用于调节MTOR的活性或表达的化合物及其用途的制作方法

本发明涉及用于调节mtor基因的表达水平和/或活性的rna靶向治疗剂，更具体地涉及包含该治疗剂的化合物和组合物，其中所述化合物和组合物可用于预防、改善或治疗mtor相关疾病、病症和病况。

背景技术：

1、哺乳动物(或机制性)雷帕霉素靶蛋白(mtor)途径在调节对细胞生命、衰老和死亡至关重要的各种生物学过程中起到重要作用。鉴于mtor普遍分布于全身的各种细胞类型中，mtor途径控制了包括但不限于肝脏、淋巴细胞、白色和棕色脂肪组织、骨骼肌和大脑在内的不同器官/组织中的多种合成代谢和分解代谢过程。因此，mtor活性受损，特别地其过度活化，已与包括癌症、2型糖尿病、心血管病理、神经系统疾病和衰老在内的广泛人类疾病相关联。

2、mtor是一种在人中由mtor基因(染色体1p36.2)编码的289kda蛋白激酶。mtor是一种细胞内丝氨酸/苏氨酸激酶，其在介导体内适当的生理功能中发挥关键作用。mtor与其它蛋白质形成复合物以介导细胞内信号转导；根据组成蛋白质的身份，这些复合物被分类为mtor复合物1 (mtorc1)或mtor复合物2 (mtorc2)。mtorc1包含raptor (mtor调节相关蛋白)作为组分，并通过调节核糖体生物发生和蛋白质表达而在细胞生长和增殖中起到重要作用。mtorc2包含rictor (mtor的雷帕霉素不敏感伴侣蛋白)作为组分，且在细胞内细胞骨架重塑和细胞迁移中发挥重要作用。含mtor的复合物在其上游调节因子、底物特异性、功能输出和对雷帕霉素的敏感性方面也有所不同。对雷帕霉素的敏感性代表了区分mtorc1和mtorc2复合物的另一关键特征。雷帕霉素不直接抑制mtor的催化(激酶)活性；相反，它与免疫亲和蛋白fkbp12 (12kda的fk506结合蛋白)结合，fkbp12是一种与mtor fkbp-雷帕霉素结合结构域(frb)结合的蛋白质。尽管frb结构域存在于mtorc1和mtorc2复合物二者中，但它仅在mtorc1中暴露，因为rictor阻止fkbp12-雷帕霉素复合物进入mtorc2的frb结构域。因此，mtorc2在体外和体内均对雷帕霉素的作用相对耐受。

技术实现思路

1、发明要解决的问题

2、本发明的一个实施方案涉及用于调节mtor的活性和/或表达水平的rna靶向治疗剂，包括例如rnai剂、反义寡核苷酸和mirna等。

3、本发明的一个实施方案涉及用于调节mtor的活性和/或表达水平的化合物，以及包含该化合物作为活性成分的用于预防、改善和/或治疗mtor相关疾病、病症和病况的药物组合物、方法或用途。

4、本发明的其它实施方案涉及通过使用用于调节mtor的活性和/或表达水平的化合物来调节mtor的活性和/或表达水平的组合物、方法或用途。

5、用于调节mtor的活性和/或表达水平的化合物可以是寡聚化合物和/或rnai剂，其中所述寡聚化合物可以是反义寡核苷酸，并且其中所述rnai剂可包括但不限于ssrnai剂、sirna、shrna和mirna。

6、用于解决问题的方案

7、本发明的一个实施方案涉及用于调节mtor的活性和/或表达水平(量)的化合物，以及包含所述化合物作为活性成分的用于预防、改善和/或治疗mtor相关疾病、病症和病况的药物组合物或方法。此外，本发明的一个实施方案涉及用于调节mtor的活性和/或表达水平(量)的化合物，以及包含所述化合物作为活性成分的用于预防、改善和/或治疗由mtor介导的疾病、病症和病况的药物组合物或方法。

8、本发明的一个具体实施方案涉及一种用于预防、改善和/或治疗mtor相关疾病、病症和病况的方法，所述方法包括向有需要的个体或患者施用用于调节mtor的活性和/或表达水平的化合物的步骤。如本文所用，术语“表达”是指多核苷酸产生基因产物例如rna或多肽(或蛋白质等)的过程。

9、更具体地，本发明涉及一种用于预防、改善和/或治疗由mtor的过度活化或过度表达引起的疾病、病症和病况的药物组合物或方法。

10、在本公开中，“个体”、“患者”或“受试者”是指选择用于治疗或疗法的人或非人动物，并且非人动物可包括但不限于哺乳动物，例如猴、大鼠、小鼠、兔和豚鼠等。

11、本发明的一个具体实施方案涉及用于调节mtor的活性和/或表达水平(量)的化合物、寡聚化合物和/或rnai剂。实施方案提供了用于抑制mtor mrna和蛋白质的表达、抑制mtor蛋白的活性、或降低mrna和蛋白质的水平的化合物、方法和组合物。在具体实施方案中，用于调节mtor的活性和/或表达水平(量)的化合物可以是降低或抑制mtor的活性和/或表达水平(量)的抑制剂。

12、mtor信号途径的过度活化可能由于mtor基因本身或mtor的上游基因的突变、或由于其它信号途径的稳态的破坏而发生。例如，局灶性皮质发育不良(fcd)是难治性儿童癫痫的代表性疾病，与单侧半侧巨脑畸形(hme)一起被归类为fmcd (局灶性皮质发育畸形)疾病，由于诱导mtor信号途径的过度活化的脑特异性体细胞突变，这些疾病的遗传成因已众所周知。

13、特别地，mtor基因本身的突变(其占fcd ii型疾病患者中发现的各种基因变异的约60%)可改变mtor蛋白的结构，导致mtorc1和mtorc2二者的过度活化。从现有文献中众所周知的是，mtorc1和mtorc2复合物均可导致难治性fmcd癫痫。

14、本发明的mtor靶向反义寡核苷酸(aso)通过降解mtor基因的mrna来降低mtor的表达水平。这降低了mtor本身的表达水平，而mtor是两种复合物的共同组分，从而诱导了mtorc1和mtorc2复合物二者的活性的抑制，并因此可用作难治性fmcd癫痫的治疗药物。特别地，通过突变修饰的mtor蛋白可能对小分子化合物类的mtor抑制剂反应不同，但本发明的mtor反义寡核苷酸可以克服这一点。

15、根据本发明的化合物可用于mtor相关疾病、病症和病况，或更具体地由mtor的过度活化或过度表达引起的疾病、病症和病况，并且mtor的过度活化或过度表达可由mtor基因或包含它的信号途径中的基因的基因改变而引起，并且此类基因改变包括种系改变和体细胞改变。

