杜仲苷促进脂肪间充质干细胞增殖和成软骨分化的应用及方法与流程

技术特征：
1.杜仲苷促进脂肪间充质干细胞增殖和成软骨分化的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：在体外培养体系中加入杜仲苷以促进脂肪间充质干细胞的增殖和成软骨分化。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述体外培养体系包括高糖dmem培养基 10％胎牛血清 1％双抗溶液。4.根据权利要求2或3所述的应用，其特征在于：向体外培养体系中加入10ng/ml杜仲苷，然后对脂肪间充质干细胞进行培养。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：培养条件为5％co2的培养箱，培养温度为37℃。6.一种促进脂肪间充质干细胞增殖和成软骨分化的体外培养体系，其特征在于：包括杜仲苷。7.根据权利要求6所述的体外培养体系，其特征在于：杜仲苷的加入量为10ng/ml。8.一种促进脂肪间充质干细胞增殖和成软骨分化的方法，其特征在于：包括以下步骤：s1、原代脂肪间充质干细胞获取：s1.1、经手术患者知情同意，无菌条件下获取人工膝关节置换手术后患者废弃的髌下脂肪垫，将其移入无菌操作台，用无菌眼科剪剪掉肉眼可见的红色血管以及白色结缔组织，然后将剩余脂肪组织剪成1.0
‑
2.0mm3碎块，dpbs清洗两次，每次5min；s1.2、用0.25％胰蛋白酶在37℃消化1h，吸弃0.25％胰蛋白酶，加入用不含血清的高糖dmem培养基配制的0.2％i型胶原酶溶液，消化过夜；s1.2、第2天转移至50ml离心管内，小心吸取下层液体然后经过40μm细胞过滤网过滤，再转移至15ml离心管，1500r/min离心，沉淀用2ml基础培养基溶解并且转入细胞培养瓶中，放入37℃、5％co2的细胞培养箱中培养，1
‑
2d后会见到细胞贴壁生长，即得原代脂肪间充质干细胞；s2、原代脂肪间充质干细胞体外培养：将得到的原代脂肪间充质干细胞培养24h后进行半量换液，48h后进行全量换液，之后每2天换液1次，培养5
‑
7d后，原代脂肪间充质干细胞可生长融合达到90％以上，用0.25％胰蛋白酶消化后，按1:3传代接种到新的细胞培养瓶中持续体外培养，即得二代脂肪间充质干细胞；s3、促进增殖：取二代长满的脂肪间充质干细胞，用0.25％胰蛋白酶消化，待细胞生长，融合度达到80％时，在基础培养基上加入10ng/ml杜仲苷，置于37℃、5％co2培养箱中继续培养24h；s4、促进成软骨分化：取二代长满的脂肪间充质干细胞，用0.25％胰蛋白酶消化，在基础培养基上加入10ng/ml杜仲苷、10ng/ml tgf
‑
β3、100nmol/l地塞米松、1％its
‑
g、50μg/ml维生素c以及40μg/ml脯氨酸，每2天换液1次，连续培养14天。9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述基础培养基包括高糖dmem培养基 10％胎牛血清 1％双抗溶液。

技术总结
本发明公开了杜仲苷促进脂肪间充质干细胞增殖和成软骨分化的应用及方法，所述方法包括以下步骤：S1、原代脂肪间充质干细胞获取；S2、原代脂肪间充质干细胞体外培养；S3、促进增殖：取二代长满的脂肪间充质干细胞，用0.25％胰蛋白酶消化，待细胞生长，融合度达到80％时，在基础培养基上加入10ng/mL杜仲苷，置于37℃、5％CO2培养箱中继续培养24h；S4、促进成软骨分化：取二代长满的脂肪间充质干细胞，用0.25％胰蛋白酶消化，在基础培养基上加入10ng/mL杜仲苷、10ng/mL TGF


技术研发人员：姚楠 胡子旋 刘文刚 黄丹娥 黄雪君 陈玉兴
受保护的技术使用者：广东省第二中医院（广东省中医药工程技术研究院）
技术研发日：2021.07.28
技术公布日：2021/11/2