”或“治疗有效量”是指引发所需生物学或医学反应，例如减轻或缓解所治疗病况的症状的活性成分的量。在本发明的一些实施方案中，所施用的pparδ激动剂化合物的量取决于各种因素，包括但不限于受试者的体重、受试者病况的性质和/或程度等。化合物
[0072]
pparδ激动剂化合物是脂肪酸、脂质、蛋白质、肽、小分子或其他化学实体，其与细胞pparδ结合并且，不受任何特定理论限制，引发下游反应，即基因转录(天然基因转录或报告构建体基因转录)，相当于内源性配体如视黄酸，或相当于标准参考pparδ激动剂化合物如卡巴环素(carbacyclin)。
[0073]
在实施方案中，pparδ激动剂化合物是选择性激动剂。如本文所用，选择性pparδ激动剂化合物被视为化学实体，其结合至且激活细胞pparδ并且基本上不激活细胞过氧化物酶体增殖物激活受体
‑
α(pparα)和
‑
γ(pparγ)。如本文所用，选择性pparδ激动剂化合物是具有至少10倍最大激活(相比于内源性受体配体)的化学实体，其中相对于pparα和pparγ中的任一者或两者，以大于100倍的效能激活pparδ。在进一步的实施方案中，选择性pparδ激动剂化合物是化学实体，其结合至且激活人细胞pparδ并且基本上不激活人pparα和pparγ中的任一者或两者。在进一步的实施方案中，选择性pparδ激动剂化合物是化学实体，相对于pparα和pparγ中的任一者或两者，其以至少约10倍、或约20倍、或约30倍、或约40倍、或约50倍、或约100倍的效能激活pparδ。
[0074]
在一些实施方案中，本文考虑的选择性pparδ激动剂化合物能够同时接触pparδ的val312和ile328(hpparδ编号)位置处的氨基酸残基。在一些实施方案中，选择性pparδ激动剂化合物能够同时接触val298、leu303、val312和ile328(hpparδ编号)位置处的氨基酸残基。
[0075]
本文中的“激活”被定义为上述的下游反应，在ppar的情况下是基因转录。在一些情况下，基因转录被间接测量为反映所研究的特定ppar亚型的激活的蛋白质的下游产生。或者，在一些情况下，使用人工报告构建体来研究细胞中表达的单个ppar的激活。在一些情况下，待研究的特定受体的配体结合结构域与产生方便的实验室读数的转录因子的dna结合结构域(例如酵母gal4转录因子dna结合结构域)融合。在一些情况下，融合蛋白与影响萤光素酶蛋白表达的gal4增强子一起转染到实验室细胞系中。当这种体系被转染到实验室细胞系中时，受体激动剂与融合蛋白的结合将导致光发射。
[0076]
在一些实施方案中，选择性pparδ激动剂化合物例示了在选择性表达pparδ的细胞中有上述基因转录谱，而在选择性表达pparγ或pparα的细胞没有该谱。在一个实施方案中，细胞分别表达人pparδ、pparγ和pparα。
[0077]
在进一步的实施方案中，pparδ激动剂化合物可具有小于约5μm的ec
50
值，如通过下文所述的ppar瞬时反式激活测定所确定的。在一个实施方案中，ec
50
值小于约1μm。在另一实施方案中，ec
50
值小于约500nm。在另一实施方案中，ec
50
值小于约100nm。在另一实施方案中，ec
50
值小于约50nm。
[0078]
在一些情况下，ppar瞬时反式激活测定基于将分别编码嵌合测试蛋白和报告蛋白的两种质粒瞬时转染到人hek293细胞中。在一些情况下，嵌合测试蛋白是来自酵母gal4转录因子的dna结合结构域(dbd)与人ppar蛋白的配体结合结构域(lbd)的融合物。除了配体
结合袋外，ppar
‑
lbd部分还具有天然激活结构域，使融合蛋白能够作为ppar配体依赖性转录因子发挥作用。gal4 dbd指导嵌合蛋白仅与gal4增强子结合(在hek293细胞中不存在)。报告质粒含有驱动萤火虫萤光素酶蛋白表达的gal4增强子。转染后，hek293细胞表达gal4
‑
dbd
‑
ppar
‑
lbd融合蛋白。该融合蛋白将进而与控制萤光素酶表达的gal4增强子结合，并且在没有配体的情况下什么也不做。在添加ppar配体的细胞后，萤光素酶蛋白将以对应于ppar蛋白的激活的量产生。添加合适的底物后，通过光发射来测量萤光素酶蛋白的量。
[0079]
细胞培养和转染：在一些情况下，使hek293细胞在dmem 10％fcs中生长。在一些情况下，在转染前一天将细胞接种在96孔板中，以在转染时达到50
‑
80％的汇合度。在一些情况下，使用fugene转染试剂，根据制造商的说明，每孔共转染0.8mg dna，其含有0.64mg pm1a/glbd、0.1mg pcmvbgal、0.08mg pgl2(gal4)5和0.02mg padvantage。在一些情况下，允许细胞表达蛋白质48小时，然后添加化合物。
[0080]
质粒：在一些情况下，人pparδ是使用由分别来自人肝脏、脂肪组织和胎盘的mrna逆转录合成的cdna，通过pcr扩增获得的。在一些实施方案中，扩增的cdna被克隆到pcr2.1中并测序。在一些情况下，每个ppar同种型的配体结合结构域(lbd)是通过pcr生成的(pparδ：aa 128
–
c端)，并通过将框中的片段亚克隆到载体pm1中而与酵母转录因子gal4的dna结合结构域(dbd)融合(sadowski等人,(1992),gene 118,137)，生成质粒pm1αlbd、pm1γlbd和pm1δ。在一些情况下，随后融合物通过测序来验证。在一些情况下，通过将编码gal4识别序列的5个重复序列的寡核苷酸(webster等人,(1988),nucleic acids res.16,8192)插入载体pgl2启动子(promega)中，生成质粒pgl2(gal4)5，来构建报告蛋白。pcmvbgal在一些情况下是从clontech购买的，而padvantage在一些情况下是从promega购买的。
[0081]
化合物：在一些情况下，将化合物溶解在dmso中并在添加到细胞时以1:1000稀释。在一些情况下，以0.001至300μm的浓度范围对化合物进行四重测试。在一些情况下，将细胞用化合物处理24小时，然后进行萤光素酶测定。在一些情况下，每种化合物在至少两个独立的实验中进行测试。
[0082]
萤光素酶测定：在一些情况下，吸出包含测试化合物的培养基，并且在一些情况下，将包含1mm mg

和ca

的100μl pbs添加到每个孔中。在一些实施方案中，根据制造商的说明(packard instruments)使用luclite试剂盒进行萤光素酶测定。在一些情况下，光发射通过在packard lumicounter上计数进行量化。为了测量β
‑
半乳糖苷酶活性，在一些情况下，将来自每种转染裂解物的25ml上清液转移到新的微板中。在一些实施方案中，使用来自promega的试剂盒在微孔板中进行β
‑
半乳糖苷酶测定并在labsystems ascent multiscan读数器中读取。在一些情况下，将β
‑
半乳糖苷酶数据用于标准化(转染效率、细胞生长等)萤光素酶数据。
[0083]
统计方法：在一些情况下，化合物的活性计算为与未处理样品相比的倍数诱导。在一些实施方案中，对于每种化合物，功效(最大活性)作为与wy14,643对于pparα、罗格列酮对于pparγ和卡巴环素对于pparδ相比的相对活性给出。ec
50
是产生50％最大观察活性的浓度。在一些情况下，使用graphpad prism 3.02(graphpad software,san diego,ca)通过非线性回归计算ec
50
值。
[0084]
在进一步的实施方案中，pparδ激动剂化合物具有小于约1000g/mol的分子量、或小于约950g/mol的分子量、或小于约900g/mol的分子量、或小于约850g/mol的分子量、或小
于约800g/mol的分子量、或小于约750g/mol的分子量、或小于约700g/mol的分子量、或小于约650g/mol的分子量、或小于约600g/mol的分子量、或小于约550g/mol的分子量、或小于约500g/mol的分子量、或小于约450g/mol的分子量、或小于约400g/mol的分子量、或小于约350g/mol的分子量、或小于约300g/mol的分子量、或小于约250g/mol的分子量。在另一实施方案中，pparδ激动剂化合物具有大于约200g/mol的分子量、或大于约250g/mol的分子量、或大于约250g/mol的分子量、或大于约300g/mol的分子量、或大于约350g/mol的分子量、或大于约400g/mol的分子量、或大于约450g/mol的分子量、或大于约500g/mol的分子量、或大于约550g/mol的分子量、或大于约600g/mol的分子量、或大于约650g/mol的分子量、或大于约700g/mol的分子量、或大于约750g/mol的分子量、或大于约800g/mol的分子量、或大于约850g/mol的分子量、或大于约900g/mol的分子量、或大于约950g/mol的分子量、或大于约1000g/mol的分子量。在一些实施方案中，本段中上述的任何上限和下限被组合。
[0085]
在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物是任何以下公开的专利申请中公开的pparδ激动剂化合物：wo 97/027847、wo 97/027857、wo 97/028115、wo 97/028137、wo 97/028149、wo 98/027974、wo 99/004815、wo 2001/000603、wo 2001/025181、wo 2001/025226、wo 2001/034200、wo 2001/060807、wo 2001/079197、wo 2002/014291、wo 2002/028434、wo 2002/046154、wo 2002/050048、wo 2002/059098、wo 2002/062774、wo 2002/070011、wo 2002/076957、wo 2003/016291、wo 2003/024395、wo 2003/033493、wo 2003/035603、wo 2003/072100、wo 2003/074050、wo 2003/074051、wo 2003/074052、wo 2003/074495、wo 2003/084916、wo 2003/097607、wo 2004/000315、wo 2004/000762、wo 2004/005253、wo 2004/037776、wo 2004/060871、wo 2004/063165、wo 2004/063166、wo 2004/073606、wo 2004/080943、wo 2004/080947、wo 2004/092117、wo 2004/092130、wo 2004/093879、wo 2005/060958、wo 2005/097098、wo 2005/097762、wo 2005/097763、wo 2005/115383、wo 2006/055187、wo 2007/003581和wo 2007/071766(其中每一个的这些pparδ激动剂化合物并入本文)。
[0086]
在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物是任何以下公开的专利申请中公开的pparδ激动剂化合物：wo2014/165827；wo2016/057660；wo2016/057658；wo2017/180818；wo2017/062468；和wo/2018/067860(其中每一个的这些pparδ激动剂化合物并入本文)。
[0087]
在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物是任何以下公开的专利申请中公开的pparδ激动剂化合物：美国专利申请公开号20160023991、20170226154、20170304255和20170305894(其中每一个的这些pparδ激动剂化合物并入本文)。
[0088]
在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物是苯氧基烷基羧酸化合物。在一些实施方案中，苯氧基烷基羧酸化合物是2
‑
甲基苯氧基烷基羧酸化合物。
[0089]
在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物是苯氧基烷基羧酸化合物，即，苯氧基乙酸化合物、苯氧基丙酸化合物、苯氧基丙烯酸化合物、苯氧基丁酸化合物、苯氧基丁烯酸化合物、苯氧基戊酸化合物、苯氧基戊烯酸化合物、苯氧基己酸化合物、苯氧基己烯酸化合物、苯氧基辛酸化合物、苯氧基辛烯酸化合物、苯氧基壬酸化合物、苯氧基壬烯酸化合物、苯氧基癸酸化合物或苯氧基癸烯酸化合物。在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物是苯氧基乙酸化合物或苯氧基己酸化合物。在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物是苯氧基乙酸化合物。在一些实施方案中，苯氧基乙酸化合物是2
