CD31竞争剂及其用途的制作方法

cd31竞争剂及其用途
技术领域
1.本发明涉及疾病的预防和/或治疗领域。
2.特别地，本发明涉及用于预防和/或治疗疾病的化合物，所述化合物是cd31的竞争剂(competitor)。


背景技术：

3.cd31，也称为血小板内皮细胞粘附分子
‑
1(platelet endothelial cell adhesion molecule
‑
1，pecam
‑
1)，是130kda的i型跨膜糖蛋白，由6个细胞外免疫球蛋白(ig)样同源结构域、一个19个残基的跨膜结构域和一个118个残基的细胞质尾组成(newman和newman,2003.arterioscler thromb vasc biol.23:953
‑
964)。因此，cd31属于细胞粘附分子的ig超家族。cd31能够通过涉及ig样结构域1的亲同种抗原相互作用(homophilic interaction)与自身结合；以及通过涉及ig样结构域1
‑
3的亲异种抗原相互作用与两种其他配体αvβ3整联蛋白和cd38结合(newman,1997.j clin invest.99(1):3
‑
8)。
4.cd31表达主要在内皮细胞中观察到，其中它被认为是组成型标志物(constitutive marker)(kalinowska&losy,2006.eur j neurol.13(12):1284
‑
90)，但cd31表达也在造血谱系(hematopoietic lineage)的大多数非红系细胞包括血小板、单核细胞、嗜中性粒细胞、t和b细胞亚群中观察到(wang等,2003.am j physiol heart circ physiol.284(3):h1008
‑
17)。尽管cd31亲同种抗原相互作用是内皮细胞细胞间连接的主要组成，但它也参与白细胞
‑
内皮细胞迁移的过程(血细胞渗出(diapedesis))，使白细胞在炎症期间渗透到组织中(ilan&madri,2003.curr opin cell biol.15(5):515
‑
24)。
5.在金属蛋白酶依赖性切割后，发现cd31以膜形式和可溶性形式存在(ilan等,2001.faseb j.15(2):362
‑
72)。在一些炎性疾病包括动脉粥样硬化和败血症中观察到可溶性cd31(scd31)的循环水平增加(feng等,2016.eur rev med pharmacol sci.20(19):4082
‑
4088；kjaergaard等,2016.apmis.124(10):846
‑
55)，这可能反映了scd31参与减少负反馈回路模式中进一步白细胞迁移的事实(muller等,1993.j exp med.178(2):449
‑
60)。有趣的是，在多种神经变性疾病包括多发性硬化(losy等,1999.j neuroimmunol.99(2):169
‑
72，kuenz等,2005.j neuroimmunol.167(1
‑
2):143
‑
9)、hiv
‑
脑炎(eugenin等,2006.j leukoc biol.79(3):444
‑
52)、副肿瘤性脑
‑
脊髓
‑
多发性神经病(paraneoplastic encephalo
‑
myelo
‑
polyneuropathy)(dziewulska等,2000.folia neuropathol.38(1):29
‑
33)和脑缺血(zaremba和losy,2002.acta neurol scand.106(5):292
‑
8)中也观察到脑脊液(csf)scd31水平增加。对这些脑scd31水平增加的通常理解是其表明血脑屏障(bbb)受损，这是任何神经炎症反应的典型特征(kalinowska和losy,2006.eur j neurol.13(12):1284
‑
90)。
6.然而，发现缺血性卒中后的脑scd31水平与(i)神经性卒中严重程度和(ii)功能失能程度呈正相关(zaremba和losy,2002.central
‑
european j immunol.27:90
‑
96)。因此，申请人想知道scd31是否积极参与神经变性过程。事实上，scd31本身也可对神经元有毒。出
乎意料的是，申请人发现scd31没有毒性，而是与之相反，它在体外对神经元有很强的保护作用。这个结果尤其令人惊讶，因为脑中的cd31表达仅限于bbb的内皮细胞(williams等,1996.j neurosci res.45(6):747
‑
57)。在中和克隆moon
‑
1抗cd31抗体存在下以及通过拮抗性抗cd38抗体(克隆okt10或at13/5)，scd31的神经保护作用受到拮抗，表明scd31的神经保护作用是通过与其配体cd38相互作用来介导的。此外，scd31的神经保护作用被激动性抗cd38抗体重演(recapitulated)，先前显示该抗体能模拟scd31和cd38之间的相互作用(deaglio等,1998.j immunol.160(1):395
‑
402)。值得注意的是，激动性抗cd38抗体(克隆hb7)的神经保护作用与scd31的神经保护作用一样，在拮抗性抗cd38抗体(克隆okt10或at13/5)存在下受到抑制。
7.cd38是45kda的ii型跨膜糖蛋白，具有长的c末端细胞外结构域和短的n末端细胞质结构域。cd38具有多种生物活性，包括受体介导的功能(通过内化)、酪氨酸磷酸化介导的功能和酶介导的功能。此外，如wo2018224683中所公开的，报道了一些特异性抗cd38抗体在癌症治疗中是有意义的。申请人在本文中发现，当酪氨酸磷酸化受到抑制时，scd31或激动性抗cd38抗体(克隆hb7)的神经保护作用受到拮抗。


