TLR8基因人源化的非人动物及其构建方法和应用与流程

技术特征：
1.一种嵌合tlr8蛋白，其特征在于，所述的嵌合tlr8蛋白包含人tlr8蛋白的全部或部分。2.根据权利要求1所述的嵌合tlr8蛋白，其特征在于，所述的嵌合tlr8蛋白包含人tlr8蛋白的信号肽、跨膜区、胞质区和/或胞外区的全部或部分，优选的，所述的嵌合tlr8蛋白包含人tlr8蛋白的信号肽和/或胞外区的全部或部分，优选的，所述的人tlr8蛋白胞外区的部分包含至少200、250、300或350个氨基酸，进一步优选的，所述的胞外区包含与seq id no：4的第27
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818位、第27
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822位或第27
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825位具有至少60％、65％、70％、80％、85％、90％、95％或至少99％同一性的氨基酸序列或者包含seq id no：4的第27
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818位、第27
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822位或第27
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825位所示的氨基酸序列；所述的人tlr8蛋白信号肽的部分包含至少10、15或20个氨基酸，优选的，所述的信号肽包含与seq id no：4的第5
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26位具有至少60％、65％、70％、80％、85％、90％、95％或至少99％同一性的氨基酸序列或者包含与seq id no：4的第5
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26位所示的氨基酸序列。3.根据权利要求1或2所述的嵌合tlr8蛋白，其特征在于，所述的嵌合tlr8蛋白中包含的人tlr8蛋白的部分氨基酸序列选自下列组中的一种：a)包含seq id no：4第5
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818、1
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818、1
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822、1
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825、5
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822或5
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825位氨基酸序列的全部或部分；b)包含与seq id no：4的第5
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818、1
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818、1
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822、1
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825、5
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822或5
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825位氨基酸序列同一性至少为75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％的氨基酸序列；c)包含与seq id no：4的第5
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818、1
‑
818、1
‑
822、1
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825、5
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822或5
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825位所示氨基酸序列差异不超过10、9、8、7、6、5、4、3、2或不超过1个氨基酸的氨基酸序列；或d)包含seq id no：4的第5
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818、1
‑
818、1
‑
822、1
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825、5
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822或5
‑
825位所示的，包括取代、缺失和/或插入一个或多个氨基酸残基的氨基酸序列。4.根据权利要求1
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3任一所述的嵌合tlr8蛋白，其特征在于，所述的嵌合tlr8蛋白的氨基酸序列选自下列组中的一种：a)包含seq id no：13氨基酸序列的全部或部分；b)包含与seq id no：13氨基酸序列同一性至少为60％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％的氨基酸序列；c)包含与seq id no：13所示氨基酸序列差异不超过10、9、8、7、6、5、4、3、2或不超过1个氨基酸的氨基酸序列；或d)包含seq id no：13所示的，包括取代、缺失和/或插入一个或多个氨基酸残基的氨基酸序列。5.一种tlr8嵌合基因，其特征在于，所述的tlr8嵌合基因包含人tlr8基因的部分。6.根据权利要求5所述的tlr8嵌合基因，其特征在于，所述的tlr8嵌合基因编码权利要求1
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4任一所述的嵌合tlr8蛋白。7.根据权利要求5或6所述的tlr8嵌合基因，其特征在于，所述的tlr8嵌合基因包含人tlr8基因的1号外显子至2号外显子的全部或部分；优选的，所述的人tlr8基因的部分包含2号外显子的全部或部分，其中，2号外显子的部分至少包含500bp的核苷酸序列，优选的，所述的人tlr8基因的部分至少包含seq id no：7所示核苷酸序列。
8.根据权利要求5
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7任一所述的tlr8嵌合基因，其特征在于，所述的tlr8嵌合基因中包含的人tlr8基因的部分选自下列组中的一种：(a)包含seq id no：7所示核苷酸序列的全部或部分；(b)包含与seq id no：7所示核苷酸序列的同一性至少为75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％的核苷酸序列；(c)包含与seq id no：7所示核苷酸序列差异不超过10、9、8、7、6、5、4、3、2或不超过1个核苷酸的核苷酸序列；(d)具有seq id no：7所示核苷酸序列的，包括取代、缺失和/或插入一个或多个核苷酸的核苷酸序列。9.根据权利要求5