‑
甲基苯氧基乙酸化合物。在一些实施方案
中，pparδ激动剂化合物是苯氧基己酸化合物。
[0090]
在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物是苯氧基乙酸化合物、((苯甲酰胺基甲基)苯氧基)己酸化合物、((杂芳基甲基)苯氧基)己酸化合物、甲基硫代苯氧基乙酸化合物或烯丙氧基苯氧基乙酸化合物。
[0091]
在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物是((苯甲酰胺基甲基)苯氧基)己酸化合物。
[0092]
在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物是((杂芳基甲基)苯氧基)己酸化合物。在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物是((咪唑基甲基)苯氧基)己酸化合物。在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物是咪唑
‑1‑
基甲基苯氧基己酸化合物。在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物是6
‑
(2
‑
((2
‑
苯基
‑
1h
‑
咪唑
‑1‑
基)甲基)苯氧基)己酸。
[0093]
在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物是烯丙氧基苯氧基乙酸化合物。在一些实施方案中，烯丙氧基苯氧基乙酸化合物是4
‑
烯丙氧基
‑2‑
甲基苯氧基)乙酸化合物。
[0094]
在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物是甲基硫代苯氧基乙酸化合物。在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物是4
‑
(甲基硫代)苯氧基)乙酸化合物。
[0095]
在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物是选自下组的苯氧基烷基羧酸化合物：(z)
‑
[2
‑
甲基
‑4‑
[3
‑
(4
‑
甲基苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑
苯氧基]乙酸；(e)
‑
[2
‑
甲基
‑4‑
[3
‑
[4
‑
[3
‑
(吡唑
‑1‑
基)丙
‑1‑
炔基]苯基]
‑3‑
(4
‑
三氟甲基苯基)
‑
烯丙氧基]苯氧基]乙酸；(e)
‑
[4
‑
[3
‑
(4
‑
氟苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基]乙酸(化合物1)；(e)
‑
[2
‑
甲基
‑4‑
[3
‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]
‑3‑
(4
‑
三氟甲基苯基)烯丙氧基]
‑
苯氧基]乙酸；(e)
‑
[4
‑
[3
‑
(4
‑
氯苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基]乙酸；(e)
‑
[4
‑
[3
‑
(4
‑
氯苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑2‑
甲基苯基]
‑
丙酸；{4
‑
[3
‑
异丁氧基
‑5‑
(3
‑
吗啉
‑4‑
基
‑
丙
‑1‑
炔基)
‑
苄硫基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基}
‑
乙酸；{4
‑
[3
‑
异丁氧基
‑5‑
(3
‑
吗啉
‑4‑
基
‑
丙
‑1‑
炔基)
‑
苯硫基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基}
‑
乙酸；以及{4
‑
[3,3
‑
双
‑
(4
‑
溴
‑
苯基)
‑
烯丙氧基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基}
‑
乙酸；(r)
‑3‑
甲基
‑6‑
(2
‑
((5
‑
甲基
‑2‑
(4
‑
(三氟甲基)苯基)
‑
1h
‑
咪唑
‑1‑
基)甲基)苯氧基)己酸；(r)
‑3‑
甲基
‑6‑
(2
‑
((5
‑
甲基
‑2‑
(6
‑
(三氟甲基)吡啶
‑3‑
基)
‑
1h
‑
咪唑
‑1‑
基)甲基)苯氧基)己酸；(e)
‑
[4
‑
[3
‑
(4
‑
氟苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基]乙酸(化合物1)；2
‑
{4
‑
[({2
‑
[2
‑
氟
‑4‑
(三氟甲基)苯基]
‑4‑
甲基
‑
1,3
‑
噻唑
‑5‑
基}甲基)硫基]
‑2‑
甲基苯氧基}
‑2‑
甲基丙酸(索格列扎；gw677954)；2
‑
[2
‑
甲基
‑4‑
[[3
‑
甲基
‑4‑
[[4
‑
(三氟甲基)苯基]甲氧基]苯基]硫代]苯氧基]
‑
乙酸；2
‑
[2
‑
甲基
‑4‑
[[[4
‑
甲基
‑2‑
[4
‑
(三氟甲基)苯基]
‑5‑
噻唑基]甲基]硫代]苯氧基]
‑
乙酸(gw
‑
501516)；[4
‑
[[[2
‑
[3
‑
氟
‑4‑
(三氟甲基)苯基]
‑4‑
甲基
‑5‑
噻唑基]甲基]硫代]
‑2‑
甲基苯氧基]乙酸(gw0742，也称gw610742)；2
‑
[2,6二甲基
‑4‑
[3
‑
[4
‑
(甲基硫代)苯基]
‑3‑
氧代
‑
1(e)
‑
丙烯基]苯氧基]
‑2‑
甲基丙酸(elafibranor；gft
‑
505)；{2
‑
甲基
‑4‑
[5
‑
甲基
‑2‑
(4
‑
三氟甲基
‑
苯基)
‑
2h
‑
[1,2,3]三唑
‑4‑
基甲硫基]
‑
苯氧基}
‑
乙酸；以及[4
‑
({(2r)
‑2‑
乙氧基
‑3‑
[4
‑
(三氟甲基)苯氧基]丙基}硫基)
‑2‑
甲基苯氧基]乙酸(seladelpar；mbx
‑
8025)；(s)
‑4‑
[顺式
‑
2,6
‑
二甲基
‑4‑
(4
‑
三氟甲氧基
‑
苯基)哌嗪
‑1‑
磺酰基]
‑
茚满
‑2‑
羧酸或其甲苯磺酸盐(kd
‑
3010)；(2s)
‑2‑
{4
‑
丁氧基
‑3‑
[({[2
‑
氟
‑4‑
(三氟甲基)苯基]羰基}氨基)甲基]苄基}丁酸(tipp
‑
204)；[4
‑
[3
‑
(4
‑
乙酰基
‑3‑
羟基
‑2‑
丙基苯氧基)丙氧基]苯氧基]乙酸(l
‑
165,
0411)；2
‑
(4
‑
{2
‑
[(4
‑
氯苯甲酰基)氨基]乙基}苯氧基)
‑2‑
甲基丙酸(苯扎贝特)；或其药学上可接受的盐。
[0096]
在另一实施方案中，pparδ激动剂化合物是选自下组的2
‑
甲基苯氧基烷基羧酸化合物：(e)
‑
[4
‑
[3
‑
(4
‑
氟苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基]乙酸(化合物1)；2
‑
{4
‑
[({2
‑
[2
‑
氟
‑4‑
(三氟甲基)苯基]
‑4‑
甲基
‑
1,3
‑
噻唑
‑5‑
基}甲基)硫基]
‑2‑
甲基苯氧基}
‑2‑
甲基丙酸(索格列扎；gw677954)；2
‑
[2
‑
甲基
‑4‑
[[3
‑
甲基
‑4‑
[[4
‑
(三氟甲基)苯基]甲氧基]苯基]硫代]苯氧基]
‑
乙酸；2
‑
[2
‑
甲基
‑4‑
[[[4
‑
甲基
‑2‑
[4
‑
(三氟甲基)苯基]
‑5‑
噻唑基]甲基]硫代]苯氧基]
‑
乙酸(gw
‑
501516)；[4
‑
[[[2
‑
[3
‑
氟
‑4‑
(三氟甲基)苯基]
‑4‑
甲基
‑5‑
噻唑基]甲基]硫代]
‑2‑
甲基苯氧基]乙酸(gw0742，也称gw610742)；2
‑
[2,6二甲基
‑4‑
[3
‑
[4
‑
(甲基硫代)苯基]
‑3‑
氧代
‑
1(e)
‑
丙烯基]苯氧基]
‑2‑
甲基丙酸(elafibranor；gft
‑
505)；{2
‑
甲基
‑4‑
[5
‑
甲基
‑2‑
(4
‑
三氟甲基
‑
苯基)
‑
2h
‑
[1,2,3]三唑
‑4‑
基甲硫基]
‑
苯氧基}
‑
乙酸；以及[4
‑
({(2r)
‑2‑
乙氧基
‑3‑
[4
‑
(三氟甲基)苯氧基]丙基}硫基)
‑2‑
甲基苯氧基]乙酸(seladelpar；mbx
‑
8025)。
[0097]
在另一实施方案中，pparδ激动剂化合物是选自下组的化合物：(s)
‑4‑
[顺式
‑
2,6
‑
二甲基
‑4‑
(4
‑
三氟甲氧基
‑
苯基)哌嗪
‑1‑
磺酰基]
‑
茚满
‑2‑
羧酸或其甲苯磺酸盐(kd
‑
3010)；(2s)
‑2‑
{4
‑
丁氧基
‑3‑
[({[2
‑
氟
‑4‑
(三氟甲基)苯基]羰基}氨基)甲基]苄基}丁酸(tipp
‑
204)；[4
‑
[3
‑
(4
‑
乙酰基
‑3‑
羟基
‑2‑
丙基苯氧基)丙氧基]苯氧基]乙酸(l
‑
165,0411)；以及2
‑
(4
‑
{2
‑
[(4
‑
氯苯甲酰基)氨基]乙基}苯氧基)
‑2‑
甲基丙酸(苯扎贝特)。
[0098]
在另一实施方案中，pparδ激动剂化合物是选自下组的化合物：索格列扎；洛贝格列酮(lobeglitazone)；萘格列酮(netoglitazone)；和爱沙列酮(isaglitazone)；2
‑
(4
‑
{2
‑
[(4
‑
氯苯甲酰基)氨基]乙基}苯氧基)
‑2‑
甲基丙酸(苯扎贝特)；2
‑
[2
‑
甲基
‑4‑
[[3
‑
甲基
‑4‑
[[4
‑
(三氟甲基)苯基]甲氧基]苯基]硫代]苯氧基]
‑
乙酸(参见wo 2003/024395)；(s)
‑4‑
[顺式
‑
2,6
‑
二甲基
‑4‑
(4
‑
三氟甲氧基
‑
苯基)哌嗪
‑1‑
磺酰基]
‑
茚满
‑2‑
羧酸或其甲苯磺酸盐(kd
‑
3010)；(2s)
‑2‑
{4
‑
丁氧基
‑3‑
[({[2
‑
氟
‑4‑
(三氟甲基)苯基]羰基}氨基)甲基]苄基}丁酸(tipp
‑
204)；2
‑
[2
‑
甲基
‑4‑
[[[4
‑
甲基
‑2‑
[4
‑
(三氟甲基)苯基]
‑5‑
噻唑基]甲基]硫代]苯氧基]
‑
乙酸(gw
‑
501516)；2
‑
[2,6二甲基
‑4‑
[3
‑
[4
‑
(甲基硫代)苯基]
‑3‑
氧代
‑
1(e)
‑
丙烯基]苯氧基]
‑2‑
甲基丙酸(gft
‑
505)；{2
‑
甲基
‑4‑
[5
‑
甲基
‑2‑
(4
‑
三氟甲基
‑
苯基)
‑
2h
‑
[1,2,3]三唑
‑4‑
基甲硫基]
‑
苯氧基}
‑
乙酸；以及[4
‑
({(2r)
‑2‑
乙氧基
‑3‑
[4
‑
(三氟甲基)苯氧基]丙基}硫基)
‑2‑
甲基苯氧基]乙酸(seladelpar；mbx
‑
8025)。
[0099]
在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物是(e)
‑
[4
‑
[3
‑
(4
‑
氟苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基]乙酸(化合物1)：
[0100]
(e)
‑
[4
‑
[3
‑
(4
‑
氟苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基]乙酸的化学合成的示例在pct申请公布号wo2007/071766的实施例10中获悉。
[0101]
将化合物1对全部三种人ppar亚型(hppar)进行了测试：hpparα、hpparγ和hpparδ，使用测试这种活性的体外测定。在人、猴和小鼠中，相比于pparα和pparγ，化合物1对pparδ表现出明显更高的选择性(参见表1)。在一些情况下，化合物1充当pparδ的完全激动剂，并且仅充当pparα和pparγ两者的部分激动剂。在一些情况下，化合物1在测试这种活性的反式激活测定中对pparα和/或pparγ显示出可忽略的活性。表1：化合物1在人、猴和小鼠ppar受体反式激活测定中的效力表1：化合物1在人、猴和小鼠ppar受体反式激活测定中的效力
[0102]
在一些实施方案中，化合物1不显示任何人类视黄醇x受体(hrxr)活性，也未显示对核受体fxr、lxr
α
或lxr
β
的活性。作为pparδ的完全激动剂和pparα和pparγ二者的部分激动剂。
[0103]
在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物是(z)
‑
[2
‑
甲基
