一种索马鲁肽侧链的液相制备方法与流程

1.本发明属于医药化工领域，具体涉及一种索马鲁肽侧链的液相制备方法。


背景技术：

2.索玛鲁肽(sermaglutide)是诺和诺德公司研发一种新的长效胰高血糖素样肽-1(glp-1)类似物，不仅具有显著的降血糖疗效，还具有明显的减肥功效，该药也是诺和诺德糖尿病管线中第2种兼具降糖及减肥功效的glp-1降糖药(另一种为利拉鲁肽)。与利拉鲁肽相比，索玛鲁肽的脂肪连更长，疏水性强，但是索玛鲁肽经过短链的peg修饰，亲水性大大增强。peg修饰后不但可以与白蛋白紧密结合，掩盖dpp-4酶水解位点，还能降低肾排泄，可延长生物半衰期，达到长循环的效果。索玛鲁肽具有降低血糖、减轻体重、促进胰岛细胞再生以及心血管系统保护等多种效应，临床应用前景广阔，索玛鲁肽cas：910463-68-2序列：his-aib-glu-gly-thr-phe-thr-ser-asp-val-ser-ser-tyr-leu-glu-gly-gln-ala-ala-lys(octadec anedioic-glu-peg2-peg2)-glu-phe-ile-ala-trp-leu-val-arg-gly-arg-gly-oh。
3.目前已报道的索玛鲁肽的制备方法分为三类：
4.第一类为片段法合成索玛鲁肽，例如中国专利申请cn104356224a和cn106749613a，该方法浪费原料，所得中间体需要纯化并建立质量标准，理论上节约时间，实际由于步骤增多、纯化和检测中间体耗时等原因，导致最终合成周期延长，成本增加；第二类为将修饰后的lys接入索玛鲁肽主链，例如中国专利申请cn106478806a，该方法存在反应不完全、活性弱、生产成本高，需多步纯化等缺点；第三类为完成索玛鲁肽主链合成后脱除侧链保护，然后完成侧链修饰，例如中国专利申请cn106928343a和cn101133082a，该方法将极易消旋的his过早引入树脂，作为索玛鲁肽末端结构的his在后期多步侧链缩合过程中不断消旋，导致最终消旋杂质越来越多，也缺乏合理性，不利于工业生产。
5.其中多肽药物最有效的化学合成方法是固相合成fmoc法，也就是从多肽的-cooh开始，将第一个氨基酸连接到树脂上后，除去氨基酸n端的fmoc保护基，按照顺序，偶联下一个氨基酸，脱去n端保护，再偶联，再脱保护的方式直到最后一个n端氨基酸的偶联完成，如中国专利申请cn109311961公布了一种索马鲁肽的合成方法，该方法是通过将二肽片段、三肽片段或其组合与n端fmoc保护且侧链保护的氨基酸、fmoc-gly-树脂偶联，得到索马鲁肽树脂，经侧链修饰后裂解或直接裂解、纯化、冻干，即得。作为其基础的二肽片段纯度及收率对其后续偶联有着重要影响，专利cn109311961以boc-his(trt)-oh为起始氨基酸与honb成活性酯，活性酯进一步与h-aib-oh反应形成boc-his(trt)-aib-oh基础二肽片段，该反应收率只有59.4％，且纯度不高严重影响后续多肽合成反应收率及纯度。
6.综上所述，现有索马鲁肽侧链的制备过程中，合成步骤较多，合成周期长，纯度和收率低，生产成本高，不利于大规模生产。


技术实现要素：

7.为了解决现有技术中索马鲁肽过程合成步骤较多、合成周期长、产物分离困难等问题，本发明提供了一种索马鲁肽基础侧链二肽的制备方法，该方法反应路线短，操作简便，反应更加温和、经济环保且收率高，适于工业化生产。
8.本发明具体通过如下技术方案实现：
9.一种索马鲁肽侧链的液相制备方法，包括如下步骤：
10.(1)活性酯的制备
11.化合物ii即n-保护-l-组氨酸和化合物iii即n-羟基琥珀酰亚胺反应得活性酯即反应液a；