技术实现要素：

8.本发明涉及一种分离的抗人cd38抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段与cd31竞争，优选与人cd31竞争；并诱导细胞中的溶酶体胞吐，其在vacuolin
‑
1存在下受到抑制。
9.在一个实施方案中，所述分离的抗人cd38抗体或其抗原结合片段是单克隆的。
10.在一个实施方案中，所述分离的抗人cd38抗体或其抗原结合片段是人源化的。
11.在一个实施方案中，
12.a)所述分离的抗人cd38抗体或其抗原结合片段的重链可变区(hcvr)包含以下三个互补决定区(cdr)：
13.‑
v
h
‑
cdr1：gftfsnx1(seq id no:4)，
14.‑
v
h
‑
cdr2：x2gssrx3(seq id no:5)，和
15.‑
v
h
‑
cdr3：x4x5x6x7x8yx9x
10
x
11
x
12
gmdv(seq id no:6)；和
16.b)所述分离的抗人cd38抗体或其抗原结合片段的轻链可变区(lcvr)包含以下三个cdr：
17.‑
v
l
‑
cdr1：agtssdvggx
13
x
14
x
15
vs(seq id no:21)，
18.‑
v
l
‑
cdr2：x
16
dsx
17
rps(seq id no:22)，和
19.‑
v
l
‑
cdr3：strvfgggt(seq id no:23)；
20.其中：
21.x1选自tyr(y)、asn(n)和ser(s)；
22.x2选自ser(s)和tyr(y)；
23.x3选自tyr(y)、asp(d)、asn(n)和ser(s)；
24.x4选自ser(s)和空位(empty position)；
25.x5选自ser(s)和空位；
26.x6选自ser(s)和tyr(y)；
27.x7选自ser(s)和asp(d)；
28.x8选自tyr(y)、ser(s)、asp(d)和gly(g)；
29.x9选自tyr(y)和gly(g)；
30.x
10
选自ser(s)、tyr(y)和phe(f)；
31.x
11
选自gly(g)和asp(d)；
32.x
12
选自asn(n)、tyr(y)和ser(s)；
33.x
13
选自ser(s)和asn(n)；
34.x
14
选自ser(s)和tyr(y)；
35.x
15
选自tyr(y)和ser(s)；
36.x
16
选自tyr(y)、ser(s)和asp(d)；且
37.x
17
选自tyr(y)和asn(n)。
38.在一个实施方案中，所述抗人cd38抗体或其抗原结合片段包含：
39.‑
序列为seq id no：7的v
h
‑
cdr1，序列为seq id no：10的v
h
‑
cdr2，序列为seq id no：15的v
h
‑
cdr3，序列为seq id no：24的v
l
‑
cdr1，序列为seq id no：29的v
l
‑
cdr2和序列为seq id no:23的v
l
‑
cdr3；
40.‑
序列为seq id no：8的v
h
‑
cdr1，序列为seq id no：11的v
h
‑
cdr2，序列为seq id no：16的v
h
‑
cdr3，序列为seq id no：25的v
l
‑
cdr1，序列为seq id no：30的v
l
‑
cdr2和序列为seq id no:23的v
l
‑
cdr3；
41.‑
序列为seq id no：9的v
h
‑
cdr1，序列为seq id no：12的v
h
‑
cdr2，序列为seq id no：17的v
h
‑
cdr3，序列为seq id no：25的v
l
‑
cdr1，序列为seq id no：30的v
l
‑
cdr2和序列为seq id no:23的v
l
‑
cdr3；
42.‑
序列为seq id no：7的v
h
‑
cdr1，序列为seq id no：13的v
h
‑
cdr2，序列为seq id no：19的v
h
‑
cdr3，序列为seq id no：27的v
l
‑
cdr1，序列为seq id no：32的v
l
‑
cdr2和序列为seq id no:23的v
l
‑
cdr3；
43.‑
序列为seq id no：9的v
h
‑
cdr1，序列为seq id no：14的v
h
‑
cdr2，序列为seq id no：20的v
h
‑
cdr3，序列为seq id no：28的v
l
‑
cdr1，序列为seq id no：30的v
l
‑
cdr2和序列为seq id no:23的v
l
‑
cdr3；或
44.‑
序列为seq id no：9的v
h
‑
cdr1，序列为seq id no：14的v
h
‑
cdr2，序列为seq id no：16的v
h
‑
cdr3，序列为seq id no：28的v
l
‑
cdr1，序列为seq id no：30的v
l
‑
cdr2和序列为seq id no:23的v
l
‑
cdr3。
45.在一个实施方案中，所述抗人cd38抗体或其抗原结合片段包含：
46.‑
序列为seq id no:33的hcvr和序列为seq id no:39的lcvr；
47.‑
序列为seq id no:34的hcvr和序列为seq id no:40的lcvr；
48.‑
序列为seq id no:35的hcvr和序列为seq id no:40的lcvr；
49.‑
序列为seq id no:36的hcvr和序列为seq id no:41的lcvr；
50.‑
序列为seq id no:37的hcvr和序列为seq id no:42的lcvr；或
51.‑
序列为seq id no:38的hcvr和序列为seq id no:42的lcvr。
52.本发明还涉及编码本发明所述分离的抗人cd38抗体或其抗原结合片段的核酸。
53.本发明还涉及包含本发明所述核酸的表达载体。
54.本发明还涉及与cd31特异性竞争结合cd38的化合物，用于预防和/或治疗有此需要的受试者中的疾病，所述疾病选自神经变性疾病；神经炎性疾病；炎性疾病；自身免疫疾病；代谢性疾病；眼部疾病；年龄相关疾病；以及癌症和转移。
55.在一个实施方案中，所述疾病选自肌萎缩侧索硬化；帕金森病及相关病症；阿尔茨海默病及相关病症；亨廷顿病；多发性硬化；类风湿性关节炎；系统性红斑狼疮；糖尿病；肥胖；非酒精性脂肪性肝炎；年龄相关性黄斑变性；和青光眼。
56.本发明还涉及与cd31特异性竞争结合cd38的化合物，用于增加有此需要的受试者，尤其是所述受试者的血液中的至少一种抗炎细胞因子的水平。
57.在一个实施方案中，所述抗炎细胞因子是白介素
‑
10(il
‑
10)。
58.在一个实施方案中，用于本发明的任何方法中的化合物选自肽、嵌合肽、抗体、其抗原结合片段、抗原结合抗体模拟物、寡核苷酸和有机小分子；且所述化合物：
59.‑
诱导细胞中离散细胞质基质的酪氨酸磷酸化，其在染料木黄酮存在下受到抑制；和/或
60.‑
诱导细胞中的溶酶体胞吐，其在vacuolin
‑
1存在下受到抑制。
61.在一个实施方案中，用于本发明的任何方法中的化合物是本发明所述的分离的抗人cd38抗体或其抗原结合片段。
62.在一个实施方案中，用于本发明的任何方法中的化合物是：
63.‑
包含人cd31的ig样结构域1
‑
3的肽，优选包含seq id no:1的氨基酸28至315的肽或其变体；或
64.‑
包含人cd31的ig样结构域1
‑
3的嵌合肽，优选包含seq id no：1的氨基酸28至315的肽或其变体；与免疫球蛋白的fc结构域，与人血清白蛋白，优选与人血清白蛋白的结构域iii或与转铁蛋白融合。
65.定义
66.除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语与相关领域技术人员通常理解的含义相同。为方便起见，提供了在说明书、实施例和权利要求中使用的某些术语和短语的含义。
67.如本文所用，“affitin”是指具有选择性结合抗原的能力的人工蛋白。它们在结构上衍生自dna结合蛋白sac7d，其发现于属于古菌域的微生物嗜酸热硫化叶菌(sulfolobus acidocaldarius)中。通过将sac7d结合表面上的氨基酸随机化，例如通过产生对应于sac7d结合界面的11个残基的随机取代的变体，可以产生affitin文库并使所得蛋白文库进行多轮核糖体展示，affitin能够针对多个靶点，例如肽、蛋白、病毒和细菌。affitin是抗体模拟物，并正被开发为生物技术中的工具。它们还用作多种酶的特异性抑制剂(krehenbrink等,2008.j mol biol.383(5):1058
‑
68)。技术人员可以使用本领域已知的方法容易地开发具有所需结合特性的affitin，尤其是如国际专利申请wo2008068637和上文引用的出版物中所公开的，尤其是生成噬菌体展示和/或核糖体展示文库以及使用本文公开的抗原对其进行筛选。
68.如本文所用，“抗体”或“免疫球蛋白”是指具有两条重链和两条轻链的组合的蛋白，无论其是否具有任何相关的特异性免疫反应性。“抗体”是指对目标抗原具有显著的已知特异性免疫反应活性的此类组装体(assembly)。所述术语涵盖多克隆抗体、单克隆抗体、
重组抗体、双特异性抗体、多特异性抗体和修饰的抗体。
69.还应理解，如本文所用，术语“抗体”和“免疫球蛋白”涵盖使用已知方法修饰的抗体或抗体结合片段。例如，为了减缓体内清除(clearance)并获得更理想的药代动力学特征，可以使用聚乙二醇(peg)修饰抗体或其结合片段。将peg偶联(coupling)和位点特异性缀合(conjugating)至抗体或其结合片段的方法描述在例如leong等,2001.cytokine.16(3):106
‑
19；delgado等,1996.br j cancer.73(2):175
‑
82中。
70.抗体和免疫球蛋白包含轻链和重链，它们之间有或没有链间共价键。对脊椎动物系统中的基本免疫球蛋白结构的理解相对较好。通用术语“免疫球蛋白”包括可以在生化上区别的五种不同类别的抗体。尽管以下讨论通常针对免疫球蛋白分子的igg类别，但所有五种抗体类别均在本发明的范围内。对于igg，免疫球蛋白包含两条相同的分子量为约23kda的轻多肽链和两条相同的分子量为约53
‑
70kda的重链。这四条链通过二硫键以“y”构型连接，其中轻链从“y”口开始并继续通过可变区将重链环抱在内(bracket)。抗体的轻链分为kappa(κ)或lambda(λ)。每个重链类别可以与κ或λ轻链结合。通常，当免疫球蛋白由杂交瘤、b细胞或基因工程化的宿主细胞产生时，轻链和重链彼此共价键合，并且两条重链的“尾”区通过共价二硫键或非共价键彼此键合。在重链中，氨基酸序列从y构型分叉末端的n末端直至每条链底部的c末端。本领域技术人员将理解，重链分为gamma(γ)、mu(μ)、alpha(α)、delta(δ)或epsilon(ε)，其间还有一些亚类(例如γ1
‑
γ4)。正是这条链的性质决定了抗体的“类别”分别为igg、igm、iga、igd或ige。免疫球蛋白亚类或“同种型(isotype)”(例如iggl、igg2、igg3、igg4、iga1等)已被充分特征化并且已知其赋予功能特化(functional specialization)。鉴于本公开内容，这些类别和同种型中每一个的修饰形式对于本领域技术人员来说是容易辨别的，并且因此在本发明的范围内。如上所述，抗体的可变区允许抗体选择性识别并特异性结合抗原上的表位。也就是说，抗体的轻链可变域(v
l
结构域)和重链可变域(v
h
结构域)组合以形成定义三维抗原结合位点的可变区。这种四级抗体结构形成了存在于“y”每个臂末端的抗原结合位点。更具体地，抗原结合位点由v
h
和v
l
结构域中每一个上的三个互补决定区(cdr)定义。
71.多项开发治疗性抗体的研究已将fc区工程化以优化抗体特性，从而生成更适合其所需药理学活性的分子。抗体的fc区介导其血清半衰期和效应子功能，例如补体依赖性细胞毒性(cdc)、抗体依赖性细胞毒性(adcc)和抗体依赖性细胞吞噬作用(adcp)。位于ch2和ch3结构域之间界面的几种突变，例如n297a、n297g、l234a/l235a、l235e、t250q/m428l、m252y/s254t/t256e和h433k/n434f，已显示会增加对fcrn的结合亲和力以及igg1的体内半衰期。然而，fcrn结合增加和半衰期增加之间并不总是有直接关系。提高治疗性抗体效力(efficacy)的一种方法是增加其血清持久性(serum persistence)，从而允许更高的循环水平、更少的施用频率和减少的剂量。可能需要将fc区工程化以减少或增加抗体的效应子功能。对于靶向细胞表面分子的抗体，尤其是免疫细胞或神经元上的抗体，需要废除效应子功能。相反，对于旨在用于肿瘤学的抗体，增加效应子功能可提高治疗活性。四种人igg同种型以不同的亲和力结合激活性fcγ受体(fcγri、fcγriia、fcγriiia)、抑制性fcγriib受体以及补体的第一组分(c1q)，产生非常不同的效应子功能。igg与fcγr或c1q的结合取决于位于铰链区和ch2结构域中的残基。ch2结构域的两个区域对于fcγr和c1q结合来说至关重要，并且在igg2和igg4中具有独特序列。
72.如本文所用，“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”或“adcc”是指一种细胞毒性形式，其中分泌的抗体结合在存在于某些细胞毒性细胞(例如nk细胞、嗜中性粒细胞、单核细胞和巨噬细胞)的fc受体(fcr)上，使这些细胞毒性效应细胞能够与携带抗原的靶细胞特异性结合并随后杀死靶细胞。为了评估目标分子的adcc活性，可以进行体外adcc测定，例如在专利us5,500,362或us5,821,337中描述的那些。
73.如本文所用，“抗体依赖性吞噬作用(antibody
‑
dependent phagocytosis)”或“调理作用(opsonization)”是指细胞介导的反应，其中表达fcγr的非特异性细胞毒性细胞识别靶细胞上结合的抗体并随后引起靶细胞的吞噬作用。
74.如本文所用，“anticalin”是指能够与抗原(无论是蛋白还是小分子)结合的人工蛋白。它们是衍生自天然结合蛋白家族人脂质运载蛋白(lipocalin)的抗体模拟物。anticalin约小8倍，其大小为约180个氨基酸，且质量为约20kda(kolmar&skerra,2008.febs j.275(11):2667)。已经生成了anticalin噬菌体展示文库，其允许筛选和选择，尤其是具有特定结合特性的anticalin。技术人员可以使用本领域已知的方法容易地开发具有所需结合特性的anticalin，所述方法尤其是如ep专利ep1270725、us专利us8,536,307、schlehuber&skerra(2002.biophys chem.96(2
‑
3):213
‑
28)以及上文引用的文献中公开的，尤其是使用本文所述的抗原生成和筛选噬菌体展示和/或核糖体展示文库。
75.如本文所用，“抗原结合抗体模拟物”是指人工蛋白、肽、核酸，以及更广泛地，具有模拟抗体结合抗原能力的任意化学化合物。
76.此类模拟物包括寡核苷酸适体，以及affitin、anticalin和肽适体。affitin、anticalin和肽适体可以在包括细菌表达系统的多种表达系统中或通过组合化学产生。因此，本发明提供了具有本文所述抗体的特征，尤其是关于与cd31竞争的特征的affitin、anticalin、肽适体以及其他类似的抗原结合抗体模拟物(例如寡核苷酸适体)。
77.如本文所用，“抗体的抗原结合片段”是指抗体的一个部分或区域，其包含比完整抗体更少的氨基酸残基，即对应于本发明抗体结构的一部分的分子，其表现出对cd38的抗原结合能力，可能以其天然形式；与相应完整抗体的抗原结合特异性相比，此类片段尤其表现出相同或基本上相同的对所述抗原的抗原结合特异性。有利地，抗原结合片段具有与相应完整抗体相似的结合亲和力。然而，相对于相应的完整抗体具有降低的抗原结合亲和力的抗原结合片段也涵盖在本发明内。抗原结合能力可以通过测量抗体与靶片段之间的亲和力来确定。这些抗原结合片段也可称为抗体的“功能性片段(functional fragment)”。
78.抗体的抗原结合片段包括但不限于fv、dsfv、scfv、fab、fab'、f(ab')2和单域抗体。fv片段由通过疏水相互作用结合在一起的抗体的v
l
和v
h
结构域组成；在dsfv片段中，v
h
:v
l
异二聚体通过二硫键而稳定；在scfv片段中，v
l
和v
h
结构域通过灵活的肽接头彼此连接，从而形成单链蛋白。fab片段是可通过对抗体进行木瓜蛋白酶消化来获得的单体片段；它们包含整个l链和h链的v
h
‑
c
h
1片段，通过二硫键结合在一起。f(ab')2片段可以通过对铰链二硫键下方的抗体进行胃蛋白酶消化来产生；它包含两个fab'片段，以及另外的免疫球蛋白分子铰链区的一部分。fab'片段可通过切割f(ab')2片段铰链区的二硫键来获得。f(ab')2片段是二价的，即它们包含两个抗原结合位点，就像天然免疫球蛋白分子一样；在另一个方面，fv(构成fab可变部分的v
h
‑
v
l
二聚体)、dsfv、scfv、fab和fab'片段是单价的，即它们包含单个抗原结合位点。可以将本发明的这些基本抗原结合片段组合在一起以获得多价抗原结
合片段，例如双抗体(diabody)、三抗体(tribody)或四抗体(tetrabody)。这些多价抗原结合片段也是本发明的一部分。
79.如本文所用，“双特异性抗体”是指识别两种不同抗原的抗体，这归因于其具有对第一抗原特异的至少一个区域(例如，衍生自第一抗体的可变区)和对第二抗原特异的至少一个第二区域(例如，衍生自第二抗体的可变区)。双特异性抗体与两种靶抗原特异性结合，并因此是一种多特异性抗体。识别两种或更多种不同抗原的多特异性抗体可以通过重组dna方法产生或包括但不限于通过任何简便方法化学产生的抗体。双特异性抗体包括能够识别两种不同抗原的所有抗体或抗体偶联物或抗体的聚合形式。双特异性抗体包括已经经过还原和重组以保留其二价特征的抗体，以及已经经过化学偶联的抗体，从而其对每种抗原可具有多个抗原识别位点，例如bime(双特异性巨噬细胞增强抗体，bispecific macrophage enhancing antibody)、bite(双特异性t细胞接合子，bispecific t cell engager)、dart(双亲和力重定向分子，dual affinity retargeting)；dnl(dock
‑
and
‑
lock)、dvd
‑
ig(双可变域免疫球蛋白，dual variable domain immunoglobulin)、has(人血清白蛋白)、kih(knobs into holes)。
80.如本文所用，“cd31”是指130kda的i型跨膜糖蛋白，也称为血小板内皮细胞粘附分子
‑
1(pecam
‑
1)、peca1、gpiia'、endocam或cd31/endocamas，并描述在newman&newman(2003.arterioscler thromb vasc biol.23:953
–
964)中。在本发明中，术语“cd31”更具体地是指来自哺乳动物物种的cd31，甚至更具体地是指人cd31。优选地，术语“人cd31”是指氨基酸序列seq id no:1的蛋白，由np_000433ncbi登录号引用。本文所述的人cd31的氨基酸编号对应于如seq id no:1所示的人cd31序列的氨基酸编号，并由np_000433ncbi登录号引用。
[0081][0082][0083]
如本文所用，“cd38”是指45kda的ii型跨膜糖蛋白，也称为t10、环状adp
‑
核糖水解
酶1(cyclic adp
‑
ribose hydrolase 1)、adprc1，如malavasi等(2008.physiological review.88:841
‑
886)中所述。在本发明中，术语“cd38”更具体地是指特定来自一个哺乳动物物种，甚至更具体地是指人cd38。优选地，术语“人cd38”是指氨基酸序列seq id no:2的蛋白，由np_001766ncbi登录号引用。如本文所述的人cd38的氨基酸编号对应于如seq id no:2所示的人cd38序列的氨基酸编号，并由np_001766ncbi登录号引用。
[0084][0085]
如本文所用，“cdr”或“互补决定区”意指在重链和轻链多肽的可变区内均发现的非连续性抗原结合位点。cdr的识别根据表1的规则(推断自kabat等,1991.sequences of proteins of immunological interest(第5版).bethesda,md:u.s.dep.of health and human services；和chothia和lesk,1987.j mol biol.196(4):901
‑
17)，或通过使用imgt“collier de perle”算法。在这个方面，对于本发明的序列的定义，应注意区域/结构域的界定可在不同参考系统之间变化。因此，本发明所述的区域/结构域涵盖了抗体可变域全长序列内的相关序列的长度或定位有约 /
‑
10％变化的序列。
[0086]
表1
[0087]
[0088][0089]
*saul&poljak,1992.proteins.14(3):363
‑
71
[0090]
如本文所用，“嵌合抗体”是指其中衍生自哺乳动物物种例如小鼠的种系的可变域的序列已被移植到衍生自另一哺乳动物物种例如人类的种系的恒定结构域的序列上的抗体。有利地，如果本发明所述的单克隆抗体是嵌合单克隆抗体，则后者包含人恒定区。可以通过使用本领域技术人员公知的基因重组技术从非人抗体开始制备嵌合抗体。例如，嵌合抗体可以通过克隆重链和轻链的重组dna来产生，所述重组dna包括启动子和编码非人抗体
可变区的序列，以及编码非人抗体恒定区的序列。关于嵌合抗体的制备方法，可参考例如verhoeyn等(1988.science.239(4847):1534
‑
6)。
[0091]
如本文所用，“补体依赖性细胞毒性”或“cdc”是指补体存在下靶细胞的裂解。经典补体途径的激活通过补体系统的第一组分与结合其同源抗原(cognate antigen)的抗体的结合而启动。为了评估补体激活，进行cdc测定，例如描述在gazzano
‑
santoro等,1997.j immunol methods.202(2):163
‑
71中的cdc测定。
[0092]
如本文所用，“与cd31特异性竞争的化合物”涉及适用于药物用途的任意分子，其与cd38特异性结合，从而使内源性cd31与cd38的相互作用分流(shunting)。此类化合物涵盖抗体、其抗原结合片段、抗原结合抗体模拟物、有机小分子、寡核苷酸和重组蛋白。
[0093]
关于组合物、药物组合物或药物，本文所用的“基本上由
……
组成”是指本发明所述的化合物是所述组合物、药物组合物或药物中唯一一种具有生物活性的药剂。
[0094]
如本文所用，“表位”是指位于抗体或其结合片段所结合的一种或多种蛋白上的氨基酸的特定排列。表位通常由分子的化学活性表面基团组成，例如氨基酸或糖侧链，并且具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。表位可以是线性的(或连续的)或构象的，即涉及抗原的不同区域中的两个或多个氨基酸序列，这些序列可能不一定是连续的。
[0095]
如本文所用，“片段可结晶区”或“fc”或“fc区”涵盖包含抗体恒定区且不包括第一恒定区免疫球蛋白结构域的多肽。因此，fc是指iga、igd和igg的最后两个恒定区免疫球蛋白结构域，和ige和igm的最后三个恒定区免疫球蛋白结构域，以及这些结构域的n末端柔性铰链。
[0096]
对于iga和igm，fc可包含j链。对于igg，fc包含免疫球蛋白结构域cγ2和cγ3以及cγ1和cγ2之间的铰链。
[0097]
尽管fc区的边界可以不同，人igg重链fc区通常定义为在其羧基末端包含残基c226或p230，其中编号根据kabat等,1991(sequences of proteins of immunological interest(第5版).bethesda,md:u.s.dep.of health and human services)中所述的eu索引。kabat中所述的eu索引是指kabat等,1991(如上)所述的人igg1eu抗体的残基编号。fc可以指分离的这个区域，或在抗体、抗体片段或fc融合蛋白中的这个区域。
[0098]
fc片段天然由不包括结构域c
h
1的重链的恒定区，即下边界区和恒定结构域c
h
2和c
h
3或c
h
2至c
h
4(取决于同种型)的恒定区组成。
[0099]
从本发明的意义上，抗体的fc片段可以是天然的或可以以多种方式修饰，只要其包含与fcr受体(对于igg为fcγr受体)结合的功能域(functional domain)，并且优选地包含与受体fcrn结合的功能域。修饰可以包括fc片段的某些部分的缺失，条件是后者包含与受体fcr(对于igg为受体fcγr)结合的功能域，并且优选地包含与受体fcrn结合的功能域。抗体或抗体fc片段的修饰还可以包括能够影响抗体生物学特性的氨基酸的各种取代，条件是后者包含与受体fcr结合的功能域，并且优选地包含与受体fcrn结合的功能域。
[0100]
特别地，当抗体是igg时，其可以包含旨在增强与受体fcγriii(cd16)结合的突变，如wo2000042072、wo2004029207、wo2004063351或wo2004074455中所述。还可以存在使与受体fcrn的结合增强并因此增强抗体的体内半衰期的突变，如描述在例如wo2000042072、wo2002060919、wo2010045193或wo2010106180中。可以存在或不存在其他突变，例如使与补体蛋白的结合减少或增加并因此减少或增加补体依赖性细胞毒性(cdc)应
答的那些突变，例如描述在例如wo1999051642或wo2004074455中。
[0101]
如本文所用，“fc融合蛋白”涵盖包含直接连接至另一肽或使用接头连接至另一肽的免疫球蛋白fc结构域的多肽。
[0102]
如本文所用，“框架区”或“fr”包括作为可变区的一部分但不是cdr的一部分的氨基酸残基(例如，使用cdr的kabat/chothia定义)。因此，可变区框架的长度在100至120个氨基酸之间，但仅包括cdr之外的那些氨基酸。
[0103]
关于hcvr的具体实例和kabat/chothia定义的cdr：
[0104]
‑
fr1可以对应于涵盖根据chothia/abm定义的氨基酸1
‑
25，或涵盖根据kabat定义的之后5个残基的可变区的结构域；
[0105]
‑
fr2可以对应于涵盖氨基酸36
‑
49的可变区的结构域；
[0106]
‑
fr3可以对应于涵盖氨基酸67
‑
98的可变区的结构域；和
[0107]
‑
fr4可以对应于从氨基酸104
‑
110至可变区结束的可变区的结构域。
[0108]
轻链的框架区类似地被每个lcvr的cdr分隔。在天然存在的抗体中，存在于每个单体抗体上的六个cdr是短的、不连续的氨基酸序列，其在抗体在水性环境中呈现其三维构型时特异性定位以形成抗原结合位点。重链和轻链可变域的其余部分在氨基酸序列中显示出较小的分子间变异性，称为框架区。框架区主要采用β
‑
折叠构象，且cdr形成连接β
‑
折叠结构并在一些情况下形成β
‑
折叠结构的一部分的环。因此，这些框架区起到形成支架的作用，所述支架通过链间的非共价相互作用将六个cdr定位在正确的方向上。由定位的cdr形成的抗原结合位点决定了与免疫反应性抗原上的表位互补的表面。这个互补的表面促进抗体与免疫反应性抗原表位的非共价结合。本领域普通技术人员能够容易地识别cdr的位置。
[0109]
如本文所用，“重链区”包括衍生自免疫球蛋白重链恒定结构域的氨基酸序列。包含重链区的蛋白包含c
h
1结构域、铰链(例如上、中和/或下铰链区)结构域、c
h
2结构域、c
h
3结构域或其变体或片段中的至少一个。在一个实施方案中，本发明所述的抗体或其结合片段可以包含免疫球蛋白重链的fc区(例如铰链部分、c
h
2结构域和c
h
3结构域)。在另一个实施方案中，本发明所述的抗体或其结合片段至少缺少恒定结构域的一个区域(例如，c
h
2结构域的全部或部分)。在某些实施方案中，至少一个且优选所有恒定结构域均衍生自人免疫球蛋白重链。例如，在一个优选的实施方案中，重链区包含全人铰链结构域。在其他优选实施方案中，重链区包含全人fc区(例如，来自人免疫球蛋白的铰链、c
h
2和c
h
3结构域序列)。在某些实施方案中，重链区的组成型恒定结构域来自不同的免疫球蛋白分子。例如，蛋白的重链区可包含衍生自iggl分子的c
h
2结构域和衍生自igg3或igg4分子的铰链区。在其他实施方案中，恒定结构域是包含不同免疫球蛋白分子的区域的嵌合结构域。例如，铰链可以包含来自igg1分子的第一区域和来自igg3或igg4分子的第二区域。如上所述，本领域普通技术人员将理解，可以对重链区的恒定结构域进行修饰以使得其在氨基酸序列上与天然存在的(野生型)免疫球蛋白分子不同。即，本发明所述的抗体或其结合片段可包含对一个或多个重链恒定结构域(c
h
1、铰链、c
h
2或c
h
3)和/或轻链恒定结构域(c
l
)的改变或修饰。示例性修饰包括一个或多个结构域中的一个或多个氨基酸的添加、缺失或取代。
[0110]
如本文所用，“铰链区”包括将c
h
1结构域连接至c
h
2结构域的重链分子区域。这个铰链区包含约25个残基并且是柔性的，因此允许两个n末端抗原结合区独立移动。铰链区可细分为三个不同的结构域：上、中和下铰链结构域(roux等,1998.j immunol.161(8):4083
‑
90)。
[0111]
如本文所用，“人血清白蛋白融合蛋白”是指由使用或不使用接头与人血清白蛋白的至少一个结构域融合的肽组成的重组蛋白。
[0112]
如本文所用，“人源化抗体”是指嵌合抗体或其结合片段，其含有衍生自非人免疫球蛋白的最小序列。其包括由具有可变区和恒定区的非人细胞制备的抗体，所述可变区和恒定区已被改变为更接近于由人细胞制备的抗体，例如，通过改变非人抗体的氨基酸序列以引入在人种系免疫球蛋白序列中发现的氨基酸。本发明所述的人源化抗体或其结合片段可以包括不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或位点特异性诱变(site
‑
specific mutagenesis)或通过体内体细胞突变引入的突变)，例如在cdr中。术语“人源化抗体”还包括其中已将衍生自另一哺乳动物物种(例如小鼠)种系的cdr序列移植到人框架序列上的抗体及其结合片段。换句话说，术语“人源化抗体”是指其中将受体人抗体的cdr替换为来自供体非人抗体(例如小鼠抗体)的cdr的抗体或其结合片段。人源化抗体或其结合片段还可在框架序列中包含供体来源的残基。人源化抗体或其结合片段还可包含人免疫球蛋白恒定区的至少一部分。人源化抗体及其结合片段还可包含既未在受体抗体中发现也未在导入的cdr或fr序列中发现的残基。可以使用本领域已知的方法进行人源化(例如，jones等,1986.nature.321(6069):522
‑
5；riechmann等,1988.nature.332(6162):323
‑
7；verhoeyen等,1988.science.239(4847):1534
‑
6；presta,1992.curr opin biotechnol.3(4):394
‑
8；专利us4,816,567)，包括技术例如“超级人源化(superhumanizing)”抗体(例如，tan等,2002.j immunol.169(2):1119
‑
25)和“表面重塑(resurfacing)”(例如，staelens等,2006.mol immunol.43(8):1243
‑
57；roguska等,1994.proc natl acad sci usa.91(3):969
‑
73)。
[0113]
将本发明所述的抗体或其结合片段人源化的方法是本领域公知的。用于制备人源化抗体或其结合片段的轻和重链人可变域的选择对于降低抗原性至关重要。根据所谓的“最佳拟合(best
‑
fit)”方法，针对已知人可变域序列的整个文库筛选本发明所述的抗体或其结合片段的可变域的序列。然后，将与小鼠序列最接近的人序列接受为人源化抗体的人框架(fr)(sims等,1993.j immunol.151(4):2296
‑
308；chothia&lesk,1987.j mol biol.196(4):901
‑
17)。
[0114]
将本发明所述抗体或其结合片段人源化的另一种方法使用来自特定轻链或重链亚组的所有人抗体的共有序列的特定fr。相同的框架可用于多种不同的人源化抗体(carter等,1992.proc natl acad sci usa.89(10):4285
‑
9；presta等,1993.j immunol.151(5):2623
‑
32)。更重要的是，将抗体人源化并保留对cd38的高亲和力和其他有利的生物学特性。为了实现这一目标，根据优选的方法，通过对亲本序列以及使用亲本和人源化序列的三维模型的各种概念性人源化产品的分析过程来制备人源化抗体及其结合片段。三维免疫球蛋白模型是普遍可用的并且是本领域技术人员所熟悉的。可以使用计算机程序来说明和显示选定的候选免疫球蛋白序列的可能的三维结构。对这些显示的检查可以分析残基在候选免疫球蛋白序列的功能作用(functioning)中的可能作用，即分析影响候选免疫球蛋白结合其表位的能力的残基。通过这种方式，可以从共有序列和导入序列中选择和组合cdr残基，从而实现所需的抗体特征，例如对cd38的亲和力增加。通常，cdr残基直接且最实质性地参与影响抗原结合。
[0115]
将本发明所述的抗体或其结合片段人源化的另一种方法是使用携带部分人免疫系统的转基因或转染色体动物进行免疫。作为宿主，这些动物的免疫球蛋白基因已替代为功能性人类免疫球蛋白基因。因此，由这些动物产生的抗体或在由这些动物的b细胞制备的杂交瘤中产生的抗体已经人源化。此类转基因或转染色体动物的示例包括但不限于：
[0116]
‑
xenomouse(abgenix,fremont,ca)，描述于专利us5,939,598、us6,075,181、us6,114,598、us6,150,584和us6,162,963中；
[0117]
‑
humab(medarex,inc.)，描述于lonberg等,1994.nature.368(6474):856
‑
859；lonberg&huszar,1995.int rev immunol.13(1):65
‑
93；harding&lonberg,1995.ann n y acad sci.764:536
‑
46；taylor等,1992.nucleic acids res.20(23):6287
‑
95；chen等,1993.int immunol.5(6):647
‑
56；tuaillon等,1993.proc natl acad sci usa.90(8):3720
‑
4；choi等,1993.nat genet.4(2):117
‑
23；chen等,1993.embo j.12(3):821
‑
30；tuaillon等,1994.j immunol.152(6):2912
‑
20；taylor等,1994.int immunol.6(4):579
‑
91；fishwild等,1996.nat biotechnol.14(7):845
‑
51；
[0118]
‑
专利申请wo2002043478中描述的km
[0119]
‑
tc小鼠，描述在tomizuka等,2000.proc natl acad sci usa.97(2):722
‑
7；
[0120]
‑
omnirat
tm
(omt,inc.)，描述在专利申请wo2008151081；geurts等,2009.science.325(5939):433；menoret等,2010.eur j immunol.40(10):2932
‑
41；osborn等,2013.j immunol.190(4):1481
‑
90。
[0121]
人源化抗体及其结合片段也可以根据多种其他技术产生，例如通过使用已经工程化以表达人抗体库(antibody repertoire)的其他转基因动物(jakobovitz等,1993.nature.362(6417):255
‑
8)进行免疫，或通过使用噬菌体展示方法选择抗体库。此类技术是技术人员已知的，并且可以从本技术中公开的单克隆抗体或其结合片段开始实施。
[0122]
在一些实施方案中，包含hcvr和lcvr(或其cdr)的本发明所述的抗体或其结合片段可包含第一恒定域(c
h
1和/或c
l
)，其氨基酸序列完全或基本上是人的。
[0123]
在一些实施方案中，尤其是当本发明所述的抗体或其结合片段旨在用于人类治疗用途时，整个恒定区或其至少一部分通常具有完全或基本上人的氨基酸序列。因此，c
h
1结构域、铰链区、c
h
2结构域、c
h
3结构域和c
l
结构域(和c
h
4结构域，若存在)中的一个或多个或任意组合就其氨基酸序列而言可以是完全或基本上人的。有利地，c
h
1结构域、铰链区、c
h
2结构域、c
h
3结构域和c
l
结构域(和c
h
4结构域，若存在)可以均具有完全或基本上人的氨基酸序列。
[0124]
在人源化或嵌合抗体或其结合片段的恒定区的上下文中，术语“基本上人的”是指与人恒定区具有至少70％，优选至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的氨基酸序列同一性。
[0125]
在本文中，术语“人氨基酸序列”是指由人免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列，其包括种系、重排的和体细胞突变的基因。本发明还涉及包含“人”序列的恒定域的蛋白，其已通过相对于人序列的一个或多个氨基酸添加、缺失或取代而被改变，除了其中明确要求“完全人铰链区”存在的那些实施方案之外。
[0126]
本发明所述的抗体或其结合片段中存在“完全人铰链区”可以对最小化免疫原性
和优化抗体稳定性均有益。认为可以在重链和/或轻链的恒定区内，尤其是在fc区内进行一个或多个氨基酸取代、插入或缺失。氨基酸取代可以导致取代的氨基酸替代为不同的天然存在的氨基酸，或非天然的或修饰的氨基酸。其他结构修饰也是允许的，例如糖基化模式的改变(例如，通过添加或删除n
‑
或o
‑
连接的糖基化位点)。取决于抗体或其结合片段的目标用途，可以需要关于其对fc受体的结合特性例如调节效应子功能而对本发明所述的抗体或其结合片段进行修饰。例如，可以将半胱氨酸残基引入fc区，从而允许在这个区域中形成链间二硫键。由此产生的同二聚抗体可具有改进的效应子功能(caron等,1992.j exp med.176(4):1191
‑
5；shopes,1992.j immunol.148(9):2918
‑
22)。
[0127]
如本文所用，“高变环”与互补决定区(cdr)并非严格同义，这归因于高变环(hv)是基于结构定义的，而cdr是基于序列可变性定义的(kabat等,1991.sequences of proteins of immunological interest(第5版).bethesda,md:u.s.dep.of health and human services)，且hv和cdr的限制在一些v
h
和v
l
结构域中可以不同。v
l
和v
h
结构域的cdr通常可以通过上文已经解释的kabat/chothia定义来定义。
[0128]
当用于两个或更多个氨基酸序列，或两个或更多个核酸序列的序列之间的关系时，“同一性”或“同一的”是指氨基酸序列或核酸序列之间的序列相关程度，通过两个或更多个氨基酸残基或核酸残基的片段(string)之间的匹配数来确定。“同一性”测量通过特定数学模型或计算机程序(即“算法”)处理的具有空位比对(如果有)的两个或更多个序列的较小序列之间的相同匹配百分比。
[0129]
可以通过已知方法容易地计算相关氨基酸序列或核酸序列的同一性。此类方法包括但不限于描述在以下的那些：lesk a.m.(1988).computational molecular biology:sources and methods for sequence analysis.new york,ny:oxford university press；smith d.w.(1993).biocomputing:informatics and genome projects.san diego,ca:academic press；griffin a.m.&griffin h.g.(1994).computer analysis of sequence data,part 1.totowa,nj:humana press；von heijne g.(1987).sequence analysis in molecular biology:treasure trove or trivial pursuit.san diego,ca:academic press；gribskov m.r.&devereux j.(1991).sequence analysis primer.new york,ny:stockton press；carillo等,1988.siam j appl math.48(5):1073
‑
82。
[0130]
将确定同一性的优选方法设计为在测试序列之间提供最大匹配。在公众可得的计算机程序中描述了确定同一性的方法。确定两个序列之间的同一性的优选计算机程序方法包括gcg程序包，包括gap(genetics computer group,university of wisconsin,madison,wi；devereux等,1984.nucleic acids res.12(1pt 1):387
‑
95)、blastp、blastn和fasta(altschul等,1990.j mol biol.215(3):403
‑
10)。blastx程序从美国国家生物技术信息中心(ncbi)和其他来源(blast手册,altschul等ncb/nlm/nih bethesda,md.20894)公众可得。公知的史密斯沃特曼算法(smith waterman algorithm)也可用于确定同一性。
[0131]
如本文所用，“药物”意在涵盖适合施用给受试者或患者，例如哺乳动物，尤其是人的组合物。通常，“药物”是无菌的并且通常不含能够在受试者体内引起不希望的反应的污染物(例如，药物中的化合物是药物级的)。可以设计药物以通过多种不同的施用途径向有此需要的受试者施用，所述施用途径包括经口、经颊、经直肠、胃肠道外、腹膜内、皮内、皮下、鼻内、鞘内、髓周(perispinal)等。优选形式取决于目标施用方式和治疗应用。典型的优
选形式是口服溶液、可注射溶液或可输注溶液。
[0132]
如本文所用，“修饰的抗体”对应于包含抗体或其抗原结合片段的分子，其中所述抗体或其片段与功能不同的分子相结合。本发明的修饰的抗体可以是融合嵌合蛋白或由任意合适的连接形式产生的结合物(conjugate)，包括共价连接(covalent attachment)、移植(grafting)、与化学或生物基团或分子例如peg聚合物或另一种适用于防止体内蛋白酶切割的保护性基团或分子化学键合，以改善抗体或功能性片段的稳定性和/或半衰期。使用类似的技术，尤其是通过化学连接或移植，可以制备具有生物活性分子的修饰的抗体，所述活性分子选自例如毒素，尤其是假单胞菌外毒素a(pseudomonas exotoxin a)、植物毒素蓖麻毒素(ricin)或皂草素(saporin)毒素的a链，尤其是治疗活性成分，适合于将抗体或功能性片段靶向人体特定细胞或组织的载体(尤其包括蛋白载体)，或者其可以与标记或与接头相结合，尤其是当使用抗体的片段时。抗体或其功能性片段的聚乙二醇化(pegylation)是一个尤其有趣的实施方案，因为其改善了活性物质向宿主的递送条件，尤其是对于治疗应用。聚乙二醇化可以是位点特异性的，以防止对抗体或功能性片段识别位点的干扰，并且可以使用高分子量peg进行。聚乙二醇化可通过抗体或功能性片段的序列中存在的游离半胱氨酸残基或通过抗体或功能性片段的氨基酸序列中添加的游离半胱氨酸残基来实现。
[0133]
如本文所用，“单克隆抗体”旨在指具有共同重链和共同轻链氨基酸序列的抗体分子制备物，其与含有不同氨基酸序列的抗体的混合物的“多克隆抗体”制备物相反。与翻译后修饰(例如重链c末端赖氨酸的切割、天冬酰胺残基的脱酰胺(deamidation)和/或天冬氨酸残基的异构化)有关的蛋白序列的某些差异可能仍然存在于单克隆抗体组合物中存在的各个抗体之间。修饰语“单克隆”不应解释为需要通过任何特定方法产生抗体。单克隆抗体可以通过多种已知技术产生，例如噬菌体、细菌、酵母或核糖体展示，以及以杂交瘤衍生抗体为例的经典方法，其最先由kohler等(1975.nature.256(5517):495
‑
7)描述。因此，术语“单克隆”用于指衍生自仅单个核酸克隆的所有抗体。
[0134]
如本文所用，“寡核苷酸”涉及核苷酸的短分子，包括dna、rna以及修饰的核苷酸(例如包含至少一种化学修饰的核苷酸)。具体地，所述寡核苷酸由少于200个核苷酸，更具体地少于50个核苷酸组成。
[0135]
如本文所用，“寡核苷酸适体”是指当折叠成其独特的三维结构时，能够以高亲和力和特异性选择性结合小分子配体或蛋白靶标的短寡核苷酸。
[0136]
如本文所用，“肽”旨在指由至少氨基酸组成的分子。肽还可以具有其他分子基团，例如多糖链或其他翻译后修饰。“重组肽”具体是指通过重组手段产生、表达、生成或分离的肽，例如使用转染到宿主细胞中的重组表达载体表达的肽。重组肽包括例如嵌合肽。“嵌合肽”旨在指通过连接两个或更多个最初编码不同蛋白或蛋白片段的基因；或通过融合两种或更多种蛋白或蛋白片段而产生的肽。嵌合肽包括例如与igg的fc区、与人血清白蛋白(has)或hsa的特定结构域(例如结构域iii)或转铁蛋白(如strohl,2015.biodrugs.29(4):215
‑
239)融合的肽。
[0137]
如本文所用，“肽适体”是指被选择与其靶抗原上的特定位点结合的小组合蛋白。
[0138]
如本文所用，“重组抗体”是指通过重组方式产生、表达、生成或分离的抗体，例如使用转染到宿主细胞中的重组表达载体表达的抗体；从重组组合抗体文库中分离的抗体；从人免疫球蛋白基因的转基因动物(例如小鼠)中分离的抗体；或以其中特定免疫球蛋白基
因序列(例如人免疫球蛋白基因序列)与其他dna序列组装的任意其他方式产生、表达、生成或分离的抗体。重组抗体包括例如嵌合抗体和人源化抗体。
[0139]
如本文所用，“有机小分子(small organic molecule)”是指低分子量有机化合物(至多5000da，更具体地至多2000da，且最具体地至多约1000da)。
[0140]
如本文所用，“受试者”是指哺乳动物，优选人。在一个实施方案中，受试者可以是“患者”，即温血动物，更优选人，其正在等待接受或正在接受医疗护理或曾经是/现在是/将是医疗程序的对象，或被监测疾病的发展。术语“哺乳动物”在这里是指任意哺乳动物，包括人、家畜和农场动物，以及动物园、运动或宠物动物，例如狗、猫、牛、马、绵羊、猪、山羊、兔等。优选地，哺乳动物是灵长类动物，更优选是人。
[0141]
如本文所用，“治疗有效量”意指以以下为目标且不对受试者造成显著负面或不利副作用的药剂(例如，与cd31竞争结合cd38的化合物)的水平、量或浓度：(1)延迟或预防目标疾病的发作；(2)减缓或阻止目标疾病的一种或多种症状的发展、加重或恶化；(3)改善目标疾病的症状；(4)降低目标疾病的严重程度或发生率；(5)治愈目标疾病。治疗有效量可以在目标疾病发作之前施用，用于预防或防止作用。或者或另外，治疗有效量可在目标疾病开始后施用，用于治疗作用。
[0142]
如本文所用，“治疗”或“疗法”或“减轻”是指治疗和预防性(或防止性)措施；其中目标是减缓(或减轻)目标疾病。需要治疗的受试者包括已经患有目标疾病的受试者和怀疑患有目标疾病的受试者。
[0143]
如本文所用，“可变区”或“可变域”是指可变域v
h
和v
l
的某些区域的序列在抗体之间有很大差异并且用于每种特定抗体对其靶抗原的结合和特异性的事实。然而，可变性并非均匀分布在整个抗体可变域中。它集中在每个v
l
结构域和v
h
结构域中称为“高变环”的三个区段中，其形成抗原结合位点的一部分。vλ轻链结构域的第一、第二和第三高变环在本文中称为l1(λ)、l2(λ)和l3(λ)，并且可以定义为包含v
l
结构域中的残基24
‑
33(l1(λ)，由9个、10个或11个氨基酸残基组成)、残基49
‑
53(l2(λ)，由3个残基组成)和残基90
‑
96(l3(λ)，由6个残基组成)(morea等,2000.methods.20(3):267
‑
79)。
[0144]
vκ轻链结构域的第一、第二和第三高变环在本文中称为l1(κ)、l2(κ)和l3(κ)，并且可以定义为包含v
l
结构域中的残基25
‑
33(l1(κ)，由6个、7个、8个、11个、12个或13个残基组成)、残基49
‑
53(l2(κ)，由3个残基组成)和残基90
‑
97(l3(κ)，由6个残基组成)(morea等,2000.methods.20(3):267
‑
79)。
[0145]
v
h
结构域的第一、第二和第三高变环在本文中称为h1、h2和h3，并且可以定义为包含v
h
结构域中的残基25
‑
33(h1，由7个、8个或9个残基组成)、残基52
‑
56(h2，由3个或4个残基组成)和残基91
‑
105(h3，长度高度可变)(morea等,2000.methods.20(3):267
‑
79)。
[0146]
除非另有说明，否则术语l1、l2和l3分别是指v
l
结构域的第一、第二和第三高变环，并涵盖从vκ和vλ同种型获得的高变环。术语h1、h2和h3分别是指v
h
结构域的第一、第二和第三高变环，并涵盖从任意已知重链同种型获得的高变环，包括gamma(γ)、mu(μ)、alpha(α)、delta(δ)或epsilon(ε)。高变环l1、l2、l3、h1、h2和h3可各自包含上文所述的“互补决定区”或“cdr”的一部分。
具体实施方式
[0147]
本发明涉及与cd31特异性竞争结合cd38的化合物。
[0148]
在一个实施方案中，本发明所述的化合物与cd31的细胞外结构域竞争。在一个实施方案中，本发明所述的化合物与cd31细胞外结构域的ig样结构域1
‑
3竞争。
[0149]
seq id no：1所示的人cd31的氨基酸序列包含以下特征：氨基酸1至27的信号肽；氨基酸34至121的ig样结构域1；氨基酸145至233的ig样结构域2；氨基酸236至315的ig样结构域3；氨基酸328至401的ig样结构域4；氨基酸424至493的ig样结构域5；氨基酸499至591的ig样结构域6；氨基酸592至601的近膜结构域(juxta
‑
membrane domain)；氨基酸602至620的跨膜结构域和氨基酸621至738的细胞质结构域。
[0150]
因此，在一个实施方案中，本发明所述的化合物与人cd31的细胞外结构域，优选与seq id no：1的氨基酸1至601或28至601竞争。在一个实施方案中，本发明所述的化合物与人cd31的ig样结构域1
‑
3，优选与seq id no：1的氨基酸1至315或28至315或1至327或28至327竞争。
[0151]
在一个实施方案中，本发明所述的化合物选自包含以下或由以下组成的组：肽(包括重组肽或嵌合肽)、抗体、其抗原结合片段、抗原结合抗体模拟物、寡核苷酸和有机小分子。
[0152]
在一个实施方案中，本发明所述的化合物与cd38，优选人cd38特异性结合。
[0153]
本发明所述的化合物与cd38之间的特异性结合意味着所述化合物对cd38表现出可观的亲和力。
[0154]
本发明所述的化合物对cd38的亲和力可以通过本领域技术人员公知的各种方法来确定。这些方法包括但不限于生物传感器分析(包括例如biacore分析)、blitz分析和scatchard图。
[0155]
或者或另外，通过(以及其他)将所述化合物与cd38或其片段(尤其是包含cd38的表位或由cd38的表位组成的片段)的反应和所述化合物与除cd38或其片段之外的蛋白或抗原的反应进行比较，可以容易地检测本发明所述的化合物是否与cd38结合。
[0156]
在本发明所述的化合物是抗体、其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物的一个实施方案中，“可观的亲和力”可以定义为k
d
‑
亲和力常数为约10
‑7m，优选约10
‑8m或更强。具体地，当k
d
‑
亲和力常数在约10
‑7m至约10
‑
12
m，优选约10
‑8m至约10
‑
12
m，更优选约10
‑9m至约10
‑
11
m的范围内，尤其k
d
‑
亲和力常数为约10
‑
10
m时，认为本发明所述的抗体、其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物与cd38之间的结合是特异性的。
[0157]
在本发明所述的化合物是抗体、其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物的一个实施方案中，所述化合物对cd38具有低于或等于约10
‑7m，优选低于或等于约10
‑8m，更优选低于或等于约10
‑9m，甚至更优选低于或等于约10
‑
10
m的k
d
‑
亲和力常数；优选可通过生物传感器分析，尤其是通过biacore分析来确定。
[0158]
在本发明所述的化合物是有机小分子的一个实施方案中，“可观的亲和力”可以定义为k
d
‑
亲和力常数为约10
‑6m。具体地，当k
d
‑
亲和力常数在约10
‑6m至约10
‑
10
m，优选约10
‑7m至约10
‑9m的范围内，尤其k
d
‑
亲和力常数为约10
‑8m时，认为本发明所述的有机小分子与cd38之间的结合是特异性的；优选可通过生物传感器分析，尤其是通过biacore分析来确定。
[0159]
在本发明所述的化合物是寡核苷酸的一个实施方案中，“可观的亲和力”可以定义
为k
d
‑
亲和力常数为约200nm或更强。具体地，当k
d
‑
亲和力常数在约10nm至约200nm，优选约50nm至约150nm的范围内，尤其是k
d
‑
亲和力常数为约100nm时，认为本发明所述的寡核苷酸与cd38之间的结合是特异性的；优选可通过生物传感器分析，尤其是通过biacore分析来确定。
[0160]
在一个实施方案中，本发明所述的化合物与cd38内的至少一个表位特异性结合。
[0161]
在一个实施方案中，本发明所述的化合物与人cd38内的至少一个表位特异性结合。
[0162]
在一个实施方案中，所述表位是线性的。在一个实施方案中，所述表位是构象的。
[0163]
在一个实施方案中，所述表位包含71个、70个、69个、68个、67个、66个、65个、64个、63个、62个、61个、60个、59个、58个、57个、56个、55个、54个、53个、52个、51个、50个、49个、48个、47个、46个、45个、44个、43个、42个、41个、40个、39个、38个、37个、36个、35个、34个、33个、32个、31个、30个、29个、28个、27个、26个、25个、24个、23个、22个、21个、20个、19个、18个、17个、16个、15个、14个、13个、12个、11个、10个、9个、8个、7个、6个、5个、4个、3个、2个连续或不连续的氨基酸残基。
[0164]
在一个实施方案中，所述表位至少延伸跨越具有seq id no：2的人cd38的氨基酸残基1至氨基酸残基300，或延伸跨越来自其他物种的同源cd38中的相应氨基酸残基。
[0165]
在一个实施方案中，所述表位至少延伸跨越具有seq id no：2的人cd38的氨基酸残基1至氨基酸残基296，或延伸跨越来自其他物种的同源cd38中的相应氨基酸残基。
[0166]
在一个实施方案中，所述表位至少延伸跨越具有seq id no：2的人cd38的氨基酸残基1至氨基酸残基294，或延伸跨越来自其他物种的同源cd38中的相应氨基酸残基。
[0167]
在一个实施方案中，所述表位至少延伸跨越具有seq id no：2的人cd38的氨基酸残基1至氨基酸残基285，或延伸跨越来自其他物种的同源cd38中的相应氨基酸残基。
[0168]
在一个实施方案中，所述表位至少延伸跨越具有seq id no：2的人cd38的氨基酸残基70至氨基酸残基300，或延伸跨越来自其他物种的同源cd38中的相应氨基酸残基。
[0169]
在一个实施方案中，所述表位至少延伸跨越具有seq id no：2的人cd38的氨基酸残基70至氨基酸残基296，或延伸跨越来自其他物种的同源cd38中的相应氨基酸残基。
[0170]
在一个实施方案中，所述表位至少延伸跨越具有seq id no：2的人cd38的氨基酸残基70至氨基酸残基294，或延伸为跨越来自其他物种的同源cd38中的相应氨基酸残基。
[0171]
在一个实施方案中，所述表位至少延伸跨越具有seq id no：2的人cd38的氨基酸残基70至氨基酸残基285，或延伸跨越来自其他物种的同源cd38中的相应氨基酸残基。
[0172]
在一个实施方案中，所述表位至少延伸跨越具有seq id no：2的人cd38的氨基酸残基189至氨基酸残基300，或延伸跨越来自其他物种的同源cd38中的相应氨基酸残基。
[0173]
在一个实施方案中，所述表位至少延伸跨越具有seq id no：2的人cd38的氨基酸残基189至氨基酸残基296，或延伸跨越来自其他物种的同源cd38中的相应氨基酸残基。
[0174]
在一个实施方案中，所述表位至少延伸跨越具有seq id no：2的人cd38的氨基酸残基189至氨基酸残基294，或延伸跨越来自其他物种的同源cd38中的相应氨基酸残基。
[0175]
在一个实施方案中，所述表位至少延伸跨越具有seq id no：2的人cd38的氨基酸残基189至氨基酸残基285，或延伸跨越来自其他物种的同源cd38中的相应氨基酸残基。
[0176]
在一个实施方案中，所述表位至少延伸跨越具有seq id no：2的人cd38的氨基酸
残基219至氨基酸残基300，或延伸跨越来自其他物种的同源cd38中的相应氨基酸残基。
[0177]
在一个实施方案中，所述表位至少延伸跨越具有seq id no：2的人cd38的氨基酸残基219至氨基酸残基296，或延伸跨越来自其他物种的同源cd38中的相应氨基酸残基。
[0178]
在一个实施方案中，所述表位至少延伸跨越具有seq id no：2的人cd38的氨基酸残基219至氨基酸残基294，或延伸跨越来自其他物种的同源cd38中的相应氨基酸残基。
[0179]
在一个实施方案中，所述表位至少延伸跨越具有seq id no：2的人cd38的氨基酸残基219至氨基酸残基285，或延伸跨越来自其他物种的同源cd38中的相应氨基酸残基。
[0180]
在一个实施方案中，所述表位至少延伸跨越具有seq id no：2的人cd38的氨基酸残基220至氨基酸残基300，或延伸跨越来自其他物种的同源cd38中的相应氨基酸残基。
[0181]
在一个实施方案中，所述表位至少延伸跨越具有seq id no：2的人cd38的氨基酸残基220至氨基酸残基296，或延伸跨越来自其他物种的同源cd38中的相应氨基酸残基。
[0182]
在一个实施方案中，所述表位至少延伸跨越具有seq id no：2的人cd38的氨基酸残基220至氨基酸残基294，或延伸跨越来自其他物种的同源cd38中的相应氨基酸残基。
[0183]
在一个实施方案中，所述表位至少延伸跨越具有seq id no：2的人cd38的氨基酸残基220至氨基酸残基285，或延伸跨越来自其他物种的同源cd38中的相应氨基酸残基。
[0184]
在一个实施方案中，所述表位至少延伸跨越具有seq id no：2的人cd38的氨基酸残基233至氨基酸残基300，或延伸跨越来自其他物种的同源cd38中的相应氨基酸残基。
[0185]
在一个实施方案中，所述表位至少延伸跨越具有seq id no：2的人cd38的氨基酸残基233至氨基酸残基296，或延伸跨越来自其他物种的同源cd38中的相应氨基酸残基。
[0186]
在一个实施方案中，所述表位至少延伸跨越具有seq id no：2的人cd38的氨基酸残基233至氨基酸残基294，或延伸跨越来自其他物种的同源cd38中的相应氨基酸残基。
[0187]
在一个实施方案中，所述表位至少延伸跨越具有seq id no：2的人cd38的氨基酸残基233至氨基酸残基285，或延伸跨越来自其他物种的同源cd38中的相应氨基酸残基。
[0188]
在一个实施方案中，所述表位至少延伸跨越具有seq id no：2的人cd38的氨基酸残基220至氨基酸残基241和氨基酸残基273至氨基酸残基285，或延伸跨越来自其他物种的同源cd38中的相应氨基酸残基。
[0189]
在一个实施方案中，所述表位至少包含具有seq id no：2的人cd38的半胱氨酸254或来自其他物种的同源cd38中的相应半胱氨酸。
[0190]
在一个实施方案中，所述表位至少包含具有seq id no：2的人cd38的半胱氨酸275或来自其他物种的同源cd38中的相应半胱氨酸。
[0191]
在一个实施方案中，所述表位至少包含具有seq id no：2的人cd38的半胱氨酸254和半胱氨酸275或来自其他物种的同源cd38中的相应半胱氨酸。
[0192]
在一个实施方案中，所述表位包含涉及具有seq id no：2的人cd38的半胱氨酸254和半胱氨酸275或来自其他物种的同源cd38中的相应半胱氨酸的第5个(倒数第二个)c末端二硫环。具体地，人cd38的第5个(倒数第二个)c末端二硫环包含具有seq id no：2的人cd38的氨基酸残基220至氨基酸残基285，或来自其他物种的同源cd38中的相应半胱氨酸。
[0193]
在一个实施方案中，所述表位不包含具有seq id no：2的人cd38的半胱氨酸287或来自其他物种的同源cd38中的相应半胱氨酸。
[0194]
在一个实施方案中，所述表位不包含具有seq id no：2的人cd38的半胱氨酸290或
来自其他物种的同源cd38中的相应半胱氨酸。
[0195]
在一个实施方案中，所述表位不包含具有seq id no：2的人cd38的半胱氨酸287和半胱氨酸290或来自其他物种的同源cd38中的相应半胱氨酸。
[0196]
在一个实施方案中，所述表位不包含涉及具有seq id no：2的人cd38的半胱氨酸287和半胱氨酸296或来自其他物种的同源cd38中的相应半胱氨酸的第6个c末端二硫环。具体地，人cd38的第6个c末端二硫环包含具有seq id no：2的人cd38的氨基酸残基285至氨基酸残基300，或来自其他物种的同源cd38中的相应半胱氨酸。
[0197]
在一个实施方案中，本发明所述的化合物直接保护多巴胺能神经元免受由神经毒素mpp