‑4‑
[3
‑
(4
‑
甲基苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑
苯氧基]乙酸：
[0104]
(z)
‑
[2
‑
甲基
‑4‑
[3
‑
(4
‑
甲基苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑
苯氧基]乙酸的化学合成的示例可见于pct申请公开号wo2007/071766的实施例3。
[0105]
在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物是(e)
‑
[2
‑
甲基
‑4‑
[3
‑
[4
‑
[3
‑
(吡唑
‑1‑
基)丙
‑1‑
炔基]苯基]
‑3‑
(4
‑
三氟甲基苯基)
‑
烯丙氧基]苯氧基]乙酸：
[0106]
(e)
‑
[2
‑
甲基
‑4‑
[3
‑
[4
‑
[3
‑
(吡唑
‑1‑
基)丙
‑1‑
炔基]苯基]
‑3‑
(4
‑
三氟甲基苯基)
‑
烯丙氧基]苯氧基]乙酸的化学合成的示例可见于pct申请公开号wo 2007/071766的实施例4。
[0107]
在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物是(e)
‑
[2
‑
甲基
‑4‑
[3
‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]
‑3‑
(4
‑
三氟甲基苯基)烯丙氧基]
‑
苯氧基]乙酸：
[0108]
(e)
‑
[2
‑
甲基
‑4‑
[3
‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]
‑3‑
(4
‑
三氟甲基苯基)烯丙氧基]
‑
苯氧基]乙酸的化学合成的示例可见于pct申请公开号wo 2007/071766的实施例20。
[0109]
在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物是(e)
‑
[4
‑
[3
‑
(4
‑
氯苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基]乙酸：
[0110]
(e)
‑
[4
‑
[3
‑
(4
‑
氯苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基]乙酸的化学合成的示例可见于pct申请公开号wo2007/071766的实施例46。
[0111]
在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物是(e)
‑
[4
‑
[3
‑
(4
‑
氯苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗
啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑2‑
甲基苯基]
‑
丙酸：
[0112]
(e)
‑
[4
‑
[3
‑
(4
‑
氯苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑2‑
甲基苯基]
‑
丙酸的化学合成的示例可见于pct申请公开号wo2007/071766的实施例63。
[0113]
在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物是{4
‑
[3,3
‑
双
‑
(4
‑
溴
‑
苯基)
‑
烯丙氧基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基}
‑
乙酸：
[0114]
{4
‑
[3,3
‑
双
‑
(4
‑
溴
‑
苯基)
‑
烯丙氧基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基}
‑
乙酸的化学合成的示例可见于pct申请公开号wo 2004/037776的实施例10。
[0115]
在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物是{4
‑
[3
‑
异丁氧基
‑5‑
(3
‑
吗啉
‑4‑
基
‑
丙
‑1‑
炔基)
‑
苄硫基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基}
‑
乙酸：
[0116]
{4
‑
[3
‑
异丁氧基
‑5‑
(3
‑
吗啉
‑4‑
基
‑
丙
‑1‑
炔基)
‑
苄硫基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基}
‑
乙酸的化学合成的示例可见于pct申请公开号wo 2007/003581的实施例9。
[0117]
在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物是{4
‑
[3
‑
异丁氧基
‑5‑
(3
‑
吗啉
‑4‑
基
‑
丙
‑1‑
炔基)
‑
苯硫基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基}
‑
乙酸：
[0118]
{4
‑
[3
‑
异丁氧基
‑5‑
(3
‑
吗啉
‑4‑
基
‑
丙
‑1‑
炔基)
‑
苯硫基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基}
‑
乙酸的化学合成的示例可见于pct申请公开号wo 2007/003581的实施例35。
[0119]
因此，在一个实施方案中，pparδ激动剂化合物是选自下组的化合物：(z)
‑
[2
‑
甲基
‑4‑
[3
‑
(4
‑
甲基苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑
苯氧基]乙酸；(e)
‑
[2
‑
甲基
‑4‑
[3
‑
[4
‑
[3
‑
(吡唑
‑1‑
基)丙
‑1‑
炔基]苯基]
‑3‑
(4
‑
三氟甲基苯基)
‑
烯丙氧基]苯氧基]乙酸；(e)
‑
[4
‑
[3
‑
(4
‑
氟苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基]乙酸；(e)
‑
[2
‑
甲基
‑4‑
[3
‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]
‑3‑
(4
‑
三氟甲基苯基)烯丙氧基]
‑
苯氧基]乙酸；(e)
‑
[4
‑
[3
‑
(4
‑
氯苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基]乙酸；(e)
‑
[4
‑
[3
‑
(4
‑
氯苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑2‑
甲基苯基]
‑
丙酸；{4
‑
[3
‑
异丁氧基
‑5‑
(3
‑
吗啉
‑4‑
基
‑
丙
‑1‑
炔基)
‑
苄硫基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基}
‑
乙酸；{4
‑
[3
‑
异丁氧基
‑5‑
(3
‑
吗啉
‑4‑
基
‑
丙
‑1‑
炔基)
‑
苯硫基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基}
‑
乙酸；以及{4
‑
[3,3
‑
双
‑
(4
‑
溴
‑
苯基)
‑
烯丙氧基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基}
‑
乙酸；或其药学上可接受的盐。
[0120]
在进一步的实施方案中，pparδ激动剂化合物是(e)
‑
[4
‑
[3
‑
(4
‑
氟苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基]乙酸或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物是(e)
‑
[4
‑
[3
‑
(4
‑
氟苯基)
‑3‑
[4
‑
[3
‑
(吗啉
‑4‑
基)丙炔基]苯基]烯丙氧基]
‑2‑
甲基
‑
苯氧基]乙酸钠盐。
[0121]
在进一步的实施方案中，pparδ激动剂化合物是化合物1、化合物2、化合物3、化合物4、化合物5、化合物6、化合物7、化合物8、化合物9、化合物10、化合物11、化合物12、化合物13、化合物14、化合物15或化合物16，公开于wu等人,proc natl acad sci usa 2017年3月28日,114(13)e2563
‑
e2570中。
[0122]
在进一步的实施方案中，pparδ激动剂化合物是(r)
‑3‑
甲基
‑6‑
(2
‑
((5
‑
甲基
‑2‑
(4
‑
(三氟甲基)苯基)
‑
1h
‑
咪唑
‑1‑
基)甲基)苯氧基)己酸或(r)
‑3‑
甲基
‑6‑
(2
‑
((5
‑
甲基
‑2‑
(6
‑
(三氟甲基)吡啶
‑3‑
基)
‑
1h
‑
咪唑
‑1‑
基)甲基)苯氧基)己酸，或其药学上可接受的盐。
[0123]
在进一步的实施方案中，pparδ激动剂化合物是(r)
‑3‑
甲基
‑6‑
(2
‑
((5
‑
甲基
‑2‑
(4
‑
(三氟甲基)苯基)
‑
1h
‑
咪唑
‑1‑
基)甲基)苯氧基)己酸或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物是(r)
‑3‑
甲基
‑6‑
(2
‑
((5
‑
甲基
‑2‑
(4
‑
(三氟甲基)苯基)
‑
1h
‑
咪唑
‑1‑
基)甲基)苯氧基)己酸的半硫酸盐。在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物是(r)
‑3‑
甲基
‑6‑
(2
‑
((5
‑
甲基
‑2‑
(4
‑
(三氟甲基)苯基)
‑
1h
‑
咪唑
‑1‑
基)甲基)苯氧基)己酸的葡甲胺盐。
[0124]
在进一步的实施方案中，pparδ激动剂化合物是(r)
‑3‑
甲基
‑6‑
(2
‑
((5
‑
甲基
‑2‑
以及其他形式的使用不是限制性的。本文使用的章节标题仅用于组织目的，不应被解释为限制所描述的主题。
[0130]
如本文所用，关于制剂、组合物或成分的术语“可接受的”是指对被治疗的受试者的总体健康没有持续的有害影响。
[0131]
如本文所用，术语“调节”是指直接或间接与靶标相互作用以改变靶标的活性，仅作为示例包括增强靶标的活性，抑制靶标的活性，限制靶标的活性，或扩展靶标的活性。
[0132]
如本文所用，术语“调节剂”是指直接或间接与靶标相互作用的分子。相互作用包括但不限于激动剂、部分激动剂、反向激动剂、拮抗剂、降解剂或其组合的相互作用。在一些实施方案中，调节剂是拮抗剂。在一些实施方案中，调节剂是降解剂。
[0133]
如本文所用，术语“施用”及类似词语是指在一些情况下能够将化合物或组合物递送至所需生物作用位点的方法。这些方法包括但不限于口服途径、十二指肠内途径、肠胃外注射(包括静脉内、皮下、腹膜内、肌肉内、血管内或输注)、局部和直肠施用。本领域技术人员熟悉可用于本文所述化合物和方法的施用技术。在一些实施方案中，本文所述的化合物和组合物口服施用。
[0134]
如本文所用，术语“共同施用”等意在包括向单个患者施用所选择的治疗剂，并且旨在包括其中通过相同或不同施用途径或在同时或不同时间施用药剂的治疗方案。
[0135]
如本文所用，术语“有效量”或“治疗有效量”是指施用的药剂或化合物的足量，其将在一定程度上缓解正在治疗的疾病或病况的一种或多种症状。结果包括减少和/或缓解疾病的体征、症状或原因，或生物系统的任何其他期望的改变。例如，用于治疗用途的“有效量”是提供疾病症状的临床显著减少所需的包含本文公开的化合物的组合物的量。在任何个别情况下，适当的“有效”量任选地使用例如剂量递增研究等技术确定。
[0136]
如本文所用，术语“增强”是指增加或延长所需效果的效力或持续时间。因此，关于增强治疗剂的效果，术语“增强”是指在效力或持续时间方面增加或延长其他治疗剂对系统的效果的能力。如本文所用，“增强有效量”是指足以增强另一种治疗剂在所需系统中的效果的量。
[0137]
如本文所用，术语“药物组合”是指由超过一种活性成分的混合或组合产生的产品，并且包括活性成分的固定和非固定组合。术语“固定组合”是指活性成分，例如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐与共用药剂二者以单一实体或剂量的形式同时施用于患者。术语“非固定组合”是指活性成分，例如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐与共用药剂剂作为单独的实体同时、并行或依次(没有特定的间隔时间限制)施用于患者，其中这样的施用在患者体内提供了两种化合物的有效水平。后者也适用于鸡尾酒疗法，例如三种或更多种活性成分的施用。