12.(2)反应液b的制备
13.化合物iv即2-氨基异丁酸与化合物v即n,o-双三甲基硅基乙酰胺，得tms衍生物，即反应液b；
14.(3)中间体ii的制备
15.将反应液b和反应液a混合，反应结束得中间体iv；
16.(4)侧链化合物的制备
17.中间体iv脱保护的化合物i：
[0018][0019]
优选的，在以下部分进一步详细的描述以上步骤：
[0020]
步骤1活性酯的制备
[0021]
将化合物ii即n-保护-l-组氨酸，化合物iii即n-羟基琥珀酰亚胺加入反应瓶中，加入有机溶剂，搅拌溶解；将缩合试剂加入反应液中，控温搅拌反应，得反应液a。
[0022]
优选方案，所述的缩合试剂可以为二环己基碳二亚胺、n,n
’-
二异丙基碳二亚胺、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷、苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐中的任意一种或其组合，其中特别优选二环己基碳二亚胺。
[0023]
优选方案，所述的化合物ii、化合物iii、缩合试剂的投料摩尔比为1:2.0～3.0:2.0～3.0，其中特别优选1:2.4:2.4。
[0024]
优选方案，所述的有机溶剂为二氯甲烷、四氢呋喃、甲苯、乙腈、dmf、二氯乙烷、氯
仿中的一种或其组合，其中特别优选二氯甲烷。
[0025]
优选方案，所述的反应温度为20～40℃，其中特别优选35℃。
[0026]
步骤2反应液b的制备：
[0027]
将化合物iv即2-氨基异丁酸加入反应瓶中，加入有机溶剂及化合物v即n,o-双三甲基硅基乙酰胺控温反应，得反应液b。
[0028]
优选方案，所述有机溶剂选自二氯甲烷、四氢呋喃、乙腈、dmf中的一种或其组合，特别优选二氯甲烷。
[0029]
优选方案，所述的化合物iv、化合物v的投料摩尔比为：1:1.8～2.5，特别优选1:2.0。
[0030]
优选方案，所述的反应温度为10～30℃，优选25℃。
[0031]
步骤3中间体vi的制备
[0032]
将反应液b加入反应液a中，室温反应，得中间体vi。
[0033]
优选方案，所述化合物a(视为完全反应)与化合物b(视为完全反应)的投料摩尔比为1:1.8～2.5，其中特别优选1:2.0。
[0034]
在一优选方案中，反应结束后需进行后处理操作，具体的为：tlc检测反应完毕反应完毕后，停止反应，将反应液减压浓缩加入有机溶剂，在低温下搅拌析晶，干燥；所述析晶溶剂为甲醇、乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷中的一种或其组合；所述析晶温度为-5℃～10℃。
[0035]
步骤4索马鲁肽侧链二肽的制备
[0036]
将中间体vi加入有机溶剂中搅拌溶解，加入酸控温搅拌反应，tlc检测反应，反应液经后处理得侧链化合物i。
[0037]
优选方案，所述酸为三氟乙酸、盐酸、硫酸中的一种或其组合，其中特别优选三氟乙酸。
[0038]
优选方案，所述的化合物vi、酸的投料质量体积比为：1:2.5～3.5，质量以g计，体积以ml计，特别优选1:3.0。
[0039]
优选方案，所述有机溶剂选自二氯甲烷、三氯甲烷、乙腈、dmf中的一种或其组合，特别优选二氯甲烷。
[0040]
优选方案，所述的反应温度为20℃～40℃，优选35℃
[0041]
在一优选方案中，反应结束后需进行后处理操作，具体的为：反应完全后，向反应体系中加水搅拌，收集有机相，减压浓缩，向体系中加入析晶溶剂，室温搅拌析晶，过滤得白色固体即侧链化合物，所述析晶溶剂为石油醚，乙酸乙酯，甲基叔丁基醚，二氯甲烷、乙腈、丙酮中的一种或其组合，其中优选二氯甲烷/甲基叔丁基醚的混合溶剂。