诱导的线粒体抑制。
[0198]
在一个实施方案中，本发明所述的化合物具有至少一种，优选至少两种，更优选三种以下特性：
[0199]
‑
它保护多巴胺能神经元免受由于线粒体复合物i抑制引起的能量缺乏(energy deficit)，尤其是线粒体神经毒素mpp

；
[0200]
‑
它使用人外周血单核细胞(pbmc)增加抗炎细胞因子白介素
‑
10(il
‑
10)的体外释放；和/或
[0201]
‑
当注射至小鼠中时，它增加体内il
‑
10水平。
[0202]
在一个实施方案中，本发明所述的化合物与cd31，优选与人cd31竞争，并诱导酪氨酸磷酸化。具体地，本发明所述的化合物诱导在染料木黄酮存在下受到抑制的离散细胞质基质的酪氨酸磷酸化。
[0203]
磷酸化的离散细胞质基质的实例包括但不限于c
‑
cbl原癌基因、蛋白激酶syk、磷脂酰肌醇
‑
3激酶的p85亚基、磷脂酶c
‑
γ(plc
‑
γ)、raf
‑
1/map激酶、cd3
‑
ζ/zap
‑
70信号传导通路。
[0204]
在一个实施方案中，本发明所述的化合物与cd31，优选与人cd31竞争，并触发cd38内化。
[0205]
在一个实施方案中，本发明所述的化合物与cd31，优选与人cd31竞争，并诱导溶酶体胞吐。具体地，本发明所述的化合物诱导溶酶体胞吐，其在vacuolin
‑
1存在下受到抑制。
[0206]
在一个实施方案中，本发明所述的化合物不介导、触发或增强抗体依赖性细胞毒性(adcc)、抗体依赖性细胞吞噬作用(adcp)和/或补体依赖性细胞毒性(cdc)。
[0207]
在一个实施方案中，本发明所述的化合物是cd31肽，优选人cd31肽。
[0208]
在一个实施方案中，本发明所述的化合物是包含人cd31的细胞外结构域或由其组成的肽。在一个实施方案中，本发明所述的化合物是人cd31细胞外结构域的片段。在一个实施方案中，本发明所述的化合物是包含人cd31的ig样结构域1
‑
3或由其组成的肽。
[0209]
在一个实施方案中，本发明所述的化合物是包含seq id no：1的氨基酸1至601或由其组成的肽或其变体。在一个实施方案中，本发明所述的化合物是包含seq id no：1的氨基酸28至601或由其组成的肽或其变体。在一个实施方案中，本发明所述的化合物是包含seq id no：1的氨基酸1至591或由其组成的肽或其变体。在一个实施方案中，本发明所述的化合物是包含seq id no：1的氨基酸28至591或由其组成的肽或其变体。在一个实施方案中，本发明所述的化合物是包含seq id no：1的氨基酸1至493或由其组成的肽或其变体。在一个实施方案中，本发明所述的化合物是包含seq id no：1的氨基酸28至493或由其组成的
肽或其变体。在一个实施方案中，本发明所述的化合物是包含seq id no：1的氨基酸1至401或由其组成的肽或其变体。在一个实施方案中，本发明所述的化合物是包含seq id no：1的氨基酸28至401或由其组成的肽或其变体。在一个实施方案中，本发明所述的化合物是包含seq id no：1的氨基酸1至315或由其组成的肽或其变体。在一个实施方案中，本发明所述的化合物是包含seq id no：1的氨基酸28至315或由其组成的肽或其变体。在一个实施方案中，本发明所述的化合物是包含seq id no：1的氨基酸1至233或由其组成的肽或其变体。在一个实施方案中，本发明所述的化合物是包含seq id no：1的氨基酸28至233或由其组成的肽或其变体。在一个实施方案中，本发明所述的化合物是包含seq id no：1的氨基酸1至121或由其组成的肽或其变体。在一个实施方案中，本发明所述的化合物是包含seq id no：1的氨基酸28至121或由其组成的肽或其变体。
[0210]
在一个实施方案中，如上文所述的肽的变体与所述肽共有至少70％，优选至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的局部同一性(local identity)。
[0211]
在一个实施方案中，本发明所述的化合物是嵌合cd31肽，优选嵌合人cd31肽。
[0212]
在一个实施方案中，嵌合cd31肽包含如上文所定义的cd31肽或由其组成，其与免疫球蛋白的fc结构域融合以形成fc
‑
融合蛋白。
[0213]
在一个实施方案中，嵌合cd31肽包含如上文所定义的cd31肽或由其组成，其与人血清白蛋白融合以形成人血清白蛋白融合蛋白。
[0214]
在一个实施方案中，嵌合cd31肽包含如上文所定义的cd31肽，其与人血清白蛋白的一个或多个结构域融合以形成人血清白蛋白结构域融合蛋白。具体地，嵌合cd31肽可包含如上文所定义的cd31肽或由其组成，其与人血清白蛋白的结构域iii融合。
[0215]
如本文所用，术语“人血清白蛋白的结构域iii”包含如seq id no：43所示的序列的氨基酸残基404至601或由其组成，对应于由alb基因编码的人血清白蛋白(uniprot登录号和版本：p02768
‑
1，最后修改于1990年4月1日；checksum：f88ff61dd242e818)。
[0216]
在一个实施方案中，嵌合cd31肽包含如上文所定义的cd31肽或由其组成，其与转铁蛋白融合以形成转铁蛋白
‑
融合蛋白。
[0217]
在一个实施方案中，本发明所述的化合物是抗cd38抗体或其抗原结合片段。
[0218]
在一个实施方案中，本发明所述的化合物是抗cd38多克隆抗体或其抗原结合片段。
[0219]
在一个实施方案中，本发明所述的化合物是抗cd38单克隆抗体或其抗原结合片段。
[0220]
在一个实施方案中，本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段选自包含以下或由以下组成的组：小鼠抗人cd38单克隆抗体克隆hb7；大鼠抗人cd38单克隆抗体克隆90；小鼠抗人cd38单克隆抗体克隆at1；小鼠抗人cd38单克隆抗体克隆t16；小鼠抗人cd38单克隆抗体克隆ib4；以及能够与cd31特异性竞争的以上的突变、重组(包括嵌合和人源化)、双特异性和修饰的抗体。
[0221]
在一个实施方案中，本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段选自包含以下或由以下组成的组：小鼠抗人cd38单克隆抗体克隆hb7；大鼠抗人cd38单克隆抗体克隆90；以及能够与cd31特异性竞争的以上的突变、重组(包括嵌合和人源化)、双特异性和修饰的抗
体。
[0222]
在一个实施方案中，本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段选自包含以下或由以下组成的组：小鼠抗人cd38单克隆抗体克隆hb7；以及能够与cd31特异性竞争的以上的突变、重组(包括嵌合和人源化)、双特异性和修饰的抗体。
[0223]
在下文中，且除非另有明确说明，否则cdr编号和定义均根据chothia定义。
[0224]
在一个实施方案中，本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段包含重链可变区(本文中缩写为hcvr或v
h
)，其包含至少一个，优选至少两个，更优选三个以下互补决定区(cdr)：
[0225]
v
h
‑
cdr1：gftfsnx1(seq id no:4)或其变体；
[0226]
v
h
‑
cdr2：x2gssrx3(seq id no:5)或其变体；和
[0227]
v
h
‑
cdr3：x4x5x6x7x8yx9x
10
x
11
x
12
gmdv(seq id no:6)或其变体，
[0228]
其中：
[0229]
x1选自tyr(y)、asn(n)和ser(s)；
[0230]
x2选自ser(s)和tyr(y)；
[0231]
x3选自tyr(y)、asp(d)、asn(n)和ser(s)；
[0232]
x4选自ser(s)和空位；
[0233]
x5选自ser(s)和空位；
[0234]
x6选自ser(s)和tyr(y)；
[0235]
x7选自ser(s)和asp(d)；
[0236]
x8选自tyr(y)、ser(s)、asp(d)和gly(g)；
[0237]
x9选自tyr(y)和gly(g)；
[0238]
x
10
选自ser(s)、tyr(y)和phe(f)；
[0239]
x
11
选自gly(g)和asp(d)；且
[0240]
x
12
选自asn(n)、tyr(y)和ser(s)。
[0241]
在一个实施方案中，本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段包含含有以下三个cdr的hcvr：
[0242]
v
h
‑
cdr1：gftfsnx1(seq id no:4)或其变体；
[0243]
v
h
‑
cdr2：x2gssrx3(seq id no:5)或其变体；和
[0244]
v
h
‑
cdr3：x4x5x6x7x8yx9x
10
x
11
x
12
gmdv(seq id no:6)或其变体，
[0245]
其中：
[0246]
x1选自tyr(y)、asn(n)和ser(s)；
[0247]
x2选自ser(s)和tyr(y)；
[0248]
x3选自tyr(y)、asp(d)、asn(n)和ser(s)；
[0249]
x4选自ser(s)和空位；
[0250]
x5选自ser(s)和空位；
[0251]
x6选自ser(s)和tyr(y)；
[0252]
x7选自ser(s)和asp(d)；
[0253]
x8选自tyr(y)、ser(s)、asp(d)和gly(g)；
[0254]
x9选自tyr(y)和gly(g)；
[0255]
x
10
选自ser(s)、tyr(y)和phe(f)；
[0256]
x
11
选自gly(g)和asp(d)；且
[0257]
x
12
选自asn(n)、tyr(y)和ser(s)。
[0258]
在一个实施方案中，根据以下实施例将本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段命名为“克隆b08”，并且其包含含有至少一个，优选至少两个，更优选三个以下cdr的hcvr：
[0259]
v
h
‑
cdr1：gftfsny(seq id no:7)或其变体；
[0260]
v
h
‑
cdr2：sgssrs(seq id no:10)或其变体；和
[0261]
v
h
‑
cdr3：ssddyyydygmdv(seq id no：15)或其变体。
[0262]
在一个实施方案中，克隆b08包含含有以下三个cdr的hcvr：
[0263]
v
h
‑
cdr1：gftfsny(seq id no:7)或其变体；
[0264]
v
h
‑
cdr2：sgssrs(seq id no:10)或其变体；和
[0265]
v
h
‑
cdr3：ssddyyydygmdv(seq id no：15)或其变体。
[0266]
在一个实施方案中，根据以下实施例将本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段命名为“克隆c05”，并且其包含含有至少一个，优选至少两个，更优选三个以下cdr的hcvr：
[0267]
v
h
‑
cdr1：gftfsnn(seq id no:8)或其变体；
[0268]
v
h
‑
cdr2：sgssry(seq id no:11)或其变体；和
[0269]
v
h
‑
cdr3：ssssyyysgngmdv(seq id no：16)或其变体。
[0270]
在一个实施方案中，克隆c05包含含有以下三个cdr的hcvr：
[0271]
v
h
‑
cdr1：gftfsnn(seq id no:8)或其变体；
[0272]
v
h
‑
cdr2：sgssry(seq id no:11)或其变体；和
[0273]
v
h
‑
cdr3：ssssyyysgngmdv(seq id no：16)或其变体。
[0274]
在一个实施方案中，根据以下实施例将本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段命名为“克隆c06”，并且其包含含有至少一个，优选至少两个，更优选三个以下cdr的hcvr：
[0275]
v
h
‑
cdr1：gftfsns(seq id no:9)或其变体；
[0276]
v
h
‑
cdr2：sgssrn(seq id no:12)或其变体；和
[0277]
v
h
‑
cdr3：ssyssygsgngmdv(seq id no：17)或其变体。
[0278]
在一个实施方案中，克隆c06包含含有以下三个cdr的hcvr：
[0279]
v
h
‑
cdr1：gftfsns(seq id no:9)或其变体；
[0280]
v
h
‑
cdr2：sgssrn(seq id no:12)或其变体；和
[0281]
v
h
‑
cdr3：ssyssygsgngmdv(seq id no：17)或其变体。
[0282]
在一个实施方案中，根据以下实施例将本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段命名为“克隆d06”，并且其包含含有至少一个，优选至少两个，更优选三个以下cdr的hcvr：
[0283]
v
h
‑
cdr1：gftfsny(seq id no:7)或其变体；
[0284]
v
h
‑
cdr2：ygssrd(seq id no:13)或其变体；和
[0285]
v
h
‑
cdr3：ssgyyfgygmdv(seq id no：19)或其变体。
[0286]
在一个实施方案中，克隆d06包含含有以下三个cdr的hcvr：
[0287]
v
h
‑
cdr1：gftfsny(seq id no:7)或其变体；
[0288]
v
h
‑
cdr2：ygssrd(seq id no:13)或其变体；和
[0289]
v
h
‑
cdr3：ssgyyfgygmdv(seq id no：19)或其变体。
[0290]
在一个实施方案中，根据以下实施例将本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段命名为“克隆d07”，并且其包含含有至少一个，优选至少两个，更优选三个以下cdr的hcvr：
[0291]
v
h
‑
cdr1：gftfsns(seq id no:9)或其变体；
[0292]
v
h
‑
cdr2：sgssrd(seq id no:14)或其变体；和
[0293]
v
h
‑
cdr3：ssssyyysgsgmdv(seq id no：20)或其变体。
[0294]
在一个实施方案中，克隆d07包含含有以下三个cdr的hcvr：
[0295]
v
h
‑
cdr1：gftfsns(seq id no:9)或其变体；
[0296]
v
h
‑
cdr2：sgssrd(seq id no:14)或其变体；和
[0297]
v
h
‑
cdr3：ssssyyysgsgmdv(seq id no：20)或其变体。
[0298]
在一个实施方案中，根据以下实施例将本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段命名为“克隆d10”，并且其包含含有至少一个，优选至少两个，更优选三个以下cdr的hcvr：
[0299]
v
h
‑
cdr1：gftfsns(seq id no:9)或其变体；
[0300]
v
h
‑
cdr2：sgssrd(seq id no:14)或其变体；和
[0301]
v
h
‑
cdr3：ssssyyysgngmdv(seq id no：16)或其变体。
[0302]
在一个实施方案中，克隆d10包含含有以下三个cdr的hcvr：
[0303]
v
h
‑
cdr1：gftfsns(seq id no:9)或其变体；
[0304]
v
h
‑
cdr2：sgssrd(seq id no:14)或其变体；和
[0305]
v
h
‑
cdr3：ssssyyysgngmdv(seq id no：16)或其变体。
[0306]
在一个实施方案中，本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区(本文中缩写为lcvr或v
l
)，其包含至少一个，优选至少两个，更优选三个以下互补决定区(cdr)：
[0307]
v
l
‑
cdr1：agtssdvggx
13
x
14
x
15
vs(seq id no:21)或其变体；
[0308]
v
l
‑
cdr2：x
16
dsx
17
rps(seq id no:22)或其变体；和
[0309]
v
l
‑
cdr3：strvfgggt(seq id no:23)或其变体，
[0310]
其中：
[0311]
x
13
选自ser(s)和asn(n)；
[0312]
x
14
选自ser(s)和tyr(y)；
[0313]
x
15
选自tyr(y)和ser(s)；
[0314]
x
16
选自tyr(y)、ser(s)和asp(d)；且
[0315]
x
17
选自tyr(y)和asn(n)。
[0316]
在一个实施方案中，本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段包含含有以下三个cdr的lcvr：
[0317]
v
l
‑
cdr1：agtssdvggx
13
x
14
x
15
vs(seq id no:21)或其变体；
[0318]
v
l
‑
cdr2：x
16
dsx
17
rps(seq id no:22)或其变体；和
[0319]
v
l
‑
cdr3：strvfgggt(seq id no:23)或其变体，
[0320]
其中：
[0321]
x
13
选自ser(s)和asn(n)；
[0322]
x
14
选自ser(s)和tyr(y)；
[0323]
x
15
选自tyr(y)和ser(s)；
[0324]
x
16
选自tyr(y)、ser(s)和asp(d)；且
[0325]
x
17
选自tyr(y)和asn(n)。
[0326]
在一个实施方案中，根据以下实施例将本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段命名为“克隆b08”，并且其包含含有至少一个，优选至少两个，更优选三个以下cdr的lcvr：
[0327]
v
l
‑
cdr1：agtssdvggsysvs(seq id no:24)或其变体；
[0328]
v
l
‑
cdr2：ddsnrps(seq id no:29)或其变体；和
[0329]
v
l
‑
cdr3：strvfgggt(seq id no：23)或其变体。
[0330]
在一个实施方案中，克隆b08包含含有以下三个cdr的lcvr：
[0331]
v
l
‑
cdr1：agtssdvggsysvs(seq id no:24)或其变体；
[0332]
v
l
‑
cdr2：ddsnrps(seq id no:29)或其变体；和
[0333]
v
l
‑
cdr3：strvfgggt(seq id no：23)或其变体。
[0334]
在一个实施方案中，根据以下实施例将本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段命名为“克隆c05”，并且其包含含有至少一个，优选至少两个，更优选三个以下cdr的lcvr：
[0335]
v
l
‑
cdr1：agtssdvggssyvs(seq id no:25)或其变体；
[0336]
v
l
‑
cdr2：ydsyrps(seq id no:30)或其变体；和
[0337]
v
l
‑
cdr3：strvfgggt(seq id no：23)或其变体。
[0338]
在一个实施方案中，克隆c05包含含有以下三个cdr的lcvr：
[0339]
v
l
‑
cdr1：agtssdvggssyvs(seq id no:25)或其变体；
[0340]
v
l
‑
cdr2：ydsyrps(seq id no:30)或其变体；和
[0341]
v
l
‑
cdr3：strvfgggt(seq id no：23)或其变体。
[0342]
在一个实施方案中，根据以下实施例将本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段命名为“克隆c06”，并且其包含含有至少一个，优选至少两个，更优选三个以下cdr的lcvr：
[0343]
v
l
‑
cdr1：agtssdvggssyvs(seq id no:25)或其变体；
[0344]
v
l
‑
cdr2：ydsyrps(seq id no:30)或其变体；和
[0345]
v
l
‑
cdr3：strvfgggt(seq id no：23)或其变体。
[0346]
在一个实施方案中，克隆c06包含含有以下三个cdr的lcvr：
[0347]
v
l
‑
cdr1：agtssdvggssyvs(seq id no:25)或其变体；
[0348]
v
l
‑
cdr2：ydsyrps(seq id no:30)或其变体；和
[0349]
v
l
‑
cdr3：strvfgggt(seq id no：23)或其变体。
[0350]
在一个实施方案中，根据以下实施例将本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片
段命名为“克隆d06”，并且其包含含有至少一个，优选至少两个，更优选三个以下cdr的lcvr：
[0351]
v
l
‑
cdr1：agtssdvggsyyvs(seq id no:27)或其变体；
[0352]
v
l
‑
cdr2：sdsyrps(seq id no:32)或其变体；和
[0353]
v
l
‑
cdr3：strvfgggt(seq id no：23)或其变体。
[0354]
在一个实施方案中，克隆d06包含含有以下三个cdr的lcvr：
[0355]
v
l
‑
cdr1：agtssdvggsyyvs(seq id no:27)或其变体；
[0356]
v
l
‑
cdr2：sdsyrps(seq id no:32)或其变体；和
[0357]
v
l
‑
cdr3：strvfgggt(seq id no：23)或其变体。
[0358]
在一个实施方案中，根据以下实施例将本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段命名为“克隆d07”，并且其包含含有至少一个，优选至少两个，更优选三个以下cdr的lcvr：
[0359]
v
l
‑
cdr1：agtssdvggnsyvs(seq id no:28)或其变体；
[0360]
v
l
‑
cdr2：ydsyrps(seq id no:30)或其变体；和
[0361]
v
l
‑
cdr3：strvfgggt(seq id no：23)或其变体。
[0362]
在一个实施方案中，克隆d07包含含有以下三个cdr的lcvr：
[0363]
v
l
‑
cdr1：agtssdvggnsyvs(seq id no:28)或其变体；
[0364]
v
l
‑
cdr2：ydsyrps(seq id no:30)或其变体；和
[0365]
v
l
‑
cdr3：strvfgggt(seq id no：23)或其变体。
[0366]
在一个实施方案中，根据以下实施例将本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段命名为“克隆d10”，并且其包含含有至少一个，优选至少两个，更优选三个以下cdr的lcvr：
[0367]
v
l
‑
cdr1：agtssdvggnsyvs(seq id no:28)或其变体；
[0368]
v
l
‑
cdr2：ydsyrps(seq id no:30)或其变体；和
[0369]
v
l
‑
cdr3：strvfgggt(seq id no：23)或其变体。
[0370]
在一个实施方案中，克隆d10包含含有以下三个cdr的lcvr：
[0371]
v
l
‑
cdr1：agtssdvggnsyvs(seq id no:28)或其变体；
[0372]
v
l
‑
cdr2：ydsyrps(seq id no:30)或其变体；和
[0373]
v
l
‑
cdr3：strvfgggt(seq id no：23)或其变体。
[0374]
在一个实施方案中，本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段包含：
[0375]
‑
包含至少一个，优选至少两个，更优选三个以下cdr的hcvr：
[0376]
v
h
‑
cdr1：gftfsnx1(seq id no:4)或其变体，
[0377]
v
h
‑
cdr2：x2gssrx3(seq id no:5)或其变体，和
[0378]
v
h
‑
cdr3：x4x5x6x7x8yx9x
10
x
11
x
12
gmdv(seq id no:6)或其变体；和
[0379]
‑
包含至少一个，优选至少两个，更优选三个以下cdr的lcvr：
[0380]
v
l
‑
cdr1：agtssdvggx
13
x
14
x
15
vs(seq id no:21)或其变体；
[0381]
v
l
‑
cdr2：x
16
dsx
17
rps(seq id no:22)或其变体；和
[0382]
v
l
‑
cdr3：strvfgggt(seq id no:23)或其变体；
[0383]
其中：
[0384]
x1选自tyr(y)、asn(n)和ser(s)；
[0385]
x2选自ser(s)和tyr(y)；
[0386]
x3选自tyr(y)、asp(d)、asn(n)和ser(s)；
[0387]
x4选自ser(s)和空位；
[0388]
x5选自ser(s)和空位；
[0389]
x6选自ser(s)和tyr(y)；
[0390]
x7选自ser(s)和asp(d)；
[0391]
x8选自tyr(y)、ser(s)、asp(d)和gly(g)；
[0392]
x9选自tyr(y)和gly(g)；
[0393]
x
10
选自ser(s)、tyr(y)和phe(f)；
[0394]
x
11
选自gly(g)和asp(d)；
[0395]
x
12
选自asn(n)、tyr(y)和ser(s)；
[0396]
x
13
选自ser(s)和asn(n)；
[0397]
x
14
选自ser(s)和tyr(y)；
[0398]
x
15
选自tyr(y)和ser(s)；
[0399]
x
16
选自tyr(y)、ser(s)和asp(d)；且
[0400]
x
17
选自tyr(y)和asn(n)。
[0401]
在一个实施方案中，本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段包含：
[0402]
‑
包含以下三个cdr的hcvr：
[0403]
v
h
‑
cdr1：gftfsnx1(seq id no:4)或其变体，
[0404]
v
h
‑
cdr2：x2gssrx3(seq id no:5)或其变体，和
[0405]
v
h
‑
cdr3：x4x5x6x7x8yx9x
10
x
11
x
12
gmdv(seq id no:6)或其变体；和
[0406]
‑
包含以下三个cdr的lcvr：
[0407]
v
l
‑
cdr1：agtssdvggx
13
x
14
x
15
vs(seq id no:21)或其变体；
[0408]
v
l
‑
cdr2：x
16
dsx
17
rps(seq id no:22)或其变体；和
[0409]
v
l
‑
cdr3：strvfgggt(seq id no:23)或其变体；
[0410]
其中：
[0411]
x1选自tyr(y)、asn(n)和ser(s)；
[0412]
x2选自ser(s)和tyr(y)；
[0413]
x3选自tyr(y)、asp(d)、asn(n)和ser(s)；
[0414]
x4选自ser(s)和空位；
[0415]
x5选自ser(s)和空位；
[0416]
x6选自ser(s)和tyr(y)；
[0417]
x7选自ser(s)和asp(d)；
[0418]
x8选自tyr(y)、ser(s)、asp(d)和gly(g)；
[0419]
x9选自tyr(y)和gly(g)；
[0420]
x
10
选自ser(s)、tyr(y)和phe(f)；
[0421]
x
11
选自gly(g)和asp(d)；
[0422]
x
12
选自asn(n)、tyr(y)和ser(s)；
[0423]
x
13
选自ser(s)和asn(n)；
[0424]
x
14
选自ser(s)和tyr(y)；
[0425]
x
15
选自tyr(y)和ser(s)；
[0426]
x
16
选自tyr(y)、ser(s)和asp(d)；且
[0427]
x
17
选自tyr(y)和asn(n)。
[0428]
在一个实施方案中，根据以下实施例将本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段命名为“克隆b08”，并且其包含：
[0429]
‑
包含至少一个，优选至少两个，更优选三个以下cdr的hcvr：
[0430]
v
h
‑
cdr1：gftfsny(seq id no:7)或其变体，
[0431]
v
h
‑
cdr2：sgssrs(seq id no:10)或其变体，和
[0432]
v
h
‑
cdr3：ssddyyydygmdv(seq id no:15)或其变体；和
[0433]
‑
包含至少一个，优选至少两个，更优选三个以下cdr的lcvr：
[0434]
v
l
‑
cdr1：agtssdvggsysvs(seq id no:24)或其变体，
[0435]
v
l
‑
cdr2：ddsnrps(seq id no:29)或其变体，和
[0436]
v
l
‑
cdr3：strvfgggt(seq id no：23)或其变体。
[0437]
在一个实施方案中，克隆b08包含：
[0438]
‑
包含以下三个cdr的hcvr：
[0439]
v
h
‑
cdr1：gftfsny(seq id no:7)或其变体，
[0440]
v
h
‑
cdr2：sgssrs(seq id no:10)或其变体，和
[0441]
v
h
‑
cdr3：ssddyyydygmdv(seq id no:15)或其变体；和
[0442]
‑
包含以下三个cdr的lcvr：
[0443]
v
l
‑
cdr1：agtssdvggsysvs(seq id no:24)或其变体，
[0444]
v
l
‑
cdr2：ddsnrps(seq id no:29)或其变体，和
[0445]
v
l
‑
cdr3：strvfgggt(seq id no：23)或其变体。
[0446]
在一个实施方案中，根据以下实施例将本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段命名为“克隆c05”，并且其包含：
[0447]
‑
包含至少一个，优选至少两个，更优选三个以下cdr的hcvr：
[0448]
v
h
‑
cdr1：gftfsnn(seq id no:8)或其变体，
[0449]
v
h
‑
cdr2：sgssry(seq id no:11)或其变体，和
[0450]
v
h
‑
cdr3：ssssyyysgngmdv(seq id no:16)或其变体；和
[0451]
‑
包含至少一个，优选至少两个，更优选三个以下cdr的lcvr：
[0452]
v
l
‑
cdr1：agtssdvggssyvs(seq id no:25)或其变体，
[0453]
v
l
‑
cdr2：ydsyrps(seq id no:30)或其变体，和
[0454]
v
l
‑
cdr3：strvfgggt(seq id no：23)或其变体。
[0455]
在一个实施方案中，克隆c05包含：
[0456]
‑
包含以下三个cdr的hcvr：
[0457]
v
h
‑
cdr1：gftfsnn(seq id no:8)或其变体，
[0458]
v
h
‑
cdr2：sgssry(seq id no:11)或其变体，和
[0459]
v
h
‑
cdr3：ssssyyysgngmdv(seq id no:16)或其变体；和
[0460]
‑
包含以下三个cdr的lcvr：
[0461]
v
l
‑
cdr1：agtssdvggssyvs(seq id no:25)或其变体，
[0462]
v
l
‑
cdr2：ydsyrps(seq id no:30)或其变体，和
[0463]
v
l
‑
cdr3：strvfgggt(seq id no：23)或其变体。
[0464]
在一个实施方案中，根据以下实施例将本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段命名为“克隆c06”，并且其包含：
[0465]
‑
包含至少一个，优选至少两个，更优选三个以下cdr的hcvr：
[0466]
v
h
‑
cdr1：gftfsns(seq id no:9)或其变体，
[0467]
v
h
‑
cdr2：sgssrn(seq id no:12)或其变体，和
[0468]
v
h
‑
cdr3：ssyssygsgngmdv(seq id no:17)或其变体；和
[0469]
‑
包含至少一个，优选至少两个，更优选三个以下cdr的lcvr：
[0470]
v
l
‑
cdr1：agtssdvggssyvs(seq id no:25)或其变体，
[0471]
v
l
‑
cdr2：ydsyrps(seq id no:30)或其变体，和
[0472]
v
l
‑
cdr3：strvfgggt(seq id no：23)或其变体。
[0473]
在一个实施方案中，克隆c06包含：
[0474]
‑
包含以下三个cdr的hcvr：
[0475]
v
h
‑
cdr1：gftfsns(seq id no:9)或其变体，
[0476]
v
h
‑
cdr2：sgssrn(seq id no:12)或其变体，和
[0477]
v
h
‑
cdr3：ssyssygsgngmdv(seq id no:17)或其变体；和
[0478]
‑
包含以下三个cdr的lcvr：
[0479]
v
l
‑
cdr1：agtssdvggssyvs(seq id no:25)或其变体，
[0480]
v
l
‑
cdr2：ydsyrps(seq id no:30)或其变体，和