[0138]
术语“试剂盒”和“制品”用作同义词。
[0139]
术语“受试者”或“患者”包括哺乳动物。哺乳动物的示例包括但不限于哺乳动物类的任何成员：人，非人类灵长类动物如黑猩猩、以及其他猿和猴物种；农场动物，如牛、马、绵羊、山羊、猪；家养动物，如兔、狗和猫；实验室动物，包括啮齿类动物，例如大鼠、小鼠和豚鼠等。在一方面，哺乳动物是人。
[0140]
如本文所用，术语“治疗”包括缓解、减轻或改善疾病或病况的至少一种症状，预防另外的症状，抑制疾病或病况，例如阻止疾病或病况的发展、缓解疾病或病况、引起疾病或
病况的消退、缓解由疾病或病况引起的状况，或预防性和/或治疗性地停止疾病或病况的症状。药物组合物
[0141]
在一些实施方案中，将本文所述的化合物配制成药物组合物。使用一种或多种药学上可接受的无活性成分以常规方式配制药物组合物，这些无活性成分有助于将活性化合物加工成药用制剂。合适的配方取决于所选择的施用途径。例如，本文所述的药物组合物的综述可见于remington:the science and practice of pharmacy,第19版(easton,pa.:mack publishing company,1995)；hoover,john e.,remington’s pharmaceutical sciences,mack publishing co.,easton,pennsylvania 1975；liberman,h.a.和lachman,l.编,pharmaceutical dosage forms,marcel decker,new york,n.y.,1980；以及pharmaceutical dosage forms and drug delivery systems,第7版(lippincott williams&wilkins1999)中，该公开内容通过引用并入本文。
[0142]
在一些实施方案中，本文所述的化合物单独施用或在药物组合物中与药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂联合施用。本文所述的化合物和组合物的施用可以通过能够将化合物递送至作用部位的任何方法进行。这些方法包括但不限于经由肠内途径(包括口服、胃或十二指肠饲管、直肠栓剂和直肠灌肠剂)、肠胃外途径(注射或输注，包括动脉内、心内、皮内、十二指肠内、髓内、肌肉内、骨内、腹膜内、鞘内、血管内、静脉内、玻璃体内、硬膜外和皮下)、吸入、透皮、经粘膜、舌下、口腔和局部(包括表皮、皮肤、灌肠剂、滴眼剂、滴耳剂、鼻内、阴道)施用来递送，但在一些情况下，最合适的途径取决于例如接受者的病况和病症。仅举例来说，在一些情况下，本文所述的化合物通过例如手术期间的局部输注、局部施加例如乳膏或软膏、注射、导管或植入物而局部施用于需要治疗的区域。在一些情况下，施用是通过直接注射到病变组织或器官的部位。
[0143]
在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物包含在药物组合物中。如本文所用，术语“药物组合物”是指包含药物活性成分(例如，pparδ激动剂化合物)和至少一种载体的液体或固体组合物，其中没有成分在施用的量下通常是生物学上不期望的。
[0144]
掺入pparδ激动剂化合物的药物组合物采用药学上可接受的任何物理形式。在一些实施方案中，本文所述的药物组合物是用于口服施用的合适形式。在此类药物组合物的一个实施方案中，掺入治疗有效量的pparδ激动剂化合物。
[0145]
在一些实施方案中，使用常规惰性成分和配制药物组合物的方式。在一些实施方案中，遵循配制药物组合物的已知方法。考虑了所有常用类型的组合物，包括但不限于片剂、咀嚼片剂、胶囊和溶液。然而，pparδ激动剂化合物的量最好定义为有效量，即为需要此类治疗的受试者提供期望剂量的pparδ激动剂化合物的量。在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物的活性不取决于组合物的性质，因此仅为方便和经济而选择和配制组合物。将本文所述的任何pparδ激动剂化合物配制成任何期望形式的组合物。
[0146]
在一些情况下，通过将pparδ激动剂化合物与合适的稀释剂混合并将适量的混合物填充在胶囊中来制备胶囊。通常的稀释剂包括惰性粉状物质，例如许多不同种类的淀粉、粉状纤维素，尤其是结晶和微晶纤维素，糖类如果糖、甘露醇和蔗糖、谷物粉和类似的可食用粉末。
[0147]
在一些情况下，片剂通过直接压片、通过湿法制粒或通过干法制粒制备。他们的制
剂通常掺入稀释剂、粘合剂、润滑剂和崩解剂，以及pparδ激动剂化合物。典型的稀释剂包括例如，各种类型的淀粉、乳糖、甘露醇、高岭土、磷酸钙或硫酸钙、无机盐例如氯化钠、和糖粉。粉状纤维素衍生物也是有用的。典型的片剂粘合剂是诸如淀粉、明胶和糖类(诸如乳糖、果糖、葡萄糖等)的物质。天然和合成树胶也很方便，包括阿拉伯树胶、海藻酸盐、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷等。在一些情况下，聚乙二醇、乙基纤维素和蜡用作粘合剂。
[0148]
在一些情况下，片剂制剂中的润滑剂有助于防止片剂和冲头粘在模具中。在一些情况下，润滑剂选自固体，诸如滑石、硬脂酸镁和硬脂酸钙、硬脂酸和氢化植物油。
[0149]
片剂崩解剂是在润湿时溶胀以分解片剂并释放化合物的物质。它们包括淀粉、粘土、纤维素、取向物(align)和树胶。更具体地，片剂崩解剂包括玉米和马铃薯淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、木材纤维素、粉状天然海绵、阳离子交换树脂、海藻酸、瓜尔胶、柑桔渣、羧甲基纤维素和十二烷基硫酸钠。
[0150]
肠溶制剂通常用于保护活性成分免受胃中强酸性内容物的影响。此类制剂是通过用在酸性环境中不溶而在碱性环境中可溶的聚合物膜包衣固体剂型来产生的。示例性膜是邻苯二甲酸乙酸纤维素、聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯和醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯。
[0151]
片剂通常用作为调味剂和密封剂的糖包衣。在一些情况下，pparδ激动剂化合物通过在制剂中使用大量令人愉悦口感的物质如甘露醇来配制成咀嚼片。
[0152]
在一些情况下，透皮贴剂用于递送pparδ激动剂化合物。通常，贴剂包含树脂组合物，其中活性化合物将溶解或部分溶解，并通过保护组合物的膜与皮肤保持接触。其他更复杂的贴剂组合物也可使用，特别是那些具有穿透有无数孔的膜的贴剂组合物，药物通过渗透作用被泵送通过所述孔。
[0153]
在其中在药物组合物中包含pparδ激动剂化合物的任何实施方案中，此类药物组合物在一些情况下呈适合口服使用的形式，例如作为片剂、糖锭、锭剂、水性或油性悬浮液、可分散的粉剂或颗粒剂、乳剂、硬胶囊或软胶囊、糖浆或酏剂。在一些情况下，旨在用于口服使用的组合物是根据任何已知方法制备的，并且在一些情况下，此类组合物包含一种或多种选自甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂的试剂，以提供药学上优良且可口的制剂。在一些情况下，片剂含有与适用于制造片剂的药学上可接受的无毒赋形剂混合的活性成分。这些赋形剂包括例如惰性稀释剂，例如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；造粒剂和崩解剂，例如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶或阿拉伯胶；和润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。在一些情况下，片剂是未包衣的，或者在一些情况下，它们通过已知技术包衣以延迟在胃肠道中的崩解和吸收，从而提供更长时间的持续作用。例如，在一些情况下，使用延时材料如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。给药方法和治疗方案
[0154]
在一个实施方案中，pparδ激动剂化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)用于制备用于治疗哺乳动物的原发性线粒体肌病的药物。用于在需要此类治疗的哺乳动物中治疗本文所述的任何疾病或病况的方法涉及向所述哺乳动物施用包含治疗有效量的pparδ激动剂化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)、活性代谢物、前药的药物组合物。
[0155]
在某些实施方案中，施用含有本文所述化合物的组合物用于预防性和/或治疗性治疗。在某些治疗应用中，将组合物以足以治愈或至少部分阻止疾病或病况的至少一种症
状的量施用至已罹患疾病或病况的患者。这种用途的有效量取决于疾病或病况的严重性和病程、先前的疗法、患者的健康状况、体重和对药物的反应，以及治疗医师的判断。治疗有效量任选地通过包括但不限于剂量递增和/或剂量范围临床试验的方法确定。
[0156]
在预防性应用中，将含有pparδ激动剂化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)的组合物施用于易患特定疾病、病症或病况或处于特定疾病、病症或病况风险中的患者。这样的量被定义为“预防有效量或剂量”。在这种用途中，精确的量还取决于患者的健康状况、体重等。当用于患者时，该用途的有效量将取决于疾病、病症或病况的严重性和病程、先前的疗法、患者的健康状况和对药物的反应，以及治疗医师的判断。在一方面，预防性治疗包括向哺乳动物(该哺乳动物以前经历过所治疗疾病的至少一种症状并且目前处于缓解期)施用包含pparδ激动剂化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)的药物组合物，以防止疾病或病况的症状复发。
[0157]
在其中患者的病况没有改善的某些实施方案中，根据医生的判断，pparδ激动剂化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)的施用是长期施用的，即，持续一段延长的时间，包括在患者的整个生命期间，以改善或以其他方式控制或限制患者的疾病或病况的症状。
[0158]
在其中患者的状态有改善的某些实施方案中，所施用的药物的剂量被暂时降低或暂时中止一段时间(即“药物假期”)。在特定实施方案中，药物假期的长度为约2天至约1年之间，以示例的方式包括约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约7天、约10天、约12天、约15天、约20天、约28天或超过约28天。以示例的方式，在药物假期期间的剂量降低约10％
‑
100％，以示例的方式包括约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％和约100％。
[0159]
一旦患者的病况出现改善，则根据需要施用维持剂量。随后，在特定实施方案中，根据症状，将施用剂量或频率或两者降低至保持改善的疾病、病症或病况的水平。然而，在某些实施方案中，患者在任何症状复发时都需要长期的间歇性治疗。
[0160]
在一方面，对于需要采用pparδ激动剂化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)的疗法的患有faod的人，pparδ激动剂化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)每日施用。在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)每日施用一次。在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)每日施用两次。在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)每日施用三次。在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)每隔一天施用一次。在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)每周施用两次。
[0161]