[0042]
与现有技术相比，本发明取得的技术效果是：
[0043]
1、提供了一种新的制备索马鲁肽侧链的液相合成方法，相比于常规的固相合成方法，该液相合成方法不会引起树脂缩聚，增强了氨基酸偶联的程度，提高了偶联的反应活性和效率；
[0044]
2、本发明提供的制备方法关键中间体化合物a与化合物b无需分离，简化了操作步骤。
[0045]
本发明提供的液相合成方法简化了操作步骤，合成周期短，成本低，副产物少，产品收率高，有利于索马鲁肽的大规模生产，满足工业化生产的需求。
具体实施方式
[0046]
下面通过实施例来进一步说明本发明。应该正确理解的是：本发明的实施例仅仅是用于说明本发明，而不是对本发明的限制，所以，在本发明的方法前提下对本发明的简单改进均
[0047]
化合物vi的制备
[0048]
实施例1
[0049]
将化合物ii即n-保护-l-组氨酸(3.10g，5.0mmol)、n-羟基琥珀酰亚胺(1.44g，12.0mmol)于反应瓶中，加入二氯甲烷(20ml)，搅拌溶解，加入二环己基碳二亚胺(2.47g，12.0mmol)加入反应液中，35℃搅拌反应4h，得反应液a。
[0050]
将化合物iv即2-氨基异丁酸(1.03g，10.0mmol)于反应瓶中，加入二氯甲烷(20ml)及化合物v即n,o-双三甲基硅基乙酰胺(4.06g，20.0mmol)，于25℃条件下，搅拌反应14h，得反应液b。
[0051]
将反应液b加入反应液a中，加入完毕室温搅拌反应4h，将反应液减压浓缩至无液体流出，得黄色油状液体。向油状液体中加乙醇(20ml)，在5℃条件下搅拌，抽滤得白色固体，40℃真空干燥得中间体化合物vi，收率98.9％，hplc纯度99.89％。
[0052]
实施例2
[0053]
将化合物ii即n-保护-l-组氨酸(3.10g，5.0mmol)、n-羟基琥珀酰亚胺(1.16g，10.0mmol)于反应瓶中，加入四氢呋喃(20ml)，搅拌溶解，加入n,n
’-
二异丙基碳二亚胺(1.51g，12.0mmol)加入反应液中，40℃搅拌反应4h，得反应液a。
[0054]
将化合物iv即2-氨基异丁酸(1.03g，10.0mmol)于反应瓶中，加入四氢呋喃(20ml)及化合物v即n,o-双三甲基硅基乙酰胺(4.06g，20.0mmol)，于25℃条件下，搅拌反应14h，得反应液b。
[0055]
将反应液b加入反应液a中，加入完毕室温搅拌反应4h，将反应液减压浓缩至无液体流出，得黄色油状液体。向油状液体中加乙醇(20ml)，在5℃条件下搅拌，抽滤得白色固体，40℃真空干燥得中间体化合物vi，收率95.3％，hplc纯度99.82％。
[0056]
实施例3
[0057]
将化合物ii即n-保护-l-组氨酸(3.10g，5.0mmol)、n-羟基琥珀酰亚胺(1.74g，15.0mmol)于反应瓶中，加入甲苯(20ml)，搅拌溶解，加入六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(6.24g，12.0mmol)加入反应液中，30℃搅拌反应4h，得反应液a。
[0058]
将化合物iv即2-氨基异丁酸(1.03g，10.0mmol)于反应瓶中，加入乙腈(20ml)及化合物v即n,o-双三甲基硅基乙酰胺(4.06g，20.0mmol)，于25℃条件下，搅拌反应14h，得反应液b。
[0059]