16、疾病、病症或病理状况的实例可包括肿瘤、神经系统病症和肾脏疾病。神经系统病症包括神经发育病症和神经退行性病症。神经发育病症可包括mtor病、癫痫和癫痫发作相关病症等。mtor病包括由体细胞突变引起的局灶性皮质发育不良(fcd)如fcd ii型、半侧巨脑畸形(hme)、以及结节性硬化症(tsc)，巨脑畸形(meg)，cowden综合征，pik3ca相关过度生长谱系病(pros)，bannayan-riley-ruvalcaba综合征(brrs)，lhermitte-duclos病(ldd)，mcap (巨脑畸形-多指/趾-多小脑回-脑积水(megalencephaly-polydactyly-polymicrogyria-hydrocephalus))，mpph (巨脑畸形-多小脑回-脑积水(megalencephaly-polymicrogyria-hydrocephalus))，smith-kingsmore综合征(sks)、羊水过多、巨脑畸形和症状性癫痫综合征(polyhydramnios, megalencephaly and symptomatic epilepsysyndrome, pmse)，家族性智力障碍-巨头畸形综合征和proteus综合征。神经发育病症包括脆性x综合征(fxs)和自闭症谱系障碍(asd)等。具体地，神经发育病症包括皮质发育畸形(mcds)，mcd的实例为结节性硬化症(tsc)、局灶性皮质发育不良(fcd)如ii型局灶性皮质发育不良(fcdii)和hme等，并且与mcd相关的症状包括癫痫、癫痫发作(seizure)等。

17、癫痫和癫痫发作相关病症(epilepsy and seizure-related disorders)包括伴可变病灶的家族性局灶性癫痫(familial focal epilepsy with variable foci,ffevf)、常染色体显性夜间癫痫(autosomal dominant nocturnal epilepsy, adnfle)、家族性内侧颞叶癫痫(familial mesial temporal lobe epilepsy, fmtle)、颞叶癫痫(temporal lobe epilepsy, tle)和婴儿期起病的发育性癫痫性脑病(infantile-onsetdevelopmental and epileptic encephalopathies, dee)。

18、神经退行性疾病包括阿尔茨海默病(alzheimer's disease, ad)、帕金森病(parkinson's disease, pd)、亨廷顿病(huntington's disease, hd)、肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis, als)等。

19、肿瘤包括实体瘤和神经肿瘤学肿瘤(neuro-oncological tumor)，实体瘤包括肺癌(lung cancer)、结直肠癌 (colorectal cancer)、胃癌(gastric cancer)、肾细胞癌(renal cell carcinoma)、膀胱癌(bladder cancer)、前列腺癌(prostate cancer)和乳腺癌(breast cancer)。上述神经肿瘤学肿瘤包括神经节瘤(ganglioma)、胶质母细胞瘤(glioblastoma)、胚胎发育不良性神经上皮肿瘤(dysembryoplastic neuroepithelialtumor, dnet)、室管膜下巨细胞星形细胞瘤(subependymal giant cell astrocytomas,sgcas/segas)等。

20、肾脏疾病可包括肾移植、多囊肾病(pkd)、肾癌和糖尿病肾病。具体地，实例为常染色体显性多囊肾病(adpkd)或常染色体隐性多囊肾病(autosomal recessive polycystickidney disease, arpkd)，其是以形成肾囊肿为特征的遗传性疾病并且已知由分别编码多囊蛋白-1 (pc-1)和多囊蛋白-2 (pc-2)的pkd1和pkd2两个基因的突变引起。此外，已知arpkd是由于pkhd1基因的突变而发生。已报道的临床前结果显示，mtor抑制剂延缓pkd患者的囊肿生长并保护肾功能。因此，本化合物可用于与mtor过度活化或过度表达相关的肾脏疾病如多囊肾病或其症状，例如延缓囊肿生长、保护肾功能等。

21、本发明中用于调节mtor的活性和/或表达水平的化合物具体是可用于调节mtor复合物1 (mtorc1)和/或mtor复合物2 (mtorc2)的活性的化合物。特别地，本发明的化合物靶向mtor基因并调节mtor蛋白的活性和/或表达，而mtor蛋白是mtorc1和mtorc2共有的，从而能够调节mtorc1和mtorc2二者。特别地，mtor基因本身的突变(其占fcd ii型疾病患者中发现的各种基因变异的约60%)诱导mtor蛋白结构的改变，从而导致mtorc1和mtorc2二者的过度活化。由于mtorc1和mtorc2复合物二者均可引起fmcd难治性癫痫，本发明的化合物具有能够作用于由各种基因变异引起的所有fmcd疾病的优点。

22、如本公开中所用，“靶核酸”和“靶rna”是指对其设计反义化合物以发挥作用的核酸。除非另有说明，否则“靶rna”是指rna转录本并且包括前体mrna和mrna。在本公开中，除非另有说明，否则“rna”是指rna转录本并且包括前体mrna和成熟mrna二者。

23、如本公开中所用，“靶区域”是指靶核酸的一部分，对其设计寡聚化合物来与之杂交。这里，“靶核酸”和“靶rna”为mtor。在本公开中，mtor基因可以是人mtor基因序列，包括已知的参考转录本或其变体，这些可在各种基因数据库中获得。具体地，mtor核酸序列(例如人mtor核酸序列)可通过ncbi (美国国家生物技术信息中心)参考序列核苷酸id ng_033239.1识别，并且基因组位置为1号染色体上的11,106,535至11,262,551 (对应于ncbi参考序列核苷酸id nc_000001.11或ensembl转录本id：enst00000361445.9的核苷酸11,106,535至11,262,551)。本文使用的坐标是指基因组参考组装grch38 (genome referenceconsortium human build 38)的坐标，即hg38 (human genome build 38)。

24、本发明涉及用于调节mtor的活性和/或表达水平的rna靶向治疗剂，并且包括例如rnai剂、反义寡核苷酸、mirna等。具体地，本发明的化合物包括但不限于针对mtor核酸的反义寡核苷酸和rna干扰剂(rnai剂)。rna靶向治疗剂可以是包含8至80个核苷的寡核苷酸、或具有与人mtor核酸序列互补的序列的rnai剂。

25、rnai剂是指部分地经由risc或ago2起作用以调节靶核酸和/或由靶核酸编码的蛋白质的反义剂。rnai剂包括但不限于双链sirna、单链rnai (ssrnai)、以及包括微小rna模拟物的微小rna。rnai剂不旨在包括反义寡核苷酸。

26、rnai剂的一个实施方案可以是双链rnai剂，其可以是sirna并且可包含与靶基因互补的反义链和与反义链互补的有义链，并且可任选地包含缀合到一条链的一个或多个内部位置的一个或多个亲脂性部分，任选地经由接头或载体缀合。有义链和反义链的长度各自可为19至25个核苷酸，但不限于此。

27、具体地，用于互补杂交的mtor基因(ensembl转录本id：enst00000361445.9)的靶向核碱基序列可为gaatgttgaccaatgctat (seq no. 464)、ggtctgagtttaaggtcta (seqno. 465)或ggtctgagtttaaggtcta (seq no. 465)，作用于这些靶序列区域的sirna的有义序列和反义序列的实例可为seq no. 456至463中记载的核碱基序列，但不限于此。