在一些情况下，pparδ激动剂化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)每日施用一次、每日施用两次、每日施用三次或更多次。在一些情况下，pparδ激动剂化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)每日施用两次。在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)每日、每天、每隔一天、每周5天、每周一次、每隔一周、每月两周、每月三周、每月一次、每月两次、每月三次，或更频繁施用。在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)每日施用两次，例如，早晨和
晚上。在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)施用至少1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、18个月、2年、3年、4年、5年、10年或更久。在一些实施方案中，pparδ激动剂(例如化合物1或其药学上可接受的盐)每日施用两次，持续至少或约1周、2周、3周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月或更久。在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)每日施用一次、每日施用两次、每日施用三次、每日施用四次或每日施用多于四次，持续至少或约1周、2周、3周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月或更久。
[0162]
通常，用于治疗人的本文所述的疾病或病况的pparδ激动剂化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)的剂量常在每剂约0.1mg/kg体重至约10mg/kg体重范围内。在一个实施方案中，所需剂量方便地以单一剂量或同时(或在短时间段内)或以适当间隔施用的分剂量提供，例如作为每日两个、三个、四个或更多个子剂量。在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)方便地以每日一次同时(或在短时间段内)施用的分剂量提供。在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)方便地以每日两次等份施用的分剂量提供。
[0163]
在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)以每剂约0.1mg至约10mg/kg体重的剂量口服施用于人。在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)以连续的给药时间表施用于人。在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)以连续的每日给药时间表施用于人。
[0164]
术语“连续给药时间表”是指以规则的时间间隔施用特定治疗剂。在一些实施方案中，连续给药时间表是指以规则间隔施用特定治疗剂，且没有来自特定治疗剂的任何药物假期。在一些其他实施方案中，连续给药时间表是指以循环方式施用特定治疗剂。在一些其他实施方案中，连续给药时间表是指在药物施用循环中施用特定治疗剂，然后是来自特定治疗剂的药物假期(例如，清除期或不施用药物的其他此类时间段)。例如，在一些实施方案中，治疗剂在一周中每日一次、每日两次、每日三次、每周一次、每周两次、每周三次、每周四次、每周五次、每周六次、每周七次、每隔一天、每三天、每四天、每日进行施用，随后一周不施用治疗剂；在两周中每日施用，随后一或两周不施用治疗剂；在三周中每日施用，随后一、二或三周不施用治疗剂；在四周中每日施用，随后一、二、三或四周不施用治疗剂；每周施用治疗剂，随后一周不施用治疗剂；或每两周施用治疗剂，随后两周不施用治疗剂。在一些情况下，每日施用是每日一次。在一些情况下，每日施用是每日两次。在一些情况下，每日施用是每日三次。在一些情况下，每日施用是每日超过三次。
[0165]
术语“连续的每日给药时间表”是指每天在每日大致相同的时间每天施用特定的治疗剂。在一些情况下，每日施用是每日一次。在一些情况下，每日施用是每日两次。在一些情况下，每日施用是每日三次。在一些情况下，每日施用是每日超过三次。
[0166]
在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)的量每日施用一次。在一些其他实施方案中，pparδ激动剂化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)的量每日施用两次。在一些其他实施方案中，pparδ激动剂化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)的量每日施用三次。
[0167]
在其中未观察到人的疾病或病况状态改善的某些实施方案中，将pparδ激动剂化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)的每日剂量提高。在一些实施方案中，每日一次给药时间表改变为每日两次给药时间表。在一些实施方案中，采用每日三次给药时间表来增加所施用的pparδ激动剂化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)的量。在一些实施方案中，增加通过吸入施用的频率以在更规律的基础上提供重复的高cmax水平。在一些实施方案中，增加施用频率以提供维持的或更规律的pparδ激动剂化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)暴露。在一些实施方案中，增加施用频率以在更规律的基础上提供重复的高cmax水平并提供维持的或更规律的pparδ激动剂化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)暴露。
[0168]
在任何前述方面是包括单次施用有效量的pparδ激动剂化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)的进一步实施方案，包括如下的进一步实施方案：其中pparδ激动剂化合物(i)每日一次；或(ii)在一天的时间范围内多次施用。
[0169]
在任何前述方面是包括多次施用有效量的pparδ激动剂化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)的进一步实施方案，包括如下的进一步实施方案：其中(i)pparδ激动剂化合物在单个剂量中连续或间歇施用；(ii)多次施用之间的时间为每6小时；(iii)每8小时向哺乳动物施用pparδ激动剂化合物；(iv)每12小时向哺乳动物施用pparδ激动剂化合物；(v)每24小时向哺乳动物施用pparδ激动剂化合物。在进一步或替代的实施方案中，方法包括药物假期，其中pparδ激动剂化合物的施用暂时中止，或者所施用的pparδ激动剂化合物的剂量暂时降低；在药物假期结束时，pparδ激动剂的给药恢复。在一个实施方案中，药物假期的长度从2天到1年不等。
[0170]
通常，用于向人施用的pparδ激动剂化合物或其药学上可接受的盐的合适剂量将在约0.1mg/kg每日至约25mg/kg每日(例如约0.2mg/kg每日、约0.3mg/kg每日、约0.4mg/kg每日、约0.5mg/kg每日、约0.6mg/kg每日、约0.7mg/kg每日、约0.8mg/kg每日、约0.9mg/kg每日、约1mg/kg每日、约2mg/kg每日、约3mg/kg每日、约4mg/kg每日、约5mg/kg每日、约6mg/kg每日、约7mg/kg每日、约8mg/kg每日、约9mg/kg每日、约10mg/kg每日、约15mg/kg每日、约20mg/kg每日，或约25mg/kg每日)的范围内。替代地，用于向人施用的pparδ激动剂化合物或其药学上可接受的盐的合适剂量将在约0.1mg/日至约1000mg/日；约1mg/日至约400mg/日；或约1mg/日至约300mg/日的范围内。在其他实施方案中，用于向人施用的pparδ激动剂化合物或其药学上可接受的盐的合适剂量将为约1mg/日、约2mg/日、约3mg/日、约4mg/日、约5mg/日、约6mg/日、约7mg/日、约8mg/日、约9mg/日、约10mg/日、约15mg/日、约20mg/日、约25mg/日、约30mg/日、约35mg/日、约40mg/日、约45mg/日、约50mg/日、约55mg/日、约60mg/日、约65mg/日、约70mg/日、约75mg/日、约80mg/日、约85mg/日、约90mg/日、约95mg/日、约100mg/日、约125mg/日、约150mg/日、约175mg/日、约200mg/日、约225mg/日、约250mg/日、约275mg/日、约300mg/日、约325mg/日、约350mg/日、约375mg/日、约400mg/日、约425mg/日、约450mg/日、约475mg/日，或约500mg/日。在一些实施方案中，剂量每日施用超过一次(例如每日两次、三次、四次或更多次)。在一个实施方案中，用于向人施用的pparδ激动剂化合物或其药学上可接受的盐的合适剂量为约100mg每日两次(即总共约200mg/日)。在另一实施方案中，用于向人施用的pparδ激动剂化合物或其药学上可接受的盐的合适剂量为约50mg每日两次(即总共约100mg/日).
[0171]
在一些实施方案中，用于施用于患有原发性线粒体肌病的人的化合物1或其药学上可接受的盐的合适剂量将为约10mg/日、约15mg/日、约20mg/日、约25mg/日、约30mg/日、约35mg/日、约40mg/日、约45mg/日、约50mg/日、约55mg/日、约60mg/日、约65mg/日、约70mg/日、约75mg/日、约80mg/日、约85mg/日、约90mg/日、约95mg/日、约100mg/日、约125mg/日、约150mg/日、约175mg/日、约200mg/日、约225mg/日、约250mg/日、约275mg/日、约300mg/日、约325mg/日、约350mg/日、约375mg/日、约400mg/日、约425mg/日、约450mg/日、约475mg/日或约500mg/日。在一些实施方案中，用于施用于人的合适剂量的化合物1或其药学上可接受的盐将为约50mg/日、约100mg/日、约150mg/日、约200mg/日、约250mg/日、约300mg/日、约350mg/日、约400mg/日、约450mg/日或约500mg/日。在一些实施方案中，用于施用于人的化合物1或其药学上可接受的盐的合适剂量将为约50mg/日。在一些实施方案中，用于施用于人的化合物1或其药学上可接受的盐的合适剂量将为约100mg/日。在一些实施方案中，剂量每天施用多于一次(例如，每天两次、三次、四次或更多次)。
[0172]
在一些实施方案中，基于关于个体治疗方案的许多变量，每日剂量或剂型中活性物质的量低于或高于本文所示的范围。在各种实施方案中，每日剂量和单位剂量根据许多变量而改变，包括但不限于待治疗的疾病或病况、施用方式、个体受试者的要求、待治疗的疾病或病况的严重性、人的身份(例如，体重)和施用的特定附加治疗剂(如果适用)，以及从业者的判断。
[0173]
此类治疗方案的毒性和治疗功效通过细胞培养物或实验动物中的标准药学程序确定，包括但不限于ld
50
和ed
50
的确定。毒性作用与治疗作用的剂量比为治疗指数，用ld
50
与ed
50
的比值表示。在某些实施方案中，从细胞培养物测定和动物研究获得的数据用于制定用于哺乳动物(包括人)的治疗有效每日剂量范围和/或治疗有效单位剂量。在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物的每日剂量在包括具有最小毒性的ed
50
的循环浓度范围内。在某些实施方案中，每日剂量范围和/或单位剂量在该范围内变化，取决于所采用的剂型和所采用的施用途径。
[0174]
在一些实施方案中，在向受试者施用治疗有效剂量的pparδ激动剂化合物后，没有观察到不良作用的水平(noael)为每千克体重至少1、10、20、50、100、500或1000mg(mpk)pparδ激动剂化合物。在一些示例中，被施用pparδ激动剂的大鼠的7天noael为至少约200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1500或2000mpk。在一些示例中，被施用pparδ激动剂化合物的狗的7天noael为至少约10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、200、500mpk。
[0175]
在一些实施方案中，哺乳动物中的原发性线粒体肌病的诊断通过组织活检和分子遗传学检测来确认(例如，parikh s等人，diagnosis and management of mitochondrial disease:a consensus statement from the mitochondrial medicine society.genet med.2015；17(9):689