将反应液b加入反应液a中，加入完毕室温搅拌反应4h，将反应液减压浓缩至无液体流出，得黄色油状液体。向油状液体中加乙醇(20ml)，在5℃条件下搅拌，抽滤得白色固体，40℃真空干燥得中间体化合物vi，收率94.2％，hplc纯度99.78％。
[0060]
实施例4
[0061]
将化合物ii即n-保护-l-组氨酸(3.10g，5.0mmol)、n-羟基琥珀酰亚胺(1.04g，9.0mmol)于反应瓶中，加入乙腈(20ml)，搅拌溶解，加入苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐(5.31g，12.0mmol)加入反应液中，20℃搅拌反应4h，得反应液a。
[0062]
将化合物iv即2-氨基异丁酸(1.03g，10.0mmol)于反应瓶中，加入dmf(20ml)及化合物v即n,o-双三甲基硅基乙酰胺(4.06g，20.0mmol)，于25℃条件下，搅拌反应14h，得反应液b。
[0063]
将反应液b加入反应液a中，加入完毕室温搅拌反应4h，将反应液减压浓缩至无液体流出，得黄色油状液体。向油状液体中加乙醇(20ml)，在5℃条件下搅拌，抽滤得白色固体，40℃真空干燥得中间体化合物vi，收率90.4％，hplc纯度99.76％。
[0064]
实施例5
[0065]
将化合物ii即n-保护-l-组氨酸(3.10g，5.0mmol)、n-羟基琥珀酰亚胺(1.86g，16.0mmol)于反应瓶中，加入1.2-二氯乙烷(20ml)，搅拌溶解，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(2.30g，12.0mmol)加入反应液中，45℃搅拌反应4h，得反应液a。
[0066]
将化合物iv即2-氨基异丁酸(1.03g，10.0mmol)于反应瓶中，加入二氯甲烷(20ml)及化合物v即n,o-双三甲基硅基乙酰胺(4.06g，20.0mmol)，于10℃条件下，搅拌反应14h，得反应液b。
[0067]
将反应液b加入反应液a中，加入完毕室温搅拌反应4h，将反应液减压浓缩至无液体流出，得黄色油状液体。向油状液体中加乙醇(20ml)，在5℃条件下搅拌，抽滤得白色固体，40℃真空干燥得中间体化合物vi，收率87.3％，hplc纯度99.68％。
[0068]
实施例6
[0069]
将化合物ii即n-保护-l-组氨酸(3.10g，5.0mmol)、n-羟基琥珀酰亚胺(1.40g，12.0mmol)于反应瓶中，加入二氯甲烷(20ml)，搅拌溶解，加入二环己基碳二亚胺(2.06g，10.0mmol)(1.92g，10.0mmol)加入反应液中，15℃搅拌反应4h，得反应液a。
[0070]
将化合物iv即2-氨基异丁酸(1.03g，10.0mmol)于反应瓶中，加入二氯甲烷(20ml)及化合物v即n,o-双三甲基硅基乙酰胺(4.06g，20.0mmol)，于30℃条件下，搅拌反应14h，得反应液b。
[0071]
将反应液b加入反应液a中，加入完毕室温搅拌反应4h，将反应液减压浓缩至无液体流出，得黄色油状液体。向油状液体中加乙醇(20ml)，在5℃条件下搅拌，抽滤得白色固体，40℃真空干燥得中间体化合物vi，收率96.6％，hplc纯度99.81％。
[0072]
实施例6
[0073]
将化合物ii即n-保护-l-组氨酸(3.10g，5.0mmol)、n-羟基琥珀酰亚胺(1.40g，12.0mmol)于反应瓶中，加入二氯甲烷(20ml)，搅拌溶解，加入二环己基碳二亚胺(3.10g，15.0mmol)加入反应液中，35℃搅拌反应4h，得反应液a。
[0074]