28、亲脂性部分可以是脂肪族、脂环族或多脂环族化合物，具体为脂质、胆固醇、视黄酸、胆酸、金刚烷乙酸、1-芘丁酸、二氢睾酮、1,3-双-o(十六烷基)甘油、香叶基氧基己醇、十六烷基甘油、冰片、薄荷醇、1,3-丙二醇、十七烷基、棕榈酸、肉豆蔻酸、o3-(油酰基)石胆酸、o3-(油酰基)胆烯酸、二甲氧基三苯甲基或吩噁嗪，或者可包含选自由饱和或不饱和c4-c30烃链、羟基、胺、羧酸、磺酸盐、磷酸盐、硫醇、叠氮化物和炔烃组成的组的官能团。更具体地，亲脂性部分可包含饱和或不饱和c6-c18烃链，其详细信息可参见wo2019217459a1等。

29、本发明的mtor抑制剂可包含缀合基团和/或末端基团。在具体实例中，mtor抑制剂调节靶核酸的量和/或活性。缀合部分修饰所连接的寡核苷酸的一种或多种性质，包括但不限于药效学、药代动力学、稳定性、结合、吸收、组织分布、细胞分布、细胞吸收、电荷和清除。在具体实例中，缀合部分赋予所连接的寡核苷酸新的性质。如本公开中所用，“缀合基团”是指直接连接到寡核苷酸的原子基团。缀合基团包括缀合部分和将缀合部分连接到寡核苷酸的缀合接头。

30、在本公开中，术语“抑制表达或活性”表示与未经处理的样品或对照样品中的表达或活性相比，表达或活性的降低或抑制，并且其不一定表示总体上表达或活性的完全消除。具体地，根据本发明的反义寡聚物或rnai剂能够将mtor表达水平降低至70%以下、65%以下、60%以下或50%以下。

31、在具体实例中，寡聚化合物和寡聚物双链体与靶核酸杂交并可产生至少一种反义活性；这些寡聚化合物和寡聚物双链体为反义化合物。在具体实例中，当反义化合物在标准细胞测定中降低或抑制靶核酸的量或活性超过25%时，其具有反义活性。在具体实例中，反义化合物选择性地影响一种或多种靶核酸。

32、在具体实例中，基于处理前的对照组和未用mtor抑制剂处理的对照组(设定为0%)，mtor抑制剂可降低mtor rna或mtor蛋白的活性或表达水平约5%以上、约10%以上、约15%以上、约20%以上、约25%以上、约30%以上、约35%以上、约40%以上、约45%以上、约50%以上、约55%以上、约60%以上、约65%以上、约70%以上、约75%以上、约80%以上、约85%以上、约90%以上或约95%以上。可选地，基于处理前的对照组和未用mtor抑制剂处理的对照组(将其设定为100%)，用mtor抑制剂处理后的mtor rna或mtor蛋白的活性或表达水平可为约95%以下、约90%以下、约85%以下、约80%以下、约75%以下、约70%以下、约65%以下、约60%以下、约55%以下、约50%以下、约45%以下、约40%以下、约35%以下、约30%以下、约25%以下、约20%以下、约15%以下、约10%以下或约5%以下。

33、本发明的mtor抑制剂可以是反义寡核苷酸，并且反义寡核苷酸是指具有与靶核酸或其区域或区段互补的核酸序列的寡核苷酸。在具体实例中，反义寡核苷酸能够特异性地与靶核酸或其区域或区段杂交。如本文所用，“反义寡核苷酸”是指包含能够与靶核酸杂交并且具有至少一种反义活性的反义化合物的寡核苷酸部分的寡核苷酸。术语“反义寡聚物”、“反义化合物”、“反义寡核苷酸”或“反义rnase h寡核苷酸”可互换使用，并且各自具有由核碱基键连接的碱基对形成部分，所述核碱基键使碱基对部分杂交。在这些实施方案中，寡核苷酸的区域具有与靶核碱基序列互补的核碱基序列。在具体实例中，寡核苷酸的核碱基序列中的区域或整个长度与靶基因或靶区域互补，并且具有至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、或至少100%的序列同一性。术语“反义rnase h寡核苷酸”是指包含与靶序列互补的区域并且包含适合于rnase h介导的核酸降低的至少一种化学修饰的寡核苷酸。

34、在本公开中，用于调节mtor的活性和/或表达水平(量)的化合物(例如寡核苷酸)包括其药学上可接受的盐，其中“药学上可接受的盐”是指化合物(例如寡聚化合物或寡核苷酸)的生理学上和药学上可接受的盐，即保留母体化合物的所需生物活性且不引起不期望的毒理学影响的盐。

35、一个实施方案涉及包含由8至80个连接核苷构成的经修饰的寡核苷酸的寡聚化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸的核酸序列与mtor核酸序列的等长部分的互补序列具有至少80%的序列同一性，并且所述经修饰的寡核苷酸包含选自由经修饰的糖部分、经修饰的核苷间键和经修饰的核碱基组成的组的至少一种修饰。

36、另一实施方案涉及包含由8至80个连接核苷构成的经修饰的寡核苷酸的寡聚化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸的核酸序列包含seq id no：1至439的核酸序列之中的12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续核碱基，并且所述经修饰的寡核苷酸包含选自由经修饰的糖部分、经修饰的核苷间键和经修饰的核碱基组成的组的至少一种修饰。

37、“寡聚化合物”是指包含单个寡核苷酸以及任选地一个或多个附加特征(例如缀合基团或末端基团)的化合物。“寡核苷酸”是指连接核苷的聚合物，每个核苷独立地经修饰的或未经修饰的。除非另有说明，否则寡核苷酸包含选自由以下组成的组的至少一个亚基组：8至80、8至70、8至60、8至50、8至40、8至30、8至25、8至22、8至20、10至80、10至70、10至60、10至50、10至40、10至30、10至25、10至22、10至20、12至80、12至70、12至60、12至50、12至40、12至30、12至25、12至22、12至20、14至80、14至70、14至60、14至50、14至40、14至30、14至25、14至22、14至20、16至80、16至70、16至60、16至50、16至40、16至30、16至25、16至22、和16至20个亚基。

38、可增加或降低寡核苷酸的长度而不消除活性。例如，在woolf等人(proc. natl.acad. sci. usa 89:7305-7309, 1992)的文献中，在卵母细胞注射模型中测试了一系列的核苷酸长度为13至25的寡核苷酸的诱导靶rna切割的能力。在寡核苷酸的末端附近具有8或11个错配碱基的长度为25个核碱基的寡核苷酸可以指导靶rna的特异性切割，尽管其程度低于不含错配的寡核苷酸。

39、如本公开中所用，在寡核苷酸的上下文中，“连续”是指彼此直接相邻的核苷、核碱基、糖部分或核苷之间的键(核苷间键)。例如，“连续核碱基”是指序列中彼此直接相邻的核碱基。

40、作为本发明的示例性寡聚化合物，与人mtor序列互补结合的核碱基序列示于下表1至表4中，下表1至表4中的起点和终点表示由ensembl提供的mtor核酸(ensembl转录本id：enst00000361445.9)的碱基位置。