[0481]
v
l
‑
cdr3：strvfgggt(seq id no：23)或其变体。
[0482]
在一个实施方案中，根据以下实施例将本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段命名为“克隆d06”，并且其包含：
[0483]
‑
包含至少一个，优选至少两个，更优选三个以下cdr的hcvr：
[0484]
v
h
‑
cdr1：gftfsny(seq id no:7)或其变体，
[0485]
v
h
‑
cdr2：ygssrd(seq id no:13)或其变体，和
[0486]
v
h
‑
cdr3：ssgyyfgygmdv(seq id no:19)或其变体；和
[0487]
‑
包含至少一个，优选至少两个，更优选三个以下cdr的lcvr：
[0488]
v
l
‑
cdr1：agtssdvggsyyvs(seq id no:27)或其变体，
[0489]
v
l
‑
cdr2：sdsyrps(seq id no:32)或其变体，和
[0490]
v
l
‑
cdr3：strvfgggt(seq id no：23)或其变体。
[0491]
在一个实施方案中，克隆d06包含：
[0492]
‑
包含以下三个cdr的hcvr：
[0493]
v
h
‑
cdr1：gftfsny(seq id no:7)或其变体，
[0494]
v
h
‑
cdr2：ygssrd(seq id no:13)或其变体，和
[0495]
v
h
‑
cdr3：ssgyyfgygmdv(seq id no:19)或其变体；和
[0496]
‑
包含以下三个cdr的lcvr：
[0497]
v
l
‑
cdr1：agtssdvggsyyvs(seq id no:27)或其变体，
[0498]
v
l
‑
cdr2：sdsyrps(seq id no:32)或其变体，和
[0499]
v
l
‑
cdr3：strvfgggt(seq id no：23)或其变体。
[0500]
在一个实施方案中，根据以下实施例将本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段命名为“克隆d07”，并且其包含：
[0501]
‑
包含至少一个，优选至少两个，更优选三个以下cdr的hcvr：
[0502]
v
h
‑
cdr1：gftfsns(seq id no:9)或其变体，
[0503]
v
h
‑
cdr2：sgssrd(seq id no:14)或其变体，和
[0504]
v
h
‑
cdr3：ssssyyysgsgmdv(seq id no:20)或其变体；和
[0505]
‑
包含至少一个，优选至少两个，更优选三个以下cdr的lcvr：
[0506]
v
l
‑
cdr1：agtssdvggnsyvs(seq id no:28)或其变体，
[0507]
v
l
‑
cdr2：ydsyrps(seq id no:30)或其变体，和
[0508]
v
l
‑
cdr3：strvfgggt(seq id no：23)或其变体。
[0509]
在一个实施方案中，克隆d07包含：
[0510]
‑
包含以下三个cdr的hcvr：
[0511]
v
h
‑
cdr1：gftfsns(seq id no:9)或其变体，
[0512]
v
h
‑
cdr2：sgssrd(seq id no:14)或其变体，和
[0513]
v
h
‑
cdr3：ssssyyysgsgmdv(seq id no:20)或其变体；和
[0514]
‑
包含以下三个cdr的lcvr：
[0515]
v
l
‑
cdr1：agtssdvggnsyvs(seq id no:28)或其变体，
[0516]
v
l
‑
cdr2：ydsyrps(seq id no:30)或其变体，和
[0517]
v
l
‑
cdr3：strvfgggt(seq id no：23)或其变体。
[0518]
在一个实施方案中，根据以下实施例将本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段命名为“克隆d10”，并且其包含：
[0519]
‑
包含至少一个，优选至少两个，更优选三个以下cdr的hcvr：
[0520]
v
h
‑
cdr1：gftfsns(seq id no:9)或其变体，
[0521]
v
h
‑
cdr2：sgssrd(seq id no:14)或其变体，和
[0522]
v
h
‑
cdr3：ssssyyysgngmdv(seq id no:16)或其变体；和
[0523]
‑
包含至少一个，优选至少两个，更优选三个以下cdr的lcvr：
[0524]
v
l
‑
cdr1：agtssdvggnsyvs(seq id no:28)或其变体，
[0525]
v
l
‑
cdr2：ydsyrps(seq id no:30)或其变体，和
[0526]
v
l
‑
cdr3：strvfgggt(seq id no：23)或其变体。
[0527]
在一个实施方案中，克隆d10包含：
[0528]
‑
包含以下三个cdr的hcvr：
[0529]
v
h
‑
cdr1：gftfsns(seq id no:9)或其变体，
[0530]
v
h
‑
cdr2：sgssrd(seq id no:14)或其变体，和
[0531]
v
h
‑
cdr3：ssssyyysgngmdv(seq id no:16)或其变体；和
[0532]
‑
包含以下三个cdr的lcvr：
[0533]
v
l
‑
cdr1：agtssdvggnsyvs(seq id no:28)或其变体，
[0534]
v
l
‑
cdr2：ydsyrps(seq id no:30)或其变体，和
[0535]
v
l
‑
cdr3：strvfgggt(seq id no：23)或其变体。
[0536]
cdr的变体是指任意如上文所定义的cdr，其特征在于具有1个、2个或3个被不同氨基酸替代的氨基酸。
[0537]
cdr的变体是指任意如上文所定义的cdr，其特征在于具有与特定cdr共有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的氨基酸序列。
[0538]
在一个实施方案中，根据以下实施例将本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段命名为“克隆b08”，并且包含具有如seq id no：33所示的序列的hcvr，或其变体。
[0539][0540]
在一个实施方案中，根据以下实施例将本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段命名为“克隆c05”，并且包含具有如seq id no：34所示的序列的hcvr，或其变体。
[0541][0542]
在一个实施方案中，根据以下实施例将本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段命名为“克隆c06”，并且包含具有seq id no：35所示的序列的hcvr，或其变体。
[0543][0544]
在一个实施方案中，根据以下实施例将本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段命名为“克隆d06”，并且包含具有如seq id no:36所示的序列的hcvr，或其变体。
[0545][0546]
在一个实施方案中，根据以下实施例将本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段命名为“克隆d07”，并且包含具有如seq id no：37所示的序列的hcvr，或其变体。
[0547][0548]
在一个实施方案中，根据以下实施例将本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段命名为“克隆d10”，并且包含具有如seq id no：38所示的序列的hcvr，或其变体。
[0549][0550]
在一个实施方案中，根据以下实施例将本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段命名为“克隆b08”，并且包含具有如seq id no：39所示的序列的lcvr，或其变体。
[0551][0552]
在一个实施方案中，根据以下实施例将本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段命名为“克隆c05”，并且包含具有如seq id no：40所示的序列的lcvr，或其变体。
[0553]
在一个实施方案中，根据以下实施例将本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段命名为“克隆c06”，并且包含具有如seq id no：40所示的序列的lcvr，或其变体。
[0554][0555]
在一个实施方案中，根据以下实施例将本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段命名为“克隆d06”，并且包含具有如seq id no：41所示的序列的lcvr，或其变体。
[0556][0557]
在一个实施方案中，根据以下实施例将本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段命名为“克隆d07”，并且包含具有如seq id no：42所示的序列的lcvr，或其变体。
[0558]
在一个实施方案中，根据以下实施例将本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段命名为“克隆d10”，并且包含具有如seq id no：42所示的序列的lcvr，或其变体。
[0559][0560]
在一个实施方案中，本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段包含：
[0561]
‑
如上文所定义的hcvr；和
[0562]
‑
如上文所定义的lcvr。
[0563]
在一个实施方案中，本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段包含：
[0564]
‑
选自seq id no:33、34、35、36、37和38的hcvr；和
[0565]
‑
选自seq id no:39、40、41和42的lcvr。
[0566]
在一个实施方案中，根据以下实施例将本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段命名为“克隆b08”，并且包含：
[0567]
‑
具有如seq id no:33所示的序列的hcvr；和
[0568]
‑
具有如seq id no:39所示的序列的lcvr。
[0569]
在一个实施方案中，根据以下实施例将本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段命名为“克隆c05”，并且包含：
[0570]
‑
具有如seq id no:34所示的序列的hcvr；和
[0571]
‑
具有如seq id no:40所示的序列的lcvr。
[0572]
在一个实施方案中，根据以下实施例将本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段命名为“克隆c06”，并且包含：
[0573]
‑
具有如seq id no:35所示的序列的hcvr；和
[0574]
‑
具有如seq id no:40所示的序列的lcvr。
[0575]
在一个实施方案中，根据以下实施例将本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段命名为“克隆d06”，并且包含：
[0576]
‑
具有如seq id no:36所示的序列的hcvr；和
[0577]
‑
具有如seq id no:41所示的序列的lcvr。
[0578]
在一个实施方案中，根据以下实施例将本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段命名为“克隆d07”，并且包含：
[0579]
‑
具有如seq id no:37所示的序列的hcvr；和
[0580]
‑
具有如seq id no:42所示的序列的lcvr。
[0581]
在一个实施方案中，根据以下实施例将本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段命名为“克隆d10”，并且包含：
[0582]
‑
具有如seq id no:38所示的序列的hcvr；和
[0583]
‑
具有如seq id no:42所示的序列的lcvr。
[0584]
hcvr和/或lcvr的变体是指如上文所定义的任意hcvr和/或lcvr，其特征在于具有与特定hcvr和/或lcvr共有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的氨基酸序列。
[0585]
hcvr和/或lcvr的变体是指如上文所定义的任意hcvr和/或lcvr，其特征在于具有由不同的氨基酸替代的1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、
14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个或30个氨基酸。
[0586]
在一个实施方案中，本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段不具有显著的亲和力，且因此不具有显著的与cd3结合的能力。在一个实施方案中，本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段不是抗cd3/抗cd38双特异性抗体。说明性地，wo2016071355中公开了抗cd3/抗cd38双特异性抗体。
[0587]
在一个实施方案中，本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段是嵌合的。
[0588]
在一个实施方案中，本发明所述的嵌合抗cd38抗体或其抗原结合片段包含重链和/或轻链，其包含人恒定区和来自另一物种的可变区，例如，鼠类可变区。
[0589]
在一个实施方案中，本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段是人源化的。
[0590]
在一个实施方案中，本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段是人源化的，优选是人源化的单克隆抗体或抗原结合片段，更优选地包含：
[0591]
‑
衍生自人κ轻链恒定区(lccr)的lccr，和
[0592]
‑
衍生自人igg1、igg2、igg3或igg4(野生型或突变的)重链恒定区(hccr)的hccr。
[0593]
在一个实施方案中，本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段是人源化的，优选是人源化的单克隆抗体或抗原结合片段，更优选地包含：
[0594]
‑
衍生自人κ轻链恒定区(lccr)的lccr，和
[0595]
‑
衍生自包含d297a或d297g突变的人iggl或衍生自包含s228p突变的人igg4的重链恒定区(hccr)。
[0596]
本发明所述的人源化抗cd38抗体或其抗原结合片段在施用给人类受试者时具有免疫原性低于鼠类抗体(或完全非免疫原性)的优势。
[0597]
如本领域技术人员所公知的，hccr igg同种型的选择集中于是否需要特定功能以及是否需要合适的体内半衰期。例如，为选择性根除癌细胞而设计的抗体通常需要允许补体激活和通过抗体依赖性细胞介导的细胞毒性来杀死效应子介导的细胞的活性同种型。人igg1和igg3(半衰期较短)同种型均满足这些标准，尤其是人igg1同种型(野生型和变体)。具体地，凭借hccr的igg同种型(尤其是人野生型和变体igg1同种型)，抗体可以通过cdc、adcc和/或adcp机制对细胞具有细胞毒性(salfeld,2007.nat biotechnol.25(12):1369
‑
72；irani等,2015.mol immunol.67(2pt a):171
‑
82)。事实上，片段可结晶(fc)区与多种辅助分子相互作用以介导间接效应子功能，例如抗体依赖性细胞毒性(adcc)、抗体依赖性细胞吞噬作用(adcp)和补体依赖性细胞毒性(cdc)。
[0598]
在一个实施方案中，可以将本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段进行修饰以增强adcc、adcp和/或cdc。此类修饰是本领域公知的。
[0599]
例如，已知包含低岩藻糖含量的抗体通过fcγriii受体增强adcc应答(参见，例如，国际专利公开wo2014140322)。因此，本发明所述的抗体可以包含低岩藻糖含量。
[0600]
如本文所用，术语“岩藻糖含量”是指连接至每个抗体的每个重链的fc片段的n297残基的n
‑
聚糖内的岩藻糖基化形式的百分比。
[0601]
如本文所用，术语“低岩藻糖含量”是指岩藻糖含量小于或等于65％。有利地，岩藻糖含量小于或等于65％，优选小于或等于60％、55％或50％，或甚至小于或等于45％、40％、35％、30％、25％或20％。然而，岩藻糖含量不需要为零，且其可以例如大于或等于5％、
10％、15％或20％。
[0602]
在一个实施方案中，本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段可以进一步包含不同类型的糖基化(寡甘露糖(oligomannose)或双触角(biantennary)复合物类型的n
‑
聚糖，其中在双触角复合物类型的n
‑
聚糖的情况下具有可变比例的二等分n
‑
乙酰氨基葡萄糖(glcnac)残基或半乳糖残基)，条件是它们具有低岩藻糖含量(参见例如国际专利公开wo2007048077)。例如，可以如欧洲专利公开ep1176195或国际专利公开wo2001077181或wo2012041768中所述地获得具有轻微岩藻糖基化的n
‑
聚糖的抗体。
[0603]
与双触角复合物类型的n
‑
聚糖相比，寡甘露糖类型的n
‑
聚糖具有更短的体内半衰期。因此，有利地，本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段在其fc片段的n
‑
糖基化位点上具有双触角复合物类型的聚糖结构，其如上文所定义地具有低岩藻糖含量。
[0604]
在一个实施方案中，修饰本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段以促进穿过血脑屏障(bbb)的递送。修饰抗体以促进其穿过bbb(例如，当胃肠外施用时)的手段和方法是本领域公知的，并且描述在例如yu等,2011.sci transl med.3(84):84ra44；atwal等,2011.sci transl med.3(84):84ra43；和国际专利申请wo2015031673和wo2016208695中。
[0605]
在一些实施方案中，本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段结合至治疗性部分，即药物。在一个实施方案中，治疗性部分选自细胞毒素、化疗剂、细胞因子、免疫抑制剂、免疫刺激剂、裂解肽和放射性同位素。此类结合物在本文中称为“抗体药物结合物(antibody drug conjugate)”或“adc”。
[0606]
在一个实施方案中，本发明所述的化合物是编码如上文所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段的分离的核酸。
[0607]
在一个实施方案中，分离的核酸是纯化的。
[0608]
在一个实施方案中，将分离的核酸纯化至：
[0609]
(1)核酸重量比大于80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％或更大，如通过吸光度方法或荧光方法所测定的(例如，通过测量在260和280nm处的吸光度比(a
260/280
))，且最优选重量比大于96％、97％、98％或99％；或
[0610]
(2)同质化(homogeneity)，如通过琼脂糖凝胶电泳和使用嵌入剂(intercalating agent)例如溴化乙锭、sybr green、gelgreen等显示的。
[0611]
容易理解，本领域技术人员能够设计编码本文公开的任意hcvr和/或lcvr的核酸序列。
[0612]
还应理解，本领域技术人员熟悉旨在修饰核酸序列以改善例如重组生产率的分子生物学方法，例如通过密码子优化。最终，本技术涵盖编码本文公开的任意hcvr和/或lcvr的任意核酸。
[0613]
在一个实施方案中，本发明所述的化合物是包含编码上文所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段的分离的核酸的表达载体。
[0614]
在一个实施方案中，本发明所述的表达载体包含编码本发明所述的抗体或其结合片段的hcvr的序列，其有效连接至调控元件。
[0615]
在一个实施方案中，本发明所述的表达载体包含编码本发明所述的抗体或其结合片段的lcvr的序列，其有效连接至调控元件。
[0616]
在一个实施方案中，本发明所述的表达载体包含：
[0617]
‑
编码本发明所述的抗体或其结合片段的hcvr的序列，其有效连接至调控元件，和
[0618]
‑
编码本发明所述的抗体或其结合片段的lcvr的序列，其有效连接至调控元件。
[0619]
在一个实施方案中，本发明所述的化合物是抗原结合抗体模拟物。
[0620]
本文公开的抗体或其抗原结合片段的所有实施方案均经必要修改后转变为本发明所述的抗原结合抗体模拟物。
[0621]
在一个实施方案中，本发明所述的化合物是有机小分子。
[0622]
本发明还涉及包含本发明所述的与cd31特异性竞争结合cd38的化合物或由其组成或基本上由其组成的组合物。
[0623]
本发明还涉及包含本发明所述的与cd31特异性竞争结合cd38的化合物的药物组合物；和至少一种药学上可接受的赋形剂。
[0624]
术语“药学上可接受的赋形剂”包括任何和所有溶剂、分散介质、包衣剂、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。所述赋形剂在施用给动物，优选人时不产生有害反应、过敏反应或其他不良反应。对于人类施用，制备物应满足监管机构例如fda办公室或ema要求的无菌、热原性以及一般安全性和纯度标准。
[0625]
可用于这些药物组合物的药学上可接受的赋形剂包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白例如人血清白蛋白、缓冲物质如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物(partial glyceride mixture)、水、盐或电解质例如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶体二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素基物质(例如，羧甲基纤维素钠)、聚乙二醇、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯
‑
聚氧丙烯
‑
嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。
[0626]
在一个实施方案中，本发明所述的药物组合物包含对于能够注射给受试者的制剂而言药学上可接受的媒介物。这些尤其可以是等渗的、无菌的盐溶液(磷酸一钠或磷酸二钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙或氯化镁等或此类盐的混合物)，或干燥的，尤其是冷冻干燥的组合物，其取决于情况可添加无菌水或生理盐水以构成可注射溶液。
[0627]
本发明还涉及包含本发明所述的与cd31特异性竞争结合cd38的化合物或由其组成或基本上由其组成的药物。本发明进一步涉及本文公开的与cd31特异性竞争结合cd38的化合物用于制备或制造药物的用途。
[0628]
本发明还涉及预防和/或治疗有此需要的受试者中的疾病的方法，包括向所述受试者施用本发明所述的与cd31特异性竞争结合cd38的化合物、组合物、药物组合物或药物。
[0629]
本发明还涉及本发明所述的与cd31特异性竞争结合cd38的化合物、组合物、药物组合物或药物，其用作药物。本发明还涉及本发明所述的与cd31特异性竞争结合cd38的化合物、组合物、药物组合物或药物，其用于预防和/或治疗有此需要的受试者中的疾病。
[0630]
在一个实施方案中，疾病与受试者中可溶性cd38水平升高有关、归因于其或由其引起。具体地，可在血液样品(包括全血、血浆和血清，优选血浆样品)、脑脊液样品和/或肌肉活检中检测到可溶性cd38水平增加。
[0631]
在一个实施方案中，疾病选自包含以下或由以下组成的组：神经变性疾病；神经炎性疾病；炎性疾病；自身免疫疾病；代谢性疾病；眼部疾病；年龄相关疾病和衰老；以及癌症和转移。在一个实施方案中，疾病选自包含以下或由以下组成的组：神经变性疾病、神经炎性疾病、炎性疾病、自身免疫疾病及其组合。
[0632]
本公开还涵盖所述疾病的症状。
[0633]
神经变性疾病的示例包括但不限于：帕金森病及相关病症，包括帕金森病、帕金森痴呆(parkinson
‑
dementia)、常染色体隐性park2和park6相关帕金森病，非典型帕金森综合征，包括进行性核上性麻痹(progressive supranuclear palsy)、皮质基底节变性综合征(corticobasal degeneration syndrome)、路易体痴呆(lewy bodies dementia)、多系统萎缩(multiple system atrophy)、瓜德罗普帕金森病(guadeloupean parkinsonism)和lytigo
‑
bodig病；运动神经元疾病，包括肌萎缩侧索硬化、额颞叶痴呆、进行性延髓麻痹、假性延髓麻痹、原发性侧索硬化、进行性肌萎缩、脊髓性肌萎缩和脊髓灰质炎后综合征(post
‑
polio syndrome)；神经炎性疾病；阿尔茨海默病及相关病症，包括阿尔茨海默病的早期阶段、阿尔茨海默病的轻度阶段、阿尔茨海默病的中度阶段、阿尔茨海默病的轻度至中度阶段、阿尔茨海默病的晚期阶段、轻度认知障碍、血管性痴呆，混合性痴呆、皮克病(pick’s disease)、嗜银颗粒痴呆(argyrophilic grain disease)、后皮质萎缩(posterior cortical atrophy)、韦尼克
‑
科萨科夫综合征(wernicke
‑
korsakoff syndrome)；朊病毒病；溶酶体贮积病；脑白质营养不良(leukodystrophy)；亨廷顿病(huntington's disease)；多发性硬化；唐氏综合症(down syndrome)；脊髓和延髓肌肉萎缩；hiv相关神经认知障碍；妥瑞症(tourette syndrome)；常染色体显性脊髓小脑性共济失调；弗里德希共济失调(friedreich’s ataxia)；齿状红核苍白球萎缩(dentatorubral pallidoluysian atrophy)；强直性肌营养不良(myotonic dystrophy)；精神分裂症；年龄相关记忆障碍；自闭症和自闭症谱系障碍(autism spectrum disorder)；注意力缺陷多动障碍(attention
‑
deficit hyperactivity disorder)；慢性疼痛；酒精引起的痴呆；进行性非流畅性失语症(progressive non
‑
fluent aphasia)；语义性痴呆(semantic dementia)；痉挛性截瘫；纤维肌痛(fibromyalgia)；后莱姆病(post
‑
lyme disease)；神经病；戒断症状；阿尔珀斯病(alpers'disease)；脑
‑
眼
‑
面
‑
骨骼综合征(cerebro
‑
oculo
‑
facio
‑
skeletal syndrome)；威尔逊氏病(wilson’s disease)；科凯恩综合征(cockayne syndrome)；雷氏病(leigh’s disease)；伴有脑铁积累的神经变性(neurodegeneration with brain iron accumulation)；视阵挛肌阵挛综合征(opsoclonus myoclonus syndrome)；α
‑
甲基酰基辅酶a消旋酶缺乏(alpha
‑
methylacyl
‑
coa racemase deficiency)；安德曼综合征(andermann syndrome)；arts综合症(arts syndrome)；综合征( syndrome)；线粒体膜蛋白相关神经变性；泛酸激酶相关神经变性；伴有硬化性白质脑病的多囊性脂膜性骨发育不良(polycystic lipomembranous osteodysplasia with sclerosing leukoencephalopathy)；核黄素转运蛋白缺乏神经元病(riboflavin transporter deficiency neuronopathy)；和共济失调毛细血管扩张(ataxia telangiectasia)。
[0634]
在一个实施方案中，本发明涉及本发明所述的命名为“克隆b08”或“克隆d06”的抗cd38抗体或其抗原结合片段，其用于预防和/或治疗有此需要的受试者中的神经变性疾病。
[0635]
术语“神经炎性疾病”和“炎性脱髓鞘疾病(inflammatory demyelinating disease)”可以互换使用，是指大脑或脊髓的一个或多个区域有炎症的疾病。然而，这些术语并不完全等同，并且本领域技术人员将理解，神经炎性疾病不一定需要脱髓鞘
(demyelination)，尽管脱髓鞘通常在炎症后发展。
[0636]
神经炎性疾病的示例包括但不限于多发性硬化；急性播散性脑脊髓炎(acute disseminated encephalomyelitis)；视神经炎；横贯性脊髓炎(transverse myelitis)；视神经脊髓炎(neuromyelitis optica)等。在一些情况下，可将具有继发性神经炎症的原发性病况(例如，具有继发性神经炎症的创伤性脑损伤)视为神经炎性疾病，因为其与本主题公开有关。
[0637]
在一个实施方案中，本发明涉及本发明所述的命名为“克隆b08”的抗cd38抗体或其抗原结合片段，其用于预防和/或治疗有此需要的受试者中的神经炎性疾病。
[0638]
炎性疾病的示例包括但不限于关节炎(包括骨关节炎、类风湿性关节炎、脊椎关节病(spondyloarthropathy)和银屑病关节炎)；哮喘(包括变应性哮喘、非变应性哮喘、过敏性哮喘、运动引发的哮喘、药物引发的哮喘、职业性哮喘(occupational asthma)和晚期哮喘)；炎性肠疾病(包括克罗恩病(crohn’s disease)、溃疡性结肠炎和结肠炎)；炎性皮肤病(包括银屑病、变应性皮炎和接触性超敏反应)；多发性硬化；骨质疏松症；肌腱炎；过敏性病症(包括鼻炎、结膜炎和荨麻疹)；应答于对宿主的损害而引起的炎症(inflammation in response to an insult to the host)(包括受伤或感染)；移植排斥；移植物抗宿主病；败血症；和系统性红斑狼疮。
[0639]
在一个实施方案中，本发明涉及本发明所述的命名为“克隆b08”、“克隆c05”、“克隆d06”或“克隆d07”的抗cd38抗体或其抗原结合片段，其用于预防和/或治疗有此需要的受试者中的炎性疾病。
[0640]
自身免疫疾病的示例包括但不限于斑秃(alopecia areata)；强直性脊柱炎；关节炎；抗磷脂综合征；自身免疫性阿狄森氏病(autoimmune addison's disease)；自身免疫性溶血性贫血；自身免疫性内耳病(autoimmune inner ear disease)(也称为梅尼埃病(m
é
ni
è
re’s disease))；自身免疫性淋巴组织增生综合征；自身免疫性血小板减少性紫癜；自身免疫性溶血性贫血；自身免疫性肝炎；白塞氏病(bechet's disease)；克罗恩病；1型糖尿病(diabetes mellitus type 1)；肾小球肾炎；格雷夫斯病(graves’disease)；格林
‑
巴利综合征(guillain
‑
barr
é
syndrome)；炎性肠疾病；狼疮性肾炎；多发性硬化；重症肌无力(myasthenis gravis)；天疱疮(pemphigus)；恶性贫血(pernicous anemia)；结节性多动脉炎(polyarteritis nodosa)；多发性肌炎(polymyositis)；原发性胆汁性肝硬化；银屑病；雷诺现象(raynaud's phenomenon)；风湿热；类风湿性关节炎；硬皮病；干燥综合征(syndrome)；系统性红斑狼疮；溃疡性结肠炎；白癜风；和韦格纳氏肉芽肿病(wegener's granulamatosis)。
[0641]
在一个实施方案中，本发明涉及本发明所述的命名为“克隆b08”、“克隆c05”、“克隆d06”或“克隆d07”的抗cd38抗体或其抗原结合片段，其用于预防和/或治疗有此需要的受试者中的自身免疫疾病。
[0642]
代谢性疾病的示例包括但不限于糖尿病(例如1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病)；高血糖症；胰岛素抵抗；糖耐量受损(impaired glucose tolerance)；高胰岛素血症(hyperinsulinism)；糖尿病并发症；血脂异常(dyslipidemia)；高胆固醇血症(hypercholesterolemia)；高甘油三酯血症(hypertriglyceridemia)；hdl低胆固醇血症；ldl高胆固醇血症和/或hld非胆固醇血症(hld non
‑
cholesterolemia)；vldl高蛋白血症；
异常脂蛋白血症；载脂蛋白a
‑