–
701.doi:10.1038/gim.2014.177)。
[0176]
人类线粒体基因组数据库是已知的，参见例如mitomap，人类线粒体dna中的多态性和突变纲要。还参见，人类线粒体dna的修订的剑桥参考序列(rcrs)。
[0177]
组织活检涉及在显微镜下研究受感染组织的小样本。在一些实施方案中，还进行对组织样本进行的化学测试。
[0178]
在一些实施方案中，组织活检包括肌肉活检。在一些实施方案中，对组织进行多种组织学、生化和遗传研究。组织检测允许但不限于，检测具有组织特异性或低水平异质性的
mtdna突变以及mtdna含量(拷贝数)的量化。
[0179]
在一些实施方案中，肌肉组织学包括但不限于，苏木精和伊红(h&e)、gomori三色染色(对于破碎红纤维)、sdh(对于富含sdh或破碎蓝纤维)、nadh
‑
tr(nadh
‑
四唑还原酶)、cox(用于cox阴性纤维)和联合sdh/cox染色(cox中间纤维)。电子显微镜(em)检查线粒体的内含物和超微结构异常。
[0180]
在一些实施方案中，在组织(通常是肌肉)中进行功能性体外测定以测量线粒体功能。这些测试评价线粒体etc或呼吸链的各种功能。功能测定包括etc单个组分的酶活性、组分活性的测量、蓝色天然凝胶电泳、复合物和超复合物中各种蛋白质组分的存在的测量(通过蛋白质印迹和凝胶电泳实现)和使用各种底物和抑制剂的氧气消耗。
[0181]
在一些实施方案中，用本文所述的pparδ激动剂化合物(例如，化合物1或其药学上可接受的盐)治疗哺乳动物的原发性线粒体肌病的方法导致肌肉组织学的改善、线粒体dna拷贝数的增加、异质性水平的改善、呼吸链酶活性(例如但不限于，atp
‑
adp水平、脂肪酸氧化基因表达或通量)的改善(例如，增加)和mrna水平的增加(例如，使用转录组学测量的)。
[0182]
在一些实施方案中，用本文所述的pparδ激动剂化合物(例如，化合物1或其药学上可接受的盐)治疗哺乳动物的原发性线粒体肌病的方法导致取自患有原发性线粒体肌病的哺乳动物的活检肌肉样品的组织学改善。在一些实施方案中，活检肌肉样品的组织学改善包括提高线粒体的质量。在一些实施方案中，活检肌肉样品的组织学改善包括破碎红纤维的减少。
[0183]
在一些实施方案中，活检肌肉样品的组织学改善改善至少或约10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或大于95％。
[0184]
在一些实施方案中，线粒体dna拷贝数增加至少或约10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或大于95％。在一些实施方案中，向患有原发性线粒体肌病的哺乳动物施用本文所述的pparδ激动剂化合物(例如，化合物1或其药学上可接受的盐)导致线粒体dna拷贝数提高至少或约0.5倍、1倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或大于10倍。
[0185]
在一些实施方案中，异质性水平改善至少或约10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或大于95％。在一些实施方案中，向患有原发性线粒体肌病的哺乳动物施用本文所述的pparδ激动剂化合物(例如，化合物1或其药学上可接受的盐)导致异质性水平改善至少或约0.5倍、1倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或大于10倍。
[0186]
在一些实施方案中，呼吸链酶活性提高至少或约10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或大于95％。在一些实施方案中，向患有原发性线粒体肌病的哺乳动物施用本文所述的pparδ激动剂化合物(例如，化合物1或其药学上可接受的盐)导致呼吸链酶提高至少或约0.5倍、1倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或大于10倍。
[0187]
在一些实施方案中，将改善与对照比较。在一些实施方案中，对照是未接受pparδ激动剂(例如，化合物1或其药学上可接受的盐)的个体。在一些实施方案中，对照是未接受全剂量的pparδ激动剂(例如，化合物1或其药学上可接受的盐)的个体。在一些实施方案中，
对照是个体在接受pparδ激动剂(例如，化合物1或其药学上可接受的盐)之前的基线。
[0188]
在一些实施方案中，用本文所述的过氧化物酶体增殖物激活的受体δ(pparδ)激动剂化合物(例如，化合物1或其药学上可接受的盐)治疗哺乳动物的原发性线粒体肌病的方法导致一种或多种结果量度的改善。在一些实施方案中，结果量度包括但不限于患者报告的结果(pro)、运动耐量、全身脂肪酸氧化(例如
13
co2产生)、血液酰基肉碱谱和血液炎症细胞因子。在一些实施方案中，通常在施用pparδ激动剂化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)之前确定基线评估。通过在用pparδ激动剂化合物治疗期间进行的重复评估以及与基线评估和/或任何先前评估的比较来评估结果量度的改善。
[0189]
在一些实施方案中，一种或多种结果量度改善至少或约10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或大于95％。在一些实施方案中，向患有原发性线粒体肌病的哺乳动物施用本文所述的pparδ激动剂化合物(例如，化合物1或其药学上可接受的盐)导致一种或多种结果量度改善至少或约0.5倍、1倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或大于10倍。
[0190]
在一些实施方案中，患者报告的结果(pro)用问卷测量。在一些实施方案中，问卷涵盖与所治疗的病症相关的健康概念。在一些实施方案中，问卷涵盖与所治疗的病症相关的健康概念，例如但不限于：身体机能、身体疼痛、由于身体健康问题导致的角色限制、由于个人或情绪问题导致的角色限制、情绪状况、社会功能、精力/疲劳和总体健康认知，包括对健康变化的认知。
[0191]
在一些实施方案中，结果量度通过评估运动耐量或耐力的测试来评估。在一些实施方案中，通过运动测试评估运动耐力。运动测试包括但不限于次极量跑步机、步行测试(例如6分钟；12分钟)、跑步测试、跑步机和测力运动测试。在一些实施方案中，运动测试与感知用力度博格量表结合使用。在一些实施方案中，运动测试根据美国胸科学会(ats)提出的指南进行。
[0192]
在一些实施方案中，治疗原发性线粒体肌病包括提高哺乳动物的运动耐量、减轻疼痛、减少疲劳、增加力量、提高存活率或其组合。
[0193]
在人类中治疗原发性线粒体肌病包括改善人感觉良好的感觉、改善认知、提高运动耐量、减轻疼痛、减少疲劳、增加力量、提高存活率或其组合。
[0194]
在一些实施方案中，通过要求接受治疗的人比较治疗后与治疗前的上述症状来确定人的健康感、疼痛、疲劳和/或认知的改善。
[0195]
在一些实施方案中，可以通过要求护理人员比较治疗前后受试者的症状来确定人的症状的改善。
[0196]
在一些实施方案中，提高哺乳动物的运动耐量包括增加耐力/运动耐量，如通过坐
‑
站测试或步行测试(例如，约6分钟步行测试或12分钟步行测试)中的步行距离所测量的。在一些实施方案中，在这样的步行测试中步行的距离增加至少约1米、至少约5米、至少约10米、至少约20米、至少约30米、至少约40米、至少约50米、至少约60米、至少约70米、至少约80米、至少约90米、至少约100米或大于约100米。
[0197]
如本文所用，术语“约”是指在所述值
±
10％以内。
[0198]
在一些实施方案中，提高所述哺乳动物的运动耐量包括降低在大约12分钟的步行测试中的心率。在一些实施方案中，心率降低：每分钟1次心跳、每分钟2次心跳、每分钟3次
心跳、每分钟4次心跳、每分钟5次心跳、每分钟至少约10次心跳，或每分钟至少约20次心跳。
[0199]
在一些实施方案中，提高哺乳动物的运动耐量包括增加哺乳动物的氧峰值或最大摄氧量(峰值vo2或vo
2 max)。vo
2 max，也称为最大摄氧量，是衡量一个人在剧烈运动期间可以利用的最大氧气量的量度。它是一种常用的量度，用于在运动过程之前或期间确定一个人的有氧能力。
[0200]
在一些实施方案中，峰值vo2表示为绝对速率(例如，每分钟的氧气升数(例如l/min))或相对速率(例如，每分钟的每公斤体重的氧气毫升数(例如，ml/min/kg
·
min))。
[0201]
在一些实施方案中，提高哺乳动物的运动耐量包括将哺乳动物峰值vo2测量值增加约0.5ml/min/kg、约1ml/min/kg、约1.5ml/min/kg、约2ml/min/kg、约2.5ml/min/kg、约3ml/min/kg、约3.5ml/min/kg、约4ml/min/kg、约4.5ml/min/kg、约5ml/min/kg或大于约5ml/min/kg。
[0202]
在一些实施方案中，改善所述哺乳动物的运动耐量包括降低所测得的呼吸交换率(rer)。
[0203]
在一些实施方案中，测量呼吸交换率(rer)以评估运动耐量。rer是新陈代谢中产生的二氧化碳(co2)量与使用的氧气(o2)之间的比率。在一些实施方案中，该比率是通过比较呼出气体与室内空气来确定的。
[0204]
在一些实施方案中，哺乳动物的疼痛用简明疼痛量表(bpi)评价。bpi包括一份问卷，其评估疼痛的严重程度以及疼痛对所经历的日常功能的影响。在一些实施方案中，以十分制测量疼痛严重程度。在一些实施方案中，用pparδ激动剂(例如，化合物1或其药学上可接受的盐)治疗原发性线粒体肌病包括bpi评分降低1、2、3、4、5或大于5。
[0205]
在一些实施方案中，哺乳动物的疲劳或精力水平用修正的疲劳影响量表(mfis)评价。疲劳是许多人时不时地经历的一种身体疲倦和精力不足的感觉。在一些实施方案中，患有诸如原发性线粒体肌病的医疗病况的人比其他人更频繁地体验到更强烈的疲劳感并且影响更大。mfis包括一份问卷，其评估疲劳对一个人日常生活的影响。在一些实施方案中，总mfis评分的范围可以从0到84。在一些实施方案中，用pparδ激动剂(例如，化合物1或其药学上可接受的盐)治疗原发性线粒体肌病包括mfis评分降低1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或大于20。联合治疗
[0206]
在某些情况下，将pparδ激动剂化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)与一种或多种其他治疗剂联合施用是合适的。
[0207]
在一个实施方案中，pparδ激动剂化合物(例如化合物1)或其药学上可接受的盐或溶剂化物的治疗效果通过施用佐剂而增强(即，佐剂本身的治疗益处较小，但与另一治疗药剂联合时，对患者的总的治疗益处被增强)。或者，在一些实施方案中，患者经历的益处通过施用pparδ激动剂化合物(例如化合物1)或其药学上可接受的盐或溶剂化物以及同样具有治疗益处的另一药剂(其还包括治疗方案)而增加。
[0208]
在一个特定实施方案中，pparδ激动剂化合物(例如化合物1)或其药学上可接受的盐或溶剂化物与第二治疗剂共同施用，其中pparδ激动剂化合物(例如化合物1)或其药学上可接受的盐或溶剂化物和第二治疗剂调节所治疗的疾病、病症或病况的不同方面，由此提供比单独施用任一治疗剂更大的总体益处。
[0209]
在任何情况下，无论所治疗的疾病、病症或病况如何，患者经历的总体益处是两种治疗剂的简单加和，或患者经历协同益处。
[0210]
在某些实施方案中，当pparδ激动剂化合物(例如化合物1)或其药学上可接受的盐或溶剂化物与一种或多种另外的药剂化合物(例如另外的治疗有效的药物、佐剂等)联合施用时，不同治疗有效剂量的pparδ激动剂(例如化合物1)或其药学上可接受的盐或溶剂化物将用于配制药物组合物和/或用于治疗方案。在联合治疗方案中使用的药物和其他药剂的治疗有效剂量任选地通过与上文针对活性物本身所述的方式类似的方式确定。此外，本文所述的预防/治疗方法包括有节奏给药的使用，即提供更频繁的低剂量以最小化毒副作用。在一些实施方案中，联合治疗方案包括如下的治疗方案：其中pparδ激动剂化合物(例如化合物1)或其药学上可接受的盐或溶剂化物的施用在用本文所述的第二药剂治疗之前、期间或之后开始，并持续直到用第二药剂治疗期间的任何时间或用第二药剂治疗结束之后。还包括如下的治疗：其中pparδ激动剂化合物(例如化合物1)或其药学上可接受的盐或溶剂化物和联合使用的第二药剂同时施用，或在不同时间施用，和/或在治疗期间以减小或增大的间隔施用。联合治疗进一步包括周期性治疗，其在不同的时间开始和结束以帮助患者的临床管控。