41、[表1]

42、

43、

44、

45、[表2]

46、

47、

48、

49、[表3]

50、

51、

52、

53、[表4]

54、

55、

56、

57、在具体实例中，寡聚化合物包含由8至80个连接核苷构成的经修饰的寡核苷酸，其中所述经修饰的寡核苷酸的核酸序列可包含选自由seq id no：1至439组成的组的区域内的12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续核碱基。经修饰的寡核苷酸包含选自由经修饰的糖部分、经修饰的核苷间键和经修饰的核碱基组成的组的至少一种修饰。

58、具体的寡核苷酸可与人mtor的核酸序列(例如ensembl转录本id：enst00000361445.9的mtor核酸序列)中的tr1区域，更具体为tr6区域；tr2区域；tr3区域，更具体为tr7区域；tr4区域；或tr5区域互补结合。关于各区域的具体信息提供于下表5和表6中。靶区域具体可为人mtor转录本(例如ensembl转录本id：enst00000361445.9的mtor核酸序列)中的核酸序列。因此，反义寡核苷酸可以是包含由8至80个、例如12至30个或12至22个、具体为12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续的连接核苷组成的寡核苷酸的寡聚化合物，与选自由seq id no：440至446组成的组的mtor基因区域互补，并且基于处理前的对照组和未处理的寡核苷酸(设定为0%)，所述反义寡核苷酸可具有35%以上或40%以上的mtor敲低(kd)效率。

59、区域可被鉴定为在反义寡核苷酸筛选中提供mtor表达的高效抑制的靶位点，并且mtor mrna上的此类区域可被视为用于反义寡核苷酸或rnai剂的有利靶区域。

60、[表5]

61、

62、[表6]

63、

64、例如，寡核苷酸可以是包含由8至80个、例如12至30个或12至22个、具体为12、13、14、15、16、17、18、19、20、21或22个连续的连接核苷组成的寡核苷酸的寡聚化合物，与选自由seq id no：440至446组成的组的mtor基因区域(有义链)反向互补。

65、更具体地，与选自由seq id no：440至446组成的组的mtor基因区域(有义链)反向互补的寡核苷酸的核酸序列为，例如，作为与tr1的核酸序列的一部分反向互补的寡核苷酸的包含seq id no：1至19的核酸序列中的12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续的连接核苷的寡核苷酸，更具体地，作为与tr6的核酸序列的一部分反向互补的寡核苷酸的包含seqid no：10至15的核酸序列中的12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续的连接核苷的寡核苷酸；例如，作为与tr2的核酸序列的一部分反向互补的寡核苷酸的包含seq id no：27至36的核酸序列中的12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续的连接核苷的寡核苷酸；作为与tr3的核酸序列的一部分反向互补的寡核苷酸的包含seq id no：68至81的核酸序列中的12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续的连接核苷的寡核苷酸，更具体地，例如，作为与tr7的核酸序列的一部分反向互补的寡核苷酸的包含seq id no：70至74的核酸序列中的12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续的连接核苷的寡核苷酸；例如，作为与tr4的核酸序列的一部分反向互补的寡核苷酸的包含seq id no：396至403的核酸序列中的12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续的连接核苷的寡核苷酸；或者，例如，作为与tr5的核酸序列的一部分反向互补的寡核苷酸的包含seq id no：414至417的核酸序列中的12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续的连接核苷的寡核苷酸。此外，寡核苷酸可以是包含经修饰的寡核苷酸的寡聚化合物，所述经修饰的寡核苷酸包含选自由经修饰的糖部分、经修饰的核苷间键和经修饰的核碱基组成的组的至少一种修饰。

66、具体地，寡核苷酸的核酸序列可以是包含选自由seq id no：10、11、12、13、14、28、32、35、71、396、397、398、399、400、401、402、403、414和416组成的组的核酸序列中的12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续的连接核苷的寡聚化合物，并且寡核苷酸还可以是包含经修饰的寡核苷酸的寡聚化合物，所述经修饰的寡核苷酸包含选自由经修饰的糖部分、经修饰的核苷间键和经修饰的核碱基组成的组的至少一种修饰。

67、寡核苷酸可以是包含选自由seq id no：447至453组成的组的核酸序列内的8至80个、例如12至30个或12至22个、具体为12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续的连接核苷的寡聚化合物。在具体实例中，与tr1区域互补结合的寡核苷酸可以是包含14至80个、例如14至30个或14至22个、具体为14、15、16、17、18、19或20个连续的连接核苷和seq id no：454的核酸序列的寡聚化合物，并且例如可以是具有seq id no：10至15的核酸序列的寡聚化合物。与tr4区域互补结合的寡核苷酸可以是包含9至80个、例如12至30个或12至22个、具体为12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续的连接核苷和seq id no：455的核酸序列的寡聚化合物，并且例如可以是具有seq id no：396至403的核酸序列的寡聚化合物。

68、在本公开中，“经修饰的寡核苷酸”是指糖部分、核碱基和核苷间键中的至少一者被修饰的寡核苷酸。经修饰的寡核苷酸可包含选自由经修饰的糖部分、经修饰的核苷间键和经修饰的核碱基组成的组的至少一种修饰。术语“未经修饰的寡核苷酸”是指不包含糖部分、核碱基和核苷间键的任何修饰的寡核苷酸。

69、“核酸”是指由核苷酸单体构成的分子。核酸包括但不限于核糖核酸(rna)、脱氧核糖核酸(dna)、单链核酸和双链核酸。

70、如本公开中所用，“经修饰的核苷”是指包含经修饰的核碱基和/或经修饰的糖部分的核苷。

71、如本文所用，“核碱基”是指未经修饰的核碱基或经修饰的核碱基。核碱基是杂环部分。如本文所用，“未经修饰的核碱基”是腺嘌呤(a)、胸腺嘧啶(t)、胞嘧啶(c)、尿嘧啶(u)或鸟嘌呤(g)。如本文所用，“经修饰的核碱基”是除了未经修饰的a、t、c、u或g以外的能够与至少一个其它核碱基配对的任何核碱基(或部分)。“5-甲基胞嘧啶”是经修饰的核碱基。

72、在寡核苷酸的核碱基序列内，在任何位置可以有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个经修饰的核碱基。

73、经修饰的寡核苷酸具有糖基序，其中所述糖基序可包含：由1至10、1至9、1至8、1至7、或1至6个连接的经修饰的核苷组成的5’-翼区；由6至23、6至22、6至21、6至20、6至19、6至18、6至17、6至16、6至15、6至14、6至13、6至12、6至11、或6至10个连接的中心区核苷组成的中心缺口区；以及由1至10、1至9、1至8、1至7、或1至6个连接的经修饰的核苷组成的3’-翼区。更具体地，糖基序可包含：由1至6个连接的5’区核苷组成的5’-翼区；由6至10个连接的中心区核苷组成的中心缺口区；以及由1至6个连接的3’区核苷组成的3’-翼区。