1低蛋白血症；代谢综合征；x综合征(syndrome x)；肥胖；非酒精性脂肪肝(nafld)；非酒精性脂肪性肝炎；和肾上腺脑白质营养不良(adrenal leukodystrophy)。
[0643]
如本文所用，术语“癌症”意在涵盖原发性和继发性癌症，以及复发性、转移性和/或多重耐药性(multi
‑
drug resistant)癌症。
[0644]
癌症的示例包括但不限于乳腺癌；前列腺癌；肺癌；卵巢癌；结直肠癌；脑癌。癌症的其他非限制性示例包括胆管癌；膀胱癌；脑癌，包括胶质母细胞瘤和髓母细胞瘤；乳腺癌；宫颈癌；绒毛膜癌；结肠癌；子宫内膜癌；食道癌；胃癌；血液肿瘤，包括急性淋巴细胞性和骨髓性白血病；多发性骨髓瘤；艾滋病相关白血病和成人t细胞白血病淋巴瘤；上皮内瘤(intraepithelial neoplasm)，包括鲍温氏病(bowen's disease)和佩吉特氏病(paget's disease)；肝癌；肺癌；淋巴瘤，包括霍奇金病和淋巴细胞性淋巴瘤；神经母细胞瘤；口腔癌，包括鳞状细胞癌；卵巢癌，包括源自上皮细胞、基质细胞、生殖细胞和间充质细胞的那些；胰腺癌；前列腺癌；直肠癌；肉瘤，包括平滑肌肉瘤(leiomyosarcoma)、横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma)、脂肪肉瘤、纤维肉瘤和骨肉瘤；皮肤癌，包括黑色素瘤、卡波济氏肉瘤(kaposi's sarcoma)、基底细胞癌(basocellular cancer)和鳞状细胞癌；睾丸癌，包括生殖肿瘤，例如精原细胞瘤(seminoma)、非精原细胞瘤、畸胎瘤、绒毛膜癌；间质瘤和生殖细胞瘤；甲状腺癌，包括甲状腺腺癌和髓样癌；和肾癌，包括腺癌和维尔姆斯瘤(wilms'tumor)。癌症的其他示例包括淋巴瘤、肉瘤和癌，例如纤维肉瘤、粘液肉瘤(myxosarcoma)、脂肪肉瘤、软骨肉瘤(chondrosarcoma)、骨肉瘤、脊索瘤(chordoma)、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、淋巴管内皮肉瘤(lymphangioendotheliosarcoma)、尤文氏瘤(ewing's tumor)、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌(cystadenocarcinoma)、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝癌、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎癌、维尔姆斯瘤、宫颈癌、睾丸肿瘤、肺癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神经胶质瘤、星形细胞瘤、髓母细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、血管母细胞瘤、听神经瘤、少突胶质细胞瘤、脑膜瘤、黑色素瘤、神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤；白血病，例如急性淋巴细胞性白血病和急性髓细胞性白血病(成髓细胞性(myeloblastic)、早幼粒细胞性(promyelocytic)、髓单核细胞性(myelomonocytic)、单核细胞性和红白血病)；慢性白血病(慢性髓细胞性(粒细胞性)白血病和慢性淋巴细胞性白血病)；和真性红细胞增多(polycythemia vera)、淋巴瘤(霍奇金病和非霍奇金病)、多发性骨髓瘤、华氏巨球蛋白血症(waldenstrom's macroglobulinemia)和重链。
[0645]
眼部疾病的示例包括但不限于年龄相关性黄斑变性、青光眼、黄斑水肿、糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy)、葡萄膜炎、过敏性结膜炎、巩膜炎、角膜炎、角结膜炎、春季角结膜炎(vernal keratoconjunctivitis)、变应性角结膜炎、瘢痕性结膜炎(cicatrizing conjunctivitis)、睑缘炎(blepharitis)、内眼炎(enophthalmitis)、视网膜炎、视网膜病变、脉络膜炎、干燥综合征和视网膜坏死。
[0646]“衰老”，也称为“机体衰老(organismal aging)”，表现为年龄相关疾病，其发病率随着年龄的增长而增加。因衰老而死亡是指因年龄相关疾病而死亡。抑制或缓解衰老会延缓一种、一些或大多数年龄相关疾病。缓慢衰老表现为年龄相关疾病延缓。缓慢衰老被认为
是一种健康衰老。
[0647]
年龄相关疾病的示例包括但不限于良性肿瘤；心血管疾病，例如卒中、动脉粥样硬化和高血压；血管瘤；骨质疏松症；胰岛素抵抗和ii型糖尿病，包括糖尿病视网膜病变和神经病；阿尔茨海默病；帕金森病；年龄相关性黄斑变性；关节炎；脂溢性角化病；光化性角化病；光老化皮肤；皮肤斑点(skin spot)；皮肤癌；系统性红斑狼疮；银屑病；血管损伤后平滑肌细胞增殖和内膜增厚；炎症；关节炎；化疗的副作用；良性前列腺增生；以及较不常见的疾病，其中老年人中发病率高于年轻人。
[0648]
在一个实施方案中，疾病选自包含以下或由以下组成的组：肌萎缩侧索硬化；帕金森病及相关病症；阿尔茨海默病及相关病症；亨廷顿病；多发性硬化；类风湿性关节炎；系统性红斑狼疮；糖尿病；肥胖；非酒精性脂肪性肝炎；年龄相关性黄斑变性；和青光眼。在一个实施方案中，疾病选自包含以下或由以下组成的组：肌萎缩侧索硬化；帕金森病及相关病症；阿尔茨海默病及相关病症；和多发性硬化。在一些实施方案中，疾病是肌萎缩侧索硬化。在一些实施方案中，疾病是多发性硬化。在一些实施方案中，疾病是帕金森病及相关病症。在一些实施方案中，疾病是阿尔茨海默病及相关病症。
[0649]
在一个实施方案中，本发明所述的方法用于延缓机体衰老。
[0650]
在一个实施方案中，本发明所述的与cd31特异性竞争结合cd38的化合物、组合物、药物组合物或药物用于延缓机体衰老。
[0651]
本发明还涉及增加有此需要的受试者中，尤其是所述受试者的血液中的至少一种抗炎细胞因子水平的方法，包括向所述受试者施用本发明所述的与cd31特异性竞争结合cd38的化合物、组合物、药物组合物或药物。
[0652]
本发明还涉及本发明所述的与cd31特异性竞争结合cd38的化合物、组合物、药物组合物或药物，其用于增加有此需要的受试者中，尤其是所述受试者的血液中的至少一种抗炎细胞因子的水平。
[0653]
抗炎细胞因子的示例包括但不限于白介素
‑
10(il
‑
10)、转化生长因子β(transforming growth factorβ，tgf
‑
β)、白介素
‑
1ra(il
‑
1ra)、白介素
‑
4(il
‑
4)、白介素
‑
6(il
‑
6)、白介素
‑
11(il
‑
11)、白介素
‑
13(il
‑
13)和白介素
‑
22(il
‑
22)。
[0654]
测量受试者中血液细胞因子水平的方法是本领域已知的。此类方法包括，例如，使用elisa检测，例如以下实施例部分中描述的方法。
[0655]
具体地，本发明涉及一种增加有此需要的受试者中，尤其是所述受试者的血液中的il
‑
10水平的方法，包括向所述受试者施用本发明所述的与cd31特异性竞争结合cd38的化合物、组合物、药物组合物或药物。
[0656]
具体地，本发明涉及本发明所述的与cd31特异性竞争结合cd38的化合物、组合物、药物组合物或药物，其用于增加有此需要的受试者中，尤其是所述受试者的血液中的il
‑
10水平。
[0657]
测量来自受试者的血液样品中的il
‑
10水平的方法是本领域公知的，并且包括，例如，使用elisa检测。
[0658]
在一个实施方案中，本发明所述的与cd31特异性竞争结合cd38的化合物、组合物、药物组合物或药物引起受试者血液中il
‑
10水平的增加，与施用阴性对照分子相比增加至少100％、200％、300％，尤其是至少400％且更尤其是至少500％。
[0659]
在一个实施方案中，受试者是动物。在一个实施方案中，受试者是哺乳动物。
[0660]
哺乳动物的示例包括但不限于灵长类动物(包括人和非人)、牛(包括奶牛)、马、猪、绵羊、山羊、狗和猫。
[0661]
在一个优选的实施方案中，受试者是人。
[0662]
在一个实施方案中，受试者是成年人(例如，人类年龄大于18岁的受试者或获得生殖能力后的受试者)。在另一个实施方案中，受试者是儿童(例如，人类年龄小于18岁的受试者或尚未获得生殖能力的受试者)。
[0663]
在一个实施方案中，受试者是男性。在一个实施方案中，受试者是女性。
[0664]
在一个实施方案中，受试者正被/已被诊断患有选自包含以下或由以下组成的组的疾病：神经变性疾病；神经炎性疾病；炎性疾病；自身免疫疾病；代谢性疾病；眼部疾病；年龄相关疾病；以及癌症和转移。
[0665]
在一个实施方案中，受试者正被/已被诊断患有选自包含以下或由以下组成的组的疾病：肌萎缩侧索硬化；帕金森病及相关病症；阿尔茨海默病及相关病症；亨廷顿病；多发性硬化；类风湿性关节炎；系统性红斑狼疮；糖尿病；肥胖；非酒精性脂肪性肝炎；年龄相关黄斑变性；和青光眼。
[0666]
在一个实施方案中，受试者处于发展选自包含以下或由以下组成的组的疾病的风险中：神经变性疾病；神经炎性疾病；炎性疾病；自身免疫疾病；代谢性疾病；眼部疾病；年龄相关疾病；以及癌症和转移。
[0667]
在一个实施方案中，受试者处于发展选自包含以下或由以下组成的组的疾病的风险中：肌萎缩侧索硬化；帕金森病及相关病症；阿尔茨海默病及相关病症；亨廷顿病；多发性硬化；类风湿性关节炎；系统性红斑狼疮；糖尿病；肥胖；非酒精性脂肪性肝炎；年龄相关黄斑变性；和青光眼。
[0668]
在一个实施方案中，受试者正被/已被诊断为具有血浆可溶性cd38水平增加。
[0669]
在一个实施方案中，受试者正被/已被诊断为具有脑脊液可溶性cd38水平增加。
[0670]
在一个实施方案中，受试者在肌肉活检中正被/已被诊断为具有可溶性cd38水平增加。
[0671]
检测和测量可溶性cd38水平的方法是本领域技术人员公知的。具体地，用于检测和测量可溶性cd38水平的工具(means)和试剂盒是可商购的。
[0672]
在一个实施方案中，将配制本发明所述的化合物、组合物、药物组合物或药物以施用给受试者。
[0673]
在一个实施方案中，本发明所述的化合物、组合物、药物组合物或药物将全身或局部施用。
[0674]
在一个实施方案中，本发明所述的化合物、组合物、药物组合物或药物将通过注射、经口、局部、经鼻、经颊、经直肠、经阴道、气管内、通过内窥镜、经粘膜或通过经皮施用来施用。
[0675]
在一个实施方案中，本发明所述的化合物、组合物、药物组合物或药物将被注射，优选全身注射。
[0676]
适用于注射的制剂的示例包括但不限于溶液，例如无菌水溶液、凝胶、分散液、乳液、悬浮液、适用于在使用前加入液体以制备溶液或悬浮液的固体形式，例如粉末、脂质体
形式等。
[0677]
全身注射的示例包括但不限于静脉内(iv)、皮下、肌肉内(im)、皮内(id)、腹膜内(ip)、髓周注射和灌注(perfusion)。
[0678]
在一个实施方案中，当注射时，本发明所述的化合物、组合物、药物组合物或药物是无菌的。获得无菌组合物的方法包括但不限于gmp合成(其中gmp代表“良好生产规范(good manufacturing practice)”)。
[0679]
组合物的无菌可注射形式可以是水性或油性悬浮液。这些悬浮液可以根据本领域已知的技术使用合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂配制。无菌可注射制备物也可以是无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液。可以采用的可接受的媒介物和溶剂包括水、林格氏溶液(ringer's solution)和等渗氯化钠溶液。此外，无菌的不挥发油通常用作溶剂或悬浮介质。为此，可以使用任意温和的不挥发油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。脂肪酸，例如油酸及其甘油酯衍生物，可用于制备注射剂，其是天然药学上可接受的油，例如橄榄油或蓖麻油，尤其是它们的聚氧乙烯化形式。这些油溶液或悬浮液还可以含有长链醇稀释剂或分散剂，例如羧甲基纤维素或类似的分散剂，其通常用于药学上可接受的剂型(包括乳液和悬浮液)的制剂。其他常用的表面活性剂，例如tween、span和其他乳化剂或生物利用度增强剂，通常用于制备药学上可接受的固体、液体或其他剂型，也可以用于制剂目的。
[0680]
应当理解，本发明还考虑了其他合适的施用途径，且施用方式最终将由主治医师在合理的医学判断范围内决定。除了通过注射施用(iv、ip、im等)，其他途径也是可用的，例如雾化(respaud等,2014.mabs.6(5):1347
‑
55；guilleminault等,2014.j control release.196:344
‑
54；respaud等,2015.expert opin drug deliv.12(6):1027
‑
39)或皮下施用(jackisch等,2014.geburtshilfe frauenheilkd.74(4):343
‑
349；solal
‑
celigny,2015.expert rev hematol.8(2):147
‑
53)。
[0681]
在一个实施方案中，本发明所述的化合物、组合物、药物组合物或药物能够穿过血脑屏障(bbb)，优选当使用静脉内或皮下施用途径时。
[0682]
在静脉内注射时通过血脑屏障递送化合物、组合物、药物组合物或药物的方法是本领域已知的，尤其是当所述化合物是抗体时。事实上，一些出版物表明，静脉内注射单克隆抗体可以有效地穿过血脑屏障(bbb)。静脉内注射单克隆抗体脑浓度的药代动力学模型表明，在脑中发现了约0.4％的血浆mab浓度(shah&bets,2013.mabs.5(2):297
‑
305)。发现阿杜卡奴单抗(aducanumab)和abbv
‑
8e12的脑/血浆比例在人体内分别达到1.3％和0.385％(sevigny等2016.nature.537(7618):50
‑
6；west等,2017.j prev alz dis.4(4):236
‑
241)。此外，已经开发了多种策略来改善bbb穿透(bbb crossing)，包括使用靶向胰岛素受体或转铁蛋白受体的双特异性抗体(综述参见neves等,2016.trends biotech.34(1):36
‑
48)或使用超声诱导的bbb开放(bbb opening)，如描述在konofagou等,2012.curr pharm biotechnol.13(7):1332
‑
45中。
[0683]
在一个实施方案中，本发明所述的化合物、组合物、药物组合物或药物将以治疗有效量施用给有此需要的受试者。
[0684]
此类治疗量可由本领域技术人员通过常规试验确定，包括评估施用化合物、组合物、药物组合物或药物对寻求通过施用本发明所述的所述化合物、组合物、药物组合物或药
物来预防和/或治疗的疾病的作用。
[0685]
例如，可以通过分析施用不同量的所述本发明所述的上述化合物、组合物、药物组合物或药物对作为所述疾病的特征，尤其是来自受试者的生物样品中的一组标志物(生物学和/或临床)的定量和定性作用，来实施此类试验。
[0686]
然而，应当理解，本发明所述的化合物、组合物、药物组合物或药物的总日用量将由主治医师在合理的医学判断范围内决定。用于任何特定患者的特定治疗有效剂量水平将取决于多种因素，包括所治疗的疾病和疾病的严重程度；所使用的化合物、组合物、药物组合物或药物的活性；受试者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；所使用的化合物、组合物、药物组合物或药物的施用时间、施用途径和排泄率；治疗的持续时间；与所使用的化合物、组合物、药物组合物或药剂组合使用或同时使用的药物；以及医学领域公知的其他因素。例如，化合物的剂量以低于达到目标治疗效果所需的水平开始并逐渐增加剂量直至实现目标效果是本领域公知的。每次治疗所需的总剂量可以通过多剂量或单剂量来施用。
[0687]
在一个实施方案中，本发明所述的化合物、组合物、药物组合物或药物的治疗有效量范围为约0.1mg/kg至约50mg/kg、约0.5mg/kg至约45mg/kg、约1mg/kg至约40mg/kg、约2.5mg/kg至约35mg/kg、约5mg/kg至约30mg/kg、约10mg/kg至约20mg/kg。在一个实施方案中，本发明所述的化合物、组合物、药物组合物或药物的治疗有效量为约15mg/kg。
[0688]
在一个实施方案中，本发明所述的化合物、组合物、药物组合物或药物的治疗有效量范围为约10μg/kg至约4mg/kg(人等效剂量(human equivalent dose，hed))，约40μg/kg至约3.6mg/kg(hed)、约80μg/kg至约3.2mg/kg(hed)、约200μg/kg至约2.8mg/kg(hed)、约400μg/kg至约2.4mg/kg(hed)、约800μg/kg至约2mg/kg(hed)。在一个实施方案中，本发明所述的化合物、组合物、药物组合物或药物的治疗有效量为约1.2mg/kg(hed)。
[0689]
在一个实施方案中，治疗有效量的本发明所述的化合物、组合物、药物组合物或药物将每天施用一次、每天施用两次、每天施用三次或每天施用更多次。
[0690]
在一个实施方案中，治疗有效量的本发明所述的化合物、组合物、药物组合物或药物将每天施用、每两天施用、每三天施用、每四天施用、每五天施用、每六天施用。
[0691]
在一个实施方案中，治疗有效量的本发明所述的化合物、组合物、药物组合物或药物将每周施用、每两周施用、每三周施用。
[0692]
在一个实施方案中，治疗有效量的本发明所述的化合物、组合物、药物组合物或药物将每个月施用、每两个月施用、每三个月施用、每四个月施用、每五个月施用、每六个月施用。
[0693]
在一个优选的实施方案中，治疗有效量的本发明所述的化合物、组合物、药物组合物或药物将每12小时施用、每24小时施用、每36小时施用、每48小时施用、每60小时施用、每72小时施用、每96小时施用。
[0694]
在一个优选的实施方案中，治疗有效量的本发明所述的化合物、组合物、药物组合物或药物将每60小时施用。
[0695]
在一个实施方案中，本发明所述的化合物、组合物、药物组合物或药物用于急性施用。在一个实施方案中，本发明所述的化合物、组合物、药物组合物或药物用于长期施用。
[0696]
在一个实施方案中，治疗有效量的本发明所述的化合物、组合物、药物组合物或药物将施用约5天、7天、10天、14天、21天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、1年或更长时间。
[0697]
在一个实施方案中，本发明所述的化合物、组合物、药物组合物或药物在治疗性药物之前、同时或之后施用。
[0698]
适合与本发明所述的化合物、组合物、药物组合物或药物共同施用的治疗性药物的一些示例包括但不限于免疫抑制剂、细胞毒素、化疗剂、细胞因子、免疫刺激剂、裂解肽和放射性同位素。
[0699]
本领域技术人员将理解，本发明所述的化合物、组合物、药物组合物或药物与特定治疗性药物的共同施用将取决于要预防和/或治疗的疾病或病症，所述特定治疗性药物可选自本文所述的那些但不限于此。
[0700]
免疫抑制剂的示例包括但不限于mtor抑制剂，例如西罗莫司(sirolimus)、依维莫司(everolimus)、地磷莫司(ridaforolimus)、替西罗莫司(temsirolimus)、乌罗莫司(umirolimus)和佐他莫司(zotarolimus)；il
‑
1受体拮抗剂，例如阿那白滞素(anakinra)；抗代谢药，例如硫唑嘌呤(azathioprine)、来氟米特(leflunomide)、甲氨蝶呤(methotrexate)、霉酚酸和特立氟胺(teriflunomide)；imid，例如阿普司特(apremilast)、来那度胺(lenalidomide)、泊马度胺(pomalidomide)和沙利度胺(thalidomide)；和抗体，例如依库珠单抗(eculizumab)、阿达木单抗(adalimumab)、阿非莫单抗(afelimomab)、赛妥珠单抗(certolizumab pegol)、戈利木单抗(golimumab)、英夫利昔单抗(infliximab)、奈瑞莫单抗(nerelimomab)、美泊利单抗(mepolizumab)、奥马珠单抗(omalizumab)、法拉莫单抗(faralimomab)、伊司利莫单抗(elsilimomab)、来瑞组单抗(lebrikizumab)、乌司奴单抗(ustekinumab)、苏金单抗(secukinumab)、莫罗单抗
‑
cd3(muromonab
‑
cd3)、奥昔组单抗(otelixizumab)、替利组单抗(teplizumab)、维西珠单抗(visilizumab)、克立昔单抗(clenoliximab)、keliximab、扎木单抗(zanolimumab)、依法利珠单抗(efalizumab)、厄利珠单抗(erlizumab)、奥滨尤妥珠单抗(obinutuzumab)、利妥昔单抗(rituximab)、奥美珠单抗(ocrelizumab)、美泊珠单抗(pascolizumab)、戈利昔单抗(gomiliximab)、鲁昔单抗(lumiliximab)、替奈昔单抗(teneliximab)、toralizumab、阿塞珠单抗(aselizumab)、加利昔单抗(galiximab)、加维莫单抗(gavilimomab)、卢利珠单抗(ruplizumab)、贝利木单抗(belimumab)、blisibimod、伊匹单抗(ipilimumab)、替西木单抗(tremelimumab)、柏替木单抗(bertilimumab)、乐德木单抗(lerdelimumab)、美替木单抗(metelimumab)、那他珠单抗(natalizumab)、托珠单抗(tocilizumab)、奥度莫单抗(odulimomab)、巴利昔单抗(basiliximab)、达克珠单抗(daclizumab)、伊诺莫单抗(inolimomab)、阿佐莫单抗(zolimomab aritox)、阿托木单抗(atorolimumab)、西利珠单抗(cedelizumab)、芳妥珠单抗(fontolizumab)、马司莫单抗(maslimomab)、莫罗木单抗(morolimumab)、培克珠单抗(pexelizumab)、瑞利珠单抗(reslizumab)、罗维珠单抗(rovelizumab)、西利珠单抗(siplizumab)、他利珠单抗(talizumab)、阿替莫单抗(telimomab aritox)、伐利昔单抗(vapaliximab)、维帕莫单抗(vepalimomab)、阿巴西普(abatacept)、贝拉西普(belatacept)、依那西普(etanercept)、培那西普(pegsunercept)、阿柏西普(aflibercept)、阿法西普(alefacept)和利纳西普(rilonacept)。
[0701]
细胞毒素的示例包括但不限于放射性核素(例如
35
s、
14
c、
32
p、
125
i、
131
i、
90
y、
89
zr、
201
tl、
186
re、
188
re、
57
cu、
213
bi和
211
at)、共轭放射性核素和化疗剂。细胞毒素的进一步示例包括但不限于抗代谢药(例如5
‑
氟尿嘧啶(5
‑
fu)、甲氨蝶呤(mtx)、氟达拉滨(fludarabine)
等)、抗微管剂(例如长春新碱(vincristine)、长春碱(vinblastine)、秋水仙素(colchicine)、紫杉烷类(例如紫杉醇和多西紫杉醇(docetaxel))等)、烷化剂(例如环磷酰胺、美法仑(melphalan)、双氯乙基亚硝基脲(bischloroethylnitrosurea，bcnu)等)、铂类药物(如顺铂(也称为cddp)、卡铂(carboplatin)、奥沙利铂(oxaliplatin)、jm
‑
216、ci
‑
973等)、蒽环类(如多柔比星、柔红霉素等)、抗生素(如丝裂霉素c)、拓扑异构酶抑制剂(例如依托泊苷(etoposide)、替尼泊苷(tenoposide)和喜树碱(camptothecin))或其他细胞毒性剂，例如蓖麻毒素(ricin)、白喉毒素(diptheria toxin，dt)、假单胞菌外毒素(pseudomonas exotoxin，pe)a、pe40、相思豆毒素(abrin)、皂草素(saporin)、商陆病毒蛋白(pokeweed viral protein)、溴化乙锭、糖皮质激素(glucocorticoid)、炭疽毒素(anthrax toxin)及其他。
[0702]
化疗剂的示例包括但不限于铂配位化合物(platinum coordination compound)(例如顺铂、卡铂或奥沙利铂)；紫杉烷化合物(例如紫杉醇或多西紫杉醇)；拓扑异构酶i抑制剂(例如，伊立替康(irinotecan)或拓扑替康(topotecan))；拓扑异构酶ii抑制剂(例如依托泊苷或替尼泊苷)；长春花生物碱(例如长春碱、长春新碱或长春瑞滨)；抗肿瘤核苷衍生物(例如5
‑
氟尿嘧啶、吉西他滨(gemcitabine)或卡培他滨(capecitabine))；烷化剂(例如氮芥或亚硝基脲、环磷酰胺、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、卡莫司汀(carmustine)或洛莫司汀(lomustine)；抗肿瘤蒽环类衍生物(例如柔红霉素、多柔比星、伊达比星(idarubicin)或米托蒽醌(mitoxantrone))；抗her2抗体(例如曲妥珠单抗)；雌激素受体拮抗剂或选择性雌激素受体调节剂(例如他莫昔芬(tamoxifen)、托瑞米芬(toremifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、氟维司群(faslodex)或雷洛昔芬(raloxifene))；芳香酶抑制剂(例如依西美坦(exemestane)、阿那曲唑(anastrozole)、来曲唑(letrazole)或伏氯唑(vorozole))；分化剂(例如类视黄醇(retinoid)、维生素d和视黄酸代谢阻断剂[ramba]，例如维甲酸)；dna甲基转移酶抑制剂(例如氮杂胞苷)；激酶抑制剂(例如夫拉平度(flavoperidol)、甲磺酸伊马替尼(imatinib mesylate)或吉非替尼(gefitinib))；法尼基转移酶抑制剂(farnesyltransferase inhibitor)；和hdac抑制剂。
[0703]
细胞因子的示例包括但不限于趋化因子(例如ccl1、ccl2/mcp1、ccl3/mip1α、ccl4/mip1β、ccl5/rantes、ccl6、ccl7、ccl8、ccl9、ccl11、ccl12、ccl13、ccl14、ccl15、ccl16、ccl17、ccl18/parc/dcck1/amac1/mip4、ccl19、ccl20、ccl21、ccl22、ccl23、ccl24、ccl25、ccl26、ccl27、ccl28、cxcl1/kc、cxcl2、cxcl3、cxcl4、cxcl5、cxcl6、cxcl7、cxcl8/il8、cxcl9、cxcl10、cxcl11、cxcl12、cxcl13、cxcl14、cxcl15、cxcl16、cxcl17、cx3cl1、xcl1和xcl2)、肿瘤坏死因子(例如tnfa、淋巴毒素(lymphotoxin)、tnfsf4、tnfsf5/cd40lg、tnfsf6、tnfsf7、tnfsf8、tnfsf9、tnfsf10、tnfsf11、tnfsf13、tnfsf13b和eda)和白介素(例如il
‑
1α、il
‑
1β、il
‑
1ra、il
‑
2、il
‑
3、il
‑
4、il
‑
5、il
‑
6、il
‑
7、il
‑
9、il
‑
10、il
‑
11、il
‑
12、il
‑
13、il
‑
14、il
‑
15、il
‑
16、il
‑
17、il
‑
18、il
‑
19、il
‑
20、il
‑
21、il
‑
22、il
‑
23、il
‑
24、il
‑
25、il
‑
26、il
‑
27、il
‑
28、il
‑
29、il
‑
30、il
‑
31、il
‑
32、il
‑
33、il
‑
34、il
‑
35、il
‑
36α、il
‑
36β、il
‑
36γ、il
‑
36ra、il
‑
37、il
‑
38、ifnα、ifnβ、ifnκ、ifnω和gm
‑
csf)。
[0704]
免疫刺激剂的示例包括但不限于非格司亭(filgrastim)、聚乙二醇非格司亭(pegfilgrastim)、来格司亭(lenograstim)、莫拉司亭(molgramostim)、沙格司亭(sargramostim)、安西司亭(ancestim)、albinterferon、干扰素α、聚乙二醇干扰素α、干扰
素β、聚乙二醇干扰素β、干扰素γ、阿地白介素(aldesleukin)、奥普瑞白介素(oprelvekin)、生长激素、免疫花青(immunocyanin)、培加酶(pegademase)、催乳素(prolactin)、他索纳明(tasonermin)、组胺二盐酸盐(histamine dihydrochloride)、聚iclc(poly iclc)、维生素d、香菇多糖(lentinan)、普乐沙福(plerixafor)、罗喹美克(roquinimex)、米伐木肽(mifamurtide)、醋酸格拉替雷(glatiramer acetate)、胸腺五肽(thymopentin)、胸腺肽α1(thymosinα1)、胸腺九肽(thymulin)、聚肌苷:聚胞苷酸(polyinosinic:polycytidylic acid)、匹多莫德(pidotimod)、卡介苗(bacillus calmette
–
gu
é
rin vaccine)、黑色素瘤疫苗(melanoma vaccine)和sipuleucel
‑
t疫苗。
[0705]
裂解肽的示例包括但不限于毒素(例如白喉毒素或假单胞菌外毒素)。
[0706]
放射性同位素的示例包括但不限于以下的放射性核素：锝(例如tc
‑
99和tc
‑
97)、钾(例如k
‑
40)、铷(例如rb
‑
82)、碘(例如i
‑
123、i
‑
124、i
‑
125、i
‑
129、i
‑
131)、铯(例如cs
‑
135、cs
‑
137)、钴(例如co
‑
60)、钯(例如pd
‑
103、pd
‑
107)、镉(例如cd
‑
113)、锶(例如sr
‑
89、sr
‑
90)、铕(例如eu
‑
55)、锡(例如sn
‑
121、sn
‑
126)、磷(例如p
‑
32、p
‑
33)、铊(例如tl
‑
201)、铟(例如in
‑
111)、镓(例如ga
‑
67、ga
‑
68)、钇(例如y
‑
90)、铱(例如ir
‑
192)、铋(例如bi
‑
213)、镭(例如ra
‑
223、ra
‑
225)和钌(例如ru
‑
106)。
[0707]
本发明还涉及制备本发明所述的化合物的方法，其包括选择与cd31特异性竞争的化合物的步骤，如上文详述。
[0708]
在化合物是抗体、其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物的一个实施方案中，所述方法包括以下或由以下组成：选择对cd38的k
d
值低于或等于10
‑7m，优选低于或等于10
‑8m，更优选低于或等于10
‑9m，甚至更优选低于或等于1.10
‑
10
m的抗体、其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物，可通过生物传感器分析，尤其是通过biacore分析来确定。
[0709]
在化合物是有机小分子的一个实施方案中，所述方法包括以下或由以下组成：选择以低于或等于10
‑6m，优选低于或等于10
‑7m，更优选低于或等于1.10
‑8m的对cd38的k
d
值取代cd31结合的有机小分子，可通过生物传感器分析，尤其是通过biacore分析来确定。
[0710]
在其中化合物是寡核苷酸的一个实施方案中，所述方法包括以下或由以下组成：选择以低于或等于200nm，优选低于或等于150nm，更优选低于或等于100nm的对cd38的k
d
值取代cd31结合的寡核苷酸，可通过生物传感器分析，尤其是通过biacore分析来确定。
[0711]
如上所述，化合物与cd31竞争的能力可以通过facs或biacore分析来检测。
[0712]
在化合物是抗体、其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物的一个实施方案中，制备本发明所述的化合物的方法可进一步包括选择与cd38内的至少一个表位特异性结合的抗体、其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物的步骤，如上文所定义。
[0713]
优选地，选择与cd38内的至少一个表位特异性结合的抗体、其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物的步骤包括选择与以下特异性结合的抗体、其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物：
[0714]
‑
至少一个表位，其至少延伸跨越具有seq id no:2的人cd38的氨基酸残基220至氨基酸残基285；和/或
[0715]
‑
具有seq id no:2的人cd38的半胱氨酸254和/或275；和/或
[0716]
‑
包含具有seq id no:2的人cd38的半胱氨酸254和半胱氨酸275的第5个c末端二硫环。
[0717]
在化合物是抗体、其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物的一个实施方案中，制备本发明所述的化合物的方法可进一步包括选择不介导、触发或增强adcc、adcp和/或cdc的抗体、其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物的步骤。
[0718]
在一个实施方案中，所述方法包括选择具有至少一种、优选至少两种、更优选三种以下特性的化合物，或由其组成：
[0719]
‑
它保护多巴胺能神经元免受由于线粒体复合物i抑制引起的能量缺乏，尤其是线粒体神经毒素mpp