[0211]
应理解，用于治疗、预防或缓解有待减轻的病况的剂量方案根据许多因素(例如受试者所患的疾病、病症或状况；受试者的年龄、体重、性别、饮食和医疗状况)而变化。因此，在一些情况下，实际采用的剂量方案与本文所述的剂量方案不同，并且在一些实施方案中，脱离本文所述的剂量方案。
[0212]
对于本文所述的联合疗法，共同施用的化合物的剂量是变化的，取决于所采用的共同药物的类型、所采用的具体药物、所治疗的疾病或病况等。在另外的实施方案中，当与一种或多种其他治疗剂共同施用时，pparδ激动剂化合物(例如化合物1)或其药学上可接受的盐或溶剂化物与一种或多种其他治疗剂同时施用或顺序施用。
[0213]
在联合疗法中，多种治疗剂化合物(其中一种是pparδ激动剂(例如化合物1)或其药学上可接受的盐或溶剂化物)以任何顺序施用或甚至同时施用。如果同时施用，则仅举例而言，多种治疗剂以单个同一形式或多个形式提供(例如作为单个药丸或作为两个单独的药丸)。
[0214]
pparδ激动剂化合物(例如化合物1)或其药学上可接受的盐或溶剂化物以及联合疗法在疾病或病况发生之间、期间或之后施用，并且施用包含pparδ激动剂化合物(例如化合物1)或其药学上可接受的盐或溶剂化物的组合物的时间可以变化。因此，在一个实施方案中，化合物i或其药学上可接受的盐或溶剂化物作为预防性药物使用，并且连续施用至倾向于发展出病况或疾病的受试者，以便防止疾病或病况的发生。在另一实施方案中，pparδ激动剂化合物(例如化合物1)或其药学上可接受的盐或溶剂化物在症状出现期间或之后尽快施用。在特定实施方案中，pparδ激动剂化合物(例如化合物1)或其药学上可接受的盐或溶剂化物在检测到或怀疑疾病或病况出现后在可行时尽快施用，并且持续治疗该疾病所需的时长。在一个实施方案中，治疗所需的时长是可变的，并且调整治疗时长以适应每个受试者的特定需要。例如，在特定实施方案中，pparδ激动剂化合物(例如化合物1)或其药学上可接受的盐或溶剂化物，或含有化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物的制剂施用至少2周、约1个月至约5年。
用于联合治疗的示例性药剂
[0215]
在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物(例如，化合物1或其药学上可接受的盐)与一种或多种用于治疗原发性线粒体肌病的额外疗法联合施用。
[0216]
在某些实施方案中，至少一种另外的疗法与pparδ激动剂化合物(例如化合物1)或其药学上可接受的盐或溶剂化物同时施用。在某些实施方案中，至少一种另外的疗法的施用频率低于pparδ激动剂化合物(例如化合物1)或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在某些实施方案中，至少一种另外的疗法的施用频率超过pparδ激动剂化合物(例如化合物1)或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在某些实施方案中，至少一种另外的疗法在pparδ激动剂化合物(例如化合物1)或其药学上可接受的盐或溶剂化物的施用之前施用。在某些实施方案中，至少一种另外的疗法在pparδ激动剂化合物(例如化合物1)或其药学上可接受的盐或溶剂化物的施用之后施用。
[0217]
在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物(例如，化合物1或其药学上可接受的盐)与泛醇、泛醌、烟酸、核黄素、肌酸、l
‑
肉碱、乙酰
‑
l
‑
肉碱、生物素、硫胺素、泛酸、吡哆醇、α
‑
硫辛酸、正庚酸、coq10、维生素e、维生素c、甲基钴胺素、亚叶酸、白藜芦醇、n
‑
乙酰
‑
l
‑
半胱氨酸(nac)、锌、亚叶酸/甲酰四氢叶酸钙，或其组合联合施用。
[0218]
在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物(例如，化合物1或其药学上可接受的盐)与泛醇、泛醌、烟酸、核黄素、肌酸、l
‑
肉碱、乙酰
‑
l
‑
肉碱、生物素、硫胺素、泛酸、吡哆醇、α
‑
硫辛酸、正庚酸、coq10、维生素e、维生素c、甲基钴胺素、亚叶酸、n
‑
乙酰
‑
l
‑
半胱氨酸(nac)、锌、亚叶酸/甲酰四氢叶酸钙、白藜芦醇、阿昔莫司、elamipretide、半胱胺、琥珀酸盐、nad激动剂、vatiquinone(epi
‑
743))、omaveloxolone(rta
‑
408)、烟酸、烟酰胺、elamipretide、kl133、kh176或其组合联合施用。
[0219]
在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)与琥珀酸或其盐，或三琥珀酰甘油或其盐联合施用。在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)与国际pct公开号wo 2017/184583中所述的化合物联合施用。
[0220]
在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物(例如化合物i或其药学上可接受的盐)与抗氧化剂联合施用。
[0221]
在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)与奇数链脂肪酸、奇数链脂肪酮、l
‑
肉碱或其组合联合施用。
[0222]
在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)与三庚酸甘油脂、正庚酸、甘油三酯，或其盐，或其组合联合施用。
[0223]
在一些实施方案中，pparδ激动剂化合物与烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nad )途径调节剂联合施用。nad 在细胞内起许多重要作用，包括在由adp生成atp的氧化磷酸化中充当氧化剂。增加细胞内nad 浓度将增强线粒体内的氧化能力，从而增加营养物氧化并促进能量供应，这是线粒体的主要作用。在一些实施方案中，nad 调节剂靶向聚adp核糖聚合酶(parp)、氨基羧基粘康酸酯半醛脱羧酶(acmsd)和n'
‑
烟酰胺甲基转移酶(nnmt)。试剂盒和制品
[0224]
本文描述了用于治疗个体中的原发性线粒体肌病的试剂盒，包括向所述个体施用pparδ激动剂化合物(例如，化合物1，或其药学上可接受的盐)。
jersey 08103)购买。
[0234]
细胞培养和治疗使细胞在含有高葡萄糖水平的dulbecco改良eagle培养基(dmem)(corning life sciences,manassas,va)中或没有葡萄糖的dmem中生长48
‑
72小时。两种培养基都补充有胎牛血清、谷氨酰胺、青霉素和/或链霉素。在一些实验中，在分析参数之前，将成纤维细胞与n
‑
乙酰半胱氨酸、白藜芦醇、mitoq、trolox(维生素e的水溶性类似物)或苯扎贝特一起温育。
[0235]
将pparδ激动剂化合物溶解在磷酸盐缓冲盐水pbs中，作为储备溶液。当培养物达到约85
‑
90％汇合时，将一定量的化合物直接适当地添加到烧瓶中的细胞培养基中。允许培养物在37℃下生长48小时，然后收获。将收获的细胞沉淀物储存在
‑
80℃，直到进行免疫和酶测定分析。也将1ml至1.5ml培养基样品储存在
‑
80℃用于酰基肉碱。实施例2：测量线粒体呼吸
[0236]
用seahorse xfe96细胞外流量分析仪(sea horse bioscience,billerica,ma)测量氧气消耗率(ocr)。
[0237]
简而言之，设备含有对氧气浓度变化敏感的荧光团，其使得能够准确测量细胞色素c氧化酶(复合体iv)在oxphos期间将一个o2分子还原为两个h2o分子的速率。将细胞以80,000个细胞/孔的密度接种在96孔seahorse组织培养微板中的生长介质中。为了确保细胞数目相同，将细胞接种在预包被有cell
‑
tak(bd biosciences,san jose,ca)的细胞培养板中。所有细胞系都以每个细胞系四到八个孔测量。然后，重复整组实验。在运行seahorse测定之前，在没有co2的情况下在未缓冲的dmem中将细胞温育1小时。测量初始ocr以建立基线(基础呼吸)。还在注射300nm羰基氰化物4
‑
(三氟甲氧基)苯腙(fccp)(seahorse xf细胞线粒体压力试剂盒,santa clara,ca)后确定最大呼吸。实施例3：atp产生测定
[0238]
atp产生通过生物发光测定使用来自perkinelmer inc,waltham,ma的atp测定试剂盒(atplite试剂盒)根据制造商的说明来确定。实施例4：脂肪酸氧化(fao)通量分析
[0239]
通过量化在24孔板中培养的成纤维细胞中从缀合至无脂肪酸白蛋白的9,10
‑
[3h]棕榈酸酯(perkinelmer,waltham,ma)产生的3h2o的来进行脂肪酸氧化(fao)通量分析。
[0240]
fao通量分析的代表性非限制性示例在bennett,m.j.assays of fatty acid beta
‑
oxidation activity.methods cell biol 80,179
–
197,(2007)中有述。在一些实施方案中，将300,000个成纤维细胞铺板在6孔板中的每孔中并使其在具有10％胎牛血清的dmem中生长24小时。然后将生长培养基更换为相同的培养基或不含葡萄糖的该培养基，并且使成纤维细胞如所述生长48小时。随后，将细胞用pbs洗涤一次，然后在37℃下与在具有1μ/ml肉碱和2mg/mlα
‑
环糊精的0.5ml无葡萄糖dmem中制备的50nmol油酸酯中的0.34μci[9,10
‑3h]油酸酯(45.5ci/mmol；perkin elmer,waltham,ma)温育2小时。将脂肪酸如所述用α
‑
环糊精溶解(watkins,p.a.,ferrell,e.v.jr.,pedersen,j.i.&hoefler,g.peroxisomal fatty acid beta
‑
oxidation in hepg2 cells.arch biochem biophys 289,329
–
336(1991))。温育后，在含有750μl阴离子交换树脂(ag 1x8,醋酸盐,100
–
200mesh,biorad,richmond,ca)的柱上将释放的3h2o从油酸酯分离。在培养介质过柱后，用750μl水洗涤该板，该水也转移到柱中。然后用750μl水洗涤树脂两次。所有洗脱液都收集在闪烁小瓶中，并与
5ml闪烁液(eco
‑
lite,mp)混合，然后在氚窗口中的贝克曼闪烁计数器中计数。进行一式四份测定，其中一式三份空白(无细胞孔)。标准品包含50μl等分的温育混合物，以及2.75ml的去离子水和5ml的闪烁液。实施例5：蛋白质印迹
[0241]
使细胞在t175烧瓶中生长，并在90
‑
95％汇合时通过胰蛋白酶消化收获、沉淀并储存在
‑
80℃用于蛋白质印迹。使用dc
tm
蛋白质测定试剂盒(bio
‑
rad laboratories)将样品中的蛋白质含量量化以进行数据标准化。
[0242]
对于细胞裂解物，将沉淀物重悬于150
‑
250μl具有蛋白酶抑制剂混合物(roche diagnostics,mannheim,德国)的ripa缓冲液中。将匀浆在冰上保持30分钟，每10分钟摇动，并离心。上清液用于蛋白质印迹。对于线粒体，将沉淀物重悬在150
‑
250μl含有250mm蔗糖、2mm edta、蛋白酶抑制剂混合物(roche diagnostics,mannheim,德国)和0.5μm曲古菌素a(sigma
‑
aldrich co.,st.louis,mo)的tris缓冲液(ph 7.4)中，均质化并离心。丢弃沉淀物并离心上清液。将所得含有线粒体的沉淀物重悬在50mm tris缓冲液(ph 7.4)中，超声处理并再次离心。
[0243]
如前所述，将细胞裂解物或线粒体用于如前所述的蛋白质印迹(例如goetzman,e.s.等人，mol.genet.metab.91,138
‑
147,(2007))。实施例6：免疫荧光显微术和线粒体膜电位(免疫荧
[0244]
将细胞与抗体抗vlcad(1:1000)、抗nrf2(1:100)或抗nf
‑
kb(1:1000)在4℃下温育过夜。用tbst短暂洗涤后，将细胞与来自invitrogen的驴抗兔二抗alexa fluor 488一起温育。用dapi对细胞核进行免疫染色。然后使用封固剂将盖玻片封固，之后使用olympus confocal fluoroview1000显微镜以60倍的放大率拍摄图像。实施例7：细胞活力测定
[0245]
采用3