74、例如，经修饰的糖部分可包含选自由经修饰的非双环糖部分和经修饰的双环或三环糖部分组成的组的一种或多种。在具体实例中，经修饰的糖部分是糖替代物。此类糖替代物可包含对应于其它类型经修饰的糖部分的一个或多个取代。

75、在具体实例中，经修饰的糖部分是含有具有一个或多个取代基的呋喃糖环的经修饰的非双环糖部分，其中没有任何取代基桥接呋喃糖环的两个原子来形成环状结构。此类非桥接取代基可位于呋喃糖环上的任何位置，包括但不限于在2’、3’、4’和/或5’位的取代基(不限于此)。适用于经修饰的非双环糖部分的2’-取代基的实例包括但不限于以下：2’-f、2’-och3 (“ome”或“o-甲基”)和2’-o(ch2) 2och3 (“moe”)。在具体实例中，2’-取代基是卤素、烯丙基、氨基、叠氮基、sh、cn、ocn、cf3、ocf3、o-c1-c10烷氧基、o-c1-c10取代的烷氧基、o-c1-c10烷基、o-c1-c10取代的烷基、s-烷基、n(rm)-烷基、o-烯基、s-烯基、n(rm)-烯基、o-炔基、s-炔基、n(rm)-炔基、o-亚烷基-o-烷基、炔基、烷芳基、芳烷基、o-烷芳基、o-芳烷基、o(ch2)2sch3、o(ch2)2on(rm)(rn)或och2c(=o)-n(rm)(rn)(其中各rm和rn独立地为h、氨基保护基团、或取代或未取代的c1-c10烷基)、-o(ch2)2on(ch3)2 (“dmaoe”)和2’-och2och2n(ch2)2(“dmaeoe”)等。

76、在具体实例中，经修饰的非双环糖部分在3’位包含取代基。适用于经修饰的糖部分的3’位的取代基的实例包括但不限于烷氧基(例如甲氧基)和烷基(例如甲基、乙基)。在具体实例中，经修饰的非双环糖部分在4’位包含取代基。适用于经修饰的非双环糖部分的4’-取代基的实例包括但不限于烷氧基(例如甲氧基)、烷基以及wo 2015/106128(manoharan等人)中记载的那些。

77、适用于经修饰的非双环糖部分的5’-取代基的实例包括但不限于5’-甲基(r或s)、5’-乙烯基、乙基、5’-甲氧基、5’-氨基丙基或5’-cp。适用于经修饰的非双环糖部分的5’-取代基的一个实施方案是5’-cp，具体地，“5’-cp”是一种经修饰的糖部分化合物，其中在所包含的2-脱氧核糖的5-位被两个甲基取代，并且这些甲基彼此连接以形成环丙烷，命名为“5’-cp核苷”，其详细描述提供于wo2022/211095a1中。此外，在具体实例中，经修饰的非双环糖部分包括但不限于一个或多个非桥接糖取代基，例如2’-f-5’-甲基糖部分。

78、在具体实例中，2’-取代的修饰的非双环核苷包含含有选自f、och3和och2ch2och3的非桥接2’-取代基的糖部分。

79、具体的经修饰的糖部分包含桥接呋喃糖环的两个原子来形成第二个环的取代基，从而产生双环糖部分。包含此类双环糖部分的核苷被称为双环核苷(bna)、锁核苷(lna)或构象受限核苷酸(crn)。此类化合物记载于美国专利公开号2013/0190383；以及pct公开wo2013/036868中。在这些具体实施方案中，双环糖部分包含4’和2’呋喃糖环原子之间的桥。在某些实例中，呋喃糖是核糖环。桥接4’与2’的取代基的实例包括但不限于：4’-ch2-2’、4’-(ch2)2-2’、4’-(ch2)3-2’、4’-ch2-o-2’ (“lna”)、4’-ch2-s-2’、4’-(ch2) 2-o-2’(“ena”)、4’-ch(ch3)-o-2’ (当以s构型存在时称为“受约束的乙基”或“cet”)、4’-ch2-o-ch2-2’、4’-ch2-n(r)-2’、4’-ch(ch2och3)-o-2’ (“受约束的moe”或“cmoe”)及其类似物、4’-c(ch3)(ch3)-o-2’及其类似物、4’-ch2-n(och3)-2’及其类似物、4’-ch2-o-n(ch3)-2’、4’-ch2-c(h)(ch3)-2’、4’-ch2-c(=ch2)-2’及其类似物、4’-c(rarb)-n(r)-o-2’、4’-c(rarb)-o-n(r)-2’、4’-ch2-o-n(r)-2’和4’-ch2-n(r)-o-2’ (其中r、ra和rb各自独立地为h、保护基团或c1-c12烷基)。

80、上述经修饰的糖部分包含桥接呋喃糖环的两个原子来形成第二个环的取代基，从而产生双环糖部分。具有此类双环糖部分的核苷被称为双环核苷(bnas)或受约束的核苷。双环糖部分包含4’和2’呋喃糖环原子之间的桥。在这些实施方案中的某些实施方案中，呋喃糖是核糖环。桥接4’与2’的取代基的实例包括但不限于：4’-ch2-2’、4’-(ch2) 2-2’、4’-(ch2)3-2’、4’-ch2-o-2’ ("lna")、4’-ch2-s-2’、4’-(ch2) 2-o-2’ ("ena")、4’-ch(ch3)-o-2’ (当以s构型存在时称为“受约束的乙基”或“cet”)、4’-ch2-o-ch2-2’、4’-ch2-n(r)-2’、4’-ch(ch2och3)-o-2’ (“受约束的moe”或“cmoe”)及其类似物、4’-c(ch3)(ch3)-o-2’及其类似物、4’-ch2-n(och3)-2’及其类似物、4’-ch2-o-n(ch3)-2’、4’-ch2-c(h)(ch3)-2’、4’-ch2-c(=ch2)-2’及其类似物、4’-c(rarb)-n(r)-o-2’、4’-c(rarb)-o-n(r)-2’、4’-ch2-o-n(r)-2’和4’-ch2-n(r)-o-2’ (其中r、ra和rb各自独立地为h、保护基团或c1-c12烷基)(例如u.s. 7,427,672)。

81、在本公开中，双环核苷的一般性描述包括两种异构体构型。当在本文实例中识别出特定双环核苷(例如lna或cet)时，除非另有说明，否则它们以β-d构型存在。

82、在具体实例中，经修饰的糖部分是糖替代物。在这些具体实施方案中，糖部分的环氧原子被例如硫、碳或氮原子替代。

83、许多其它可用于经修饰的核苷的双环和三环糖以及糖替代物是本领域已知的。

84、在具体实例中，寡核苷酸化合物可包含未经修饰的核苷间键(磷酸二酯核苷间键)和/或一个或多个经修饰的核苷间键。在具体实施方案中，各核苷间键可以是选自由磷酸二酯核苷间键(po)、硫代磷酸酯核苷间键(ps)和甲磺酰基氨基磷酸酯核苷间键(mspa)组成的组的一个或多个核苷间键。甲磺酰基氨基磷酸酯(methanesulfonyl phosphoramidate)核苷间键(mspa)与甲磺酰基-氨基磷酸酯(mesyl-phosphoramidate)核苷间键可互换使用。