；
[0720]
‑
它使用人外周血单核细胞(pbmc)增加抗炎细胞因子白介素
‑
10(il
‑
10)的体外释放；和/或
[0721]
‑
当注射至小鼠中时，它增加体内il
‑
10水平。
[0722]
在一个实施方案中，所述方法包括选择与cd31、优选与人cd31竞争并诱导酪氨酸磷酸化的化合物，或由其组成。具体地，所述方法包括选择诱导在染料木黄酮存在下被抑制的离散细胞质基质的酪氨酸磷酸化的化合物，或由其组成。
[0723]
在一个实施方案中，所述方法包括选择与cd31、优选与人cd31竞争并触发cd38内化的化合物，或由其组成。
[0724]
在一个实施方案中，所述方法包括选择与cd31、优选与人cd31竞争并诱导溶酶体胞吐的化合物，或由其组成。具体地，所述方法包括选择诱导在vacuolin
‑
1存在下受到抑制的溶酶体胞吐的化合物，或由其组成。
[0725]
在一个方面，本发明还涉及鉴定需要针对选自包含以下或由以下组成的组的疾病的治疗的个体的方法：神经变性疾病、神经炎性疾病、炎性疾病、自身免疫疾病、代谢疾病、眼部疾病、年龄相关疾病和衰老，以及癌症和转移，所述个体易于响应有效量的本发明所述的化合物，尤其是本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段，所述方法包括测量cd38水平。
[0726]
本发明进一步涉及测量cd38水平在需要针对选自包含神经变性疾病、神经炎性疾病、炎性疾病、自身免疫疾病、代谢疾病、眼部疾病、年龄相关疾病和衰老，以及癌症和转移或由其组成的组中的疾病的治疗的个体中作为生物标志物的用途，尤其是确定所述个体是否易感于有效量的本发明所述的化合物，尤其是有效量的本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段。
[0727]
在一个实施方案中，cd38水平是血浆cd38水平。在一个实施方案中，cd38水平是脑脊液cd38水平。测量cd38水平的方法在现有技术中是公知的，并且可以包括使用适合的抗cd38抗体的elisa测定。用于elisa的合适抗体可以从例如r&d购买。
[0728]
在一些实施方案中，所述方法进一步包括将在所述个体中测量的cd38水平与参考值进行比较的步骤。在一个实施方案中，参考值可以代表一个健康个体或一组健康个体的cd38水平。如本文所用，“健康个体”是指没有任何上述疾病的个体。在一个实施方案中，在所述个体中测得的cd38水平与参考值相比在统计学上显著增加可以表明所述个体在疾病治疗中易于响应本发明所述的抗cd38抗体或其抗原结合片段。
[0729]
附图简要说明
[0730]
图1的图显示了scd31针对mpp