‑
(4,5
‑
二甲基噻唑
‑2‑
基)
‑5‑
(3
‑
羧基甲氧基苯基)
‑2‑
(4
‑
磺基苯基)
‑
2h
‑
四唑鎓(mts)测定试剂盒根据制造商的说明(abcam,cambridge,ma)评价细胞活力。在fluostar omega读板仪中在490nm处读取吸光度。实施例8：凋亡测定
[0246]
采用alexa488膜联蛋白v/死细胞凋亡试剂盒根据制造商的说明(invitrogen,grand island,ny)评价凋亡。试剂盒含有标记有荧光团和碘化丙啶(pi)的膜联蛋白v。膜联蛋白v可以通过与暴露在细胞质膜外叶上的磷脂酰丝氨酸结合来识别凋亡细胞，而pi通过与核酸结合而对死细胞进行染色。在becton dickinson facsaria ii流式细胞仪(bd biosciences,san jose,ca)中测定荧光。实施例9：确定酰基肉碱水平
[0247]
酰基肉碱分析使用适当的串联质谱(ms/ms)方案进行。实施例10：小鼠肌肉中的体内基因表达评估
[0248]
对雄性c57bl/6小鼠以30mg/kg的口服剂量施用化合物1，每天一次，连续7天。在第7天最后一次给药后4小时，对所有小鼠实施安乐死，并从左右肢切下两个四头肌肌肉样本。化合物1治疗改变了多种众所周知的pparδ调节基因的表达模式和对于脂肪酸转运到线粒体(cpt1b)很重要的途径、氧化磷酸化(pdk4)和线粒体生物发生(pgc
‑
1α)。
[0249]
在第二项研究中，雄性c57bl/6小鼠每天给药一次，连续四天。在治疗的第一天，每
组中的所有小鼠接受单剂量的媒介物或30mg/kg的化合物1。在第一天给药后，在以下每个时间点对每组的五只小鼠进行麻醉和安乐死：1、2、4、8、24、48、72和96小时。在时间点24小时后留下的动物接受第二剂量。在时间点48小时后留下的动物接受第三剂量。在时间点72小时后留下的动物接受第四剂量。指定用于时间点96小时的小鼠在第5天被安乐死。在48小时，化合物1治疗增加了pgc1α(线粒体生物发生的主要调控因子)和cpt1b(肌肉线粒体中长链脂肪酸β
‑
氧化途径的速率控制酶)的表达。实施例11：联合疗法
[0250]
在一些实施方案中，pparδ激动剂与用于原发性线粒体肌病(pmm)的其他疗法联合使用。在一些实施方案中，将pparδ激动剂化合物与以下中的一种或多种组合施用给具有(pmm)的个体：泛醇、泛醌、烟酸、核黄素、肌酸、l
‑
肉碱、乙酰
‑
l
‑
肉碱、生物素、硫胺素、泛酸、吡哆醇、α
‑
硫辛酸、正庚酸、coq10、维生素e、维生素c、甲基钴胺素、亚叶酸、n
‑
乙酰
‑
l
‑
半胱氨酸(nac)、锌、亚叶酸/甲酰四氢叶酸钙、白藜芦醇、阿昔莫司、elamipretide、半胱胺、琥珀酸盐、nad激动剂、vatiquinone(epi
‑
743))、omaveloxolone(rta
‑
408)、烟酸、烟酰胺、elamipretide、kl133和kh176。
[0251]
当功效大于单独的任一药剂或当任一药物所需的剂量减少从而改善副作用谱时，联合治疗是有利的。实施例12：确定化合物1对pparα、pparδ和pparδ的结合选择性
[0252]
对于所有三种人类ppar亚型(hppar)测试了化合物1：hpparα、hpparγ和hpparδ。每个人类ppar亚型的代表性实验结果如表1所示。对于每个亚型，所有测定重复至少3次。化合物1是一种有效的pparδ激动剂(ec50＝31nm)，而该化合物对pparα(ec50>10μm)和pparγ(ec50>10μm)仅显示很小的活性。
[0253]
按照jump
‑
in tm t
‑
rextm hek293重新靶向试剂盒(thermofisher，目录号a15008)的用户指南，合成目标基因并将其克隆到合适的jump
‑
in
tm
重新靶向载体中。例如，该载体将用于转染和重新靶向jump
‑
in
tm
hek293 griptite
tm
亲本细胞系。稳定的池将在大约21天的时间内进行抗生素选择，并通过功能测定测试靶基因表达。重新靶向方法：
[0254]
在不含抗生素的生长培养基中将jump
‑
in
tm
griptite
tm
hek293亲本细胞以60
‑
80％的汇合度铺板于t
‑
75烧瓶中，并使用ltx(50μl)和plus
tm
试剂(20μl)以1:1比例的表达构建体和r4整合酶表达构建体(总共20μgdna)进行转染。温育48小时后，使用600μg/ml的和10μg/ml的杀稻瘟素在生长培养基中将细胞选择约21天。bla测定方法：
[0255]
将jump
‑
in
tm
griptite
tm
hek293 rpparα、δ或γuas
‑
bla
‑
gal4细胞池在384孔板格式(每孔20,000个细胞)在不含fbs的optimem中重复地(n＝4)铺板。在加入化合物1(1mm的最高浓度，3倍稀释，10点滴定)之前使细胞粘附8小时。在16小时后，将细胞加载其是一种分别给出表达/非表达细胞的蓝色/绿色读数的荧光bla底物。蓝/绿读数在荧光读板仪(tecan safire ii)上测量。实施例13：原发性线粒体肌病(pmm)的临床试验
[0256]
下面描述人类原发性线粒体肌病临床试验的非限制性示例。
[0257]
目的：本研究的目的是：评估用化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物治疗原发性线粒体肌病受试者12周的安全性和耐受性；研究化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物在用化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物治疗的原发性线粒体肌病受试者中的药代动力学；研究化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物对用化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物治疗的原发性线粒体肌病受试者的药效学作用。
[0258]
干预：以单一药剂或组合形式每天向患者施用10
‑
2000mg的化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物。例如，受试者每天一次接受100mg的化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物，共12周。考虑其他群组。
[0259]
化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物将作为胶囊包装在瓶中。
[0260]
详细描述：每天一次口服给予患者化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
[0261]
纳入标准：国际研讨会定义的原发性线粒体肌病(pmm)：儿童和成人原发性线粒体肌病的结果量度和临床试验准备情况(mancuso,m.等人，(2017,dec)。国际研讨会：儿童和成人原发性线粒体肌病的结果量度和临床试验准备情况。consensus recommendations.10
‑
18 november2016,rome,italy.neuromuscul.disord.,12,1126
‑
1137)，其中在newcastle mitochondrial disease adult scale(nmdas)第iii部分问题5中肌病评分为2
‑
4。大约12名受试者确认有m.3243a>g突变，且12名受试者有其他mtdna缺陷，伴有肌病。
[0262]
目前遵循避免禁食的稳定饮食方案，如筛选期间获得的3天饮食记录所证明的。
[0263]
入组前至少30天有稳定的治疗方案。
[0264]
整个研究中预期且愿意保持稳定饮食和医疗。
[0265]
能走动且能够进行研究运动测试。
[0266]
足够的肾功能，如使用cockcroft
‑
gault公式估计的肾小球滤过率(egfr)≥60ml/min/1.73m2所定义的。
[0267]
能够服用胶囊。
[0268]
排除标准：出现以下任一项的受试者将不会纳入研究：
[0269]
‑
不稳定或未良好控制的疾病，如通过以下中的一项或多项确定的：超声心动图在筛选时有活动性或恶化心肌病的证据；存在急性横纹肌溶解症状，且血清cpk升高与肌病急性加重一致；来自其潜在疾病的急性危象的证据。
[0270]
‑
目前服用抗凝剂。
[0271]
‑
具有可能干扰结果量度的除了与线粒体疾病相关的那些的运动异常之外的运动异常。
[0272]
‑
在第1天之前的3个月内使用研究药物进行治疗。
[0273]
‑
研究人员认为在研究期间可能需要改变管理或可能干扰本研究的实施或安全性的显著伴随临床疾病的证据。(对于控制良好的稳定慢性病况，如受控的高血压(bp<140/90mmhg)甲状腺疾病、控制良好的1型或2型糖尿病(hba1c<8％)、高胆固醇血症、胃食管反流，或药物控制(除了三环类抗抑郁药)的抑郁症，只要症状和药物预计不会有损安全性或干扰本研究的测试和解释，则是可以接受的)。
[0274]
‑
除原位皮肤癌之外的癌症病史。
[0275]
‑
在筛选前3个月内因任何重大医疗病况而住院(由主要研究者认定)。
[0276]
‑
临床上显著的心脏病或ecg异常。
[0277]
‑
任何可能降低药物吸收的病况(例如，胃切除术)。
[0278]
‑
临床显著的肝病史，如通过alt、ggt或tb升高所证明的。
[0279]
‑
筛选时乙型肝炎表面抗原(hbsag)或丙型肝炎或hiv阳性。
[0280]
‑
临床显著肌肉损伤测试的证据(cpk>3x uln)。
[0281]
‑
药物滥用史或尿液药物筛查呈阳性。
[0282]
‑
在筛选的6个月内，每周定期饮酒超过14次(1次＝150ml葡萄酒或360ml啤酒或45ml烈酒)的历史。
[0283]
‑
怀孕或哺乳期女性。
[0284]
‑
对ppar激动剂敏感史。
[0285]
‑
研究人员认为可能会增加与研究参与或研究产品施用相关的风险或可能干扰研究结果解释的任何其他严重的急性或慢性医学或精神病况或实验室异常。
[0286]
主要结果量度：安全性终点包括：不良事件的次数和严重性。在以下中在第12周时的绝对值、相对于基线的变化发生以及临床显著变化发生率：实验室安全性测试；心电图；仰卧生命体征。
[0287]
药代动力学终点包括：化合物1血浆浓度和使用混合血浆鉴定代谢物。
[0288]
血清生物标志物从基线到第12周的绝对值和变化：成纤维细胞生长因子21(fgf
‑
21)和生长/分化因子15(gdf
‑
15)。酰基肉碱组中从基线到第12周的绝对值和变化。肌肉组织病理学从基线到第12周的变化。
[0289]
用化合物1治疗12周后从基线的变化：峰值运动试验(包括borg量表)；次极量运动测试(包括borg量表)；在12分钟步行测试中步行的距离(包括步态分析)；坐
‑
站30秒。
[0290]
在肌肉活检生物标志物中用化合物1治疗12周后从基线的变化(如果样本稀少，则按重要性排序)：线粒体dna拷贝数；异质性水平、呼吸链酶活性(atp
‑
adp水平、脂肪酸氧化基因表达或通量)；使用转录组学的信使核糖核酸(mrna)水平；在nmdas中从基线的变化；在sf
‑
36中从基线的变化；修正疲劳影响量表得分从基线的变化；在简明疼痛量表(简短形式)中从基线的变化。使用化合物1的pmm临床试验结果
[0291]
通常，在参与该研究的受试者中对化合物1的耐受性良好。
[0292]
在每天一次接受100mg的化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物共12周的受试者中观察到运动耐量的改善。在12分钟步行测试期间，受试者能够增加步行距离。图1示出了化合物1对这组受试者12分钟步行测试的影响结果。在同一组受试者中，对于每天一次接受100mg的化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物共12周的许多受试者观察到峰值vo2增加的趋势。
[0293]
在每天一次接受100mg的化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物共12周的受试者中观察到简明疼痛指数(bpi)的降低。图2示出了由于向这组受试者施用化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物导致的平均bpi评分的降低。在同一组受试者中，对于每天一次接受100mg的化合物1或其药学上可接受的盐或溶剂化物共12周的许多受试者观察到修正疲劳影响量表评分增加的趋势。
[0294]
本文描述的实施例和实施方案仅用于说明目的，并且向本领域技术人员建议的各
种修改或改变都被包括在本技术的精神和范围内以及所附权利要求的范围内。