85、在具体实例中，经修饰的寡核苷酸的各核苷间键可独立地选自由硫代磷酸酯核苷间键和磷酸二酯核苷间键组成的组。在具体实例中，各硫代磷酸酯核苷间键可以是立体无规硫代磷酸酯核苷间键。

86、在具体实例中，本发明的经修饰的寡核苷酸可包含选自由磷酸二酯核苷间键(po)、硫代磷酸酯核苷间键(ps)和甲磺酰基氨基磷酸酯核苷间键(mspa)组成的组的一个或多个核苷间键，例如可包含磷酸二酯(po)和/或硫代磷酸酯(ps)来具有ps、po、或ps与po混合物的核苷间键。在这种情况下，经修饰的寡核苷酸可具有未经修饰或经修饰的糖部分以及未经修饰或经修饰的核碱基，糖部分和核碱基如上所述。例如，当经修饰的寡核苷酸的核苷间键包含ps和po二者时，po可位于缺口聚物(gapmer)结构的翼区和缺口区，并且优选可存在于每个翼中。具体地，当寡核苷酸化合物具有5’-翼区、中心缺口区和3’-翼区的缺口聚物结构，并且每个翼区有1至6个核碱基时，含有ps和po的混合核苷间键的经修饰的寡核苷酸的实例可选自由例如sosss、sooss、sosos、soooss、soooos、sssoss、ssoosss、ssosos、ssooss、ssooos和ssooss组成的组。在这种情况下，‘o’表示磷酸二酯核苷间键(po)，‘s’表示硫代磷酸酯核苷间键(ps)。更具体地，其可以是包含选自由sosss、sooss、sosos、soooss和soooos组成的组的至少一者的5’-翼区与包含选自由sssoss、ssoosss、ssosos、ssooss、ssooos和ssooss组成的组的至少一者的3’-翼区的组合，具体地，sossssssssssssssssoss、sosssssssssssssssssooss、soossssssssssssssssooss、sososssssssssssssssosos、sooosssssssssssssss、sooosssssssssssssooos、或soooossssssssssssooss，并且更具体地，sosssssssssssssssssooss、sososssssssssssssssosos、或soooossssssssssssooss。寡聚化合物的实例可以是包含seq id no：1至439 (更具体为seq id no：1至19、seq no：27至36、seq id no：68至81、seq id no：396至403或seq id no：414至417)的核酸序列中的12、13、14、15、16、17、18、19、20、21或22个连续核碱基的序列，甚至更具体地，是在包含seq idno：11、12、13、14、28、95、102、105、106、319、396、398、399、403、409、414或416的核酸序列之中的12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续核碱基的核酸序列中含有po和ps的混合核苷间键的序列。当寡聚化合物具有由5’-翼区、缺口区和3’-翼区构成的缺口聚物结构时，包含po和ps的混合核苷连接的经修饰的寡核苷酸的实例记载于下表12中。

87、在具体实例中，经修饰的寡核苷酸包含具有经完全修饰的糖基序的区域或由其组成，且完全修饰区域内的每个核苷可包含本公开中称为均匀修饰糖基序的相同单一经修饰的糖部分，或者可包含两种或更多种不同类型的经修饰的糖部分，具体地，经修饰的寡核苷酸可包含经修饰的双环糖部分，例如桥接4’与2’的糖取代基，经修饰的非双环糖部分例如2’-moe糖部分，或者可包含至少经修饰的双环糖部分和至少经修饰的非双环糖部分。

88、在具体实例中，经修饰的寡核苷酸可包含具有由两个外部区域或“翼”以及中心或内部区域或“缺口”定义的缺口聚物基序的区域，其中中心缺口区是能够通过与靶核酸互补结合来募集rnase h的区域。缺口聚物基序的三个区域(5’-翼、缺口和3’-翼)形成连续核苷序列，其中每个翼中的核苷的糖部分的至少一部分可与缺口中的核苷的糖部分的至少一部分不同。

89、术语“缺口聚物”是指包含具有支持rnase h切割的多个核苷的内部区域、并且位于具有一个或多个核苷的外部区域之间的寡核苷酸，其中包含在内部区域中的核苷与包含在外部区域中的一个或多个核苷在化学上不同。内部区域可称为“缺口”，外部区域可称为“翼”。这里，缺口聚物中三个区域的长度(核苷数)可使用[5’-翼的核苷数]-[缺口的核苷数]-[3’-翼的核苷数]的表示法提供。例如，5-10-5缺口聚物在每个翼中包含5个连接核苷并且在缺口中包含10个连接核苷。在命名、中含有化学修饰的寡核苷酸的情况下，例如5-10-5 moe缺口聚物由5’-翼中的5个经修饰的核苷、缺口中的10个连接的脱氧核苷和3’-翼中的5个连接的moe核苷组成。在具体实施方案中，经修饰的寡核苷酸可包括5-10-5 moe缺口聚物、3-10-3 bna缺口聚物、3-10-3 cet缺口聚物、或3-10-3 lna缺口聚物等。在具体实施方案中，经修饰的寡核苷酸可包括5-10-5 moe缺口聚物、3-10-3 bna缺口聚物、3-10-3cet缺口聚物、或3-10-3 lna缺口聚物等。

90、经修饰的寡核苷酸可包含具有1至10、1至9、1至8、1至7、或1至6个连接的经修饰的核苷的5’-翼区；具有6至23、6至22、6至21、6至20、6至19、6至18、6至17、6至16、6至15、6至14、6至13、6至12、6至11、或6至10个连接的中心区核苷的中心缺口区；以及具有1至10、1至9、1至8、1至7、或1至6个连接的经修饰的核苷的3’-翼区。

91、在具体实例中，经修饰的寡核苷酸可在缺口聚物基序的三个区域(5’-翼、缺口和3’-翼)中包含选自由经修饰的糖部分、经修饰的核苷间键和经修饰的核碱基组成的组的至少一种修饰。具体地，一个或多个经修饰的核碱基(例如5-mc (5’-甲基胞嘧啶))可包含在经修饰的寡核苷酸中，并且主要包含在缺口区中、但也可包含在翼区中。核苷间键(例如ps和po键)可各自在经修饰的寡核苷酸的所有核苷间键中包含一次或多次，例如，总键可作为ps键包含、或者可作为ps和po键的混合物包含。po键可在经修饰的寡核苷酸的总键中包含一个或多个，并且可主要包含在翼区中，但也可包含在缺口区中。经修饰的糖部分可主要以一个或多个的数量包含在寡核苷酸中所含的全部核苷酸中，并且具体地，非双环糖部分可包含在翼区中，双环糖部分可主要包含在翼区中、但也可包含在缺口区中。作为具体实例，(i)经修饰的寡核苷酸可具有如下结构：5-mc包含在缺口区中，所有键均为ps键，并且非双环糖部分包含在翼区中；(ii)经修饰的寡核苷酸可具有如下结构：5-mc可包含在缺口区中，ps键和po键各自以一个或多个的数量包含，并且非双环糖部分包含在翼区中，例如，5-mc可包含在缺口区中，缺口区中的所有键均为ps键， po键和ps键各自以一个或多个的数量包含在翼区中，并且非双环糖部分可包含在翼区中；或(iii)经修饰的寡核苷酸可具有如下结构：5-mc主要包含在缺口区中、但也包含在翼区中，ps键包含在整个缺口区中，ps键、po键、或ps与po键的混合物包含在翼区中，并且双环糖部分主要包含在翼区中、但也可包含在缺口区中。然而，此类经修饰的寡核苷酸中包含的选自由经修饰的糖部分、未经修饰或经修饰的核苷间键、以及经修饰的核碱基组成的组的修饰部分仅作为说明性实例提供，本发明不限于此。