将化合物iv即2-氨基异丁酸(1.03g，10.0mmol)于反应瓶中，加入二氯甲烷(20ml)及化合物v即n,o-双三甲基硅基乙酰胺(4.06g，20.0mmol)，于30℃条件下，搅拌反应14h，得反应液b。
[0075]
将反应液b加入反应液a中，加入完毕室温搅拌反应4h，将反应液减压浓缩至无液体流出，得黄色油状液体。向油状液体中加乙醇(20ml)，在-5℃条件下搅拌，抽滤得白色固体，40℃真空干燥得中间体化合物vi，收率94.5％，hplc纯度99.75％。
[0076]
实施例7
[0077]
将化合物ii即n-保护-l-组氨酸(3.10g，5.0mmol)、n-羟基琥珀酰亚胺(1.40g，12.0mmol)于反应瓶中，加入二氯甲烷(20ml)，搅拌溶解，加入二环己基碳二亚胺(1.86g，
9.0mmol)加入反应液中，35℃搅拌反应4h，得反应液a。
[0078]
将化合物iv即2-氨基异丁酸(1.03g，10.0mmol)于反应瓶中，加入二氯甲烷(20ml)及化合物v即n,o-双三甲基硅基乙酰胺(4.06g，20.0mmol)，于35℃条件下，搅拌反应14h，得反应液b。
[0079]
将反应液b加入反应液a中，加入完毕室温搅拌反应4h，将反应液减压浓缩至无液体流出，得黄色油状液体。向油状液体中加甲醇(20ml)，在10℃条件下搅拌，抽滤得白色固体，40℃真空干燥得中间体化合物vi，收率92.1％，hplc纯度99.73％。
[0080]
实施例8
[0081]
将化合物ii即n-保护-l-组氨酸(3.10g，5.0mmol)、n-羟基琥珀酰亚胺(1.40g，12.0mmol)于反应瓶中，加入二氯甲烷(20ml)，搅拌溶解，加入二环己基碳二亚胺(3.30g，16.0mmol)加入反应液中，20℃搅拌反应4h，得反应液a。
[0082]
将化合物iv即2-氨基异丁酸(1.03g，10.0mmol)于反应瓶中，加入二氯甲烷(20ml)及化合物v即n,o-双三甲基硅基乙酰胺(4.06g，20.0mmol)，于5℃条件下，搅拌反应14h，得反应液b。
[0083]
将反应液b加入反应液a中，加入完毕室温搅拌反应4h，将反应液减压浓缩至无液体流出，得黄色油状液体。向油状液体中加乙酸乙酯(20ml)，在-10℃条件下搅拌，抽滤得白色固体，40℃真空干燥得中间体化合物vi，收率87.8％，hplc纯度99.67％。
[0084]
实施例9
[0085]
将化合物ii即n-保护-l-组氨酸(3.10g，5.0mmol)、n-羟基琥珀酰亚胺(1.40g，12.0mmol)于反应瓶中，加入二氯甲烷(20ml)，搅拌溶解，加入二环己基碳二亚胺(2.47g，12.0mmol)加入反应液中，35℃搅拌反应4h，得反应液a。
[0086]
将化合物iv即2-氨基异丁酸(1.03g，10.0mmol)于反应瓶中，加入二氯甲烷(20ml)及化合物v即n,o-双三甲基硅基乙酰胺(3.67g，18.0mmol)，于25℃条件下，搅拌反应14h，得反应液b。
[0087]
将反应液b加入反应液a中，加入完毕室温搅拌反应4h，将反应液减压浓缩至无液体流出，得黄色油状液体。向油状液体中加乙酸乙酯(20ml)，在0℃条件下搅拌，抽滤得白色固体，40℃真空干燥得中间体化合物vi，收率96.4％，hplc纯度99.80％。
[0088]
实施例10
[0089]
将化合物ii即n-保护-l-组氨酸(3.10g，5.0mmol)、n-羟基琥珀酰亚胺(1.40g，12.0mmol)于反应瓶中，加入二氯甲烷(20ml)，搅拌溶解，加入二环己基碳二亚胺(2.47g，12.0mmol)加入反应液中，20℃搅拌反应4h，得反应液a。