诱导的多巴胺能(da)细胞死亡的神经保护作用。在暴露或不暴露于scd31(0.01、0.03、0.1、0.3、1μg/ml)的5至7个div之间用mpp

(3μm)处理的
中脑培养物中的da(th

)细胞存活率。结果表示为相应对照培养物的百分比。$p<0.05与对照处理相比的单向anova；#p<0.05与mpp

处理相比的单向anova。
[0731]
图2的条形图显示了scd31针对mpp

诱导的da细胞死亡的神经保护作用。在抗cd31抗体克隆moon
‑
1(1μg/ml)、拮抗性抗cd38抗体克隆okt10(okt，1μg/ml)或拮抗性抗cd38抗体克隆at13/5(1μg/ml)存在或不存在下，在暴露或不暴露于scd31(1μg/ml)的5至7个div之间用mpp

(3μm)处理的中脑培养物中的da(th

)细胞存活率。结果表示为相应对照培养物的百分比。$p<0.05与对照处理相比的单向anova；#p<0.05与mpp

处理相比的单向anova。
[0732]
图3的条形图显示了激动性抗cd38抗体克隆hb7针对mpp

诱导的da细胞死亡的神经保护作用。在拮抗性抗体克隆okt10(okt，1μg/ml)或拮抗性抗cd38抗体克隆at13/5(1μg/ml)存在或不存在下，在暴露或不暴露于激动性抗cd38抗体(克隆hb7，1μg/ml)的5至7个div之间用mpp

(3μm)处理的中脑培养物中的da(th

)细胞存活率。结果表示为相应对照培养物的百分比。$p<0.05与对照处理相比的单向anova；#p<0.05与mpp

处理相比的单向anova。
[0733]
图4的条形图显示了在酪氨酸激酶抑制剂染料木黄酮存在或不存在下，scd31或激动性抗cd38抗体克隆hb7针对mpp

诱导的da细胞死亡的神经保护作用。在酪氨酸激酶抑制剂染料木黄酮(geni，10nm)存在或不存在下，暴露或不暴露于scd31(1μg/ml)或激动性抗cd38抗体(克隆hb7，1μg/ml)的5至7个div之间用mpp

(3μm)处理的中脑培养物中的da(th

)细胞存活率。结果表示为相应对照培养物的百分比。$p<0.05与对照处理相比的单向anova；#p<0.05与mpp

处理相比的单向anova。
[0734]
图5的条形图显示了在溶酶体胞吐抑制剂vacuolin
‑
1或endosidin2存在或不存在下，scd31或激动性抗cd38抗体克隆hb7针对mpp

诱导的da细胞死亡的神经保护作用。在两种溶酶体成熟和胞吐抑制剂vacuolin
‑
1(vac，10μm)或endosidin2(40μm)存在或不存在下，暴露或不暴露于scd31(1μg/ml)或激动性抗cd38抗体(克隆hb7，1μg/ml)的5至7个div之间用mpp

(3μm)处理的中脑培养物中的da(th

)细胞存活率。结果表示为相应对照培养物的百分比。$p<0.05与对照处理相比的单向anova；#p<0.05与mpp

处理相比的单向anova。
[0735]
图6的条形图显示了在体内mptp小鼠模型中，静脉内注射的激动性抗cd38hb7抗体(15mg/kg iv，mptp注射前两天)对黑质致密部(substantia nigra pars compacta)中da(th

)神经元数量的影响。结果表示为对照(注射pbs)小鼠的百分比。pbs组：n＝5；mptp组：n＝6；mptp hb7 15mg/kg iv组：n＝8。$p<0.05与对照处理相比的单向anova。#p<0.05与mpp

处理相比的单向anova。
[0736]
图7的条形图显示了静脉内注射激动性抗cd38克隆hb7对小鼠中il
‑
10水平的影响。$p<0.05与对照(注射pbs)组相比的单向anova。
[0737]
图8的图描述了用于鉴定与cd31竞争的抗cd38抗体的过程。
[0738]
图9的条形图显示了新的人源化抗cd38抗体(克隆a02、b06、b08、b09、c05、c06、c08、d03、d04、d06、d07、d10、e03、e05、e08、f07)(通过噬菌体展示鉴定的)或抗cd38抗体克隆hb7针对mpp

诱导的da细胞死亡的神经保护作用。在暴露或不暴露于抗cd38抗体(克隆a02、b06、b08、b09、c05、c06、c08、d03、d04、d06、d07、d10、e03、e05、e08、f07；0.5μg/ml)或抗cd38抗体克隆hb7(0.5μg/ml)的5至7个div之间用mpp

(3μm)处理的中脑培养物中的da(th

)细胞存活率。结果表示为相应对照培养物的百分比。#p<0.05与mpp

处理相比的单向anova。
[0739]
图10的条形图显示了在溶酶体胞吐抑制剂vacuolin
‑
1存在或不存在下，通过噬菌
体展示鉴定的新的人源化抗cd38抗体(克隆b08、c05、c06、d06和d07)针对mpp

诱导的da细胞死亡的神经保护作用。在溶酶体胞吐抑制剂vacuolin
‑
1(vac，10μm)存在或不存在下，暴露或不暴露于抗cd38抗体(克隆b08、c05、c06、c08、d06和d07；1μg/ml)的5至7个div之间用mpp

(3μm)处理的中脑培养物中的da(th

)细胞存活率。结果表示为相应对照培养物的百分比。$p<0.05与对照处理相比的单向anova；#p<0.05与mpp

处理相比的单向anova。
[0740]
图11的条形图显示了在体内6
‑
ohda小鼠模型中脑内注射(0.1mg/kg icv，与6
‑
ohda icv注射同时进行)抗cd38抗体(克隆hb7、b08或d06)对黑质致密部中da(th

)神经元数量的影响。结果表示为对侧(非病变)的百分比。pbs组：n＝8(pbs)；6
‑
ohda pbs组：n＝8(pbs)；6
‑
ohda hb7 0.1mg/kg icv组：n＝10(hb7icv 0.1mg/kg)；6
‑
ohda b08 0.1mg/kg icv组：n＝7(b8icv 0.1mg/kg)；6
‑
ohda d06 0.1mg/kg icv组：n＝7(d6icv 0.1mg/kg)。$p<0.05与对照(注射pbs)组相比的单向anova。#p<0.05与6
‑
ohda组相比的单向anova。
[0741]
图12的条形图显示了在体内6
‑
ohda小鼠模型中静脉内注射(15mg/kg iv，6
‑
ohdaicv注射前一天)抗cd38抗体(克隆b08或达雷木单抗(daratumumab)，dara)对黑质致密部中da(th

)神经元数量的影响。结果表示为对侧(非病变)的百分比。pbs组：n＝8(pbs)；6
‑
ohda组：n＝8(pbs)；6
‑
ohda b08 15mg/kg iv组：n＝10(b8iv 15mg/kg)；6
‑
ohda 达雷木单抗15mg/kg iv组：n＝10(dara iv 15mg/kg)。$p<0.05与对照(注射pbs)组相比的单向anova。#p<0.05与6
‑
ohda组相比的单向anova。
[0742]
图13的条形图显示了在体内6
‑
ohda小鼠模型中静脉内注射(15mg/kg iv，6
‑
ohda icv注射后两天)b08抗cd38抗体对黑质致密部中da(th

)神经元数量的影响。结果表示为对侧(非病变)的百分比。pbs组：n＝12(pbs)；6
‑
ohda pbs组：n＝12(pbs)；6
‑
ohda b08 15mg/kg iv组：n＝12(b8iv 15mg/kg)。$p<0.05与对照(注射pbs)组相比的单向anova。#p<0.05与6
‑
ohda组相比的单向anova。
[0743]
图14的条形图显示了使用来自3个健康供体的人外周血单核细胞、抗cd38抗体(克隆hb7、b08、c05、d06或d07)对抗炎细胞因子il
‑
10释放的影响(合并结果)。$p<0.05与对照(pbs处理)组相比的单向anova。
[0744]
图15a
‑
b是一组示意图和曲线图。(a)的示意图代表实验方案(protocol)。(b)的条形图显示了在体内eae小鼠模型中静脉内注射(15mg/kg iv，mog注射后10天和20天)抗cd38抗体(克隆b08)对临床评分的影响。pbs组：n＝10(pbs)；b08 15mg/kg iv组：n＝10(b8 15mg/kg iv)。*p<0.05与pbs组相比的双向anova。**p<0.01与pbs组相比的双向anova。如实施例9第2.4b节中所述地计算临床评分)。
[0745]
图16a
‑
b是一组示意图和曲线图。(a)的示意图代表实验方案。(b)的条形图显示了在体内dss小鼠模型中静脉内注射(15mg/kg iv，在d0注射)抗cd38抗体(克隆b08或达雷木单抗，dara)对结肠长度的影响。无dss组：n＝5(pbs；白条)；dss pbs组：n＝6(pbs；黑条)；dss dara 15mg/kg iv组：n＝7(dara iv 15mg/kg；黑条)；dss b08 15mg/kg iv组：n＝6(b8iv 15mg/kg；黑条)。$p<0.05与无dss组相比的单向anova。#p<0.05与dss组相比的单向anova。
[0746]
图17的条形图显示了人类健康对照(hc)或肌萎缩侧索硬化(als)患者中的血浆cd38水平。hc组：n＝46；als组：n＝40。***p<0.001，与hc组相比的t检验。
[0747]
实施例
[0748]
在以下实施例中进一步说明本发明，但本发明的技术范围不限于这些实施例。
[0749]
实施例1：scd31对中脑多巴胺能神经元的体外神经保护作用通过与cd38的相互作用而被介导
[0750]
针对线粒体神经毒素mpp

的保护
[0751]
我们在此报告，在da细胞死亡是由da神经毒素1
‑
甲基
‑4‑
苯基
‑
1,2,3,6
‑
四氢吡啶(1
‑
methyl
‑4‑
phenyl
‑
1,2,3,6
‑
tetrahydropyridine，mptp)的活性代谢物1
‑
甲基
‑4‑
苯基吡啶(1
‑
methyl
‑4‑
phenylpyridinium，mpp

)引起的线粒体中毒导致的情况下，scd31具有神经保护作用。
[0752]
为此，通过结合去极化浓度的k

(30mm)和mk801(5μm)(一种用于防止不想要的兴奋性毒性损伤的谷氨酸受体拮抗剂)的治疗来防止自发发生的da细胞死亡。然后在体外天数(div)5至7天将培养物暴露在3μm mpp

下以达到约50％的da神经元损失。当培养物在中毒期间暴露于鼠类scd31(具有seq id no：3)时，此化合物(图1)以36ng/ml的ec
50
防止了mpp

诱导的da细胞损失。
[0753]
值得注意的是，这些作用是真实且直接的神经保护作用，而并不归因于位于免疫细胞上的cd38的可能干扰(如hara
‑
yokoyama等,2008.int immunopharmacol.8(1):59
‑
70中所述)，因为在这个体外细胞培养环境中没有外周免疫细胞。
[0754]
scd31的神经保护作用在抗cd31抗体克隆moon
‑
1或拮抗性抗cd38抗体(克隆okt
‑
10或at13/5)存在下受到拮抗
[0755]
已知cd31与以下3种配体相互作用：cd31本身、cd38和αvβ3整联蛋白(kalinowska&losy,2006.eur j neurol.13(12):1284
‑
90)。然而，cd31在神经元细胞中不表达(williams等,1996.j neurosci res.45(6):747
‑
57)。先前已显示cd31与cd38的相互作用在抗cd31抗体克隆moon
‑
1或拮抗性抗cd38抗体存在下受到拮抗(deaglio等,1996.j immunol.156(2):727
‑
34；deaglio等,1998.j immunol.160(1):395
‑
402)。
[0756]
为了测试scd31的神经保护作用是否通过cd38介导，我们在先前描述的mpp

