一种与抗西瓜蔓枯病相关的分子标记、引物组及应用

本发明属于西瓜抗病育种，具体涉及一种与抗西瓜蔓枯病相关的分子标记、引物组及应用。

背景技术：

1、西瓜蔓枯病（gummy stem blight，gsb）是西瓜生产中的一种重要病害，主要由子囊菌亚门真菌瓜类球腔菌

stagonosporopsis cucurbitacearum(

didymella bryoniae),

s.

citrulli和

s. caricae等引起。病原菌以菌丝体、分生孢子器和子囊座随植物病残组织在地表、土壤及附着在架材上越冬，通过风、雨和灌溉水传播，直接侵染或从伤口侵入引发病害。

2、gsb抗性遗传研究发现，抗性并非由单基因控制，而是更复杂的遗传体系。例如，研究发现西瓜种质pi189225的抗性由一个主要数量性状位点控制，初步定位为qgsb8.1。近年来，qtl定位技术被用于西瓜gsb抗性研究，并预测了4个qtl（qll8.1、qsb8.1、qdi8.1和qsb6.1）与抗性相关的基因，多基因介导的抗病性虽然具有持久和广谱的优势，但其在育种应用中的复杂性是主要障碍。因此，加强抗病品种的培育与推广至关重要，同时开发简便高效的西瓜蔓枯病分子标记鉴定方法，仍是该领域亟待解决的关键问题。

技术实现思路

1、针对上述技术问题，本发明的第一目的在于提供检测clvdac1的snp分子标记的试剂在筛选抗西瓜蔓枯病植株中的应用。本发明开发了与抗西瓜蔓枯病遗传位点相关的clvdac1的snp分子标记，利用本发明分子标记可以快速准确的检测不同抗感西瓜植株，实现抗西瓜蔓枯病种质材料的分子辅助选择，提高西瓜抗病育种效率。

2、本发明的第二目的在于提供一种筛选抗西瓜蔓枯病的引物组。

3、本发明的第三目的在于提供一种筛选抗西瓜蔓枯病的试剂盒。

4、本发明的第四目的在于提供了上述的引物组或上述的试剂盒在筛选抗西瓜蔓枯病植株中的应用。

5、本发明的第五目的在于提供了一种抗西瓜蔓枯病的筛选方法及其在抗西瓜蔓枯病植株育种中的应用。

6、为实现上述发明目的，本发明的技术方案如下：

7、本发明提供了检测clvdac1的snp分子标记的试剂在筛选抗西瓜蔓枯病植株中的应用，所述clvdac1的snp分子标记为clvdac1-gsb01；

8、所述clvdac1-gsb01的核苷酸序列如seq id no.1所示。

9、本发明还提供了一种筛选抗西瓜蔓枯病的引物组，包括检测上述的clvdac1的snp分子标记的正向引物和检测上述的clvdac1的snp分子标记的反向引物；所述正向引物序列如seq id no.2所示，所述反向引物序列如seq id no.3所示。

10、本发明还提供了一种筛选抗西瓜蔓枯病的试剂盒，包括上述的引物组。

11、作为一种实施方式，所述试剂盒还包括pcr扩增用试剂。

12、本发明还提供了上述的引物组或上述的试剂盒在筛选抗西瓜蔓枯病植株中的应用。

13、本发明还提供了一种抗西瓜蔓枯病的筛选方法，所述筛选方法包括以下步骤：

14、使用上述的引物组对待测西瓜的dna进行pcr扩增、酶切后，根据酶切产物判定是否含有抗西瓜蔓枯病遗传位点；当所述酶切产物出现98 bp和176 bp两条主带，即判定待测西瓜含有抗西瓜蔓枯病遗传位点；当所述酶切产物出现273 bp一条主带，即判定待测西瓜不含抗西瓜蔓枯病遗传位点。

15、作为一种实施方式，所述pcr扩增的反应体系为dna模板1 μl，上游引物0.8 μl、下游引物0.8 μl，2×hieff® pcr master mix 10 μl以及ddh2o 7.4 μl。

16、作为一种实施方式，所述pcr扩增条件为：94℃预变性5 min；循环参数为94℃变性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸45 s，共进行38个循环；72℃延伸10 min。

17、作为一种实施方式，采用限制性内切酶hin1ii或同裂酶进行酶切。

18、本发明还提供了上述的筛选方法在抗西瓜蔓枯病植株育种中的应用。

19、相对于现有技术，本发明的有益效果：

20、本发明开发了与抗西瓜蔓枯病遗传位点相关的clvdac1的snp分子标记，所述clvdac1的snp分子标记为clvdac1-gsb01。利用本发明snp分子标记可以快速准确的检测不同抗感西瓜植株，实现抗西瓜蔓枯病种质材料的分子辅助选择，提高西瓜抗病育种效率，有利于西瓜抗西瓜蔓枯病基因的准确检测。

1.检测clvdac1的snp分子标记的试剂在筛选抗西瓜蔓枯病植株中的应用，其特征在于，所述clvdac1的snp分子标记为clvdac1-gsb01；

2.一种筛选抗西瓜蔓枯病的引物组，其特征在于，包括检测权利要求1所述的clvdac1的snp分子标记的正向引物和检测权利要求1所述的clvdac1的snp分子标记的反向引物；所述正向引物序列如seq id no.2所示，所述反向引物序列如seq id no.3所示。

3.一种筛选抗西瓜蔓枯病的试剂盒，其特征在于，包括权利要求2所述的引物组。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括pcr扩增用试剂。

5.一种权利要求2所述的引物组或权利要求3~4任意一项所述的试剂盒在筛选抗西瓜蔓枯病植株中的应用。

6.一种抗西瓜蔓枯病的筛选方法，其特征在于，所述筛选方法包括以下步骤：

7.根据权利要求6所述的筛选方法，其特征在于，所述pcr扩增的反应体系为dna模板1μl，上游引物0.8 μl、下游引物0.8 μl，2×hieff® pcr master mix 10 μl以及ddh2o 7.4μl。

8.根据权利要求6所述的筛选方法，其特征在于，所述pcr扩增条件为：94℃预变性5min；循环参数为94℃变性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸45 s，共进行38个循环；72℃延伸10 min。

9.根据权利要求6所述的筛选方法，其特征在于，采用限制性内切酶hin1ii或同裂酶进行酶切。

10.权利要求6~9任一项所述的筛选方法在抗西瓜蔓枯病植株育种中的应用。