[0090]
将化合物iv即2-氨基异丁酸(1.03g，10.0mmol)于反应瓶中，加入二氯甲烷(20ml)及化合物v即n,o-双三甲基硅基乙酰胺(5.09g，25.0mmol)，于25℃条件下，搅拌反应14h，得反应液b。
[0091]
将反应液b加入反应液a中，加入完毕室温搅拌反应4h，将反应液减压浓缩至无液体流出，得黄色油状液体。向油状液体中加二氯甲烷(20ml)，在-15℃条件下搅拌，抽滤得白色固体，40℃真空干燥得中间体化合物vi，收率92.4％，hplc纯度99.72％。
[0092]
实施例11
[0093]
将化合物ii即n-保护-l-组氨酸(3.10g，5.0mmol)、n-羟基琥珀酰亚胺(1.40g，
12.0mmol)于反应瓶中，加入二氯甲烷(20ml)，搅拌溶解，加入二环己基碳二亚胺(2.47g，12.0mmol)加入反应液中，20℃搅拌反应4h，得反应液a。
[0094]
将化合物iv即2-氨基异丁酸(1.03g，10.0mmol)于反应瓶中，加入二氯甲烷(20ml)及化合物v即n,o-双三甲基硅基乙酰胺(3.05g，15.0mmol)，于25℃条件下，搅拌反应14h，得反应液b。
[0095]
将反应液b加入反应液a中，加入完毕室温搅拌反应4h，将反应液减压浓缩至无液体流出，得黄色油状液体。向油状液体中加乙醇(20ml)，在5℃条件下搅拌，抽滤得白色固体，40℃真空干燥得中间体化合物vi，收率88.3％，hplc纯度99.70％。
[0096]
实施例12
[0097]
将化合物ii即n-保护-l-组氨酸(3.10g，5.0mmol)、n-羟基琥珀酰亚胺(1.40g，12.0mmol)于反应瓶中，加入二氯甲烷(20ml)，搅拌溶解，加入二环己基碳二亚胺(2.47g，12.0mmol)加入反应液中，20℃搅拌反应4h，得反应液a。
[0098]
将化合物iv即2-氨基异丁酸(1.03g，10.0mmol)于反应瓶中，加入二氯甲烷(20ml)及化合物v即n,o-双三甲基硅基乙酰胺(5.70g，28.0mmol)，于25℃条件下，搅拌反应14h，得反应液b。
[0099]
将反应液b加入反应液a中，加入完毕室温搅拌反应4h，将反应液减压浓缩至无液体流出，得黄色油状液体。向油状液体中加乙醇(20ml)，在5℃条件下搅拌，抽滤得白色固体，40℃真空干燥得中间体化合物vi，收率85.3％，hplc纯度99.64％。
[0100]
实施例13
[0101]
将化合物ii即n-保护-l-组氨酸(3.10g，5.0mmol)、n-羟基琥珀酰亚胺(1.40g，12.0mmol)于反应瓶中，加入二氯甲烷(20ml)，搅拌溶解，加入二环己基碳二亚胺(2.47g，12.0mmol)加入反应液中，20℃搅拌反应4h，得反应液a。
[0102]
将化合物iv即2-氨基异丁酸(0.93g，9.0mmol)于反应瓶中，加入二氯甲烷(20ml)及化合物v即n,o-双三甲基硅基乙酰胺(3.67g，18.0mol)，于25℃条件下，搅拌反应14h，得反应液b。
[0103]
将反应液b加入反应液a中，加入完毕室温搅拌反应4h，将反应液减压浓缩至无液体流出，得黄色油状液体。向油状液体中加乙醇(20ml)，在5℃条件下搅拌，抽滤得白色固体，40℃真空干燥得中间体化合物vi，收率95.3％，hplc纯度99.81％。
[0104]
实施例14
[0105]
将化合物ii即n-保护-l-组氨酸(3.10g，5.0mmol)、n-羟基琥珀酰亚胺(1.40g，12.0mmol)于反应瓶中，加入二氯甲烷(20ml)，搅拌溶解，加入二环己基碳二亚胺(2.47g，12.0mmol)加入反应液中，20℃搅拌反应4h，得反应液a。
