嵌合抗原受体及其应用的制作方法

本发明涉及嵌合抗原受体(car)、编码其的核酸、载体和包含其的细胞以及药物组合物。

背景技术：

1、近年来，使用了以嵌合抗原受体(car)转基因t细胞(car-t)为首的、通过基因改造而强化了功能的t细胞的治疗法的批准相继进行。特别是用于治疗癌症的car的研究和开发正在盛行。

2、例如，作为在血癌中奏效的car，批准了cd19·car-t细胞疗法制剂kymriah(注册商标)等(专利文献1)。另外，关于car的设计，报道了4-1bb的胞内结构域的使用(专利文献2)、包含靶向her2的氨基酸突变的car(专利文献3)等。

3、现有技术文献

4、专利文献

5、专利文献1：wo 2012/079000 a1

6、专利文献2：us 8399645b

7、专利文献3：wo 2017/079694 a1

8、非专利文献

9、非专利文献1：zhao,z.等，cancer cell 28:415-428，2015

技术实现思路

1、发明所要解决的课题

2、在血癌中奏效的car中，存在短期活性强但在生物体内的持续性差的car和短期活性平稳但在生物体内的持续性高的car，但2个指标此消彼长，没有建立二者指标高的car设计(例如，非专利文献1)。因此，依然存在通过car的设计的最优化来改善药效的余地。

3、因此，本发明的目的在于提供一种具有细胞杀伤活性和活性持续性的car。

4、用于解决课题的手段

5、为了解决上述问题，本发明人对靶向cd19的car中铰链和胞内结构域的设计进行了深入研究。其结果是，通过car的铰链和胞内结构域中的特定突变，开发了细胞杀伤活性和活性持续性得到改善的car。

6、第一方式中，本发明提供了一种嵌合抗原受体(car)，其包含能够与cd19结合的单链可变区片段(scfv)、铰链、跨膜区和胞内区，上述铰链包含序列编号5或6所示的氨基酸序列，上述胞内区包含含有序列编号8或9所示的氨基酸序列的共刺激结构域。

7、第二方式中，本发明提供了一种编码本发明car的核酸。另外，本发明提供包含本发明的核酸的载体。

8、第三方式中，本发明提供了一种表达本发明的car或包含本发明的核酸的t细胞。

9、第四方式中，本发明提供了包含本发明的car、本发明的核酸或包含本发明的载体的组合物，以及包含本发明的t细胞的药物组合物。

10、发明效果

11、本发明提供了一种能够与cd19结合的具有细胞杀伤活性和活性持续性的car。通过使用该car，能够提供效果更高的car-t细胞疗法。

1.一种嵌合抗原受体即car，其包括能够与cd19结合的单链可变区片段即scfv、铰链、跨膜区和胞内区，所述铰链包含序列编号5或6所示的氨基酸序列，所述胞内区包含含有序列编号8或9所示的氨基酸序列的共刺激结构域。

2.根据权利要求1所述的car，其中，所述铰链包含序列编号5所示的氨基酸序列，所述共刺激结构域包含序列编号8所示的氨基酸序列。

3.根据权利要求2所述的car，其中，所述铰链、所述跨膜区和所述胞内区包含序列编号2所示的氨基酸序列或与序列编号2所示的氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列。

4.根据权利要求1所述的car，其中，所述铰链包含序列编号6所示的氨基酸序列，所述共刺激结构域包含序列编号9所示的氨基酸序列。

5.根据权利要求4所述的car，其中，所述铰链、所述跨膜区和所述胞内区包含序列编号3所示的氨基酸序列或与序列编号3所示的氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列。

6.根据权利要求1所述的car，其中，所述能够与cd19结合的scfv包含序列编号11所示的氨基酸序列或与序列编号11所示的氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列。

7.根据权利要求1所述的car，其中，所述胞内区还包含cd3ζ的信号传导结构域。

8.根据权利要求1所述的car，其中，所述car包含序列编号16所示的氨基酸序列或与序列编号16所示的氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列。

9.根据权利要求1所述的car，其中，所述car包含序列编号17所示的氨基酸序列或与序列编号17所示的氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列。

10.一种核酸，其编码权利要求1所述的car。

11.一种载体，其包含权利要求10所述的核酸。

12.一种t细胞，其表达权利要求1所述的car、或包含权利要求10所述的核酸。

13.一种组合物，其包含权利要求1所述的car、权利要求10所述的核酸或权利要求11所述的载体。

14.一种药物组合物，其包含权利要求12所述的t细胞。

15.根据权利要求14所述的药物组合物，其用于治疗癌症。