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8任一所述的tlr8嵌合基因，其特征在于，所述的tlr8嵌合基因的核苷酸序列转录的mrna选自下列组中的一种：(a)包含seq id no：12所示核苷酸序列的全部或部分；(b)包含与seq id no：12所示核苷酸序列的同一性至少为75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％的核苷酸序列；(c)包含与seq id no：12所示的核苷酸序列差异不超过10、9、8、7、6、5、4、3、2或不超过1个核苷酸的核苷酸序列；或(d)包含与seq id no：12所示的核苷酸序列所示的，包括取代、缺失和/或插入一个或多个核苷酸的核苷酸序列。10.根据权利要求5
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9任一所述的tlr8嵌合基因，其特征在于，所述的tlr8嵌合基因包含编码人tlr8蛋白的cdna。11.根据权利要求5
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10任一所述的tlr8嵌合基因，其特征在于，所述的tlr8嵌合基因对于被替换的内源tlr8基因座是纯合或者杂合。12.一种靶向载体，其特征在于，所述的靶向载体包含人tlr8基因的部分，优选的，所述的人tlr8基因的部分包含1号至2号外显子的全部或部分；进一步优选的，所述的人tlr8基因的部分包含2号外显子的全部或部分，其中，2号外显子的部分至少包含500bp的核苷酸序列，优选的，所述的人tlr8基因的部分至少包含seq id no：7所示核苷酸序列。13.根据权利要求12所述的靶向载体，其特征在于，所述的靶向载体包含编码人tlr8蛋白的cdna的至少部分。14.根据权利要求12
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13任一所述的靶向载体，其特征在于，所述的靶向载体还包含5’臂，其选自非人动物tlr8基因基因组dna的100
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10000个长度的核苷酸；优选的，所述的5’臂与ncbi登录号为nc_000086.7至少具有90％同源性的核苷酸；进一步优选的，所述5’臂序列与seq id no：5至少具有90％同源性，或者如seq id no：5所示；和/或，所述的靶向载体还包含3’臂，其选自非人动物tlr8基因基因组dna的100
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10000个长度的核苷酸；优选的，所述的3’臂与ncbi登录号为nc_000086.7至少具有90％同源性的核苷酸；进一步优选的，所述的3’臂序列与seq id no：6至少具有90％同源性，或者如seq id no：6所示。15.一种tlr8基因人源化的非人动物的构建方法，其特征在于，所述的构建方法包括用包含人tlr8基因的部分导入非人动物tlr8基因座，所述的非人动物体内表达人tlr8蛋白或嵌合tlr8蛋白。16.根据权利要求15所述的构建方法，其特征在于，所述的嵌合tlr8蛋白如权利要求1
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4任一所述的嵌合tlr8蛋白。17.根据权利要求15或16所述的构建方法，其特征在于，所述的非人动物的基因组中还包含人tlr8基因或tlr8嵌合基因，所述的tlr8嵌合基因如权利要求5
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11任一所述的tlr8嵌合基因。18.根据权利要求15
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17任一所述的构建方法，其特征在于，所述的导入的人tlr8基因的部分包含人tlr8基因1号至2号外显子的全部或部分；优选的，包含人tlr8基因2号外显子的全部或部分，其中，所述人tlr8基因2号外显子的部分至少包含500bp的核苷酸序列，优选的，所述人tlr8基因2号外显子的部分包含seq id no：7所示的核苷酸序列。19.根据权利要求15
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18任一所述的构建方法，其特征在于，所述的构建方法包括将人tlr8基因的部分导入非人动物3号外显子。20.根据权利要求15
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19任一所述的构建方法，其特征在于，使用权利要求12
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14任一所述的靶向载体进行非人动物的构建。21.根据权利要求15
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20任一所述的构建方法，其特征在于，所述非人动物为至少包含人或人源化cd3、pd
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l1、pd
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1基因中至少一种的人源化的非人动物。22.一种包含tlr8基因人源化改造的细胞、组织或者器官，所述的细胞、组织或者器官包含权利要求5
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11任一所述的tlr8嵌合基因，所述的细胞、组织或者器官表达权利要求1
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4任一所述的嵌合tlr8蛋白。23.来源于权利要求1
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4任一所述的嵌合tlr8蛋白、权利要求5
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11任一所述的tlr8嵌合基因、权利要求15
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21任一所述的构建方法获得的非人动物、权利要求22所述的细胞、组织或者器官在需要涉及人类细胞的免疫过程的产品开发，制造抗体，或者作为药理学、免疫学、微生物学、医学研究的模型系统中的应用；或者在生产和利用动物实验疾病模型，用于开发新的诊断策略和/或治疗策略中的应用；或者在筛选、验证、评价或研究tlr8功能、人tlr8信号机理、靶向人的抗体、靶向人的药物、药效，免疫相关疾病药物以及抗肿瘤或抗炎症药物，筛选和评估人用药及药效研究方面的应用。

技术总结
本发明提供了一种TLR8基因人源化的非人动物及其构建方法、一种嵌合TLR8蛋白、一种TLR8嵌合基因、一种TLR8基因的靶向载体和其在生物医药领域的应用，利用同源重组的方式将部分编码人TLR8蛋白的核苷酸序列导入非人动物基因组中，该动物体内能正常表达嵌合TLR8蛋白，可以作为人TLR8信号机理研究、肿瘤及免疫性疾病药物筛选的动物模型，对免疫靶点的新药研发具有重要的应用价值。研发具有重要的应用价值。研发具有重要的应用价值。


技术研发人员：沈月雷 郭雅南 白阳 姚佳维 尚诚彰
受保护的技术使用者：百奥赛图（北京）医药科技股份有限公司
技术研发日：2021.07.15
技术公布日：2021/11/16