92、例如，经修饰的糖部分可包含：选自由包含2’-moe糖部分和2’-ome糖部分的经修饰的非双环糖部分；以及包含选自o-ch2-和-o-ch(ch3)-的2’,4’-桥的经修饰的双环糖部分组成的组的一种或多种类型。经修饰的寡聚化合物可包含经修饰的非双环糖部分和经修饰的双环糖部分，具体可包含含有具有2’-4’桥的经修饰的双环糖部分的至少一个经修饰的核苷以及含有经修饰的非双环糖部分的至少一个经修饰的核苷。在具体实例中，5’-翼和/或3’-翼可包含至少一种经修饰的双环糖部分和至少一种经修饰的非双环糖部分。

93、更具体地，当包含由1至6个连接的5’-区核苷构成的5’-翼区；由6至10个连接的中心区核苷构成的中心缺口区；以及由1至6个连接的3’-区核苷构成的3’-翼区时，5’-翼区和/或3’-翼区可包含至少一个经修饰的双环糖部分。例如，至少一个经修饰的双环糖部分可包含在5’-翼区和/或3’-翼区中，其余核苷可包含经修饰的非双环糖部分，其详细描述提供于例如wo2016/127002a1、wo2016/126995a1和us2018/0023081a1等专利文献中。

94、在具体实例中，当包含由1至7个连接的5’-区核苷组成的5’-翼区；由6至10个连接的中心区核苷组成的中心缺口区；以及由1至7个连接的3’-区核苷组成的3’-翼区时，5’-翼区和3’-翼区各自可独立地包含一个或多个经修饰的双环糖部分，具体地，5’-翼区可选自由以下组成的组：l、ll、ldl、lll、llll、lldl、ldll、lddl、lldd、lllll、llldl、lllll、ldlll、llddl、lddll、lldld、lldll、ldlld、ldldl、lldlll、llddll、ldllll、ldlldl、ldldll、ldlddl、lddlll、lddldl、ldddll、llllldl、llldll、lldllll、lllllll、llldddl、llddldl、llddll、lddllll、ldllldl、lddll、lddll、lddll、lddll、ldllldl、lddll和ldddlll；3’-翼区可选自由以下组成的组：l、ll、ldl、lll、llll、lldl、ldll、lddl、lldd、llll、lllll、llldl、lldll、ldlll、llddl、lddll、lldld、ldlld、ldldl、ldd llllll、llllldl、llldll、lllllll、lllllll、lllddl、ldldll、ldddll、llldll、ldllll、llllll、llddldl、llddll、lddllll、ldllldl、lddlll、ldddlll、llddddl和llddl；其中糖部分(moiety)序列中的‘d’表示2’-脱氧核糖基糖部分，‘l’表示lna糖部分。

95、具体地，当本发明的寡核苷酸化合物可包含特定双环核苷(例如lna或cet)作为经修饰的糖部分时，其可以是lna修饰的寡核苷酸或cet修饰的寡核苷酸，并且可包含选自由硫代磷酸酯核苷间键、甲磺酰基氨基磷酸酯核苷间键和磷酸二酯核苷间键组成的组的一个或多个核苷键，具体为硫代磷酸酯核苷间键(ps键)和/或磷酸二酯核苷间键(po键)。

96、此外，lna修饰的寡核苷酸或cet修饰的寡核苷酸可包含经修饰的核碱基和/或未经修饰的核碱基。包含特定双环核苷(例如lna或cet)作为经修饰的糖部分的寡聚化合物的实例可以是经修饰的糖部分，可以是包含seq id no：1至439的核酸序列(特别地seq no：1至19、seq no：27至36、seq id no：68至81、seq id no：396至403、或seq id no：414至417)内的12、13、14、15、16、17、18、19、20、21或22个连续核碱基的序列；或更具体地是包含seqid no：13、14、106、409或416的核酸序列内的12、13、14、15、16、17、18、19、20、21或22个连续核碱基的序列；其中核酸序列中的经修饰的糖部分可以是双环糖部分，并且双环糖部分可存在于5’-翼区和3’-翼区中。

97、存在于5’-翼区中的双环糖部分可独立地选自由以下组成的组：llllll、lllll、llldll、llldl、lldlll、lldll、llddll、llddl、ldllll、ldlll、ldlldl、ldldll、ldldld、ldlddl、lddlll、lddlld、lddldl、lddl、ldddll、和ldddl，并且3’-翼区中的双环糖部分可独立地选自由以下组成的组：llllll、llldll、llddll、ldllll、ldldll、lddlll、ldddll、lllll、lldll、ldlll、lddll、llll、ldll、lll、和ll。作为具体实例，lna-经修饰的寡核苷酸的实例示于表17中，但不限于此。表17中的序列以5’至3’方向显示，糖部分式中的‘d’表示2’-脱氧核糖基糖部分，‘l’表示lna糖部分。

98、在具体实施方案中，经修饰的寡核苷酸包含一个或多个缀合部分或缀合基团。在具体实例中，缀合基团修饰了寡核苷酸分子的一种或多种性质，包括但不限于药效学、药代动力学、稳定性、结合、吸收、组织分布、细胞分布、细胞摄取、电荷和清除。在某一实例中，缀合部分提供能够实现分子的新性质(例如分子的检测)的荧光基团或报告基团。

99、缀合部分包括但不限于嵌入剂、报告分子、多胺、聚酰胺、肽、碳水化合物(例如galnac)、维生素部分、聚乙二醇、硫醚、聚醚、胆固醇、巯基胆固醇(thiocholesterol)、胆酸部分、叶酸、脂质、磷脂、生物素、吩嗪、菲啶、蒽醌、金刚烷、吖啶、荧光素、罗丹明、香豆素、荧光团和染料。

