降低单克隆抗体生产中宿主细胞蛋白含量的亲和纯化方法与流程

技术特征：
1.一种降低单克隆抗体生产中宿主细胞蛋白含量的亲和纯化方法，其包括下述步骤：使用第一平衡缓冲液平衡亲和层析介质得到平衡好的亲和层析介质，并将单克隆抗体发酵液与所述平衡好的亲和层析介质结合；然后进行中间预洗脱淋洗，接着进行终洗脱以除去宿主细胞蛋白得到单克隆抗体；所述单克隆抗体为分离的抗人干扰素α受体1(ifnar1)单克隆抗体，其包含三个重链互补决定区(cdr
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h1、cdr
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h2和cdr
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h3)和三个轻链互补决定区(cdr
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l1、cdr
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l2和cdr
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l3)，其中：(a)cdr
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h1的氨基酸序列如seq id no：1所示；(b)cdr
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h2的氨基酸序列如seq id no：2所示；(c)cdr
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h3的氨基酸序列如seq id no：3所示；(d)cdr
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l1的氨基酸序列如seq id no：4所示；(e)cdr
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l2的氨基酸序列如seq id no：5所示；且(f)cdr
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l3的氨基酸序列如seq id no：6所示。2.根据权利要求1所述的亲和纯化方法，其中，所述抗人干扰素α受体1(ifnar1)单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中，所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no：7所示；且，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no：8所示。3.根据权利要求2所述的亲和纯化方法，其中，所述抗人干扰素α受体1(ifnar1)单克隆抗体的重链的氨基酸序列如seq id no：10所示；轻链的氨基酸序列如seq id no：11所示。4.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的亲和纯化方法，其中，所述亲和层析介质为配基交联到琼脂糖、聚乙烯醚、羟基化聚醚树脂、聚丙烯酸树脂、聚苯乙烯二乙烯苯基树脂、聚甲基丙烯酸树脂、聚苯乙烯树脂、羟基磷灰石或玻璃基质上的层析介质，优选的，所述亲和层析介质为配基交联到聚乙烯醚的层析介质；优选的，所述配基为protein a、protein g或protein l，优选为protein a。5.根据权利要求1
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4中任一项所述的亲和纯化方法，其中，所述第一平衡缓冲液为磷酸盐缓冲液、tris
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hcl缓冲液或硼酸
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硼砂缓冲液，所述第一平衡缓冲液中的盐浓度为5mm
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0.25m，ph为5.5
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8.0。6.根据权利要求1
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5中任一项所述的亲和纯化方法，其中，中间预洗脱缓冲液为中性缓冲液和/酸性缓冲液；优选的，所述中性缓冲液为磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液或甘氨酸缓冲液；所述酸性缓冲液为柠檬酸
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磷酸氢二钠缓冲液、醋酸
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醋酸钠缓冲液或柠檬酸
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柠檬酸三钠缓冲液；优选的，所述中间预洗脱缓冲液的ph为5.0
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7.5。7.根据权利要求6所述的亲和纯化方法，其中，在所述中间预洗脱缓冲液中加入预洗脱活性剂，优选的，所述预洗脱活性剂为盐酸胍、聚山梨酯80或氯化钠，进一步优选的，所述预洗脱活性剂为盐酸胍。8.根据权利要求7所述的亲和纯化方法，其中，所述盐酸胍的浓度为0.01
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1m。9.根据权利要求1
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8中任一项所述的亲和纯化方法，其中，在中间预洗脱淋洗后，在进行终洗脱之前还包括下述步骤：使用第二平衡缓冲液进行平衡，优选的，所述第二平衡缓冲液为磷酸盐缓冲液、tris
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hcl缓冲液或硼酸
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硼砂缓冲液。10.根据权利要求1
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9中任一项所述的亲和纯化方法，其中，终洗脱缓冲液选自柠檬酸
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磷酸氢二钠缓冲液、醋酸缓冲液、甘氨酸
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hcl缓冲液和柠檬酸
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柠檬酸钠缓冲液中的一种或两种以上，优选为柠檬酸
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磷酸氢二钠缓冲液；优选的，所述柠檬酸
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磷酸氢二钠缓冲液的ph为2.0
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7.0。

技术总结
本发明公开了一种降低单克隆抗体生产中宿主细胞蛋白含量的亲和纯化方法，所述方法包括下述步骤：使用第一平衡缓冲液平衡亲和层析介质得到平衡好的亲和层析介质，并将单克隆抗体发酵液与所述平衡好的亲和层析介质结合；然后进行中间预洗脱淋洗，接着进行终洗脱以除去宿主细胞蛋白得到单克隆抗体；所述单克隆抗体为分离的抗人干扰素α受体1(IFNAR1)单克隆抗体，其包含三个重链互补决定区(CDR


技术研发人员：戴长松 李帅 郭斌 黄文俊 戴璐 裘浙伟 王逸尘 何永梅 吴亦亮
受保护的技术使用者：江苏赛孚士生物技术有限公司
技术研发日：2021.08.02
技术公布日：2021/11/9