[0106]
将化合物iv即2-氨基异丁酸(1.29g，12.5mmol)于反应瓶中，加入二氯甲烷(20ml)及化合物v即n,o-双三甲基硅基乙酰胺(5.09g，25.0mmol)，于25℃条件下，搅拌反应14h，得反应液b。
[0107]
将反应液b加入反应液a中，加入完毕室温搅拌反应4h，将反应液减压浓缩至无液体流出，得黄色油状液体。向油状液体中加乙醇(20ml)，在5℃条件下搅拌，抽滤得白色固体，40℃真空干燥得中间体化合物vi，收率93.6％，hplc纯度99.75％。
[0108]
实施例15
[0109]
将化合物ii即n-保护-l-组氨酸(3.10g，5.0mmol)、n-羟基琥珀酰亚胺(1.40g，12.0mmol)于反应瓶中，加入二氯甲烷(20ml)，搅拌溶解，加入二环己基碳二亚胺(2.47g，12.0mmol)加入反应液中，20℃搅拌反应4h，得反应液a。
[0110]
将化合物iv即2-氨基异丁酸(0.78g，7.5mmol)于反应瓶中，加入二氯甲烷(20ml)及化合物v即n,o-双三甲基硅基乙酰胺(3.05g，15.0mol)，于25℃条件下，搅拌反应14h，得反应液b。
[0111]
将反应液b加入反应液a中，加入完毕室温搅拌反应4h，将反应液减压浓缩至无液体流出，得黄色油状液体。向油状液体中加乙醇(20ml)，在5℃条件下搅拌，抽滤得白色固体，40℃真空干燥得中间体化合物vi，收率89.2％，hplc纯度99.72％。
[0112]
实施例16
[0113]
将化合物ii即n-保护-l-组氨酸(3.10g，5.0mmol)、n-羟基琥珀酰亚胺(1.40g，12.0mmol)于反应瓶中，加入二氯甲烷(20ml)，搅拌溶解，加入二环己基碳二亚胺(2.47g，12.0mmol)加入反应液中，20℃搅拌反应4h，得反应液a。
[0114]
将化合物iv即2-氨基异丁酸(1.44g，14.0mmol)于反应瓶中，加入二氯甲烷(20ml)及化合物v即n,o-双三甲基硅基乙酰胺(5.70g，28.0mmol)，于25℃条件下，搅拌反应14h，得反应液b。
[0115]
将反应液b加入反应液a中，加入完毕室温搅拌反应4h，将反应液减压浓缩至无液体流出，得黄色油状液体。向油状液体中加乙醇(20ml)，在5℃条件下搅拌，抽滤得白色固体，40℃真空干燥得中间体化合物vi，收率85.5％，hplc纯度99.63％。
[0116]
二肽的制备
[0117]
实施例17
[0118]
将中间体vi(7.05g，0.01mol)，加入二氯甲烷(60ml)搅拌溶解，加入三氟乙酸(20ml)35℃下搅拌反应，tlc检测反应完全，向反应体系中加水(20ml)搅拌10分钟，收集有机相，减压浓缩至无液体流出。向体系中加入二氯甲烷/甲基叔丁基醚(30ml，v
二氯甲烷
：v
甲基叔丁基醚
＝1：1)混合溶液，室温搅拌析晶，过滤得白色固体即化合物i，收率99.5％，hplc纯度99.92％。
[0119]
实施例18
[0120]
将中间体vi(7.05g，11.3mmol)，加入三氯甲烷(60ml)搅拌溶解，加入三氟乙酸(18ml)30℃下搅拌反应，tlc检测反应完全，向反应体系中加水(20ml)搅拌10分钟，收集有机相，减压浓缩至无液体流出。向体系中加入三氯甲烷/甲基叔丁基醚(30ml，v
三氯甲烷
：v
甲基叔丁基醚
＝1：1)混合溶液，室温搅拌析晶，过滤得白色固体即化合物i，收率96.2％，hplc纯度99.87％。
[0121]
实施例19