体外模型中研究了，在抗cd31抗体克隆moon
‑
1(1μg/ml)或拮抗性抗cd38抗体(克隆okt10或at13/5，1μg/ml)存在或不存在下scd31(1μg/ml)的神经保护作用。。
[0757]
我们观察到scd31的神经保护作用在抗cd31抗体克隆moon
‑
1或拮抗性抗cd38抗体克隆okt10或at13/5存在下受到拮抗，因此意味着scd31的神经保护作用通过与cd38的相互作用来介导(图2)。
[0758]
scd31的神经保护作用通过激动性抗cd38抗体(克隆hb7)而再现激动性抗cd38抗体是再现cd31与cd38结合的生物学效应的化合物(deaglio等,1998.j immunol.160(1):395
‑
402)。因此，与scd31一样，激动性抗cd38抗体也应该具有神经保护作用。
[0759]
我们观察到在mpp

体外模型中，激动性抗cd38抗体(克隆hb7，1μg/ml)能够保护da神经元，并且这种神经保护作用在拮抗性抗cd38抗体(克隆okt10或at13/5，1μg/ml)存在下受到拮抗(图3)。
[0760]
scd31或激动性抗cd38抗体的神经保护作用需要酪氨酸激酶的酪氨酸磷酸化/激活
[0761]
如上文所述，cd38是一种多功能分子，包括受体介导的功能(通过内化)、酪氨酸磷酸化介导的功能和酶介导的功能。先前的研究表明，激动性(克隆hb7)或拮抗性(克隆okt10
或at13/5)抗cd38抗体无法在体外调节cd38酶活性(deckert等,2014.clin cancer res.20(17):4574
‑
83)。因此，我们想通过使用酪氨酸激酶抑制剂染料木黄酮来确定scd31或激动性抗cd38抗体是否需要酪氨酸磷酸化来介导其神经保护作用。
[0762]
我们观察到，在mpp

体外模型中，scd31(1μg/ml)或激动性抗cd38抗体(克隆hb7，1μg/ml)的神经保护作用在酪氨酸激酶抑制剂染料木黄酮(geni，10nm)存在下受到拮抗，表明酪氨酸磷酸化是保护da神经元所必需的(图4)。
[0763]
scd31或激动性抗cd38抗体的神经保护作用通过溶酶体胞吐介导
[0764]
人们可能认为，scd31和激动性抗cd38抗体均可以通过作用于cd38水平但通过不同的作用机制来保护多巴胺能神经元。排除这种可能性，我们观察到(图5)在mpp

体外模型中，scd31(1μg/ml)或激动性抗cd38抗体(克隆hb7，1μg/ml)的神经保护作用在溶酶体成熟抑制剂和ca
2
依赖性溶酶体胞吐抑制剂vacuolin
‑
1和endosidin2存在下均受到拮抗。
[0765]
激动性抗cd38抗体(克隆hb7)在体内具有神经保护作用
[0766]
为了确定激动性抗cd38抗体(克隆hb7)在体内是否也具有神经保护作用，我们静脉内注射了15mg/kg剂量的这种抗体到小鼠模型中，其中黑质致密部的多巴胺能神经元在重复的腹膜内注射mptp后变性。mptp具有穿过血脑屏障的能力，并通过星形胶质细胞转化为mpp

。mpp

是线粒体复合物i的抑制剂，其优先通过多巴胺转运蛋白在多巴胺能神经元中转运，导致多巴胺能群体的特定细胞死亡。这个模型已被广泛用作评估神经保护和神经修复策略的测试系统(dauer&przedborski,2003.neuron.39(6):889
‑
909)。
[0767]
我们观察到，静脉内注射15mg/kg剂量的激动性抗cd38抗体(克隆hb7)强烈保护黑质致密部的多巴胺能神经元免受mptp诱导的神经变性(图6)。
[0768]
结论
[0769]
总之，本实施例中提供的数据显示，scd31在体外具有神经保护作用，其通过与cd38的相互作用来介导。此作用在抗cd31抗体或拮抗性抗cd38抗体存在下受到拮抗。
[0770]
此外，已经证明了模拟scd31与cd38结合的激动性抗cd38抗体也能够诱导神经保护作用，所述作用在拮抗性抗cd38抗体存在下受到拮抗。
[0771]
无论神经保护作用是由scd31诱导还是由激动性抗cd38抗体诱导，已显示酪氨酸激酶的酪氨酸磷酸化/激活是诱导所述神经保护作用所必需的。此外，已显示所产生的神经保护作用归因于溶酶体成熟和ca
2
依赖性溶酶体胞吐。
[0772]
最后，在广泛使用的mptp小鼠模型中使用静脉内施用途径显示了激动性抗cd38抗体在体内具有神经保护作用，从而证明了激动性抗cd38抗体能够穿过bbb并与其靶标接合(engage)。
[0773]
因此，这些数据表明了scd31和激动性抗cd38抗体在神经变性疾病和神经炎性疾病治疗中的治疗作用。
[0774]
实施例2：scd31或激动性抗cd38抗体(克隆hb7)对il
‑
10水平的体内影响
[0775]
激动性抗cd38抗体(克隆hb7)在体内增加il
‑
10
[0776]
为了检测在体内是否也观察到激动性抗cd38抗体的抗炎特性，我们向小鼠静脉内注射抗cd38抗体克隆hb7(15mg/kg)。
[0777]
注射后八天，我们观察到il
‑
10水平增加了6倍(图7)。
[0778]
结论
[0779]
总之，本实施例中提供的数据显示，scd31和激动性抗cd38抗体在体内均诱导il
‑
10的强烈释放，表明其在免疫调控和抗炎症中的作用。事实上，众所周知，il
‑
10使巨噬细胞上t
h
1细胞因子、mhc ii类抗原和共刺激分子的表达下调；增强b细胞存活、增殖和抗体产生；阻断nf
‑
κb活性；并调控jak
‑
stat信号通路。
[0780]
此外，还显示了il
‑
10在治疗癌症中有效，尤其是通过抑制肿瘤转移(sun等,2000.j immunother.23(2):208
‑
14)。il
‑
10转基因小鼠中的转染的肿瘤细胞系的il
‑
10表达(groux等,1999.j immunol.162(3):1723
‑
9)或il
‑
10的给药导致原发性肿瘤生长受到控制和转移负荷减少(fujii等,2001.blood.98(7):2143
‑
51；berman等,1996.j immunol.157(1):231
‑
8)。
[0781]
因此，这些数据表明了scd31和激动性抗cd38抗体在炎性疾病和癌症治疗中的治疗作用。
[0782]
实施例3：通过噬菌体展示鉴定与cd31竞争的激动性抗cd38抗体
[0783]
为了生成再现cd31对cd38的生物学效应的新的人源化抗体，我们使用了含有15亿个序列的scfv噬菌体展示文库(philibert等,2007.bmc biotechnol.7:81)。
[0784]
进行第一轮选择以鉴定结合人cd38细胞外结构域的scfv(图8)。在95个所选scfv中，通过facs确认其中有52个与cd38

jurkat t细胞结合。对这52个经过验证的结合物(binder)进行测序，从而鉴定出16个结合cd38的非冗余scfv(non
‑
redundant scfv)。将这些结合物克隆并在cho细胞中产生相应igg。
[0785]
然后对16种非冗余igg(克隆a02、b06、b08、b09、c05、c06、c08、d03、d04、d06、d07、d10、e03、e05、e08、f07)进行了以下检测：首先在mpp

体外模型(每个克隆为0.5μg/ml)中，然后通过biacore进行了一组所选抗体与cd31的人细胞外结构域的竞争测定。
[0786]
在mpp

体外模型中，发现多个人源化抗cd38抗体克隆具有神经保护作用(图9)。具体地，4个克隆(b08、c05、d06和d10)显示出比参考激动性抗cd38抗体克隆hb7(0.5μg/ml)更强的神经保护作用。
[0787]
克隆b08、c05、c06、d06和d07的神经保护作用在溶酶体胞吐抑制剂vacuolin
‑
1(vac，10μm)存在下受到拮抗，表明这些抗体再现了scd31的生物学效应(图10)。
[0788]
实施例4：b08和c06抗cd38抗体在体内神经变性模型中的神经保护特性
[0789]
我们旨在确定b08或d06抗cd38抗体是否在体内针对氧化应激诱导的神经变性具有神经保护作用。向小鼠的右侧纹状体(striatum)施用6
‑
羟基多巴胺(6
‑
ohda)。由于6
‑
ohda是多巴胺类似物，其通过多巴胺转运蛋白在多巴胺能神经元中转运，导致右侧黑质致密部的特异性变性和多巴胺能神经元损失。它已被广泛用作新的症状药剂(symptomatic agent)以及用于评估神经保护和神经修复策略(galindo等,2014.kostrzewa(编),handbook of neurotoxicity(第1版,639
‑
651页).new york:springer
‑
verlag中)的测试系统。由于6
‑
ohda单侧注射在右侧纹状体中，左侧纹状体不受影响且每只小鼠都是其自身的对照。
[0790]
向小鼠脑内注射0.1mg/kg的hb7、b08和d06抗cd38抗体。我们观察到，以0.1mg/kg的浓度与6
‑
ohda同时脑内(icv)注射时，b08和d06抗cd38抗体在统计学上显著保护了右侧黑质致密部的多巴胺能神经元(图11)。我们还观察到，hb7抗cd38抗体无法在统计学上显著保护多巴胺能神经元。
[0791]
有趣的是，关于b08抗cd38抗体，在6
‑
ohda icv注射前一天静脉内注射(iv，15mg/kg)时，也观察到了这种神经保护作用(图12)。可注意到，抗cd38抗体达雷木单抗(dara，15mg/kg iv)无法证明神经保护活性。
[0792]
为了了解b08抗cd38抗体在神经变性过程进行时是否也能保护神经元，我们在6
‑
ohdaicv注射后两天注射了b08抗cd38抗体(以15mg/kg iv)。即使在变性开始后，我们仍然观察到强的b08抗cd38抗体神经保护活性(图13)。这证明了b08抗cd38抗体强大的神经保护作用。
[0793]
得出结论，证明了b08和d06抗cd38抗体的神经保护作用比用hb7抗cd38抗体获得的神经保护作用的功效更好。可注意到，当在神经变性过程进行时静脉内注射所述化合物时，仍然观察到这种神经保护作用。
[0794]
实施例5：b08、c05、d06和d07抗cd38抗体的体外抗炎特性
[0795]
为了确定激动性抗cd38抗体(克隆b08、c05、d06和d07)是否具有抗炎特性，我们使用来自3个健康供体的人外周血单核细胞(pbmc)在体外评估了它们对抗炎细胞因子il
‑
10释放的影响。我们观察到抗cd38抗体(克隆b08、c05、d06和d07)均在统计学上显著增加了il
‑
10释放，从而证明了抗炎特性(图14)。重要的是，在这个测定中，hb7未能在统计学上显著增加人pbmc培养物中的il
‑
10释放，表明b08、c05、d06和d07抗cd38抗体比hb7抗cd38抗体具有更高的抗炎作用。
[0796]
得出结论，以克隆b08、c05、d06和d07为代表的激动性抗cd38抗体在体外增加了pbmc的il
‑
10释放。此外，由于il
‑
10参与炎症的一般机制并已在许多自身免疫疾病中得到报道，以克隆b08、c05、d06和d07为代表的激动性抗cd38抗体为治疗和/或预防炎性疾病和/或自身免疫疾病提供了一种新的治疗策略。
[0797]
实施例6：b08抗cd38抗体在多发性硬化(ms，一种自身免疫性神经炎性疾病)的实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis，eae)小鼠模型中的神经保护作用
[0798]
多发性硬化(ms)是人类中枢神经系统(cns)的进行性炎性和脱髓鞘疾病，其中怀疑免疫系统在此疾病的发病机制中起重要作用(lassmann,2008.j neurol sci.274(1
‑
2):45
‑
7)。eae是一种在小鼠中诱导的疾病，其影响中枢神经系统并构成人类ms的模型。在皮下注射含有完全弗氏佐剂(complete freund’s adjuvant，cfa)与少突胶质细胞膜蛋白如髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(myelin oligodendrocyte glycoprotein，mog)混合的乳液后，免疫反应从外周开始，并在2周内引起cns中的炎症。同时，我们能观察到进行性上行性麻痹(progressive ascending paralysis)(从尾到后肢到前肢)。为了确定b08抗cd38抗体在此疾病中是否具有有益作用，我们注射了这种抗体(15mg/kg，在症状出现时(注射mog后10天)和第20天)。我们观察到，b08抗cd38抗体与注射pbs的小鼠相比显著降低了临床评分(图15)。
[0799]
得出结论，在症状发作时静脉内注射激动性抗cd38抗体(克隆b08)改善了自身免疫性神经炎性疾病ms的eae小鼠模型中的临床评分。
[0800]
实施例7：b08激动性抗cd38抗体在葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium，dss)诱导的结肠炎小鼠模型中的体内抗炎特性
[0801]
为了证明b08激动性抗cd38抗体在纯炎性模型中的作用，我们决定在葡聚糖硫酸
钠(dss)诱导的结肠炎小鼠模型中测试其作用。由于dss对结肠上皮细胞的毒性，其施用会导致人类溃疡性结肠炎样病变，从而导致粘膜屏障功能受损。在dss模型中通常观察到与人类病理学相似的临床观察结果，例如体重减轻、腹泻和粪便潜血(occult blood in stool)。此外，结肠长度的减少也是这个模型的特征。重要的是，研究表明dss结肠炎主要涉及淋巴细胞、嗜中性粒细胞和巨噬细胞的激活(eichele和kharbanda,2017.world j gastroenterol.23(33):6016
‑
29)。
[0802]
我们观察到施用b08抗dc38抗体(15mg/kg，iv)在统计学上显著抑制了结肠长度的减少(图16)。
[0803]
得出结论，激动性抗cd38抗体(克隆b08)增加了炎性肠疾病的dss小鼠模型中的结肠长度。
[0804]
实施例8：cd38水平作为scd31或激动性抗cd38抗体治疗用途的生物标志物的用途
[0805]
我们观察到scd31和一些再现scd31与cd38结合的抗cd38抗体具有神经保护作用。因此，我们评估了测量cd38水平是否可用于鉴别将从此类抗cd38治疗中受益的患者。我们观察到，与健康对照(hc)相比，来自als患者的血浆样品中的血浆cd38水平显著增加(图17)。这表明cd38水平能够用作选择施用本文所述的抗cd38抗体的患者的标志物。
[0806]
实施例9：用于实施例1
‑
7的材料与方法
[0807]1‑
体外实验
[0808]
1.1
‑
中脑细胞培养
[0809]
根据实验动物护理和使用指南(guide for the care and use of laboratory animals)(国家研究委员会(national research council)，1996年)、欧洲指令86/609和当地机构动物护理和使用委员会的指南对动物进行处理。从胎龄15.5的wistar大鼠胚胎(janvier breeding center,le genest st isle,法国)的腹侧中脑(ventral mesencephalon)制备培养物。将通过机械研磨中脑组织碎片获得的悬浮液中的分散的细胞(dissociated cell)以1.2
‑
1.5x 105个细胞/cm2的密度接种到组织培养支持物上，所述支持物预包被有稀释于ph 8.3的硼酸盐缓冲液中的1mg/ml聚乙烯亚胺，如所述(michel等,1997.j neurochem.69(4):1499
‑
507)。然后将培养物维持在补充有5mm葡萄糖、5％马血清和0.5％胎牛血清的n5培养基中，排除前3个div，此时胎牛血清的浓度为2.5％，有利于培养物的初始成熟(guerreiro等,2008.mol pharmacol.74(4):980
‑
9)。通过更换70％的培养基来每天饲养它们。通常，在nunc 24孔培养板(thermofischer scientific,rochester,ny)上建立中脑培养物。请注意，这些培养物含有仅多巴胺能的酪氨酸羟化酶(th)

神经元(traver等,2006.mol pharmacol.70(1):30
‑
40)。th

神经元占这些培养物中存在的神经元细胞总数的约1
‑
2％。通过计数对th呈免疫阳性的细胞来评估da神经元的存活，如所述(toulorge等,2011.faseb j.25(8):2563
‑
73)。
[0810]
1.2
‑
mpp

中毒模型
[0811]
在培养物中进行mpp

处理，其中通过长期暴露于去极化浓度的k

(30mm)，在防止如前所述的不想要的兴奋性毒性损伤(douhou等,2001.j neurochem.78(1):163
‑
74)的谷氨酸受体拮抗剂mk801(5μm)存在下，来防止自发性死亡过程。mpp

和潜在神经保护分子的处理在5至7个div之间进行。
[0812]
1.3
‑
神经元存活的定量
[0813]
使用含4％甲醛的杜氏磷酸盐缓冲盐水(dulbecco's phosphate
‑
buffered saline，pbs)将培养物固定12分钟，然后用pbs洗涤两次，然后在4℃下用以下抗体孵育24小时。使用1/5000稀释的单克隆抗th抗体(immunostar,inc.,hudson,wi)评估da神经元的存活。在含有0.2％triton x
‑
100的pbs中稀释抗体。使用抗小鼠igg抗体的alexa fluor
‑
488结合物来检测一抗。
[0814]
1.4
‑
人pbmc细胞培养
[0815]
3名健康志愿者(供体1：女性，23岁；供体2：男性，29岁；供体3：女性，20岁)作为血液供体。收集静脉血(5ml)至肝素化管(heparinized tube)中并立即处理。简言之，将血液1/1稀释于预热的rpmi 1640培养基中。在ficoll溶液(sigma；300x g，30min)中使用梯度离心分离pbmc。将分离的pbmc重悬于1体积的预热rpmi 1640培养基中并再次离心(300x g，30min)。将pbmc以107个细胞/ml的浓度重悬于补充有10％人血清(sigma
‑
aldrich)的rpmi 1640培养基中。将细胞接种到96孔微孔板中(每孔100μl)。接种后立即将测试化合物(10μg/ml)、lps(500ng/ml)和干扰素
‑
γ1b(100ng/ml)添加到pbmc培养物中。24小时后，收集细胞培养上清液并在
‑
80℃下冷冻以进行进一步处理。
[0816]
1.5
‑
il
‑
10elisa测定
[0817]
根据制造商说明的使用指示，使用elisa人il
‑
10试剂盒测定细胞培养物上清液中的il
‑
10水平。
[0818]
1.6
‑
统计学分析
[0819]
使用学生t检验进行两组之间的简单比较。通过单向方差分析和随后的邓奈特检验(dunnett's test)(若可能)对单个参照组进行多重比较。当需要全成对比较(all pairwise comparisons)时，使用student
‑
newman
‑
keuls检验。s.e.m.值来自至少三个独立实验。
[0820]2‑
体内实验
[0821]
2.1
‑
动物
[0822]
根据实验动物护理和使用指南(国家研究委员会，1996年)、欧洲指令2010/63/eu和当地机构动物护理和使用委员会的指南对动物进行处理。对于所有研究，使用8至10周龄的雄性c57bl/6小鼠(janvier，法国)。将他们保持在12:12h的光/暗循环(早8点开灯)中。将室温保持在20℃，可以自由获得标准饮食和自来水。
[0823]
2.2
‑6‑
ohda和mptp小鼠模型
[0824]
a)实验设计
[0825]
使用了两种体内小鼠模型：6
‑
ohda小鼠模型和mptp小鼠模型。对于6
‑
ohda小鼠模型，中毒方案基于向右侧纹状体中单侧立体定向纹状体内注射6
‑
ohda。在外科立体定向过程(surgical stereotaxic procedure)前一天，在外科立体定向过程期间与6
‑
ohda同时，或在6
‑
ohda注射后两天，进行脑内或静脉内注射的处理。在外科立体定向过程后8天处死动物。
[0826]
对于mptp小鼠模型，进行4次mptp(20mg/kg)注射。在mptp注射前2天进行抗cd38克隆hb7抗体的静脉内注射。在mptp注射后7天处死小鼠。
[0827]
b)外科立体定向过程
[0828]
对于单侧6
‑
ohda小鼠模型，使用水合氯醛(400mg/kg，i.p.)使动物麻醉并置于适
合于小鼠的立体定向框架中。使用hamilton注射器在以下坐标处进行注射：ap： 0.85cm，ml：
±
2cm，dv：
‑
3.4cm(对应于franklin和paxinos，1997的图集(atlas))。在测试处理存在或不存在下，注射含有或不含稀释于pbs中的5μg 6
‑
ohda的2.5μl的总体积。在注射后将针头留在原位10分钟然后拔出。
[0829]
c)组织制备
[0830]
通过颈椎脱臼处死小鼠，并分离头部以收集脑和血液样品。将脑在多聚甲醛溶液(4％)中固定1天，然后在蔗糖(30％)中浸泡2天，然后在
‑
80℃下冷冻以进行进一步分析。
[0831]
d)脑切片、免疫荧光和神经元计数(enumeration)
[0832]
使用冷冻切片机在
‑
30℃下对每个脑进行切片。每个切片的厚度为20μm。切片是在黑质(substantia nigra)周围进行的(根据艾伦小鼠大脑(allen mouse brain)，从切片51到63有80个切片)。
[0833]
然后在pbs中洗涤切片，并在4℃下与抗酪氨酸羟化酶一起搅拌孵育2天以将多巴胺能神经元染色。将切片在dapi(sigma)存在下与相应的二抗一起在室温下孵育2小时以将细胞核染色，并固定在明胶包被的载玻片上。
[0834]
使用配备有hamamatsu orce
‑
er相机的nikon te2000u或配备有axiocam 503单色相机的zeiss axio vert.a1对切片进行成像。使用image j软件或zen进行图像分析。
[0835]
2.3
‑
il
‑
10elisa测定
[0836]
将收集在收集管(500edta
‑
k3，sarstedt)中的血样以每分钟3000转的速度离心15分钟。收集上清液(血浆)并转移到试管中并在
‑
80℃下冷冻以进行进一步分析。根据制造商说明的使用指示，使用elisa il
‑
10试剂盒测定血浆样品中的il
‑
10水平。
[0837]
2.4
‑
eae小鼠模型
[0838]
a)实验设计
[0839]
通过异氟烷吸入使动物麻醉(15分钟)。在第0天，通过皮下注射含有完全弗氏佐剂中的100μg mog肽35
‑
55和500μg hkmt(热灭活的结核分枝杆菌(heat
‑
killed mycobacterium tuberculosis))的乳液对小鼠进行免疫。两小时后，动物在第0天和第2天接受了500ng百日咳毒素的腹腔注射。在乳液皮下注射后第10天和第20天静脉内注射测试化合物。在第28天处死动物。
[0840]
b)临床评分评估
[0841]
免疫后，每天监测动物的体重和临床症状。根据以下量表对临床评分进行分级：0：无临床症状；0.5：部分软尾；1：尾巴瘫痪，步态正常；1.5：尾巴瘫痪，运动不协调，后肢轻瘫；2：一后肢瘫痪或对挤捏无反应；2.5：一后肢瘫痪且另一后肢无力；3：两后肢瘫痪；3.5：两后肢瘫痪且前肢无力；4：垂死状态。
[0842]
2.5
‑
dss小鼠模型
[0843]
a)实验设计
[0844]
通过自由提供含有3％(w/v)dss的饮用水5天在小鼠中诱导实验性结肠炎，而对照小鼠仅接受自来水。当dss处理开始时，静脉内施用测试化合物(15mg/kg)。在开始dss处理
后9天处死小鼠。
[0845]
b)统计学分析
[0846]
使用sigma plot软件进行统计学分析和作图。可以根据单向或双向anova以及事后检验(post hoc test)的数据进行不同的测定(若符合应用条件)。