100、在某些实施方案中，缀合基团包括将缀合部分连接到经修饰的寡核苷酸的其余部分的缀合接头。在某些实例中，缀合接头是单化学键(即，缀合部分通过缀合接头经由单键连接到经修饰的寡核苷酸的其余部分)。在某些实例中，缀合接头包括例如烃基链等链结构、或例如乙二醇、核苷或氨基酸单元等重复单元的低聚物。在某些实例中，缀合接头包括选自烷基、氨基、氧代基、酰胺、二硫化物、聚乙二醇、醚、硫醚和羟基氨基的一种或多种基团。在此类某些实例中，缀合接头包括选自烷基、氨基、氧代基、酰胺和醚基的基团。在某些实例中，包括上述缀合接头的缀合接头是双官能连接部分，例如本领域已知可用于将缀合基团连接到寡聚化合物(例如本文提供的寡核苷酸)的那些。

101、在某些实施方案中，缀合基团或缀合部分可优选地从经修饰的寡核苷酸的其余部分裂解。例如，在某些情况下，包含特定缀合部分的寡聚化合物(包括反义剂或作为其一部分的寡聚化合物)或经修饰的寡核苷酸更好地被特定细胞类型摄取。一旦化合物被细胞摄取，优选的是缀合基团裂解以释放未缀合的寡核苷酸。因此，某些缀合部分通常可在缀合接头内含有一个或多个可裂解部分。在某些实例中，可裂解部分可以是具有至少一个可裂解键的原子基团。在某些实例中，可裂解部分包括具有1、2、3、4或多于4个可裂解键的原子基团。在某些实例中，可裂解部分在细胞或细胞内区室(例如溶酶体)内被选择性裂解。在某些实例中，可裂解部分通过内源酶(例如核酸酶)选择性裂解。

102、在具体实例中，缀合基团包括细胞靶向缀合部分。在某些实例中，细胞靶向部分的每个配体对靶细胞上的至少一种类型的受体具有亲和性。在某些实例中，每个配体对哺乳动物肺细胞表面上的至少一种类型的受体具有亲和性。细胞靶向部分的每个配体是碳水化合物、碳水化合物衍生物、经修饰的碳水化合物、多糖、经修饰的多糖、或多糖衍生物。

103、本发明的一个实施方案涉及一种用于预防、改善或治疗与mtor的活性和/或表达增加相关的疾病的药物组合物，其包含能够介导针对mtor的rna干扰(rnai)的试剂，或者涉及一种用于预防、改善或治疗与mtor的活性和/或表达增加相关的疾病的方法，其包括向有需要的受试者或个体施用能够介导针对mtor的rna干扰(rnai)的试剂。

104、本发明的另一实施方案提供了一种用于在具有增加的人mtor基因表达水平的人类受试者中降低人mtor蛋白合成或人mtor mrna水平的组合物。可选地，本发明提供了一种用于在具有增加的mtor基因表达水平的人类受试者中降低mtor蛋白合成或人mtor mrna水平的方法。

105、在具体实例中，根据本发明的方法包括向受试者施用rnai剂，并且检测或定量所述受试者的细胞或生物流体中mtor rna或mtor蛋白的量。在某些实例中，方法包括检测或定量施用前获得的第一生物样品中mtor rna或mtor蛋白的第一量；检测或定量施用后获得的第二生物样品中mtor rna或mtor蛋白的第二量；并且比较第一量与第二量，以检测或定量mtor rna或mtor蛋白的降低。

106、mtor核酸的水平或表达的抑制可通过本领域已知的各种方式测定。例如，靶核酸水平可通过例如northern印迹分析、竞争性聚合酶链反应(pcr)或定量实时pcr来定量。mtor核酸的反义抑制可通过测定mtor蛋白水平来评估。mtor的蛋白水平可通过本领域熟知的各种方式评估或定量，例如免疫沉淀、western印迹分析(免疫印迹)、酶联免疫吸附测定(elisa)、定量蛋白测定、蛋白活性测定(例如胱天蛋白酶活性测定)、免疫组织化学、免疫细胞化学或荧光活化细胞分选(facs)。

107、在具体实例中，待施用的受试者或患者在治疗前可能已经接受了选自由药物疗法、放射疗法和手术疗法组成的组的一种或多种疗法。

108、在具体实例中，本文记载了包含至少一种寡聚化合物的药物组合物。在某些实例中，一种或多种寡聚化合物各自可以是经修饰的寡核苷酸。在某些实例中，药物组合物包含药学上可接受的稀释剂或载体。在某些实例中，药物组合物包含经修饰的寡核苷酸和人工脑脊液。在某些实施方案中，药物组合物由经修饰的寡核苷酸和人工脑脊液组成。在某些实例中，药物组合物包含一种或多种寡聚化合物和一种或多种赋形剂。在某些实例中，赋形剂可选自水、盐溶液、醇、聚乙二醇、明胶、乳糖、淀粉酶、硬脂酸镁、滑石粉、硅酸、粘性石蜡、羟甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮。

109、在具体实例中，包含寡聚化合物的药物组合物包含寡聚化合物的任何药学上可接受的盐、寡聚化合物的酯、或此类酯的盐。

110、在具体实例中，药物组合物包括递送系统。递送系统的实例包括但不限于脂质体和乳剂。

111、在某些实例中，药物组合物可配制成用于经口施用。在某些实例中，药物组合物配制成用于经颊施用。在某些实例中，药物组合物配制成用于通过注射(例如静脉内、皮下、肌内、鞘内(it)、脑室内(icv)等)施用。在此类某些实例中，药物组合物包含载体并被配制成水溶液，例如水或生理学上相容的缓冲液，例如磷酸盐缓冲盐水(pbs)、人工csf (acsf)、汉克氏溶液、林格氏溶液或生理盐水缓冲液。在某些实例中，包含其它成分(例如有助于溶解性或用作防腐剂的成分)。在某些实例中，使用适当的液体载体和悬浮剂等制备可注射悬浮液。某些可注射药物组合物以单位剂型存在，例如在安瓿或多剂量容器中。某些可注射药物组合物是油性或水性溶媒(vehicle)中的悬浮液、溶液或乳剂，并可包含配制剂例如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。适用于可注射药物组合物的某些溶剂包括但不限于亲脂性溶剂和脂肪油例如芝麻油、合成脂肪酸酯例如油酸乙酯或甘油三酯、以及脂质体。

112、药物组合物的配方组成和方法取决于若干标准，包括但不限于施用途径、疾病的严重程度、或待施用的剂量。

113、在某些实例中，寡聚化合物可与药学上可接受的活性和/或非活性物质混合用于制备药物组合物或配制物。药物组合物的配制物的组成和方法取决于许多标准，包括但不限于施用途径、疾病的严重程度、或待施用的剂量。

114、根据本发明的rnai制剂可经口或肠胃外施用，并且肠胃外施用是指通过注射(例如团注(bolus)注射)或输注施用。肠胃外施用包括皮下施用、静脉内施用、肌内施用、动脉内施用、腹膜内施用或颅内施用，例如鞘内或脑室内施用。

115、发明的效果

116、本发明涉及一种用于调节mtor基因的表达水平和/或活性的化合物以及包含该化合物的组合物，其可用于预防、缓解或治疗mtor相关疾病(disease)、病症(disorder)和病况(condition)。