[0122]
将中间体vi(7.05g，11.3mmol)，加入dmf(60ml)搅拌溶解，加入三氟乙酸(25ml)40℃下搅拌反应，tlc检测反应完全，向反应体系中加水(20ml)搅拌10分钟，收集有机相，减压浓缩至无液体流出。向体系中加入乙酸乙酯/甲基叔丁基醚(30ml，v
乙酸乙酯
：v
甲基叔丁基醚
＝1：1)混合溶液，室温搅拌析晶，过滤得白色固体即化合物i，收率93.2％，hplc纯度99.78％。
[0123]
实施例20
[0124]
将中间体vi(7.05g，11.3mmol)，加入二氯甲烷(60ml)搅拌溶解，加入三氟乙酸
(14ml)45℃下搅拌反应，tlc检测反应完全，向反应体系中加水(20ml)搅拌10分钟，收集有机相，减压浓缩至无液体流出。向体系中加入乙腈/甲基叔丁基醚(30ml，v
乙腈
：v
甲基叔丁基醚
＝1：1)混合溶液，室温搅拌析晶，过滤得白色固体即化合物i，收率87.2％，hplc纯度99.75％。
[0125]
实施例21
[0126]
将中间体vi(7.05g，11.3mmol)，加入二氯甲烷(60ml)搅拌溶解，加入三氟乙酸(27ml)20℃下搅拌反应，tlc检测反应完全，向反应体系中加水(20ml)搅拌10分钟，收集有机相，减压浓缩至无液体流出。向体系中加入丙酮/甲基叔丁基醚(30ml，v
丙酮
：v
甲基叔丁基醚
＝1：1)混合溶液，室温搅拌析晶，过滤得白色固体即化合物i，收率85.8％，hplc纯度99.65％。
[0127]
实施例22
[0128]
将中间体vi(7.05g，11.3mmol)，加入二氯甲烷(60ml)搅拌溶解，加入盐酸(20ml)15℃下搅拌反应，tlc检测反应完全，向反应体系中加水(20ml)搅拌10分钟，收集有机相，减压浓缩至无液体流出。向体系中加入二氯甲烷(30ml)混合溶液，室温搅拌析晶，过滤得白色固体即化合物i，收率86.2％，hplc纯度99.84％。
[0129]
实施例23
[0130]
将中间体vi(7.05g，0.01mol)，加入二氯甲烷(60ml)搅拌溶解，加入硫酸(20ml)35℃下搅拌反应，tlc检测反应完全，向反应体系中加水(20ml)搅拌10分钟，收集有机相，减压浓缩至无液体流出。向体系中加入乙腈(30ml)混合溶液，室温搅拌析晶，过滤得白色固体即化合物i，收率87.2％，hplc纯度99.75％。
[0131]
对比实施例
[0132]
boc-his(trt)-aib-oh的制备
[0133]
将boc-his(trt)-oh(49.8g,100.0mmol)和honb(20.77g,116.0mmol)溶解在200ml thf中，冰浴条件下加入dcc(23.73g,115.0mmol)，冰浴搅拌1h，撤掉冰浴，室温反应5h滤掉不溶物，得到boc-his(trt)-onb溶液。
[0134]
将h-aib-oh(10.3g,100.0mmol)和nahco3(17.22g,205.0mmol)溶解在thf/h2o(200ml,200ml)中，冰浴条件下将上述boc-his(trt)-onb溶液滴加到上述thf/h2o中，滴加完毕后撤掉冰浴，室温搅拌反应2h。真空浓缩掉thf，水相中加入200ml h2o/et2o洗涤3次，柠檬酸酸化水相ph至3,ea萃取(500ml
×
2)，有机相用饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，得到油状物用meoh-h2o重结晶，离心干燥后得到boc-his(trt)-aib-oh白色粉末状固体，hplc纯度94.8％，收率50.8％。